容器密封系统完好性试验---微生物侵入试验方案.

微生物侵入试验文件编号：SOP-YZ-001-02小组人员：：验证时间：2015年3月30日至2015年4月15 FI《微生物相关的生产验证》项目任务书项目名称：注射剂微生物浸入试验项目完成时间：2015年3月30 |£ 4月16日项目负责人：蔡青佑项目组成员：陈柳谷杨宇康乍凌程茜温少威项目背景：某药品或生物制品企业的GMP认证或复认证工作，按要求需要对注射剂灌封进行挑战试验（微生物浸入试验），本项目结合企业验证工作完成项目任务。

导师：敏审阅:1.简介微主物形体微小，极易通过各种途径入侵、扩散，LI前的检疫、检测措施乂难以及时发现和阻隔，而微生物入侵对人类健康、经济发展，乃至社会稳定和国家安全均构成严重威胁。

因此有必要对注射剂的容器密封系统完好性进行挑战性实验，确定工艺流程的稳固程度，防止微生物入侵以确保产品质量安全可靠。

微主物侵入试验是对最终灭菌容器/密封件系统完好性的挑战性试验。

在验证试验中，取输液瓶或西林瓶（小瓶），灌装入培养基，在正常生产线上压塞、压盖灭菌。

此后，将容器密封面浸入高浓度运动性菌液中，取出、培养并检查是否有微生物侵入，确认容器密封系统的完好性。

此同时，需作阳性对照试验，确认培养基的促菌生长能力。

2.系统描述本次密封系统的完好性试验采用灌装大豆胰蛋口腺肉汤培养基，经压塞、轧盖、灭菌、微生物侵入试验，试验分为两组，A组为正常微生物侵入试验，B组为微生物挑战试验，检查产品密封可靠性是否达到要求，并对试验结果进行分析研究。

3.验证目的通过密封系统的完好性试验确认10ml瓶塞盖组成的密封系统完好性良好，能够保证产品能防止外界污染的工艺要求。

4.验证方案4.1验证方案起草验证方案审批批准人：敬日期：2015年3月304. 2检查确认确认结论：各项检查合格，实验可进行检查人：宇康日期：2015年3月30日复核人：蔡青佑日期：2015年3月31日4. 3人员及职责4. 3.1人员培训及健康检查检查验证小组成员对《密封系统完好性试验验证文件》的培训，要求参与人员熟悉验证的步骤和方法及工作容。

编号：容器密封性验证方案药业股份有限公司1、验证项目：容器密封性验证2、概述：本公司验证小组成员于年月日至年月日对三层共挤输液用袋密封性能进行了验证，考察三层共挤输液用袋在完全浸泡于高浓度运动性菌液4小时后，所有样品均无细菌侵入，可以确认容器密闭系统的完好性。

3、验证目的为考察三层共挤输液用袋的密封性能，通过微生物侵入试验证明三层共挤输液用袋密封性能完好。

4、验证范围：本验证方案适用于三层共挤输液用袋的生产。

5、验证人员5.1质量部QA：负责验证方案及报告的起草及验证的实施。

5.2质量部QC：负责按计划完成验证中的相关检验任务，确保检验结果的正确可靠。

5.3QA主管：负责验证工作的管理，协助验证方案的起草，组织协调验证工作，并总结验证结果。

5.4质量部部长：负责验证方案及报告的审查。

6、概括三层共挤输液用袋密封性试验即微生物侵入试验，是对最终灭菌容器密封系统完好性的挑战性试验。

在验证试验中，取输液袋灌装进培养基，在生产线上封口后灭菌。

然后，将整个袋子完全侵入高浓度运动性菌液中，取出、培养并检查是否有微生物侵入，以确认容器密封系统的完好性。

同时，作阳性对照试验，确认培养基是否有微生物侵入，以确认容器密封系统的完好性。

同时，作阳性对照试验，确认培养基的促菌生长能力。

7、验证内容7.1样品制备7.2营养性试验7.3挑战菌悬液的制备7.4微生物侵入试验8、验证步骤、评价方法及标准8.1试验样品的制备8.1.1试验方法于制袋灌封机分别取连续运行生产的袋子共计150个，按袋子的装量规格灌装SCDM/2（大豆胰蛋白胨肉汤）培养基，经焊盖后于115℃灭菌30分钟，然后将每袋试样编号平放，使培养基与袋子焊合部位内表面充分接触，在30～35℃下放置14天，并每天记录培养结果。

8.1.2判断标准：所有样品均不应长菌。

8.1.3试验结果：小结：检查人：日期：8.2确认培养基促菌生长能力——营养性试验8.2.1试验方法随机取20个试样，每个试样内接种0.1ml的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）ATCC 9027，菌液浓度：10～100CFU/0.1ml。

无菌药品容器密封完整性测试方法集锦前言无菌药品的容器密封系统应该能防止微生物侵入。

对于最终密封的产品需要进行密封完整性测试，并将有缺陷的产品剔除。

关于无菌药品的容器密封性，中国GMP附录1无菌药品中有相关的规定：第七十七条无菌药品包装容器的密封性应当经过验证，避免产品遭受污染。

熔封的产品（如玻璃安瓿或塑料安瓿）应当作100%的检漏试验，其它包装容器的密封性应当根据操作规程进行抽样检查。

第七十八条在抽真空状态下密封的产品包装容器，应当在预先确定的适当时间后，检查其真空度。

方法简介根据USP通则<1207>，将容器密封完整性测试的检测方法分成确定性和概率性两种类型。

确定性检测方法：真空衰减法、高压放电法和激光法。

概率性检测方法：微生物挑战法、色水法。

1真空衰减法真空衰减法是将包装容器置于专门的测试腔体内，对测试腔体抽真空，容器内外压差使得容器内部气体通过漏孔泄露进入测试腔体，主机压力传感器监测到压力的变化，将压力变化值和参考值做比较，以判定容器密封完整性是否合格。

此方法的测试步骤包括：抽真空、保压和测试。

此方法适用性很广，可用于常压、微负压和高真空的各类容器检漏，适用于粉体、液体填充容器的检漏，不可用于卡式瓶的检漏。

2高压放电法高压电检漏是指在待检品上外加高压电，根据无缺陷和有缺陷时电学参数、表征的差异实现对待检样品的密封完整性测试确认。

此方法要求容器内灌装的液体有一定的电导率。

高压放电法适用于水针西林瓶、液体安瓿瓶、液体填充预注射器和卡式瓶的完整性测试。

3激光法激光法是通过监测容器顶空压力、水汽和顶空氧变化来判定容器的完整性，原理是发射的激光穿透容器顶空，容器顶空的水汽和氧对激光有吸收，激光吸收量和对应的物质含量成正比。

顶空水汽的吸收峰宽度和顶空压力成正比，因此可以通过顶空水汽的吸收峰宽来获得顶空压力。

此方法适用于负压冻干粉针西林瓶，其内部有一定含量的顶空水汽，可通过此方式进行完整性测试。

容器/密封系统完好性实验——微生物浸入试验概述微生物浸入试验是对最终灭菌容器/密封件系统完好性的挑战性试验。

在验证试验中，去输液瓶，灌装入培养基，在正常生产线上压塞、压盖，经最长时间灭菌。

此后，将容器密封面浸入高浓度运动性菌液中，取出、培养并检查是否有微生物浸入，已确认容器密封系统的完好性。

此同时，需做阳性对照试验，确认培养基的促菌生长能力。

试验步骤1试验样品的制备1.1在生产线上去足够量的容器，灌装SCDM/2(大豆胰蛋白胨肉汤)培养基，使用自动压塞和压盖设备将容器密封。

1.2将灌装后的容器经最长灭菌程序灭菌。

1.3从灭菌柜中取出试样，冷却，将一试样倒转，使培养基与容器内表面充分接触，在30~35℃下竖放培养14天。

1.4小心去除至少50个试样的铝盖，注意不要破坏其密封口。

将去铝盖时不慎损坏容器密封性的所有试样剔除。

按1.3要求培养样品。

2确认培养基促菌生长能力——营养性试验2.1所有试样培养14天均不长菌时，随机取20个戴盖试样，每个试样内接种0.1ml 的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）ATCC9027,菌液浓度：10-100CFU/0.1ml。

2.2在30~35℃下竖放培养7天，或培养至所有试样都呈阳性结果。

2.3 若7天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样中，微生物生长良好，则容器内培养基的促菌生长能力可判为合格。

使用格兰染色和紫外灯下肉汤呈蓝绿色荧光的性质来鉴定并确认试样容器内生长的菌为接入的铜绿假单胞菌。

3挑战菌悬浮液的制备3.1从铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）ATCC9027的新斜面上取一整环培养物，分别接入含10ml无菌培养基的试管中，在30~35℃下培养16~18h。

3.2将每管的培养物分别转入含1000ml相同培养基（SCDM/2）的容器内，于30~35℃下培养22~24h。

在培养结束时，能明显见容器内培养基出现浑浊。

3.3培养结束后的菌悬液既可用来作容器/密封系统完好性试验4 微生物侵入操作实验步骤本实验需在生物安全柜内或其他不影响生产环境的地方进行。

安瓿瓶密封完整性测试方法安瓿瓶泄露的影响安瓿瓶作为医药常用的包装形式之一，安瓿瓶密封性检测项目是需要重点关注的。

安瓿瓶包含塑料安瓿瓶和玻璃安瓿瓶，里面一般填充无菌液体制剂。

安瓿瓶可能会填充无菌空气或氮气。

采用充氮工艺的目的是一方面可以抑制好氧细菌的生长，另一方面也可以防止氧敏感产品被氧化。

安瓿瓶一旦泄漏，空气中的氧气和微生物会侵入容器内，使得内部填充的产品可能被氧化，影响了产品的稳定性；且微生物侵入后，假如填充的产品适合微生物的生长，微生物会快速繁殖，进而给病人的生命安全埋下隐患。

安瓿瓶检漏方法选择容器密封完整性（ container—closure integrity，CCI）是无菌制剂研究和评价的一项重点关注内容，是其在整个生命周期内保证产品质量并保持无菌的关键因素。

2024年6月CDE发布的《化学药品注射剂包装系统密封性研究技术指南（征求看法稿）》明确了始终以来注射剂行业所存在包装系统是否要进行密封性测试的疑虑。

提及了进行注射剂包装密封性测试的几种测试方法。

明确了包装完整性泄漏测试技术（容器密闭完整性测试技术（CCIT））将检漏方法分类为确定性的方法和概率性的方法，其中真空衰减法、压力衰减法、高压放电法和激光顶空分析方法是确定性的方法，而传统的微生物侵入法和色水法是概率性的方法。

安瓿瓶密封完整性检测方法有很多种，认真研读国内外标准，我们给出制药企业常用的几种方法：方法方法灵敏度适用性局限性真空衰减法1.0um—5.0um是目前应用范围较广确实定性检测方法，可用于各种液体、固体，负压、常压，有颜色无颜色包装系统，非破坏性。

不适用于混悬液、乳状液（如蛋白质）、高粘度物质（如糖浆）等容易堵塞泄漏通道的产品。

无法区分泄漏位置及多个泄漏孔还是单个。

高压放电法1.0um—5.0um适用于混悬液、乳状液、黏稠液体、蛋白质等各类制品测试。

检测速度块，可准确找到泄漏位置。

不适用于粉针等固体产品。

内容物必需是导电的液体。

无菌药品包装容器密封性试验报告试验日期：试验人员：审核：批准：报告人：日期：1.概述本验证由生产部及质量部共同完成，并在质量部的全过程监控下按已批准的方案实施。

验证实施日期为年月日至年月日。

2.结果报告：2.1试验样品制备情况：所用样品为无菌灌装模拟试验后合格的样品。

2.1制备微生物菌悬液：从铜绿假单胞菌（ATCC 9027）的新鲜斜面上取培养物，接入含6ml无菌胆盐乳糖培养基的试管中，在30～35℃下培养了约24h，将此培养物分别转入含600ml无菌胆盐乳糖培养基的三角瓶内，于30～35℃下培养了约24h，现将菌落计数如下：结论：可用于试验用菌液。

2.2营养试验：每个试验样品内接种了多少个CFU（约100）铜绿假单胞菌。

在30～35℃下培养了7天，附：培养记录第一次试验试验开始时间：第二次试验试验开始时间：第三次试验试验开始时间：结果：结果所有试样品都呈阳性结果，符合试验预订的目标。

2.3微生物浸入试验：①将2.1的铜绿假单胞菌（ATCC 9027）的菌悬液倒入不锈钢桶内，密闭，从试验中取100只试验样品倒置于菌悬液中，将试验样品在菌悬液中持续浸泡约4h后，取出试验样品，擦干容器外残余的菌悬液，其外表用含0.5%过乙酸的70%异丙醇消毒五分钟（注意不要破坏其密封口），放入塑料袋中，置30～35℃下培养7天。

检查试验样品内微生物生长情况，有生长记作“﹢”，无生长记作“﹣”。

②阳性对照：阳性对照试验样品不经菌悬液浸泡，其外表用含0.5%过乙酸的70%异丙醇消毒五分钟后，接种10～100CFU铜绿假单胞菌，进行阳性对照试验。

现将试验记录如下：第一次试验第二次试验第三次试验结果：3.评价：冻干粉针剂轧盖密封完好性验证合格，表明各项工艺卫生管理规程及轧盖、无菌操作程序、净化空调、灌装机、人员符合GMP及无菌制剂生产要求，可进行产品的正式生产。

附：西林瓶，胶塞及铝盖规格尺寸，来源。

①．当轧盖设备发生变化时应进行再验证。

无菌药品包装容器的密封性验证方案1.概述：无菌药品的容器应能在整个有效期内有完好的密封性，防止微生物的浸入。

药品包材的设计及选择要考察相互的配合情况。

无菌容器/密封件系统的完整性测试可以在培养基灌装时进行。

2.目的：评估产品包装的密封性，以充分保护产品在储存期的无菌状态。

3.依据：《药品生产质量管理规范》2010修订版：附录1：第九十五条无菌药品包装容器的密封性应经过验证，以避免产品遭受污染。

4.责任：质量部、生产部对本验证负责。

5.微生物浸入试验法验证密封完整性：往产品容器内灌入培养基并按照常规方式压塞封盖，灭菌后冷却备用。

将冷却后的容器倒置并将瓶口完全浸没于高浓度（108CFU/ml）的运动性菌液中，4小时后，将容器外表面消毒并培养，看是否有挑战性细菌在容器内生长。

多准备一些灌装培养基的样品，在与产品相同地的贮存条件下贮存。

在贮存的一定时间间隔（12,24，36和48个月等），取出部分样品，进行微生物浸入试验，以确定密封系统在贮存期内的有效性。

6.范围：西林瓶、胶塞及铝盖的密封性验证，共有10ml及2ml两种规格。

7.用品：胆盐乳糖培养基铜绿假单胞菌（ATCC 9027）乙酸异丙醇8.实施：8.1制备样品：取已经按相应清洗灭菌操作规程制备好的西林瓶、胶塞及铝塑组合盖150套，西林瓶内灌装入已灭菌的胆盐乳糖培养基，在正常生产线上抽真空、压塞、轧盖。

将每一试样品倒转，使培养基与西林瓶内表面及胶塞充分接触，在30～35℃竖立倒置培养14天，培养基应澄清，无菌落生长。

8.2制备微生物菌悬液：从铜绿假单胞菌（ATCC 9027）的新鲜斜面上取培养物，分别接入含6ml无菌胆盐乳糖培养基的试管中，在30～35℃下培养18～24h；将每管的培养物分别转入含600ml相同培养基的容器内，于30～35℃下培养（约24小时），在培养结束时，能明显见容器内培养基出现浑浊，计数，当菌落数大于108CFU/ml时，停止培养，待用（在微生物侵入试验开始，所用菌悬液浓度（活菌数）必须达到1×108CFU/ml。

引言化学药品注射剂仿制药质量与疗效一致性评价技术要求（征求意见稿）中，稳定性研究技术要求中提到：“稳定性考察初期和末期进行无菌检查，其它时间点可采用容器密封性替代。

容器密封性可采用物理完整性方法（例如压力/真空衰减等）进行检测，并进行方法学验证。

”1、常见的容器密封完整性验证方法主要有如下几种1.1 微生物侵入实验法验证密封完整性：往产品容器内灌入培养基并按常规方式压塞，轧盖，灭菌后冷却备用。

将冷却后的容器倒置并将瓶口完全浸没于高浓度的运动菌液中，如大肠埃希菌，铜绿假单胞菌或粘质沙雷菌，4小时后，将容器外表面消毒并培养，看是否有挑战性细菌在容器内生长。

1.2 饱和盐水法测试密封性：有些产品可以做盐水渗入试验：在玻璃瓶灌入注射用水，并按常规方法密封（压塞、轧盖），此后，将其倒置于一盛有饱和盐水的托盘内，是胶塞及铝盖全部进入饱和盐水中。

将其放入灭菌设备并按常规的灭菌程序灭菌，分析瓶中内容物是否含氯化钠检查密封完整性。

1.3 亚甲基蓝溶液法：取适当数量的玻璃瓶，在玻璃瓶中灌入注射用水，按常规方法压塞、轧盖。

胶塞及样品的处理最好模拟实际生产工艺。

将样品倒置，放入装有一定浓度亚甲基蓝溶液的容器中，使其完全浸没。

将容器放入真空箱中抽真空，维持一段时间，真空箱恢复至常压，继续维持一段时间。

取出，用水冲洗瓶外，目检。

亚甲基蓝溶液不得渗入瓶内。

开发阶段的容器密封完整验证方法有时也用于生产过程中的检测。

2、常见的密封完整性检查方法主要有如下几种2.1 利用染色浴测试密封性：在高温灭菌箱灭菌之后，染色浴的测试可以在灭菌腔室内进行（如果技术条件允许的话），也可在另一个可以调整压力的容器中进行。

将容器完全浸没在染色浴，并且存在负压的环境中。

如果该容器有裂缝，空气就会从瓶中溢出，当容器表面有正压时，染色溶液会从裂缝进入瓶内部。

通过目检剔除变色的容器。

对于小批量产品，染色浴是一个相对经济的做法，不需要很多技术仪器，而且可以检出较大的泄漏。

微生物侵入试验文件编号：SＯP-YＺ—0０1—0２小组人员:：验证时间：2015年3月30日至201５年4月15日《微生物相关的生产验证》项目任务书项目名称：注射剂微生物浸入试验项目完成时间：2015年3月30日~4月16日项目负责人：蔡青佑项目组成员：陈柳谷杨宇康李凌程茜温少威项目背景：某药品或生物制品企业的GMP认证或复认证工作，按要求需要对注射剂灌封进行挑战试验（微生物浸入试验），本项目结合企业验证工作完成项目任务。

项目目标：利用实训室条件，完成注射剂灌封、灭菌，小组完成一批微生物浸入试验验证。

项目任务及要求序号任务名称任务要求任务成果1接受项目任务明确项目内容和要求。

能阅读、分析任务书，根据任务书分解要完成的任务。

参考资料和文件目录微生物浸入试验方法2查阅相关资料了解能获取资料的途径。

查阅注射剂微生物浸入试验相关资料，了解验证关键技术和知识。

分析项目所涉及的微生物操作技术要点。

微生物浸入试验（示意图菌种传代保存使用记录菌液制备方法3制定计划和方案实施企业专家现场讲座和指导的方法。

对实施条件进行分析，并设计方案。

依据方案制定实施计划。

工作分工和计划进程表。

注射剂微生物浸入试验方案。

4实施验证操作备料、器皿灭菌。

培养基配置、灌封、灭菌、菌液制备和浸泡、外部消毒、培养；对照接种、培养。

培养、观察、记录。

结果分析和报告。

补充、纠正。

按照验证方案和进程表完成操作并记录。

验证结果分析和总结。

工作日志5项目总结和报告项目学习总结的撰写方法。

能撰写项目学习总结撰写验证总结和报告。

制作交流用幻灯。

6项目资料汇总、存档学习过程资料的收集、分类方法。

能收集项目学习资料，汇总并存档。

编写目录、文本资料的汇总与装订。

电子资料的汇总与存档。

导师：李敏审阅:１、简介微生物形体微小，极易通过各种途径入侵、扩散，目前得检疫、检测措施又难以及时发现与阻隔,而微生物入侵对人类健康、经济发展，乃至社会稳定与国家安全均构成严重威胁。

述：无菌药品的容器应能在整个有效期内有完好的密封性，防止微生物的浸入。

药品包材的设计及选择要考察相互的配合情况。

无菌容器/密封件系统的完整性测试可以在培养基灌装时进行。

2.目的：评估产品包装的密封性，以充分保护产品在储存期的无菌状态。

3.依据：《药品生产质量管理规范》2010修订版：附录1：第九十五条无菌药品包装容器的密封性应经过验证，以避免产品遭受污染。

4.责任：质量部、生产部对本验证负责。

5.微生物浸入试验法验证密封完整性：往产品容器内灌入培养基并按照常规方式压塞封盖，灭菌后冷却备用。

将冷却后的容器倒置并将瓶口完全浸没于高浓度（108CFU/ml）的运动性菌液中，4小时后，将容器外表面消毒并培养，看是否有挑战性细菌在容器内生长。

多准备一些灌装培养基的样品，在与产品相同地的贮存条件下贮存。

在贮存的一定时间间隔（12,24，36和48个月等），取出部分样品，进行微生物浸入试验，以确定密封系统在贮存期内的有效性。

6.范围：西林瓶、胶塞及铝盖的密封性验证，共有10ml及2ml两种规格。

7.用品：胆盐乳糖培养基铜绿假单胞菌（ATCC 9027）乙酸异丙醇8.实施：8.1制备样品：取已经按相应清洗灭菌操作规程制备好的西林瓶、胶塞及铝塑组合盖150套，西林瓶内灌装入已灭菌的胆盐乳糖培养基，在正常生产线上抽真空、压塞、轧盖。

将每一试样品倒转，使培养基与西林瓶内表面及胶塞充分接触，在30～35℃竖立倒置培养14天，培养基应澄清，无菌落生长。

8.2制备微生物菌悬液：从铜绿假单胞菌（ATCC 9027）的新鲜斜面上取培养物，分别接入含6ml无菌胆盐乳糖培养基的试管中，在30～35℃下培养18～24h；将每管的培养物分别转入含600ml相同培养基的容器内，于30～35℃下培养（约24小时），在培养结束时，能明显见容器内培养基出现浑浊，计数，当菌落数大于108CFU/ml时，停止培养，待用（在微生物侵入试验开始，所用菌悬液浓度（活菌数）必须达到1×108CFU/ml。

引言化学药品注射剂仿制药质量与疗效一致性评价技术要求（征求意见稿）中，稳定性研究技术要求中提到：“稳定性考察初期和末期进行无菌检查，其它时间点可采用容器密封性替代。

容器密封性可采用物理完整性方法（例如压力/真空衰减等）进行检测，并进行方法学验证。

”1、常见的容器密封完整性验证方法主要有如下几种1.1 微生物侵入实验法验证密封完整性：往产品容器内灌入培养基并按常规方式压塞，轧盖，灭菌后冷却备用。

将冷却后的容器倒置并将瓶口完全浸没于高浓度的运动菌液中，如大肠埃希菌，铜绿假单胞菌或粘质沙雷菌，4小时后，将容器外表面消毒并培养，看是否有挑战性细菌在容器内生长。

1.2 饱和盐水法测试密封性：有些产品可以做盐水渗入试验：在玻璃瓶灌入注射用水，并按常规方法密封（压塞、轧盖），此后，将其倒置于一盛有饱和盐水的托盘内，是胶塞及铝盖全部进入饱和盐水中。

将其放入灭菌设备并按常规的灭菌程序灭菌，分析瓶中内容物是否含氯化钠检查密封完整性。

1.3 亚甲基蓝溶液法：取适当数量的玻璃瓶，在玻璃瓶中灌入注射用水，按常规方法压塞、轧盖。

胶塞及样品的处理最好模拟实际生产工艺。

将样品倒置，放入装有一定浓度亚甲基蓝溶液的容器中，使其完全浸没。

将容器放入真空箱中抽真空，维持一段时间，真空箱恢复至常压，继续维持一段时间。

取出，用水冲洗瓶外，目检。

亚甲基蓝溶液不得渗入瓶内。

开发阶段的容器密封完整验证方法有时也用于生产过程中的检测。

2、常见的密封完整性检查方法主要有如下几种2.1 利用染色浴测试密封性：在高温灭菌箱灭菌之后，染色浴的测试可以在灭菌腔室内进行（如果技术条件允许的话），也可在另一个可以调整压力的容器中进行。

将容器完全浸没在染色浴，并且存在负压的环境中。

如果该容器有裂缝，空气就会从瓶中溢出，当容器表面有正压时，染色溶液会从裂缝进入瓶内部。

通过目检剔除变色的容器。

对于小批量产品，染色浴是一个相对经济的做法，不需要很多技术仪器，而且可以检出较大的泄漏。

USP1207《容器密封完整性测试》解读●关于方法适用性：没有一种方法适合所有应用，测试方法选择基于特定产品的具体情况。

对于给定产品的生命周期，通常采用超过1种方法。

●关于方法适用性：产品包装的小差异可能允许一种方法适用于多个产品包装。

●关于方法的选择：包装存在分压差但不存在绝压差的情况下，可以用示踪气监测法判断泄漏；包装存在绝压差的情况下，可以通过监测顶空绝压随时间变化来判断泄漏。

●关于方法的选择：抽真空时产品成分固化可能会堵塞漏孔，使得真空衰减无效，此时可以考虑用高压放电法，前提是液体产品比包材更导电。

●关于方法的选择：铝箔包装可能证实与高压放电法不兼容，高压放电法最适用于相对不导电的包装材料。

然而，西林瓶的铝盖对高压放电法没有妨碍，甚至可以用于查找西林瓶封口的泄漏。

●关于方法的干扰因素：在某些情况下，包装内容物会干扰方法检测最小泄漏的能力。

如蛋白质成分或盐类可能堵塞漏孔，阻碍了真空衰减法或质量提取法的气体流动使得不能检出。

因此，要很谨慎理解产品对所选方法的潜在干扰，包括在包装装配好的最初时间及后续时间。

●关于微生物和液体侵入：液体在0.1um开始侵入，微生物在0.3um开始侵入。

●关于最大可允许泄漏限值：如果产品不仅要求无菌，还要求顶空气保留，那么此类产品的最大可允许泄漏限值要求更严格，同时还要考虑包装的阻隔性。

●关于最大可允许泄漏限值：硬质容器最大可允许泄漏限值可以采用0.1-0.3um，软包装最大可允许泄漏限值没有指明具体的漏孔。

●关于泄漏级别：要求包装绝对不漏是不切实际的，而是需要考虑与产品质量有关的泄漏级别，也就是说，不应当允许包装泄漏超过产品的最大可允许泄漏限值，此类泄漏应当不存在。

●关于泄漏引发的产品质量风险：由所关心的泄漏引发的产品质量风险包括3类：微生物侵入导致的产品无菌风险；液体或固体的侵入导致产品理化质量风险；顶空气含量改变导致产品理化质量风险或阻碍产品被终端客户使用。

制药行业容器密封性完整性测试的简介及选择1 概述近年来，国外开发了真空衰减法等无损定量的测试方法，并且出台了相应的测试标准和法规。

美国药典USP 1207 提出多种确定性的检测方法：真空衰减法、高压放电法和激光法等，将传统的微生物挑战法、色水法等归类为概率性的检测方法。

尤其是国外，对药品质量控制设定的技术门槛越来越高，部分FD A及欧盟审计官甚至明确推荐采用国际先进的无损测试技术替代传统的破坏性测试技术。

针对美国药典USP 1207 常见的3大确定性的检测方法：真空衰减法、高压放电法和激光法做详细阐述，并且根据一些典型的应用推荐了最佳的测试方法。

2 真空衰减法美国材料试验学会(ASTM)于2009年推出了真空衰减法作为包装无损检漏的测试标准ASTM F2338-09，该测试标准后来又得到了美国FDA的批准和认可。

国内暂时还没有相关的测试标准出台。

真空衰减法的原理是将包装容器置于专门的测试腔体中，对测试腔体抽真空，容器内外压差使得容器内部气体通过漏孔泄漏进入测试腔体，主机压力传感器监测到压力的变化，将压力变化值和参考值做比较，以判定容器是否合格。

下图是真空衰减法设备主机和西林瓶测试腔体。

真空衰减法的测试步骤主要包括：抽真空、保压和测试，见图2。

1) 抽真空：在抽真空阶段，如果在指定的抽真空时间内，实际真空度无法达到参考真空度，那么包装有大漏。

2) 保压：在保压阶段，如果在指定的保压时间内，实际真空度无法达到参考真空度，那么包装有中漏。

3) 测试：在测试阶段，如果实际dp值大于参考dp值，那么包装有小漏。

通过上述3个步骤，可以将不同程度的泄漏分别识别出来。

从而保证了该方法既能测大漏，又能测微漏。

真空衰减法分为只有绝压传感器的单传感器和具有绝压和差压传感器的双传感器技术，单传感器的技术通常精度为15-25um，双传感器技术的精度一般为1.5-10um。

绝压传感器和差压传感器可以看做是两把具有不同分辨率的标尺，绝压传感器的分辨率低，差压传感器的分辨率高，因而，单传感器的精度要比双传感器的精度差。

容器/密封系统完好性试验---微生物侵入试验方案---大容量注射剂产品验证编号：N-2222-01起草人：部门审核：QA审核:审核批准人：批准日期：1 概述微生物侵入试验是对最终灭菌容器／密封件系统完好性的挑战性试验。

在验证试验中，取输液瓶，灌装入培养基，在正常生产线上压塞、压盖灭菌。

此后，将容器密封面浸入高浓度运动性菌液中，取出、培养并检查是否有微生物侵入，确认容器密封系统的完好性。

此同时，需作阳性对照试验，确认培养基的促菌生长能力。

2 试验样品的制备2.1 在玻瓶输液及软袋输液生产线上，按100ml、250ml二种产品规格，各取300瓶（袋）数量的瓶（袋）中，灌装营养肉汤培养基，使用自动压塞和压盖设备将容器密封。

2.2 将灌装后的容器经121℃、20分钟灭菌（过度杀灭法灭菌）。

2.3 从灭菌柜中取出试样，冷却，将每一试样倒转，使培养基与容器内表面充分接触，在30～35℃下竖放培养14天。

3 确认培养基促菌生长能力——营养性试验3.1 所有试样培养14 天均不长菌时，随机取20 个带盖试样，每个试样内接种1ml 的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC 9027，菌液浓度：10～100CFU/1ml。

3.2 在30～35℃下培养7天，或培养至所有试样都呈阳性结果。

3.3 若7天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样中，微生物生长良好，则容器内培养基的促菌生长能力可判为合格。

使用革兰染色和紫外灯下肉汤呈蓝绿色荧光的性质，来鉴定并确认试样容器内生长的菌为接入的铜绿假单胞菌。

4 挑战菌悬浮液的制备4.1 从铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)ATCC 9027 的新鲜斜面上取一整环培养物，分别接入含lOml 无菌培养基的试管中，在30～35℃下培养16～18h。

4.2 将每管的培养物分别转入含1000ml 相同培养基的容器内，于30～35℃下培养22～24h。

类别：验证编号：部门：质量部页数：9页大容量注射剂*车间密封系统完好性――微生物侵入试验方案起草：年月日审核会签：质量部生产技术部工程技术部批准：年月日实施计划：从年月日到年月日目录1. 概述2. 验证方案变更申请及批准3. 验证小组成员与职责4. 编制依据5. 验证目的6. 验证内容7. 验证周期8. 验证结果的分析与评价9. 附件1.概述微生物侵入试验是对最终灭菌产品密封系统完好性的挑战性试验。

取输液瓶灌装入培养基，在正常生产线上焊盖灭菌。

此后，将输液瓶倒置侵入高浓度运动性菌液中，取出、培养并检查是否有微生物侵入，以确认密封系统的完好性。

此同时，需作阳性对照试验，确认培养基的促菌生长能力。

1.1 验证结果确定：如果一批不合格，应增加两个批次验证，包含增加批次在内，如果两批不合格，判定本次验证失败。

1.2 根据验证过程及验证结果，确认和调整工艺条件及参数。

1.3 填写验证证书。

2. 验证方案变更申请及批准验证过程中应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案变更申请及批准书，报验证小组批准。

（附件一）3.. 验证成员与职责：3.1成员部门职务签名日期验证小组验证小组组长生产部生产部部长QAQCQCQCQC工程技术部大容量注射剂三车间车间主任大容量注射剂三车间生产操作者大容量注射剂三车间生产操作者批准人：批准日期：年月日3.2 职责：3.2.1组长：组织编写验证方案；领导协调验证项目的实施，协调验证小组的工作；对验证过程的技术质量负责；参加验证方案的会签、终审、批准；参加验证报告的批准。

3.2.2验证小组：3.2.2.1 准备、检查验证方案。

3.2.2.2 设计、组织和协调验证试验。

3.2.2.3准备验证报告，评估所有的测试结果。

3.2.3生产技术部及生产车间3.2.3.1实施验证方案。

3.2.3.2 负责验证资料、数据收集、记录。

3.2.3.3负责设备、容器具的清洁。