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beckman cytoflex流式细胞仪基本原理
Beckman Coulter CytoFLEX流式细胞仪是一种基于流式细胞术原理的仪器，用于分析和计数细胞悬浮液中的细胞。
其基本原理包括以下几个步骤：
1. 流体流动：细胞悬浮液被注入到仪器中，并通过液体系统被送入流动腔室。
流体的流动会使细胞在一个个单独的微小流速中依次通过腔室。
2. 光源激发：流过流动腔室的细胞会经过一束高能、单色的激光光束的照射。
光束能够激发细胞中存在的特定荧光分子或染料。
3. 荧光检测：被激发后，细胞会发射特定波长的荧光信号。
仪器会使用一套光学元件来收集并分离不同波长的荧光光子，然后传送到光电增强器中进行放大。
4. 光电转换：光电增强器将收到的荧光信号转化为电信号，并经过调制和放大。
5. 数据采集：经过光电转换后的信号会通过数据采集系统，数字化并存储。
这些数据会被分析软件解读并生成相关的结果和图形。
通过以上步骤，CytoFLEX流式细胞仪可以提供细胞的计数、表型分析、蛋白质表达分析以及细胞周期等信息。
同时，它还
可以通过设定门控条件来筛选出特定的细胞亚群，实现更精确的细胞分析。
、准备工作1，清洗偏转板，防止盐离子影响电荷加载，电流偏转。
1）用超纯水沾湿医用棉签，擦拭偏转板所有金属物件。
再用干棉签擦干。
2）5ml 注射器吸超纯水，清洗缝隙。
用滤纸先吸水，再用干棉签擦干。
2，鞘液桶加液3, 喷嘴超声，喷嘴放入超纯水中，超声2min。
用滤纸吸干水分，晾干。
二、开机启动1, 启动电脑，密码BDIS,点开软件，无密码2，机箱侧面依次打开总机开关，蓝色、红色激光。
3, 液流启动：Cytometer --- FiuidSetup1 ）气路（透明管）、液路（蓝色管） ,从乙醇桶上拔下,插到鞘液桶2）闭合喷嘴从侧面放入到喷嘴位置,旋转至12 点方向3）取下闭合喷嘴4）将超声过的喷嘴放入喷嘴位置。
4, 喷嘴压力切换：菜单栏中Sort---SortSetup --- 70um （选择当前使用的喷嘴大小）5, 液流调整：点开电脑界面中70um图标栏里的Stream，从打叉状态变为打勾。
查看是否都处于正常状态：1）打开仪器机箱，查看液流是否流到废液槽。
如果偏离，拧开两边的螺丝，左右推动使液流到达槽内，拧好螺丝。
2）查看电脑界面，液流图像是否稳定，如果有黑白灰图片变化，用棉签擦拭偏转板上方3）查看电脑界面，液流是否在中央，如果不是，可以手动调整仪器摄像头，或者重新插好喷嘴。
4）机箱中查看激光束是否完好通过，用干棉签挡住通过位置，如果看到激光射出，则正常。
然后关闭主机箱外盖。
调整液流：通过调整振幅来实现。
1）振幅Ampl,数值调大，使液流断滴在上1/3处，即2滴连续液流。
2）频率Freg ，一般不动。
3）Gap：当喷嘴为70um时，数值一般为7、8、9。
100um时，为10, 、11 、12。
4）当Ampl和Gap都稳定时，把实际值（后面）手动输入到确定值的框内（前面）。
5）点击StreamSpot ，锁死数值，保持液流稳定。
Dropl :实际值和确定值，变化幅度保持在10以内。
Gap：实际值和确定值，变化幅度保持3以内。
流式细胞仪的使用程序------血液病实验诊断中心一.开机程序1.检查稳压器电源,打开电源,稳定5分钟。
2.打开储液箱,倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。
打开压力阀,取出鞘液桶,将鞘液桶加至4/5满(一般可用三蒸水,做分选必须用PBS 或FACSFlow),合上压力阀。
确实盖紧桶盖,检查所有管路是否妥善安置。
3.将FACSCalibur开关打开,此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY,预热5-10分钟。
排出过滤器内的气泡。
4.如果需要打印,打开打印机电源。
5.打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6.执行仪器PRIME功能一次,以排除Flow cell中的气泡。
7.分析样品时,先用FACAFlow 或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
做过分选后,每次开机后需冲洗管道:向分选装置上装上两个50ml离心管,不接通浓缩系统,摁下右下角白色按钮开始冲洗。
待自动停止后接通浓缩装置,同上法冲洗一次。
二.预设获取模式文件(Acquisition Template Files)1.从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗,可利用此视窗编辑一个获取模式文件。
2.选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot,绘出一个或多个Dot Plots(点图)。
从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源,并确定适当的x 轴和y轴参数。
3.选取屏幕左列绘图工具中的Histogram,同上法可绘出Histogram(直方图)。
4.将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuestFolder \EXP文件夹中,下次进行相同实验时可直接调用。
. 本计算机中已设定两个模式文件:ACQ和EXP,储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中,ACQ用于细胞DNA检测, EXP用于细胞表面标志分析。
一、样品制备1、取样（大约1×106 cells），离心弃上清，以PBS洗两遍，逐滴加入1ml 70%的冷乙醇固定细胞，﹣20℃冻存过夜。
分析时，离心弃上清，以PBS洗两遍，加入100μl的Rnase（GenScript试剂A），37℃水浴30min，然后再加入400μl的PI染液（GenScript试剂B），在4℃避光条件下孵育30min后即可上FCM检测。
每个样品至少获取2×104cells，二、上流式测细胞1.1、打开液流抽屉，确认气压阀处于减压状态；打开金属挡板；取出鞘液桶，倒掉废液，将鞘液桶加至2/3满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFLow），拧紧鞘液桶盖，安上金属挡板，保证管路畅通无扭曲。
检查废液桶，将废液桶的气路和液路的快速连接阀打开，倒掉废液（加鞘液一定要倒废液）向废液桶中倒入400ml浓度为10%的次氯酸钠溶液，合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
1.2、依此接通电源、打开稳压器电源（指示灯由bypass变Ac putput）、变压器电源，稳定5分钟。
将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY。
如果需要打印，打开打印机电源。
打开电脑（密码：BDIS），等待屏幕显示出标准的苹果标志（先开仪器，后开电脑主机）。
1.3、将压力阀置于加压位置，轻拍过滤器，使气泡位于滤器的上方，打开管路开关，将过滤器中的气泡排除，关闭管路开关。
若滤器管路中有气泡，打开连接头，挤出鞘液，以排除气泡。
关闭液流抽屉。
执行仪器PRIME功能一次，以排除Flowcell中的气泡（反向压力使鞘液从进样针中流出）。
结束后自动STANDBY，5分钟后即可进行试验。
2.1、从苹果画面中选取CELLQuest，最大化，选散点图标，打开，Plot type选择Acq-analysis，X参数和Y参数分别取FSC-H、SSC-H（选择散点图主要是确定所需细胞的细胞群）。
cytoflex操作规程CytoFLEX流式细胞分析仪是一种高性能、多参数流式细胞仪，广泛应用于细胞分析、免疫学研究、荧光染色等领域。
为了保证操作安全和数据准确性，以下是CytoFLEX 操作规程。
1. 开机准备a. 检查仪器电源是否插入正确，打开电源开关。
b. 检查电脑是否连接到CytoFLEX流式细胞分析仪。
c. 启动分析软件，如CytExpert。
d. 检查流式细胞分析仪的滤光片配置是否正确。
2. 设定仪器参数a. 在主界面上选择“Acquisition”进行实验参数设置。
b. 选择合适的波长和功率来激发和检测样品中的荧光染料。
c. 根据样品类型和实验要求，设置正确的流速和取样量。
3. 样品制备a. 根据实验要求，选择合适的细胞悬液和染色方法。
b. 遵循标准的样品制备过程，包括细胞计数、离心和悬浮液的制备。
c. 样品处理过程中要保持无菌条件，避免污染和细胞损伤。
4. 样品加载a. 在样品管中加入合适的染料和细胞悬液。
注意避免气泡的产生。
b. 将样品管放入样品架中，确保样品管与固定夹密封紧密。
5. 调节仪器设置a. 使用设置好的仪器参数进行样品调试。
b. 如有需要，调整观察点、光强和阈值，以获得最佳的数据。
6. 开始实验a. 点击软件界面上的“Acquisition”按钮，开始采集样品数据。
b. 实时监控样品流速和染料发光情况，如有异常情况要及时停止实验检查。
7. 数据保存和分析a. 实验完成后，保存数据文件到指定的位置。
b. 使用分析软件对采集到的数据进行后续分析和图表绘制。
8. 清洁和关机a. 关闭采集软件和电脑。
b. 使用清洁剂和纸巾擦拭仪器外壳、玻璃仪器件和样品台面。
c. 关闭CytoFLEX流式细胞分析仪的电源开关。
以上是CytoFLEX操作的基本规程，用户在使用时要按照操作要求仔细操作，确保数据的准确性和仪器的正常运行，同时在实验过程中遵循实验安全规范，确保操作的安全性。
流式细胞仪操作流程(单标)一、开机(务必按照此顺序开机)1、打开下面的小门，推上电源2、打开插线板电源开关3、开电脑4、打开流式细胞仪开关二、软件准备1、打开软件2、点击菜单栏的Cytometer，待流式细胞仪与电脑自动连接后会自动出现startup 和shutdown选项，点击startup，系统提示按确定。
（等待5～6min startup 完成后再继续）2、在出现的Browser栏中依次选择new folder——new experiment——new specimen——new tubes，按照实验组数给new specimen编号，按照每一组实验试管数给new tubes 编号。
3、在右边显示屏中拽出Global sheet，点击Dot Plot绘制散点图，点击Histogram绘制直方图。
以FITC单标抗体为例，首先绘制FSC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图1），然后绘制以FITC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图2），最后绘制以FITC-A为横坐标、count为纵坐标的直方图（图3）。
4、点击菜单栏中的populations，选择create statistics view。
三、上机操作1、将试管放置在流式细胞仪上，在左侧显示屏的Acquisition Dashboard中点击acquire data，此时流式细胞仪开始工作。
2、根据图1中细胞的位置，在Cytometer FACScanto 栏中的parameters标签中调节FSC和SSC的电压大小，使主群细胞在图1上处于居中的位置。
3、点击右侧显示屏的Polygon Gate按钮，在图1中选择要求测量的主群细胞，可见图1中出现P1，并且其中的细胞变成红色。
4、选择图2、图3，分别在左侧显示屏的Inspector-Dot Plot栏中点击P1的复选框，可见图2、3中的图象均变成红色，即要求细胞仪检测选定的细胞P1。
CyFlow Space流式细胞仪操作规程一、开机前检查1.确认所有线缆连接正常。
2.确认废液瓶已被清空，鞘液瓶装入2/3鞘液。
3.确认废液瓶内已加入消毒剂。
二、开机顺序1.按住UPS开关按钮2秒钟，至绿色指示灯亮起。
2.打开流式细胞仪主机电源开关及激光开关。
3.打开计算机主机及显示器开关。
4.打开打印机开关。
三、软件使用步骤1.双击计算机桌面上的“FloMax” 图标，显示欢迎使用界面，点击“确定”（如下图）进入软件，仪器自动初始化。
2.点击软件界面中底部按钮行中的“仪器设臵”按钮，随后软件将弹出仪器设臵相关的菜单。
3.选择“读取”按钮，在“C:\ FloMax”文件夹中选择“*.ist”4.在软件界面中的右上角有两个“关闭”按钮，点击下方的灰色“关闭”按钮，并确认软件初次打开时的默认模板被关闭。
5.读取模板：在软件界面中的左上角“文件”菜单中点击“打开”，选择“C：\FloMax”文件夹中的“*.fcs”。
6.此时仪器处于待机状态，可以上样检测标本。
四、样本处理及检测操作步骤1.标本处理：取约0.5cm2样品放于平面塑料培养皿内，加500ul DNA 1 Step试剂，使用尖锐的刀片切割样品，之后再加入1500ul的DNA 1 Step试剂，将样本及液体用滤网过滤到样品管中，避光染色1min。
2.将样品管插入仪器后，自动开始样品测试，采集的数据达到实验要求后，可以直接拔下样品管，终止测试。
仪器会执行一次自动清洗，结束之后，可以进行下一个测试。
五、保存检测结果1.待每个测试结束并自动清洗完成后，可对检测结果进行保存。
点击“FloMax”软件中“文件”菜单中的“保存”按钮,选择“本地磁盘(D:)”并将检测结果保存在“检测结果”文件夹中，名称可按需输入。
六、生成并打印中文报告1.所有检测结束后需要关闭所有结果或模板。
2.将已经保存并需要生成报告的结果调入FloMax软件，调入方式和“读取模板”的方式相同。
一、准备工作1，清洗偏转板，防止盐离子影响电荷加载，电流偏转。
1）用超纯水沾湿医用棉签，擦拭偏转板所有金属物件。
再用干棉签擦干。
2）5ml注射器吸超纯水，清洗缝隙。
用滤纸先吸水，再用干棉签擦干。
2，鞘液桶加液3，喷嘴超声，喷嘴放入超纯水中，超声2min。
用滤纸吸干水分，晾干。
二、开机启动1，启动电脑，密码BDIS，点开软件，无密码2，机箱侧面依次打开总机开关，蓝色、红色激光。
3，液流启动：Cytometer----FiuidSetup1）气路（透明管）、液路（蓝色管），从乙醇桶上拔下，插到鞘液桶2）闭合喷嘴从侧面放入到喷嘴位置，旋转至12点方向3）取下闭合喷嘴4）将超声过的喷嘴放入喷嘴位置。
4，喷嘴压力切换：菜单栏中Sort---SortSetup----70um（选择当前使用的喷嘴大小）5，液流调整：点开电脑界面中70um图标栏里的Stream，从打叉状态变为打勾。
查看是否都处于正常状态：1）打开仪器机箱，查看液流是否流到废液槽。
如果偏离，拧开两边的螺丝，左右推动使液流到达槽内，拧好螺丝。
2）查看电脑界面，液流图像是否稳定，如果有黑白灰图片变化，用棉签擦拭偏转板上方3）查看电脑界面，液流是否在中央，如果不是，可以手动调整仪器摄像头，或者重新插好喷嘴。
4）机箱中查看激光束是否完好通过，用干棉签挡住通过位置，如果看到激光射出，则正常。
然后关闭主机箱外盖。
调整液流：通过调整振幅来实现。
1）振幅Ampl，数值调大，使液流断滴在上1/3处，即2滴连续液流。
2）频率Freg，一般不动。
3）Gap：当喷嘴为70um时，数值一般为7、8、9。
100um时，为10,、11、12。
4）当Ampl和Gap都稳定时，把实际值（后面）手动输入到确定值的框内（前面）。
5）点击StreamSpot，锁死数值，保持液流稳定。
Drop1：实际值和确定值，变化幅度保持在10以内。
Gap：实际值和确定值，变化幅度保持3以内。
此视为稳定液流。
CytoFLEX常规操作流程CytoFLEX常规操作流程开机流程1.检查鞘液和废液容器。
验证并确认鞘液容器中有足够的鞘液且废液容器已排空。
2.打开细胞分析仪背面的电源总开关，等待细胞分析仪完成启动，再打开电脑。
3.登入Windows 操作系统并选择CytExpert 桌面图标，以打开软件。
4.检查屏幕下方的仪器状态栏，无异常提示即可点击采集栏中的初始化按钮，初始化仪器。
5.在菜单栏中点击细胞仪，在下拉菜单中选择开机流程，按提示完成开机操作：将装有约2ml去离子水放置于上样器中，点击开始。
仪器质控流程1.取质控微球，摇匀后滴一滴微球至装有500μl PBS的样品试管中，混匀，上样。
2.点击菜单栏中的质控，进入质控流程。
3.在批号栏中选择与质控微球对应的靶值文件，点击开始，等待仪器自动完成质控。
注：如果没有对应的靶值文件，或者QC不通过，请联系仪器工程师。
关机流程1.准备好一管有效氯浓度为0.5～1%的次氯酸洗液及一管去离子水。
2.点击菜单栏中的细胞仪，在下拉菜单中点击每日清洗。
3.根据提示，先上次氯酸清洗液，选择清洗时间(常规检测洗3-5min，样本粘性比较大的实验比如周期凋亡等适当延长到6-8min)，然后再选择等时间的去离子水清洗即可。
仪器维护1.每天关机前请参照关机流程完成每日清洗操作。
2.每周一次对于样品台进行清洁。
用有效氯浓度为0.5%左右的漂白水擦拭样品台表面，以及半自动进样器底部。
3.至少每月执行一次深度清洗，或者仪器超过两周未使用时也建议进行深度清洗。
将仪器置于待机模式后，在菜单栏中的细胞仪选项下选择深度清洗，按照提示完成深度清洗即可。
允许清洁溶液留在流动室中约30 分钟。
如果您需要延长清洁时间，请勿超过24 小时。
在深度清洁循环期间，该装置的电源可关闭。
仪器清洗瓶中所用的Contrad 70清洗液使用十次或半年一换。
实验流程1.准备好实验样本，了解实验所用的染料特性，选择正确的通道检测。
