3批ｒｈＩＬ 11制品的ＲＰ ＨＰＬＣ图谱
完全一致,说明该厂ｒｈＩＬ 11的生产工艺是
稳定的;与ＧＩ公司生产的ｒｈＩＬ 11对照品
比较有20个峰与对照品一致,但第6 峰的峰高和 峰面积均明显较小,且在第9和第10 峰之间多一 个峰,说明该厂ｒｈＩＬ 11蛋白质结构与ＧＩ 公司生产的ｒｈＩＬ 11比较存在细小差别。
2。ＨＰＬＣ系统测试
ＨＰＬＣ系统测试标准物质进样后呈3个 峰,12次重复进样3个峰保留时间的ＲＳＤ分别 为0. 4%,0 .6%和0. 8%,峰面积的ＲＳＤ分别为 0 .7%,0 .8%和0 .8%。ｒｈＩＬ 11对照品37℃ 酶切20ｈ后于4℃温控自动进样器连续进样5次, 结果见图1。5个色谱图完全重叠在一起,所产生 21个峰的保留时间、峰高和峰面积的ＲＳＤ均 分别小于1 .0%,5 .4%和9. 8%,表明本系统误差 小,重复性好,可用于ｒｈＩＬ11的肽图分析。
酶反应进程曲线 纵坐标为底物或产物的变化 量，横坐标为反应时间，曲线斜率表示反应速 度。从酶反应进程曲线求得反应的初速度。 酶浓度曲线 纵坐标为反应速度，横坐标为酶 量。通过酶浓度曲线检验反应测定系统是否适 宜。
酶活力测定的要求：测得的反应速度 必须和酶浓度有线性的比例关系，这 也是检验酶反应和测定系统是否适宜、 正确的标准。
每mg供试品中含胰蛋白酶单位数为
A1 - A2 0.003TW
P=
A1—A 2 0.003 T W
重组人白细胞介素 11的胰蛋白酶切肽 图分析
肽图分析是评价重组产品蛋白质结构 及其生产工艺稳定性的重要方法,目前常用 的方法有ＣＮＢｒ裂解ＳＤＳ-ＰＡＧＥ微 量肽图法和胰蛋白酶切ＲＰ ＨＰＬＣ肽图 法。
1。酶切条件 取浓度为3ｍｇ· ｍＬ-1的样品0 4ｍＬ对1%Ｎ Ｈ 4 ＨＣＯ 3 充分透析,然后取透析样品250μＬ至 微量进样瓶,加0 3ｍｇ· ｍＬ-1ＴＰＣＫ处理的胰 蛋白酶10μＬ混匀,于37℃温控自动进样器酶切, 每80ｍｉｎ进样一针,进样量6μＬ,用Ｍｉｌｌ ｅｎｎｉｕｍ32色谱软件选择214ｎｍ进行分析, 直至ｒｈＩＬ 11完全酶解。按此方法摸索最佳 酶切时间,在第14针后ｒｈＩＬ 11已被完全酶切, 酶切时间在18～22ｈ范围内肽图图谱基本一致, 即确定最佳酶切条件为37℃保温20ｈ。
