菜籽甾醇转化制备雄烯二酮高产菌株的诱变育种

分枝杆菌原生质体诱变产9-羟基-雄烯二酮菌种选育薛凯;王荣;王友富;李良智;胡翠英;扶教龙【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2017(045)023【摘要】为获得转化底物植物甾醇为9-羟基-雄烯二酮(简称9-OH-AD)的高产稳定菌株,将出发菌株分枝杆菌制备成原生质体,并对其原生质体进行定向紫外诱变筛选.结果表明,NaCl为最佳的分枝杆菌原生质体渗透稳定剂,最适浓度为0.5 mol/L,在此条件下获得的原生质体数量为3.1×108个/mL,且最终获得1株比出发菌株9-OH-AD生产量提高84.7％的菌株MS23,经传代3次,9-OH-AD的积累量分别为37.32、41.64、38.77 mg/L,具有良好的遗传稳定性.产品通过液相色谱进行确证,同时在5 L发酵罐中进行转化制备9-OH-AD的初步研究.经原生质体紫外诱变获得的遗传性稳定的9-OH-AD高产菌株可用于进一步的转化制备条件优化研究.【总页数】5页(P288-292)【作者】薛凯;王荣;王友富;李良智;胡翠英;扶教龙【作者单位】苏州科技大学化学生物与材料工程学院,江苏苏州215009;浙江神洲药业有限公司,浙江台州318000;浙江神洲药业有限公司,浙江台州318000;苏州科技大学化学生物与材料工程学院,江苏苏州215009;苏州科技大学化学生物与材料工程学院,江苏苏州215009;苏州科技大学化学生物与材料工程学院,江苏苏州215009【正文语种】中文【中图分类】S182【相关文献】1.9-苯基-9-羟基-4,5-二氮杂芴水合物的合成与表征2.一种新型含磷阻燃剂双-N[1-(4-羟基苯基)-1-(9-氢-9-氧杂-10-磷杂菲-10-氧化物)-甲基]-1,5-萘二胺的合成及应用3.分枝杆菌LY-1转化植物甾醇产9α羟基雄烯二酮的发酵工艺优化4.C1,2位脱氢酶抑制剂对9-羟基雄烯二酮制备的影响5.C1,2位脱氢酶抑制剂对9-羟基雄烯二酮制备的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010698933.8(22)申请日 2020.07.20(66)本国优先权数据202010600821.4 2020.06.28 CN(71)申请人 中国科学院上海高等研究院地址 201210 上海市浦东新区海科路99号(72)发明人 张保国　刘相岑　袁辰阳　曹慧锦　杜桂林　史吉平　(74)专利代理机构 上海光华专利事务所(普通合伙) 31219代理人 许亦琳　余明伟(51)Int.Cl.C12N 9/02(2006.01)C12N 15/53(2006.01)C12N 15/74(2006.01)C12N 1/21(2006.01)C12P 33/02(2006.01)C12R 1/32(2006.01) (54)发明名称一种微生物降解植物甾醇生产雄二烯二酮的方法(57)摘要本发明涉及生物技术领域，提供一种微生物降解植物甾醇生产雄二烯二酮的方法，首次从新金分支杆菌DSM 1381中克隆出一个新的3‑甾酮‑△1‑脱氢酶基因，过基因工程手段，获得了高效表达3‑甾酮‑△1‑脱氢酶的重组菌，在转化培养基中底物植物甾醇浓度高达5g/L时，可使转化液中产物雄二烯二酮的纯度在95％以上，有效的减少副产物雄烯二酮残留，提高产物雄二烯二酮的纯度。

权利要求书1页 说明书11页序列表8页 附图2页CN 111808830 A 2020.10.23C N 111808830A1.一种3-甾酮-△1-脱氢酶，其特征在于，所述3-甾酮-△1-脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码如权利要求1所述的3-甾酮-△1-脱氢酶。

3.根据权利要求2所述的一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID NO：28所示。

4.一种重组表达载体，其特征在于，包含如权利要求2或3所述的多核苷酸。

菜籽甾醇转化制备雄烯二酮高产菌株的诱变育种杨英;姜绍通;胡锦艳;赵俊平;梁铁艳【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2009(030)005【摘要】以分枝杆菌Mycobacterium sp.BD-696为出发菌株,采用紫外、硫酸二乙酯复合诱变处理,筛选得到两株雄烯二酮高产突变株:Mycobacterium sp.BD-696-3和Mycobacterium sp.BD-696-6,在底物甾醇添加量为6‰、摇瓶发酵168h时的雄烯二酮产量分别为2.31g/L和2.33g/L,得率分别为60.7%和61.4%,较出发菌株提高了12.8%和13.5%.连续传代实验结果表明,突变株Mycobacterium sp.BD-696-6的遗传性状稳定.【总页数】4页(P145-148)【作者】杨英;姜绍通;胡锦艳;赵俊平;梁铁艳【作者单位】合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽,合肥,230009;安徽建筑工业学院环境工程系,安徽,合肥,230022;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽,合肥,230009;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽,合肥,230009;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽,合肥,230009;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽,合肥,230009【正文语种】中文【中图分类】Q933【相关文献】1.两相系统发酵转化植物甾醇为雄烯二酮的研究 [J], 姜绍通;赵俊平;杨英;胡锦艳;崔丽娟2.双水相系统微生物转化植物甾醇制备雄烯二酮研究 [J], 杨英;姜绍通;潘丽军;易守连3.微生物转化植物甾醇为雄烯二酮检测方法的建立 [J], 杨英;姜绍通;赵俊平;胡锦艳;操丽丽4.分枝杆菌LY-1转化植物甾醇产9α羟基雄烯二酮的发酵工艺优化 [J], 王向栋;李会;陈志蔚;蔡兆培;史劲松;许正宏5.分枝杆菌降解植物甾醇制备雄烯二酮转化过程研究 [J], 杨英;姜绍通;魏兆军;赵妍嫣;孙晓明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公开说明书[11]公开号CN 1639354A [43]公开日2005年7月13日[21]申请号03804973.2[22]申请日2003.02.03[21]申请号03804973.2[30]优先权[32]2002.02.01 [33]US [31]10/066,395[86]国际申请PCT/CA2003/000131 2003.02.03[87]国际公布WO2003/064674 EN 2003.08.07[85]进入国家阶段日期2004.08.31[71]申请人阿克佐诺贝尔公司地址荷兰阿纳姆[72]发明人J·P·库特尼 E·J·赫灵顿 G·斯帕索夫[74]专利代理机构中国国际贸易促进委员会专利商标事务所代理人罗菊华[51]Int.CI 7C12P 33/16C12P 33/00C12P 33/02C12P 39/00C12N 1/14C07J 1/00// ( C12P33/16,C12R1∶32)(C12P33/02,C12R1∶77)权利要求书 2 页 说明书 26 页 附图 2 页[54]发明名称将植物甾醇发酵制备雄二烯二酮的方法[57]摘要将植物甾醇组合物发酵以制备雄烯二酮(雄－4－烯－3，17－二酮)和随后的雄二烯二酮(雄－1，4－二烯，3，17－二酮)的方法，其包括：在第一营养培养基中增殖分枝杆菌属的微生物培养物；将微生物培养物和植物甾醇组合物在生物反应器中放置足够的时间以将组合物基本上转化为雄烯二酮(“AD溶液”)；在第二营养培养基中增殖镰孢属的真菌培养物；将1)镰孢属物种或2)真菌培养物培养基中的一种或多种注入生物反应器中，反应足够的时间以将AD溶液转化为雄二烯二酮。

03804973.2权 利 要 求 书第1/2页 1.将植物甾醇组合物发酵以制备雄烯二酮(雄-4-烯-3，17-二酮)和随后制备雄二烯二酮(雄-1，4-二烯，3，17-二酮)的方法，其中包括： 在第一营养培养基中增殖分枝杆菌属的微生物培养物； 将微生物培养物和植物甾醇组合物在生物反应器中放置足够的时间以将该组合物基本上转化为雄烯二酮(″AD溶液″)；在第二营养培养基中增殖镰孢属的真菌培养物；将1)镰孢属物种和2)真菌培养物培养基中的一种或多种注入生物反应器中足够的时间以将AD溶液转化为雄二烯二酮。

雄甾烯二酮转化菌的诱变育种
李莹;戈梅;王旻;陈代杰
【期刊名称】《中国医药工业杂志》
【年(卷),期】2003(34)7
【摘要】分别采用紫外光、YAG倍频脉冲激光、紫外光与倍频激光复合处理等方法 ,以不同剂量对雄甾烯二酮 (1)转化菌进行诱变照射 ,同时对激光的修复作用、诱变效果进行探讨。

结果表明 ,被照菌株产 1能力有不同程度的提高。

当菌株经紫外光照射后再以不同剂量 YAG倍频激光照射 ,获得一株高产优质突变株 L- 3- 195 ,产 1能力提高了116 % ,且不再产生结构类似副产物雄甾二烯二酮 ,经 4次传代 ,突变株遗传性状稳定。

【总页数】3页(P322-324)
【关键词】雄甾烯二酮;诱变育种;紫外光;激光
【作者】李莹;戈梅;王旻;陈代杰
【作者单位】中国药科大学;上海来益生物药物研发中心
【正文语种】中文
【中图分类】TQ467.8
【相关文献】
1.微生物转化植物甾醇生产雄烯二酮(AD)和雄二烯二酮(ADD)的工业化生产工艺开发研究 [J],
2.雄甾烯酮转化菌的诱变育种和发酵条件优化 [J], 赵有玺;龚平
3.菜籽甾醇转化制备雄烯二酮高产菌株的诱变育种 [J], 杨英;姜绍通;胡锦艳;赵俊平;梁铁艳
4.Mycobacterium sp.高效转化植物甾醇为雄甾-1,4-二烯-3,17二酮的诱变选育[J], 钟传圣;饶志明;夏海锋;许正宏;方慧英;诸葛健
5.降解植物甾醇产雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮工程菌株的构建及转化培养基优化 [J], 刘相岑;郝晓蔚;张瑞婕;冯雯雯;朱晨光;张保国;史吉平
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专利名称：一种植物甾醇制备4-雄烯二酮的方法专利类型：发明专利
发明人：吴卫忠,蒋澄宇
申请号：CN201410441970.5
申请日：20140902
公开号：CN104195209A
公开日：
20141210
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种植物甾醇制备4-雄烯二酮的方法，包括如下步骤：步骤1，将自主分离与筛选得到的一株分杆菌株、种子斜面固体培养基和无菌水，恒温培养5-6天，得到种子；步骤2，将一级种子培养基溶于水，移入由步骤1得到的种子，在摇床上放置72h，得到一级种子；步骤3，将二级种子培养基溶于水，移入由步骤2得到的一级种子，反应48h，得到二级菌种；步骤4，将植物甾醇、豆油、吐温分别放入发酵罐中，同时加入生物转化培养基，移入步骤3得到的二级菌种，直至检测无植物甾醇残留为止，加热到90℃，静止3h，分出水层；步骤5，油层用有机溶剂萃取，减压浓缩到溶剂体积的1/4，冷却到5℃，过滤，得到粗品；用甲醇重结晶，得到4-雄烯二酮成品。

申请人：常州大学
地址：213016 江苏省常州市武进区滆湖路1号
国籍：CN
代理机构：南京同泽专利事务所(特殊普通合伙)
代理人：蒋全强
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