改良培养条件对发酵酸奶中乳酸菌检测效果的影响研究
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2009年2月第30卷第2期食品研究与开发姚勇芳,朱美娟,许玉雅,劳灼灼,余雅雯(广东轻工职业技术学院食品系,广东广州510312)改良培养条件对发酵酸奶中乳酸菌检测效果的影响研究摘要:主要研究培养条件对发酵酸奶中乳酸菌检测效果的影响研究,通过在MC 改良培养基中加入番茄汁、吐温-80和在培养基上覆盖琼脂的方法研究,改良乳酸菌检测效果。
结果表明:在1000mL 改良MC 培养基中加入20mL 蕃茄汁、0.5mL 吐温-80,平板凝固后再覆盖一层琼脂,能使乳酸菌菌落变大和清晰易于准确计数。
关键词:乳酸菌;培养条件;改良;应用THE STUDY OF INFLUENCE OF IMPROVED CULTURE CONDITION ON DETECTION EFFECT OF LACTIC ACIDBACTERIA IN CLABBERYAO Yong-fang,ZHU Mei-juan,XU Yu-ya,LAO Zhuo-zhuo,YU Ya-wen(Guangdong Industry Technical College,Guangzhou 510312,Guangdong,China)Abstract:To improve the National Standard Examination Method of lactic acid bacteria and apply the new method to the sour milk beverage.The national standard method of lactic acid bacteria is be improved by the way that the substrate composed of the tomato juice and Tween-80is covered a floor of agar.More examination effect can be produced by means of following condition:1000mL MC substrate ,20mL tomato juice,0.5mLTween-80.Key words:lactic acid bacteria;culture condition;improvement;application基金项目:广东轻工职业技术学院科研启动基金资助(KX010321)作者简介:姚勇芳(1976—),男(汉),讲师,研究方向:食品微生物检测。
乳酸菌与人类的关系密切,乳酸菌饮料中的乳酸菌向肠道内补充有益菌群,维持肠道内的微生态平衡,达到预防一些疾病的目的,且易于吸收。
而乳酸菌计数结果的准确性直接影响产品的内在质量,也关系到人体健康。
现在的国标方法普遍存在菌落小,不明显和难数的弊端,在对乳酸菌进行种类鉴定时,必须拨开培养基表面,操作难度大,准确率低。
利用优化培养基的条件,使培养出来的乳酸菌更易鉴别和计数[1]。
1材料和方法1.1材料与仪器1.1.1样品达能碧悠原味酸奶、伊利酸奶、蒙牛酸奶、风行瓶装酸奶、光明酸奶、香满楼酸奶、卡士原味酸奶、卡士芦荟味酸奶、达能原味酸奶、燕塘瓶装酸奶:购于学校附近大型超市,冰箱0℃~4℃存放。
1.1.2培养基与试剂改良MC 培养基、革兰氏染色液(按GB/T4789.28规定)、3%过氧化氢溶液(按GB/T4789.28规定)、0.85%灭菌生理盐水、固体琼脂、新鲜番茄汁(将新鲜番茄洗干净,切碎,放入三角瓶,置4℃冰箱8h~12h ,取出后用纱布过滤即成)、吐温-80。
1.1.3仪器ML11型普通光学显微镜:广州市明美光电技术有限公司;PHS-3C 型精密pH 计:上海精密科学仪器有限公司;BCD-276AY4型冰箱:容声冰箱厂;HC-TP11-1型架盘药物天平:上海光学仪器厂;DRP-9082型电热恒温培养箱:上海热策电子科技有限公司。
其它为试验室常规设备。
1.2方法1.2.1乳酸菌国标法培养条件的改善试验[2-3]1.2.1.1在改良MC 培养基上添加不同量番茄汁的比较试验在1L 的改良MC 培养基中,分别添加50、40、30、检测分析952009年2月第30卷第2期食品研究与开发乳酸菌结果报告数/(cfu/mL )Reportorial number /(cfu/mL )2.2×1083.8×1086.2×1086.2×1086.4×108不同培养基Culture medium1000mL 改良MC 培养基+40mL 番茄汁1000mL improved MC substrate+40mL tomato juice1000mL 改良MC 培养基+30mL 番茄汁1000mL improved MC substrate+30mL tomato juice1000mL 改良MC 培养基+20mL 番茄汁1000mL improved MC substrate+20mL tomato juice1000mL 改良MC 培养基+10mL 番茄汁1000mL improved MC substrate+10mL tomato juice1000mL 改良MC 培养基1000mL improved MC substrate 菌落特征Colony character 平皿底为粉红色、菌落较小、表面粗糙、红色、可有淡淡的晕平皿底为粉红色、菌落中等、红色、表面粗糙、有淡淡的晕平皿底为粉红色、菌落较大、清晰、表面光滑、晕较模糊平皿底为粉红色、菌落较小,较清晰、表面光滑、晕较明显平皿底为粉红色、菌落较小、红色、圆形、边缘整齐或似星状,可有淡淡的晕表1添加不同量番茄汁对乳酸菌生长的影响Table 1Effects of tomato juice on lactic acid bacteria'growth表2添加不同量吐温-80对乳酸菌生长的影响Table 2Effects of Tween-80on lactic acid bacteria'growth不同培养基Culture medium1000mL 改良MC 培养基+0.7mL 吐温-801000mL Improved MC substrate +0.7mL Tween-801000mL 改良MC 培养基+0.5mL 吐温-801000mL Improved MC substrate +0.5mL Tween-801000mL 改良MC 培养基+0.3mL 吐温-801000mL Improved MC substrate +0.3mL Tween-801000mL 改良MC 培养基+0.1mL 吐温-801000mL Improved MC substrate +0.1mL Tween-801000mL 改良MC 培养基1000mL Improved MC substrate 菌落特征Colony character 平皿底为粉红色、菌落较小、表面粗糙、红色、可有淡淡的晕平皿底为粉红色、菌落较大、清晰、大小几乎一致,表面光滑、晕较明显平皿底为粉红色、菌落中等,较清晰、表面光滑、晕较明显平皿底为粉红色、菌落较小、表面光滑、红色、可有淡淡的晕平皿底为粉红色、菌落较小、红色、圆形、边缘整齐或似星状,可有淡淡的晕20mL 不同量的番茄汁,配制成4种不同的乳酸菌分离培养基,按GB/T 4789.35-2003方法对比发酵酸奶中乳酸菌检测效果,选择最佳蕃茄汁添加量。
1.2.1.2在改良MC 培养基上添加不同量吐温-80的比较试验在1L 的改良MC 培养基中分别添加0.7、0.5、0.3、0.1mL 吐温-80,配制成4种乳酸菌分离培养基,按GB/T 4789.35-2003方法对比发酵酸奶中乳酸菌检测效果,选择最佳的吐温-80添加量。
1.2.1.3双层平板培养除氧试验按GB/T4789.35-2003方法完成乳酸菌的接种,倒平板待培养基凝固后,再在表面铺一层灭菌琼脂溶液,凝固后倒置恒温培养,对比发酵酸奶中乳酸菌检测效果。
1.2.2改良培养条件对酸奶产品中乳酸菌检测效果应用研究[4]用改良后的乳酸菌培养条件测定发酵酸奶中乳酸菌的总数,对结果进行分析及比较。
2结果与分析2.1乳酸菌国标法培养条件的改善试验2.1.1在乳酸菌改良MC 培养基中添加不同量番茄汁的比较试验(见表1)由表1可看出,添加一定量的番茄汁的改良MC培养基,乳酸菌菌落增大,这是因为蕃茄汁富含维生素,可刺激乳酸菌快速生长,便于挑取可疑菌落做革兰氏染色及过氧化氢酶试验;蕃茄汁添加过量,造成培养基的pH 等因素不适合乳酸菌生长。
试验可知,在1000mL 改良MC 培养基中添加20mL 蕃茄汁乳酸菌菌落清晰、明显,容易计数,且与国标法测定检出率一致。
2.1.2在乳酸菌改良MC 培养基中添加不同量吐温-80的比较试验检测分析乳酸菌结果报告数(cfu/mL )Reportorial number/(cfu/mL )4.0×1087.7×1084.4×1084.5×1086.4×108962009年2月第30卷第2期食品研究与开发参考文献:[1]黄君红,彭丽珍,王爱兰.酸奶中乳酸菌含量的检测[J].中国微生态学杂志,2001,13(6):324-325[2]陈丽丽,何章勇,李建华,等.市售发酵酸奶中乳酸菌含量的检测[J].美国中华临床医学杂志,2003,5(2):292-293[3]张继英张娅婷.不同选择性培养基对乳酸菌生长的影响[J].信阳农业高等专科学校学报,2006,16(3):119-120[4]叶向库,刘汉勋,贺红军.常温下市售酸奶乳酸菌数和pH 值的变化研究[J].食品科技,2005(6):6收稿日期:2008-01-28王贤亲1,潘晓军1,林丹1,*,林观样2,吴建章1,蔡进章3(1.温州医学院药学院,浙江温州325035;2.温州医学院附属第一医院,浙江温州325000;3.温州医学院附属第二医院,浙江温州325000)丁岙杨梅叶挥发油的GC-MS 分析摘要:采用气相色谱-质谱(GC-MS )联用技术对丁岙杨梅叶的挥发油化学成分进行分析,共分离鉴定出17种化合物,占挥发油总量的80%以上。
其中主要成分有石竹烯(49.79%),à-石竹烯(24.16%),橙花叔醇(16.59%),石竹烯氧化物(2.21%)。
关键词:杨梅;挥发油;气相色谱-质谱ANALYSIS OF THE ESSENTIAL OIL FROM THE LEAVES OF DING-AO MYRICA RUBRA BY GC-MSWANG Xian-qin 1,PAN Xiao-jun 1,LIN Dan 1,*,LIN Guan-yang 2,WU Jian-zhang 1,CAI Jin-zhang 3(1.School of Pharmacy of Wenzhou Medical College,Wenzhou 325035,Zhejiang,China;2.The First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College,Wenzhou 325000,Zhejiang,China;3.The Second Affiliated Hospital ofWenzhou Medical College,Wenzhou 325000,Zhejiang,China)Abstract:The chemical compositions of the essential oil from the leaves of Ding -Ao Myrica rubra were analyzed by GC-MS.17compounds were isolated and identified representing 80.6%of the total essential oil.Of them the main component are :Caryophyllene (49.79%),à-Caryophyllene (24.16%),Nerolidol (16.59%),Caryophyllene oxide(2.21%).Key words:Myrica rubra ;essential oil;GC-MS作者简介:王贤亲(1980—),男(汉),初级实验师,硕士,主要从事药物分析研究。