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atcc标准菌株说明书
1、ATCC菌种批号说明:菌名称简称的拼音首字母+转种日期-代数-编号。
2、菌株每转种一次即增加一代，实验用应控制在五代以内。
3、购买菌株后，立即进行转种，不宜长期冷藏保存。
4、转种方式:
普通菌斜面:用接种环挑取斜面上的菌落，转种至适宜的液体培养基中，按药典规定的时间培养后，将液体培养物分装至无菌冻存管中，每支 1.5~2.0ml，冰箱冷冻(-20°℃)保存。
每次实验取一支转种后使用。
如:生孢梭菌:将小管中液体培养物接入硫乙醇酸盐液体培养基中，ATCC菌种按药典规定的时间培养后，将液体培养物分装至无菌冻存管中，每支1.5~2.0ml，冰箱冷冻(-20℃)保存。
每次实验取一支转种后使用。
黑曲霉:用接种环蘸取小管中孢子悬液，并涂布至改良马丁琼脂斜面上，培养1周后，按药典方法将孢子洗下，孢子悬液冰箱冷藏(4℃)保存。
实验时可直接取该悬液稀释至合适的级别后使用。
5、转种的液体培养基体积推荐为100ml，可分装约40~50支无菌冻存管，平时使用时应定期进行菌株的鉴定，若菌落形态不典型或特征反应不明显，说明该ATCC菌种已不适宜继续使用，应销毁后购买新菌株。
ATCC菌种保藏方法微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚至死亡，因而常常造成菌种的衰退，并有可能使优良菌种丢失。
菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定，确保菌种不死亡、不变异、不被污染，以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要。
菌种保藏的方法有哪些呢?传代保存法有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。
传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。
传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。
培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。
若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。
一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。
传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉;②菌株的遗传性状容易发生变异;③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低;④需要定期转种，工作量大;⑤杂菌的污染机会较多。
液体石蜡覆盖保存法该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。
此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。
其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物(如产孢能力低的丝状菌)的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行菌种保藏。
悬液保存法即使微生物混悬于适当溶液中进行保存的方法。
常用的有：① 蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。
本法应注意避免水分的蒸发。
菌株的保存使用及销毁1、新引进的菌种经形态、染色、培养性状、生化特性等的鉴别确定后作记录，并进行保存。
2、自主分离筛选的菌株经试验确定为优良菌株，并进行形态、染色、培养性状、生化特性、毒性等的鉴别确定（必要时进行分子鉴定）后作记录，并进行保存。
3、应用菌株采用斜面低温保存法。
将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌株生长充分以后，转移至 4～8℃冰箱中保存。
此法仅用于应用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。
保存时间根据菌种种类而不同，细菌：1个月；酵母菌：2个月；霉菌及芽胞：3个月。
4、半储存菌株以甘油冷冻管保存法或液体石腊封存的半固体琼脂为主。
甘油浓度为10%～20%，保存温度为-20～-30℃，每隔1～2年转种一代。
此种方法主要适用于需氧细菌和酵母菌的保藏5长期保存的储存菌株以冷冻干燥保藏为主，特殊要求的菌种可用其它方法进行保存，保存期可长达几年至几十年。
6菌种的传代不可超过6次。
视菌种的特性及使用情况，一般储存菌株每5年传代一次，每隔1～2年从储存菌株转接至半储存菌株，半储存菌株每1～2年传代一次，每1～3个月从半储存菌株转接接至应用菌株。
7、菌种的确认：用无菌接种环取上述培养物接种到营养琼脂培养基（细菌）或玫瑰红钠培养基（真菌和酵母菌）平板上，或相应的宜于该菌生长的鉴别培养基平板上，然后在 30～35℃下培养3天（细菌）；20～25℃下培养 5 天（真菌和酵母菌）。
培养后，首先观察其是否具有典型的菌落形态，然后挑取生长旺盛的单一的纯菌落，划线于平皿培养基，每种菌划 4 个平皿，以便收集较多的生长旺盛的典型单菌落，进行保存和鉴定。
鉴定时作革兰氏染色、镜检，观察其染色特性及形态特征。
必要时再做生化实验以进一步鉴定该菌种。
若在该平板上发现有其它菌落生长，则说明操作有污染或菌种不纯，应将此被污染了的培养物灭活处理，并寻找原因。
应根据其原因采取措施重新分离挑选纯菌落。
xxx食品检测中心作业指导书1。
目的规范实验室菌种的收集、使用、保管程序；确保实验室的安全。
2.范围本管理细则适用于实验室菌种的使用和管理。
3。
职责3.1菌种保管员：按照本指导书做好菌种的收集、转种、使用、保存和发放以及销毁工作. 3。
2科室负责人:负责监督菌种的使用及管理。
4.管理细则本实验室保存的菌种仅包括一部分致病性较弱的三类细菌、一部分无致病能力的普通细菌和常见真菌。
不包括病毒、螺旋体、衣原体、立克次体;保存的菌种主要用于各类培养基、检测试剂的性能测试和质量控制。
4.1在本实验室保管的菌种名4。
1。
1保留工作菌种:大肠杆菌A TCC25922、鼠伤寒沙门氏菌50013、福氏志贺氏菌2a ATCC12022、副溶血性弧菌200904—1、金黄色葡萄球菌A TCC25923、表皮葡萄球菌ATCC12228溶血性链球菌23310、铜绿假单胞菌10211、普通变形杆菌，克雷伯氏杆菌，小肠结肠炎耶森氏菌ATCC 23715 、单核增生李斯特菌ATCC19111、枯草芽胞杆菌ATCC6633b 、蜡状芽胞杆菌A TCC11778、白色念珠菌A TCC10231、酿酒酵母ATCC9763、黑曲霉菌、展青霉菌、黄曲霉菌。
4。
1.2常规检测,科研分离得到的有保留价值的三类/四类菌种根据需要可继续保留；如果在食品中分离到二类/一类菌种,及时送上级单位进一步鉴定，并按规定立即销毁。
本实验室不保存一类、二类菌种。
4.2 菌种的保管4.2.1实验室菌种保存于专用的菌种室。
4.2。
2菌种保管员及科室负责人双人双锁负责保管菌种.4.2.3使用菌种需提出申请、经科室负责人批准后，向菌种保管员领用。
4。
2。
4菌种应按规定的时间定期转种,一般每转种3代做一次鉴定,如发现污染或变异应及时处理。
4。
2。
5保管人员工作变动时应作好交接工作。
4。
3 菌种的使用和保存4。
3.1菌种的类别4.3.1。
1实验室内的标准菌种根据用途不同，分为储存菌种、传代用菌种和工作用菌种。
标准菌株使用标准操作规程1 检验目的对实验室的标准菌株进行合理的保存，并规范合理的使用流程，保证菌株的性能稳定可靠。
2 范围微生物实验室保存的标准菌株。
3 职责微生物组工作人员正确执行本操作规程。
4 术语和定义4.1标准菌株其特征进行了分类和描述，有明确的来源。
ATCC（American Type Culture Collection）美国标准菌株收藏中心。
4.2标准储备菌株标准菌株经过一代转接后获得的同种菌株。
4.3 工作菌株标准储备菌株传代后得到的同种菌株。
4.4 标准培养物标准菌株、标准储备菌株、工作菌株的统称。
4.5质控菌株ATCC最佳，但当无法获得时可以使用ATCC演化的菌株或我国国家菌种库储存的标准菌株。
特殊情况，例如定性试验可用已知的菌种作为质控菌株。
室间质评的菌株即可。
5 保存程序5.1标准菌株5.1.1商业购买的ATCC标准菌株干粉，-80℃低温保存，可以2年以上。
安瓿真空包装的，-80℃可长期稳定保存。
将标准菌株进行编号和登记。
5.1.2复苏用1ml无菌的小牛血清或营养肉汤溶解。
根据菌种的生长特点，接种到新鲜培养基上选择适宜的培养条件培养18-24h。
酵母菌要求3天，形成孢子的微生物宜保存孢子。
5.2标准储备菌株5.2.1由复苏后的ATCC标准菌株制备。
复苏后的标准菌株要检查其纯度，必要时进行生化试验检查。
刮取培养物上的菌体，用足量的菌悬浮于防冻培养基中。
防冻液可以是无菌脱纤维羊血、10%甘油肉汤。
储存足够量的标准储备菌株，可用1-2年。
一年52周需要52支以上。
5.2.2甘油肉汤保存法成分有蛋白胨、牛肉浸出粉、氯化钠、甘油、纯化木。
相当于20%的甘油。
挑取5环菌落加入到1ml甘油肉汤中混匀。
苛养菌可以适当增加菌量。
-80℃保存。
除链球菌和嗜血杆菌以外细菌均可使用。
保存期限1-5年。
5.2.3全血保存法成分为脱纤维羊血。
挑取5环菌落加入到1ml甘油肉汤中混匀。
苛养菌可以适当增加菌量。
ATCC粪肠球菌质控菌株使用说明书（英译中）使用本品可以直接使用，一次性接种环里包含稳定的活性微生物，一次性接种环可以应用于培养基、诊断试剂盒及试剂的性能验证、细菌盲种及方法学验证。
描述每个包装内含5个接种环，每个接种环独立包装。
保存保存于2-8度。
随用随取，保质期内，接种环内微生物特性稳定。
打开在包装标签指示处，剪开。
变质保持干燥，潮湿后停止使用。
操作每个接种环上的标本均为明胶干燥而成，须在保温保湿的环境下复溶。
直接在选择性培养基上接种可能会导致生长缓慢，若需接种在选择性培养基上，需先在非选择性培养基上培养，如血琼脂平板，等有可见菌落形成后再转种。
以下两种方法可以用于接种培养，根据不同的微生物选择正确的方法。
直接划线接种该方法适用于无特殊营养要求的微生物培养。
1.把平板温浴到35-37度；2.拿掉接种环上的保护套；3.把接种环插入或平放于培养基表面，使接种环表面充分湿润，保持10-15S使之充分吸收水分。
4.使用最常用的方法划线接种，每个接种环可以划5块板。
5.将平板放置于最佳的空气和温度环境进行培养。
间接（肉汤）培养法该方法适用于对培养基有特殊营养要求的细菌。
1.拿掉接种环保护套。
2.使用无菌剪刀剪下接种环，放置于含有0.5-1.0ml液体培养基的瓶子中，液体培养基包括以下成分：a.胰蛋白胨大豆琼脂或新鲜无菌的硫代硫酸盐用于细菌培养；b.灭菌生理盐水用于真菌培养。
3.将瓶子放于35-37度使接种环上的标本膜充分溶解，轻轻摇动瓶子使细菌分散开来。
4.使用无菌吸头，在培养基上滴加几滴标本，划线接种。
5.将接种好的培养基放置于最佳的气体和温度环境中培养。
合适条件下，大多数细菌均能在24-48h内培养出来，少数细菌会有明显的生长滞后，需追加培养24h。
注释：接种环上的微生物为ATCC原代培养物。
参考文献........接种环商标解释权归 Remel Inc.,Remel Inc.属于 Themo Fisher 科技公司的子公司。
