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免疫原和抗血清的制备免疫原和抗血清的制备抗原和抗体是免疫反应的基本条件也是免疫检验的两大重要因素。
抗原是制备特异性抗体的前提条件，抗体可用于纯化抗原和检测抗原，也是医学检验中用于疾病诊断和研究的重要物质。
免疫原的制备免疫佐剂抗血清的制备抗血清的鉴定和保存抗血清的纯化颗粒性抗原的制备颗粒性抗原主要是指细胞抗原和细菌抗原,制备的方法较简单,通过分离或纯培养即可得到。
细胞抗原——绵羊红细胞。
细菌抗原——菌体O抗原。
可溶性抗原的制备可溶性抗原：蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、细菌外毒素等。
（一）组织可溶性抗原的粗提（二）可溶性抗原的纯化（三）纯化抗原的鉴定（一）组织可溶性抗原的粗提1.组织均浆的制备：高速组织捣碎机法、研磨法；2.细胞的破碎：反复冻融法、超声破碎法、自溶法、酶处理法、表面活性剂处理法。
（二）可溶性抗原的提取和纯化1.超速离心法；2.选择性沉淀法：核酸去除法、盐析法、有机溶剂沉淀法、聚合物沉淀法；3.凝胶过滤法；4.离子交换层析法；5.亲和层析法；6.电泳法。
（三）纯化抗原的鉴定主要包括蛋白含量测定、分子量测定、纯度鉴定、免疫活性鉴定等。
半抗原性免疫原的制备半抗原只具有抗原性而无免疫原性；如某些多肽、多糖、激素、小分子量的药物等。
半抗原与蛋白质载体或高分子聚合物结合后才有免疫原性。
（一）载体1.蛋白质类：牛血白蛋白等；2.多肽聚合物：多聚赖氨酸等；3.大分子聚合物和某些颗粒：聚乙烯吡咯烷酮等。
（二）半抗原与载体的连接方法1.物理方法：通过电荷和微孔吸附半抗原，吸附的载体有淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、硫酸葡聚糖、羧甲基纤维素等。
2.化学方法：利用某些功能基团将半抗原连接到载体上。
如碳二亚胺法、戊二醛法等。
（三）半抗原性免疫原的鉴定与载体结合的半抗原数目与免疫原性密切相关。
所以，应测定半抗原与载体的比例，方法有：①吸收光谱分析法：②放射性核素标记半抗原渗入法。
免疫佐剂指先于抗原或与抗原同时注入体内，可增强机体对抗原的免疫应答的物质。
免疫原制备和抗血清的制备免疫原制备和抗血清的制备是现代免疫学研究的重要内容之一、免疫原可以是一种物质，如微生物、细胞或其部分，也可以是一种化学物质，如蛋白质、糖类或核酸。
而抗血清则是通过动物体内或体外免疫方法获得的一种含有特异抗体的血清。
免疫原制备可以采用多种方法，最常见的方法之一是使用细菌或其他微生物制备免疫原。
先将目标微生物培养，然后进行离心、洗涤和破碎等处理，得到免疫原。
此外，还可以通过化学方法合成免疫原。
合成免疫原的方法通常是将所需的化学组分按照一定的顺序和比例进行化学反应，最终得到预期的免疫原。
免疫原的制备需要注意保持其生物活性和纯度，并进行适当的保存和贮存。
抗血清的制备需要选择适当的动物作为实验对象，如小鼠、兔等。
首先，将免疫原注入到动物体内，通过多次免疫，刺激动物产生特异性抗体。
其次，采集动物的血液，分离出血清，并进行清理和加工，最终得到抗血清。
清理和加工的过程主要包括疫苗净化、灭活处理、抗原提取和免疫原去除等步骤。
为了提高抗血清的特异性和效价，可以通过多次免疫和亲和层析等方法对抗血清进行增强。
免疫原制备和抗血清的制备在免疫学研究和临床诊断中具有重要的应用价值。
它们可以用于检测和诊断一些疾病的存在和发展，或用于治疗一些疾病。
例如，抗血清可以作为特异性抗体的源头，用于检测和鉴定病原体。
在流行病学调查中，通过检测血清中抗体的水平和类型，可以判断一些群体中其中一种病原体的暴露情况和传播链。
此外，利用抗血清可以对血型进行鉴定和配对，为输血和器官移植提供有力的支持。
总之，免疫原制备和抗血清的制备是现代免疫学研究中的关键技术。
通过合适的免疫原制备和动物免疫方法，可以获得高效的抗血清，并为疾病的检测、诊断和治疗提供重要的工具。
在未来的研究和应用中，我们可以期待这些技术的进一步发展和创新，以满足不断增长的免疫学需求。
第3章免疫原和抗血清的制备免疫原是指能够引起机体免疫反应并激发产生特异性抗体的物质。
抗血清是指动物或人体经过免疫后所产生的含有抗体的血清。
免疫原和抗血清的制备是研究免疫学和生物制剂开发的重要环节。
本文将探讨免疫原和抗血清制备的一般原则和步骤。
1.免疫原的选择选择合适的免疫原对于制备高效的抗血清至关重要。
一般来说，免疫原应具备以下特点：(1)纯度：免疫原应具有尽可能高的纯度，以避免其他成分对免疫反应的干扰。
(2)特异性：免疫原应具有与所需抗体特异性结合的能力，以激发特异性抗体的产生。
(3)免疫原性：免疫原应具有足够的免疫原性，即能够引起机体的免疫反应。
(4)安全性：免疫原应具备足够的安全性，避免潜在风险。
根据不同的应用需求，免疫原可以是多种类型的物质，如蛋白质、多肽、核酸和糖类等。
选择合适的免疫原需要根据研究目的和预期应用来确定。
2.免疫原的制备免疫原的制备通常分为化学合成和生物提取两种方式。
(1)化学合成：对于小分子的免疫原，可以通过化学合成的方法合成。
例如，对于多肽免疫原，可以设计并合成相应的多肽序列。
化学合成的优势在于可以精确控制免疫原的结构和纯度。
(2)生物提取：对于大分子的免疫原，如蛋白质和核酸，通常采用生物提取的方法。
蛋白质可以通过基因工程技术在大肠杆菌等表达系统中表达并纯化得到。
核酸可以通过DNA重组技术合成。
3.免疫反应的诱导免疫反应的诱导是指向机体注射免疫原以激发免疫反应。
免疫反应的诱导通常包括以下步骤：(1)免疫原的给药：将免疫原通过注射、给药或吸入等方式引入机体内。
(2)辅助剂的使用：为了增强免疫反应效果，通常会添加辅助剂。
辅助剂可改变免疫原的物理性质和免疫反应的过程。
(3)免疫程序的设计：根据需求设计免疫程序，包括免疫原的剂量、注射间隔和免疫次数等。
抗血清的制备是通过免疫动物或人体以获得抗体，从而制备含有抗体的血清。
一般来说，抗血清的制备包括以下步骤：(1)免疫动物的选择：选择合适的免疫动物，如小鼠、兔子或猴子等。
单克隆抗体技术操作流程一、免疫原制备免疫原是制备单克隆抗体的关键，它可以是蛋白质、多肽、病毒、细胞表面分子等。
首先需要获得纯度高的免疫原，并进行适当的处理，如去除杂质、进行修饰等。
接下来，将免疫原与适当的佐剂混合，以增强免疫原的免疫原性，如将免疫原与完全佐剂混合，然后注射到小鼠等实验动物体内。
二、免疫动物免疫将制备好的免疫原注射到实验动物体内，激发其免疫系统产生抗体。
通常情况下，需要多次免疫以增强免疫效果。
在每次免疫后，需要采集动物的血清样本，检测抗体的产生情况。
可以使用酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法对血清中的抗体进行检测。
三、细胞融合与筛选当动物产生了满意的抗体效价后，需要从其脾脏等淋巴组织中获得抗体产生的细胞。
将脾脏细胞与骨髓瘤细胞（如NS-1细胞）进行融合，形成杂交瘤细胞。
融合后的细胞具有双亲细胞的优点，既能产生抗体，又具有无限增殖的能力。
为了筛选出产生特异性抗体的杂交瘤细胞，通常需要进行限稀稀释、酶标记法、细胞毒性试验等步骤。
其中，限稀稀释法是最常用的筛选方法，通过将杂交瘤细胞逐级稀释，最终得到单个细胞的克隆。
然后，将这些单克隆细胞扩大培养，并对其产生的抗体进行筛选和鉴定。
四、抗体纯化与鉴定通过培养和扩增单克隆细胞，可以得到大量的单克隆抗体。
接下来，需要对抗体进行纯化和鉴定。
纯化可以使用各种离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析等技术，去除杂质，得到纯度较高的抗体。
鉴定抗体的特异性和亲和力是非常重要的步骤。
特异性可以通过免疫印迹、免疫组化等方法进行检测，判断抗体是否能够特异性地结合目标抗原。
亲和力可以通过表面等离子共振（SPR）等技术进行测定，评估抗体与抗原的结合强度。
五、应用和保存经过纯化和鉴定后，单克隆抗体可以应用于多个领域，如医学诊断、生物学研究、药物开发等。
在应用过程中，需要根据具体需求对抗体进行合适的标记和修饰，以提高其应用效果。
为了保存单克隆抗体，可以将其冻存于低温下，如-20°C或-80°C。
免疫原和抗血清的制备考点总结第一节免疫原的制备免疫原指能诱导机体产生抗体或致敏淋巴细胞，并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。
一、颗粒性抗原的制备细胞、细菌、寄生虫等皆为颗粒性抗原。
细胞抗原（如绵羊红细胞）一般情况下经生理盐水或其他溶液洗净，配制一定浓度即可。
细菌抗原多用液体或固体培养物，经集菌后处理。
颗粒性抗原大多用静脉内注射免疫法。
二、可溶性抗原的制备和纯化（一）组织和可溶性抗原的粗提蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶、补体、细菌毒素、免疫球蛋白片段、核酸等皆为良好的可溶性抗原。
1.组织匀浆的制备（1）高速组织捣碎机法；（2）研磨法：组织匀浆液要离心沉淀，沉淀物为组织和细胞碎片，上清液为提取可溶性抗原的材料。
2.细胞的破碎（1）反复冻融法：-20℃冷冻，30～37℃融化。
（2）超声破碎法（3）自溶法（4）酶处理法：胃蛋白酶或胰酶。
（5）表面活性剂处理法：十二烷基硫酸钠。
3.免疫球蛋白片段的制备（1）非共价键解离法：改变pH环境或用变性剂。
（2）共价键解离法：还原法或氧化法解离二硫键。
（3）溴化氰裂解法：溴化氰裂解蛋白质肽链。
（4）酶解法：木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或胰蛋白酶。
（二）可溶性抗原的提纯和纯化1.超速离心法：适用于少数大分子抗原或比重较轻的抗原，不适用于大多数中小分子抗原。
2.选择性沉淀法：（1）核酸去除法：核糖核酸降解法更简便。
（2）盐析法：常采用硫酸铵使蛋白抗原进行粗筛、提取丙种球蛋白及抗原浓缩。
（3）有机溶剂沉淀法：常采用乙醇或丙酮。
（4）聚合物沉淀法：常用非离子型聚合物，如聚乙二醇（PEG）。
3.凝胶过滤法：根据分子大小进行分离纯化。
4.离子交换层析法：利用一些带电离子基团的凝胶或纤维素，吸附带有相反电荷的蛋白质抗原。
5.亲和层析法：与生物分子间不同的亲和性进行分离。
如抗原和抗体、酶和酶抑制物、酶蛋白和辅酶、激素和受体等。
6.电泳法：蛋白质在同一pH环境中，分子量和电荷不同，在电场中迁移速率不同进行分离。
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《免疫原的制备方法范文一》抗原与免疫血清的制备将抗原注射于动物体，可刺激动物的B淋巴细胞转为浆细胞产生特异性抗体，待动物血清中积累大量抗体时，采集其血液，分离析出血清，此即含抗体的免疫血清，或称抗血清。
制备特异性强，效价高的免疫血清对于微生物的鉴定，传染病的诊断与治疗，抗原分析，免疫球蛋白的鉴定以及其他蛋白质鉴定与研究均有很大的用途。
动物产生抗体的量，一方面可因动物的种类、年龄、营养状况及刺激部位的感受性的不同而不同外，另一方面还与抗原的种类、注射量、注射途径、注射次数以及注射的间隔时间有关，抗原量低到一定限度时，抗体不能产生或现有的方法不能测出，但超过最高限度对抗体的产生反起抑制作用。
在最低限度以上，抗体根据抗原量的增加而增加，达到最高限度时，即不再增加。
抗原初次注射后，经一段时间诱导期，血清内即可找到抗体，以后逐渐上升，抗体量一般不高，然后逐渐下降。
但再次注射时，抗体量迅速上升到最高水平，而且维持时间也长，因此，制备抗体一般需要多次注射抗原，才能得到最高的免疫血清本试验通过大肠杆菌及兔血抗原的制备以及免疫小鼠从而获得小鼠大肠杆菌抗血清和兔血抗血清。
为微生物的鉴定和免疫球蛋白的鉴定以及其他蛋白质鉴定与研究提供相应特异性抗体。
1 材料与方法1.1 材料大肠杆菌（培养24h）、小鼠（8-12周龄）、兔子1.2 试剂0.5%石炭酸生理盐酸；小鼠红细胞等抗原溶液；洗涤液：Tris（1mol/L）10mL，HCl（1mol/L）8.4mL，吐温20 0.25mL；稀释液：磷酸氢二钠2.9g，磷酸二氢钾0.2g，氯化钠8.5g，白明胶1g，吐温20 0.5g，加水至1000mL；底物溶液：0.05mol/L柠檬酸48.6mL，0.1mol/L 磷酸二氢钾51.4mL，临用前，加入40mL邻苯二钠和0.15mL 30% H2O2；2mol/LH2SO4；生理盐水，其它化学试剂均为国产分析纯。
用为免疫动物产生抗体的抗原物质如果是人工合成的。
质地比较纯，免疫动物后可获得质量好的抗血清。
如果以从组织中提取的物质作为抗原，必须经过纯化，保证提取物的纯净，才能获得质量好的抗血清。
某些物质的分子量比较小，抗原性弱，属于半抗原，不易使动物产生抗体，必须把这些半抗原连接到大分子物质（载体）上，形成较为理想的免疫原，既能减少免疫注射的次数，又可节约抗原，产生良好的免疫效应，获得高质量的抗体。
（一）载体用为作为载体的物质较多，下列几类可供选择。
蛋白质类载体：人血清白蛋白（HSA）、牛血清白蛋白（BSA）、兔血清白蛋白（RSA）、牛甲状腺球蛋白（TG）、血蓝蛋白（Hemocyanin）以及人、牛和鸡γ-球蛋白等均可作为载体。
这些载体免疫活性较强，有商品供应，容易获得，即使自选提取，操作也较方便。
常用的有TG、BSA、HAS等，以TG为好。
多肽聚合物，人工合成的多聚赖氨酸、多聚谷氨酸、多聚混合氨基酸等，可与半抗原结合，所形成的免疫原可获高滴度、高亲合度的抗血清。
大分子有机化合物和某些粉末，如聚乙烯吡咯酮、羧甲基纤维素、聚甲基丙酸酯微粒、乳胶和炭末等，可吸附半抗原，也可用来作为载体，但用这类载体合成的免疫原免疫动物，所获抗血清的质量不稳定。
载体，尤其是大分子物质本身就是一种抗原，它们进行体内，可发挥致敏作用，激活免疫系统，从而使半抗原也可以使机体产生优质的抗体。
因此，如果把半抗原与无免疫原性的载体结合，就不能使机体产生抗体。
另外，半抗原与载体结合后，可适当延迟其降解和排出体外，从而可以发挥更久的作用。
（二）偶联剂半抗原和载体联接，操作比较简单，在一般实验室中都可进行。
但对反应条件有一定的要求：在反应过程中半抗原的免疫活性不发生改变，也不应引起载体变性到不溶解的程度。
常用的方法是利用偶联剂把半抗原和载体联接起来。
用作偶联剂的有碳化二亚胺类、戊二醛、二异氰酸化合物和二卤化二硝基苯等。
这些偶联剂使半抗原与载体在-COOH、-NH2或-SH等基团部位发生结合。
碳化二亚胺偶联过程示意如下：由反应过程可见，碳化二亚胺的偶联作用即可以在NH2部位发生，也可发生在羧基部位。
戊二醛所起的偶合作用与碳化二亚胺有所不同，戊二醛的两个醛基分别与载体和半抗原的-NH2结合。
它起一种“桥梁”作用，而把载体与半抗原联接在一起，其反应过程为：在免疫原的制备中，应根据不同的半抗原选用偶联剂。
（三）制备过程以制备催产素（OT）免疫原为例：（1）1mgOT，溶解于1ml 双蒸馏水或0.25%醋酸溶液中。
10mgTG 溶解于1ml 0.1mol/LPBS(pH7.5)或蒸馏水内。
（2）把OT溶液与TG溶液振荡混匀。
（3）边搅拌边滴加入0.25%戊二醛1ml。
加毕后再搅拌5～10min，在室温下继续反应2～3h，就可供免疫动物用。
免疫原以新制备的为好，如果一次制备了较多的免疫原，也可保存在-40℃的低温冰箱内备用。
抗原的制备除完整的细胞可作为抗原外，各种不同的细胞内存在的各种分子量不同的物质，也都具有全抗原或半抗原的性质，某种抗原物质可能是某一类细胞所特有的，可作为这种细胞的一个标志。
由于细胞存在着许多性质不同的抗原物质，有时要从这众多的物质中提取、纯化某种抗原物质，以供科学研究之用。
一、抗原的提取抗原的制备是一件十分细致的工作，要制备一个高纯度的抗原，需要付出艰巨的努力，制备工作涉及物理学、化学和生理学等许多领域的知识。
根据物理或化学特性建立起来的分离、纯化方法的主要原理不外乎科二个方面：①利用混合物中几个组分分配率的差别将他们分配到可用机械方法分离的两或几个物相中，如盐析、有机溶剂抽提、层析和结晶等；②把混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于不同的区域而达到分离的目的，如电泳、超速离心和超滤等。
由于组织细胞内存着许多分子结构和理化性质不同的抗原物质，其分离方法也不一样，就是同一类大分子物质，因选材不同，所使用的方法也很大差别。
因此很难有一个通用的标准方法供提取任何生物活性物质使用，所以在提取前必须针对所欲提取的物质，充分查阅文献资料，选用合适的方法。
如果要提取一个结构及性质未知的抗原物质，更需要经过各种方法的比较探索，才能找到一些工作规律和获得预期的效果。
抗原物质的制备，大概要经过如下过程：①材料的选择和预处理；②细胞的粉碎（细胞器的分离）。
③提取；④纯化；⑤浓缩或干燥，保存。
现分别简述如下。
（一）材料的选择及预处理选择什么材料主要根据实验目的而定。
通常选含量高、工艺简便、成本低的材料。
材料选定后，通常要进行预处理，剔除结缔组织、脂肪组织等，把组织块剪碎。
若取材后不立即进行提取，则应冷冻保存，动物组织更要深低温保存。
某些容易失活的物质，一般宜采用新鲜材料。
（二）细胞的粉碎除了提取体液、组织间液内的多肽、蛋白质、酶不需粉碎细胞外，凡要提取组织内、细胞膜上及胞内的生物活性物质，都必须把组织和细胞粉碎，使活性物质充分释放到溶液内。
不同的组织，细胞的破碎难易不一，因此所使用的粉碎方法也不完全相同。
如脑、胰、肝等比较软嫩的组织，用普通匀浆器研磨就行，肌肉、心脏等则需绞碎后再作匀浆。
现浆常用的细胞粉碎方法介绍如后。
1．物理法（1）高速组织捣碎机：通常由调速器、支架、马达、带杆刀叶、有机玻璃筒等组成。
把材料放于筒内（约占筒内容积的1/3）固定筒盖，开动马达，调速器由慢逐渐增至所需速度。
此法适用于内脏组织。
（2）玻璃匀浆器：由一个内壁经过磨砂的玻璃管和一根一端为球状（球面经过磨砂）玻璃研杆组成。
把绞碎的组织置于管内，加适量溶液，插入研杆，用手或电动转动研杆，并上下移动。
用此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机高，对大分子的破坏也少。
是粉碎少量软嫩材料（脑、胰、肝等）时常用的方法。
（3）超声波处理法：多用于软嫩组织，根据不同组织采用不同频率，处理10～15min，超声波处理时溶液温度升高，使不耐热的物质失活，使用时为防止温度升高，除间歇开机外，还需人工降温，避免溶液内存在气泡。
核酸及某些酶对超声波很敏感，要慎用。
（4）反复冻融法：把待碎样品冷却到零下15～20。
C，冻固后取出，缓慢解冻，如此反复操作，可使大部分动物性细胞及胞内的颗粒破碎，但也可使生物活性物质失活。
（5）冷热交替法：把材料投入90。
C左右水中维持数分钟后取出投入冰浴内，可使大部分细胞破碎。
可用于提取蛋白质和核酸。
2．化学和生物化学法（1）自溶法：把新鲜材料置于一定的pH和适宜的温度下，利用组织细胞自身的酶系统把组织破坏，使细胞内容物释放出来。
动物材料的自溶温度选在0～4℃，需加少量防腐剂，自溶时间较长，不易控制，不常用。
（2）溶菌酶处理法：多用于破坏大肠杆菌等微生物的细胞壁。
在每毫升含2亿个细胞的悬液中加100μg至1mg溶菌酶，37℃，保温10min，细胞就破坏了。
此外，蜗牛酶、纤维素酶也被选作破碎细菌细胞之用。
（3）表面活性剂处理法：较常用的有十二烷基磺酸钠、氯化十二烷基吡啶、去氧胆酸钠等。
（三）抗原的提取提取、抽提、萃取这3个词的含义基本相同。
但一般说来，提取是指在分离纯化前期，将经过处理或粉碎了的细胞置于一定条件和溶剂中，让被提取物充分地释放出来的过程，而抽提则是贯穿于分离纯化的整个过程中，如在制备核酸过程中，用氯仿反复提取蛋白液，用苯酚反复抽提分离DNA和RNA。
影响提取的因素主要来自被提取物在提取的溶剂中的溶解度大小以及它由固相扩散到液相的难易。
一个物质在某一溶剂中的溶解度大小和该物质的分子结构及使用的溶剂的理化性质有关。
一般说来，极性物质易溶于极性溶剂，非极性物质易溶于非极性大分子的等电点远的pH值使溶解度增加。
因此，在不同的抗原提取过程中，所选用的溶剂的性质、pH值、离子强度、抽提温度、介电常数等因素是提取成败的重要因素。
要达到分离提纯的目的，必须灵活地应用这些因素。
现将蛋白质、核酸、多肽等抗原（半抗原）的提取方法概要叙述于下。
1．蛋白质和酶的提取蛋白质是由许多氨基酸连接而成的高分子物质，分子量从数千至百万。
数以千计的蛋白质，按它们的功能可分成两大类，一类是活性蛋白，包括酶、激素蛋白、受体蛋白、运动蛋白、运输和贮存蛋白、防御蛋白等等，另一类是非活性蛋白，如胶原蛋白、角蛋白等，不同的蛋白质由于其结构的差异，它们溶解度也各不相同。
大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于有机溶剂乙醇、丙酮、丁醇等。
这对选择撮蛋白质的溶剂具有重要意义。
（1）水溶液提取：由于蛋白质大部分溶于水、稀酸和稀碱溶液，因此提取蛋白质以水溶液为主，其中尤以稀盐液和缓冲液对蛋白质稳定性好，溶解度大，氢是最常用的溶剂。
应注意下列几点：①盐浓度，常用等渗溶液，尤以0.02～0.05mol/L磷酸盐缓冲液或碳酸盐缓冲液、0.15mol/L氯化钠溶液应用较多。
如酵母脱氢酶以0.66mol/L磷酸氢二钠溶液提取，6-磷酸葡萄糖脱氢酶以0.1mol/L碳酸氢钠液提取，脱氧核糖核蛋白在低盐溶液中溶解度小，就要用1mol/L以上的氯化钠液提取，而某些脂肪酶，用水提取比低盐溶液提取效果更好。
②pH值的选择对蛋白质提取颇为重要，因为蛋白质的溶解度和稳定性与pH值关系很大。
提取液的pH值首先要保证在蛋白质稳定的范畴内，通常在等电点的两侧，碱性蛋白如细胞色素C和溶菌酶选在偏酸一侧，酸性蛋白如肌肉甘油醛-3-磷酸脱氢酶应选在偏碱一侧。
③温度：为防止活性蛋白变性、降解而失活，温度通常选在5℃以下。
对少数耐温的蛋白质和酶，可适当提高温度，使杂蛋白变性分离，有利于提纯，如胃蛋白酶、酵母醇脱氢酶以及许多多肽激素可选择37～50℃条件下提取，效果比低温提取更好。
（2）有机溶剂提取：一些不溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液的蛋白质和酶，常用不同比例的有机溶剂来提取。
如用70%～80%乙醇提取麸蛋白；用60%～70%的酸性乙醇提取胰岛素，既可抑制水解酶对胰岛素的破坏，又可除去大量杂蛋白，用丁醇提取某些附于微粒体和线粒体的酶，一些与脂质结合牢固的蛋白质和酶以丁醇提取，效果较好。
我国生化工作者曾用此法成功地提取了琥珀酸脱氢酶和碱性磷酸脂酶。
丁醇提取法对pH及温度的选择范围较广（Ph3～10）,温度由零下2℃～40℃均可。
2．核酸的提取核酸分为两大类：一类为核糖核酸（RNA），另一类为脱氧核糖核酸（DND）。
核酸的分子量极大，人数万致亿万。
核酸是两性化合物，在一定的等电点。
溶于水，其水溶液呈酸性，不溶于乙醇等有机溶剂。
细胞内的核酸常和蛋白质结合成核蛋白。
核糖核蛋白和脱氧核糖核蛋白在不同浓度的电解质溶液中的溶解度有显著区别，有一定浓度范围的氯化钠溶液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度随着氯化钠浓度增加而逐渐下降，当氯化钠浓度为0.14mol/L时，其溶解度仅为水中溶解度的1/100，但当氯化钠浓度再增加时，脱氧核糖核蛋白的溶解度重新增加，氯化钠浓度增加到0.5mol/L时，其溶解度与水中溶解度相似，当氯化钠浓度增加到1mol/L时，它的溶解度比在水中大2倍。
