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初级检验士考试讲义第三章免疫原和抗血清的制备免疫原和抗血清是免疫学和免疫检验研究中的重要概念。
免疫原是指能够诱导机体产生特异性免疫应答的物质，抗血清则是指免疫个体体液中含有特异性抗体的血清。
本文将介绍免疫原和抗血清的制备方法及其应用。
一、免疫原的制备免疫原的制备分为天然免疫原和人工合成免疫原两种方法。
天然免疫原一般是从病原微生物、细胞或组织中提取的物质，包括细胞壁、细胞器、蛋白质、多糖、核酸等。
人工合成免疫原则通过化学或生物技术手段合成类似于天然物质的分子结构，如多肽、人工合成的抗原表位等。
天然免疫原的制备需要先从源头获取样品，如从细菌培养物中分离出细胞壁或细胞膜，并用物理或化学方法脱除非免疫原的成分，得到纯净的免疫原。
有些免疫原需要通过培养细胞或组织得到，如病毒免疫原可以通过感染细胞培养物来获得。
此外，对于一些无法通过传统提取方法获取的免疫原，可以通过基因工程技术将其基因序列插入到表达宿主中，使其能够在宿主中大量表达。
人工合成免疫原的制备方法较为复杂，常用的包括固相合成和液相合成。
固相合成方法将氨基酸依次添加到固体载体上，并通过化学反应连接形成多肽链，进而得到所需的多肽免疫原。
液相合成则是将氨基酸加入反应溶液中，在适当条件下进行反应，经过一系列步骤得到多肽免疫原。
人工合成免疫原的优点是可以人为设计多肽序列，使得免疫原具有更好的抗原性和特异性。
抗血清的制备通常是将动物暴露于免疫原，促使其产生特异性抗体，然后收集动物体液中的抗体形成抗血清。
常用的动物包括小鼠、兔、猪等。
动物的免疫原既可以是天然免疫原，也可以是人工合成免疫原。
制备抗血清时，首先需要选择适当的免疫途径和免疫计划。
例如，对于小鼠和兔，多采用皮下或肌肉注射的方式给予免疫原，然后按照一定时间间隔加强免疫。
免疫原的剂量、接种时间和次数等因素都会影响抗体产生的效果，因此需要进行严格的监测和调整。
通常，在免疫完成后，可以通过采集动物体液，如血液、尿液等，将其离心分离，得到含有特异性抗体的血清。
第三章免疫原和抗血清的制备第一节免疫原的制备免疫原指能诱导机体产生抗体或致敏淋巴细胞，并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。
一、颗粒性抗原的制备细胞、细菌、寄生虫等皆为颗粒性抗原。
细胞抗原（如绵羊红细胞）一般情况下经生理盐水或其他溶液洗净，配制一定浓度即可。
细菌抗原多用液体或固体培养物，经集菌后处理。
颗粒性抗原大多用静脉内注射免疫法。
二、可溶性抗原的制备和纯化（一）组织和可溶性抗原的粗提蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶、补体、细菌毒素、免疫球蛋白片段、核酸等皆为良好的可溶性抗原。
1.组织匀浆的制备通常需要先将来源于人和动物的组织和细胞破碎，再经一定的方法纯化，才能获得所需的抗原。
细胞破碎方法有：（1）高速组织捣碎机法；（2）研磨法：组织匀浆液要离心沉淀，沉淀物为组织和细胞碎片，上清液为提取可溶性抗原的材料。
2.细胞的破碎除上述机械捣碎获取外，尚有酶处理法，常用胃蛋白酶或胰酶，可获得游离的单个细胞。
细胞抗原分膜蛋白抗原、细胞质抗原（主要为细胞器）、细胞核与核膜抗原，制备这些抗原前均需将细胞破碎，方法有：（1）反复冻融法：-20℃冷冻，30～37℃融化（2）超声破碎法（3）自溶法（4）酶处理法：胃蛋白酶或胰酶（5）表面活性剂处理法：十二烷基硫酸钠3.免疫球蛋白片段的制备五种免疫球蛋白都具抗原性，皆可提取及纯化，但如分解成片段（如Fab片段、Fc片段、轻链片段等）作为免疫原可制备出分辨力更高的特异性抗血清。
制备方法有：（1）非共价键解离法：改变pH环境或用变性剂（2）共价键解离法（3）溴化氰裂解法（4）酶解法：木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或胰蛋白酶.木瓜酶可将IgG裂解成2个Fab片段及1个Fc片段；胃蛋白酶可将IgG裂解成F（ab′）2个片段及数个小片段；胰蛋白酶可将IgG切成不规则的肽链。
（二）可溶性抗原的提纯和纯化1.超速离心法：适用于少数大分子抗原或比重较轻的抗原，不适用于大多数中小分子抗原。
第3章免疫原和抗血清的制备免疫原是指能够引起机体免疫反应并激发产生特异性抗体的物质。
抗血清是指动物或人体经过免疫后所产生的含有抗体的血清。
免疫原和抗血清的制备是研究免疫学和生物制剂开发的重要环节。
本文将探讨免疫原和抗血清制备的一般原则和步骤。
1.免疫原的选择选择合适的免疫原对于制备高效的抗血清至关重要。
一般来说，免疫原应具备以下特点：(1)纯度：免疫原应具有尽可能高的纯度，以避免其他成分对免疫反应的干扰。
(2)特异性：免疫原应具有与所需抗体特异性结合的能力，以激发特异性抗体的产生。
(3)免疫原性：免疫原应具有足够的免疫原性，即能够引起机体的免疫反应。
(4)安全性：免疫原应具备足够的安全性，避免潜在风险。
根据不同的应用需求，免疫原可以是多种类型的物质，如蛋白质、多肽、核酸和糖类等。
选择合适的免疫原需要根据研究目的和预期应用来确定。
2.免疫原的制备免疫原的制备通常分为化学合成和生物提取两种方式。
(1)化学合成：对于小分子的免疫原，可以通过化学合成的方法合成。
例如，对于多肽免疫原，可以设计并合成相应的多肽序列。
化学合成的优势在于可以精确控制免疫原的结构和纯度。
(2)生物提取：对于大分子的免疫原，如蛋白质和核酸，通常采用生物提取的方法。
蛋白质可以通过基因工程技术在大肠杆菌等表达系统中表达并纯化得到。
核酸可以通过DNA重组技术合成。
3.免疫反应的诱导免疫反应的诱导是指向机体注射免疫原以激发免疫反应。
免疫反应的诱导通常包括以下步骤：(1)免疫原的给药：将免疫原通过注射、给药或吸入等方式引入机体内。
(2)辅助剂的使用：为了增强免疫反应效果，通常会添加辅助剂。
辅助剂可改变免疫原的物理性质和免疫反应的过程。
(3)免疫程序的设计：根据需求设计免疫程序，包括免疫原的剂量、注射间隔和免疫次数等。
抗血清的制备是通过免疫动物或人体以获得抗体，从而制备含有抗体的血清。
一般来说，抗血清的制备包括以下步骤：(1)免疫动物的选择：选择合适的免疫动物，如小鼠、兔子或猴子等。
第三章免疫原和抗血清的制备第一节免疫原的制备免疫原指能诱导机体产生抗体或致敏淋巴细胞，并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。
一、颗粒性抗原的制备细胞、细菌、寄生虫等皆为颗粒性抗原。
细胞抗原（如绵羊红细胞）一般情况下经生理盐水或其他溶液洗净，配制一定浓度即可。
细菌抗原多用液体或固体培养物，经集菌后处理。
颗粒性抗原大多用静脉内注射免疫法。
二、可溶性抗原的制备和纯化（一）组织和可溶性抗原的粗提蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶、补体、细菌毒素、免疫球蛋白片段、核酸等皆为良好的可溶性抗原。
1组.织匀浆的制备（1）高速组织捣碎机法；（2）研磨法：组织匀浆液要离心沉淀，沉淀物为组织和细胞碎片，上清液为提取可溶性抗原的材料。
2细.胞的破碎（）反复冻融法：℃冷冻，〜7融化。
（2）超声破碎法（3）自溶法（4）酶处理法：胃蛋白酶或胰酶。
（5）表面活性剂处理法：十二烷基硫酸钠。
3免.疫球蛋白片段的制备（）非共价键解离法：改变环境或用变性剂。
（2）共价键解离法：还原法或氧化法解离二硫键。
（3）溴化氰裂解法：溴化氰裂解蛋白质肽链。
（4）酶解法：木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或胰蛋白酶。
（二）可溶性抗原的提纯和纯化超速离心法：适用于少数大分子抗原或比重较轻的抗原，不适用于大多数中小分子抗原。
选择性沉淀法：（1）核酸去除法：核糖核酸降解法更简便。
（2）盐析法：常采用硫酸铵使蛋白抗原进行粗筛、提取丙种球蛋白及抗原浓缩。
（3）有机溶剂沉淀法：常采用乙醇或丙酮。
（）聚合物沉淀法：常用非离子型聚合物，如聚乙二醇（）G凝胶过滤法：根据分子大小进行分离纯化。
离子交换层析法：利用一些带电离子基团的凝胶或纤维素，吸附带有相反电荷的蛋白质抗原。
5亲.和层析法：与生物分子间不同的亲和性进行分离。
如抗原和抗体、酶和酶抑制物、酶蛋白和辅酶、激素和受体等。
电泳法：蛋白质在同一环境中，分子量和电荷不同，在电场中迁移速率不同进行分离。
（三）纯化抗原的鉴定蛋白质含量测定：常用的是紫外光吸收法，该法测定和的吸光度（）值。
临床免疫学和免疫检验第三章免疫原和抗血清的制备讲义第三章免疫原和抗血清的制备概述：免疫学的研究主要涉及到两个重要的组分：免疫原和抗血清。
免疫原是引发免疫反应的物质，抗血清则是由免疫反应产生的抗体。
制备免疫原和抗血清是研究免疫学的基础，也是开展临床免疫学和免疫检验的前提。
一、免疫原的制备1.病原体免疫原的制备（1）整活病原体的制备：将病原体培养至足够数量，收集后经过消毒杀菌处理，用于动物免疫或制备抗血清。
（2）灭活病原体的制备：将病原体培养至足够数量，用热、化学物质或辐射等方法使其失去活性，避免感染动物或人员，用于动物免疫或制备抗血清。
（3）病原体抗原的提取和纯化：通过培养病原体，收集其代谢产物，经过提取、纯化等步骤得到纯净的抗原物质。
2.细胞免疫原的制备（1）原代细胞制备：从动物或人体中采集组织或器官，通过细胞培养技术将细胞分离并进行传代，得到大量的细胞用于动物免疫或制备抗血清。
（2）细胞株制备：将细胞分离后，在适当的培养环境中进行无限传代，得到大量同源的细胞，用于动物免疫或制备抗血清。
（3）细胞裂解物制备：将细胞离心沉淀后，用适当的缓冲液裂解细胞释放细胞内的免疫原物质，进行纯化处理后得到制备的免疫原。
3.蛋白质免疫原的制备（1）从细胞裂解物中分离：将细胞裂解，经过离心等步骤得到细胞内的蛋白质物质，可以经过分子筛、电泳等技术得到纯净的蛋白质免疫原。
（2）基因工程蛋白质的制备：利用克隆技术将目标蛋白质的基因导入到表达系统中，通过大量表达和纯化，得到目标蛋白质。
二、抗血清的制备抗血清是由免疫原引发的免疫反应产生的抗体。
下面介绍几种常见的抗血清制备方法。
1.动物抗血清的制备选择适宜的动物（如小鼠、兔子、小鸡等），先注射免疫原，然后通过多次免疫，免疫记忆细胞对免疫原做出反应，最后采集动物血液得到抗血清。
2.单克隆抗体的制备将B细胞与病原体或免疫原细胞融合，形成杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞能够无限制地分裂，并能够产生单一抗体。
临床免疫学检验教案
第次课授课时间：2007.9-12
第一节免疫原的制备
一、颗粒性抗原的制备
二、可溶性抗原的制备和纯化
三、半抗原性免疫原的制备
第二节免疫佐剂
一、佐剂的种类
二、佐剂的作用机制
第三节抗血清的制备
一、免疫动物的选择
二、免疫程序
三、动物采血法
第四节抗血清的鉴定和保存
一、抗血清的鉴定
二、抗血清的保存
第五节抗血清的纯化
一、特异性IgG抗体
二、单价特异性抗血清
简图简
表示意
图设问
讨论
讲解免疫原的制备20 min
讲解免疫佐剂20 min
讲解抗血清的制备20 min
讲解抗血清的鉴定和保存20 min
讲解抗血清的纯化20 min
免疫原(immunogen)是能诱导机体产生抗体并能与抗体发生反应的物质颗粒性
抗原-细胞、细菌、寄生虫可溶性抗原一
蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、核酸
免疫佐剂(immunoadjuvant):预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗
原的免疫应答或改变免疫应答的类型的物
质称为免疫佐剂，简称佐剂
(adjuvant )。
临床免疫学和免疫检验第三章免疫原和抗血清的制备讲
义
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第三章免疫原和抗血清的制备
一、引言
本章主要阐述了免疫原和抗血清的制备。
这包括定位免疫原的位点，构建分子免疫试剂，考察抗原特异性及抗血清的制备方法等。
首先要先了解免疫原的性质，以及它们的位点，只有位点的准确认定，才可以继而构建分子免疫试剂。
这些分子免疫试剂能够特异性检测抗原，而后经过合理的疫苗工艺，在动物体内形成抗血清，从而达到抗毒作用。
二、定位免疫原的位点
1.基因测序技术
基因测序技术（Sequencing Technolog）是用来鉴定染色体上不同物质或分子的一种技术，它可以帮助确定免疫原的精确位点。
如果综合应用多种鉴定技术，就可以更准确的定位免疫原的位点，并且可以有效筛选出慢性病毒感染病人的抗原性分子及其相关物质。
2.单克隆抗体。
初级检验技师临床免疫学和免疫检验第三章免疫原和抗
血清的制备
免疫原和抗血清的制备是临床免疫学和免疫检验中非常重要的一环。
免疫原是指引起机体免疫反应的物质，而抗血清是指从动物体内提取的具有特定抗原结合能力的血清。
制备免疫原和抗血清的目的是为了研究免疫学和进行免疫诊断。
一、免疫原的制备
1.天然免疫原的制备
2.人工合成免疫原的制备
人工合成免疫原是通过人工手段合成或改造蛋白质、多肽、核酸或多糖等，以模拟天然免疫原的结构和功能。
常用方法有化学合成、酶切、递归合成等。
1.抗原免疫动物的选择
在制备抗血清之前，首先需要选择合适的动物作为免疫对象。
常用的动物有小鼠、兔、大鼠等。
选择免疫动物时需要考虑其抗原性、稳定性以及生产抗血清的成本和效果等因素。
2.免疫程序
免疫程序分为原位免疫和外位免疫两种。
原位免疫是将免疫原直接注入动物体内，常见的方法有肌肉注射、皮下注射、腹腔注射等。
外位免疫是将免疫原注射到免疫动物前肢的足底或韧带等处，以提高免疫效果。
3.抗血清的采集和分离
免疫程序完成后，可以采集免疫动物的血清进行进一步处理。
采集血清时可以使用静脉置管或心脏穿刺等方法。
采集到的全血需要经过离心分离得到血清，然后经过过滤和冷藏等步骤进行保存。
4.抗血清的纯化
为了获得纯净的抗血清，需要对采集到的血清进行纯化处理。
常用的方法有硫酸铵沉淀、硫酸沉淀、亲和层析、凝胶过滤等。
通过这些方法，可以去除血清中的不想要的成分，得到高纯度的抗血清。
