动物细胞培养

2.2.1动物细胞培养和核移植技术 第1课时

【学习目标】

1、简述动物细胞培养的过程、条件及应用。

2、比较动物细胞培养与植物组织培养区别。

【学习重点】

1、动物细胞培养的过程、条件。

【自主学习】

一、动物细胞工程常用的技术手段

1、动物细胞工程常用的技术手段有哪几种？

2、______________是动物细胞工程技术的基础。

二、动物细胞培养

1、动物细胞培养的概念

（1）动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，它分散成______________，后放在______________中，让这些细胞______________和______________。

（2）动物细胞培养的原理是：_________________。

2、动物细胞培养的过程

（1）基本概念

①什么是细胞贴壁？

②什么是接触抑制？

③什么是原代培养？什么是传代培养？

说明：分瓶之前，称原代培养；出现接触抑制用胰蛋白酶处理，再分瓶培养为传代培养。

（2）过程

【思考探究】

①为什么选用幼龄的动物组织或胚胎？ 幼龄动物组织或胚胎 单个细胞

细胞悬液 细胞贴壁生长 细胞悬液

细胞株或细胞系 原代培养

传代培养 剪碎

胰蛋白酶

胰蛋白酶

②如何使组织分散为单个细胞？这说明细胞间的物质是什么？能不能用胃蛋白酶？

③制成细胞悬液的主要目的是什么？

④培养细胞的培养瓶或培养皿应具备什么条件？

⑤贴满瓶壁的细胞要如何处理才能继续培养？

⑥目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内的，为什么？10～50代，50代以后细胞有什么变化？

【例1】下列有关动物细胞培养的叙述中正确的是 （ ）

A、动物细胞培育的目的是获得大量的细胞分泌蛋白

B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散

C、细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中

D、培养至50代后的传代细胞称为细胞株

动物细胞培养总结

一．实验准备

1.实验器械、器皿的清洗和消毒

（1）清洗和包装

离心管(1.5ml，2ml,15ml)若干，冻存管若干放进铝饭盒，用牛皮纸包裹，系紧棉绳，用笔在饭盒上和牛皮纸上标记盒内所装物品名称、数量、日期和所属人名称。

蓝枪头两盒，黄枪头白枪头各一盒用牛皮纸包裹，用棉绳扎紧。

取适量蒸馏水于4L玻璃瓶，瓶盖拧松半圈。

过滤器，250ml玻璃瓶，500ml玻璃瓶用自来水毛刷洗涤剂刷洗，蒸馏水润洗，烘干。

过滤器两部分分别包裹，先将瓶口部位用锡纸包裹后，再罩以牛皮纸，再用棉布密包起来，用棉绳扎紧。

玻璃瓶拧下瓶盖，瓶身浸酸。浸酸时应注意安全，须穿戴耐酸手套和白大褂，注意保护好面部和身体裸露部分，提前备好一盆水在旁以便浸酸结束后清洗耐酸手套，防止走动时酸液滴到地板上不好清洗。瓶口慢慢沉入液面下，注意缓慢降低瓶身，使液体慢慢浸入瓶内，以免产生气泡溅出酸液，发生危险。浸酸时器皿要充满酸液，勿留气泡，浸泡过夜。取出瓶身时，须穿戴耐酸手套和白大褂，注意保护好面部和身体裸露部分，提前备好一盆水在旁，取出后将瓶身放入盆内水中在转移至水池边清洗，以免酸液滴落地板不好清洗。换水洗几次，待水澄清后开始冲洗，每瓶都用自来水灌满，倒掉，重复15次，再用蒸馏水漂洗5次，去离子水漂洗3次，烘干备用。

（2）消毒灭菌

1>全自动高压灭菌锅：插电源，打开开关，检查水位，若水位不足加蒸馏水补足，放入物品，瓶类物体须拧松盖子后放最上面一筐，盖上灭菌锅盖，拧紧盖子至温度显示栏的左上角有一红点亮灯，按start开始升温。若灭有无菌水或玻璃瓶待降温至常温再打开，打开后立即拧紧，无菌水瓶口封上封口膜。若没灭瓶类物品，降温至80度左右即可打开灭菌锅，须戴上线手套取出。

2>手提式高压灭菌锅：插电源，打开开关，检查水位，若水位不足加蒸馏水补足，检查设定是否为121度20分钟，放入物品，盖上灭菌锅盖，注意导气管一定插到锅底并不能堵塞，用手对称地拧紧锅盖螺栓，再用扳手继续拧紧。加温升压之前，先打开排气阀门，加温约半小时后见排气阀处开始排残留在锅内的冷空气，排气五分钟，关闭排气阀，继而开始升压。灭菌后不要立即打开气阀放气以免水汽喷出。待自然降温至常压才能打开气阀。

动物细胞培养习题

名词解释

1、细胞工程（cell engineering）

是指应用现代细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的理论与方法，按照人们的需要和设计，在细胞水平上的遗传操作，重组细胞的结构和内含物，以改变生物的结构和功能，即通过细胞融合、核质移植、染色体或基因移植以及组织和细胞培养等方法，快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术。

2、细胞培养（cell culture）

将组织块用机械方法或酶解法分离成单个细胞，做成细胞悬液，再培养于固体基质上，成单层细胞生长，或在培养液中呈悬浮状态培养的技术称为细胞培养。

3、细胞核移植(nuclear transplantation)

细胞核移植，就是将一个细胞核用显微注射的方法放进另一个细胞里去。前者为供体，可以是胚胎的干细胞核，也可以是体细胞的核。

4、染色体工程(chromosome engineering )

是人们按照一定的设计,有计划地消减,添加或代换同种或异种染色体,从而达到定向改变遗传特性和选育新品种的一种技术.

5、胚胎工程(embryonic engineering)

胚胎工程：指在胚胎发育过程中进行的生物技术。

包括：胚胎移植、胚胎融合、胚胎分割、胚胎冷冻、胚胎性别鉴定、胚胎细胞核移植、转基因操作。

6、干细胞（stem cell） 是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。

7、组织工程；组织工程是指应用工程学和生命科学的原理和方法来研究正常或病理状况下哺乳动物组织的结构、功能和生长的机制，研究开发能够修复、维持或改善损伤组织的人工生物替代物的一门学科。

8、初代培养

也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1-4周。

9、继代培养

对来自于外植体所增殖的培养物(包括细胞、组织或其切段)通过更换新鲜培养基及不断切割或分离，进行连续多代的培养，就称为继代培养

学习指导案

课题 动物细胞培养 授课时间

课型 新授 主备人

教材分析 动物细胞培养是其他动物细胞工程的基础，打好基础很重要。通过设计六道讨论题，在预习的基础上解决讨论题后，大部分学生能够掌握动物细胞培养的过程。

学情基础分析及预习导学 在植物组织培养的基础上，学习动物细胞培养，要通过对比，理解过程，结果、应用和条件

课程目标 知识与技能：

简述动物细胞培养的过程、条件及应用。

情感态度和价值观

了解生物技术，关注实际生活

能力方面

通过讨论，了解动物细胞培养的过程。

学习重点 动物细胞培养的过程及条件。

学习难点

动物细胞培养的过程

教具准备 多媒体课件和学案

学习过程

学习内容 学习形式 教师指导 时间

（一）引入新课

利用植物细胞可以培育成植物体，那么，你利用动物细胞能不能大量繁殖动物体，以提高繁殖率呢？这节课我们来学习动物细胞工程。

（二）进行新课

[问题]动物细胞工程的常用技术手段有哪些？最基础的技术手段是什么？

动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等。最基础的技术手段是动物细胞培养。

1．动物细胞培养

1.1概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。

[分析]（1）需分散成单个细胞；（2）需要在培养基上培养；（3）动物细胞培养的实质是细胞增殖——原理

1.2动物细胞培养的过程：

[问题]什么是细胞贴壁？什么是接触抑制？

悬液中分散的细胞很快就贴附在有丝分裂，称为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。

[问题]如何打破接触抑制？需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分别继续培养，让细胞继续增殖。

[问题]细胞传代培养代数有什么特点？

传代培养的细胞一般传至10代后就不易传下去了，一般来说，细胞在传至10～50代左右时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，这时部分细胞的细胞核型可能发生变化，当继续传代培养时，少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限，获得不死性。所以目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。