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分子生物学10

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分子生物学名词解释

分子生物学名词解释

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分子生物学名词解释第十章 DNA的生物合成1、半保留复制:复制时，母链双链DNA解开成两股单链，各自作为模板指导子代合成新的互补链.子代细胞的DNA双链,其中一股链从亲代完整的接受过来，另一股单链则完全重新合成。

由于碱基互补，两个子细胞的DNA双链，都和亲代母链DNA碱基序列一致。

这种复制方式称为半保留复制。

2、半不连续复制：领头链连续复制,随从链不连续复制，这就是复制的半不连续性.3、双向复制：复制时,DNA从起始点向两个方向解链,形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。

4、冈崎片段：DNA复制时，随从链形成的不连续片段。

5、复制子：是独立完成复制的功能单位，从一个DNA 复制起点起始的DNA复制区域称为复制子。

6、引发体：复制起始时，原核生物由解链酶、DnaC、DnaG、结合到DNA复制起始区域形成的复合结构，叫引发体.7、领头链：DNA复制时，顺着解链方向生成的子链，复制是连续进行的,叫做领头链.8、随从链：DNA复制时，不能顺解链方向连续复制，复制方向与解链方向相反的子链叫做随从链。

9、端粒:指真核生物染色体线性DNA分子末端的结构,由末端DNA序列和蛋白质构成.10、框移突变：指由于核苷酸的插入或缺失突变引起的三联体密码的阅读方式改变,造成蛋白质氨基酸排列顺序发生改变,其后果是翻译出的蛋白质可能完全不同.11、引物:是由引物酶催化合成的短链RNA分子。

12、逆转录:以RNA为模板在逆转录酶的作用下合成双链DNA的过程.第十一章 RNA的生物合成1、转录：生物体以DNA为模板合成RNA的过程称为转录。

现代分子生物学课后习题及答案(共10 章) 第一章绪论1 你对现代分子

现代分子生物学课后习题及答案(共10 章) 第一章绪论1 你对现代分子

现代分子生物学课后习题及答案（共 10 章）第一章绪论 1. 你对现代分子生物学的含义和包括的研究范围是怎么理解的？ 2. 分子生物学研究内容有哪些方面？ 3. 分子生物学发展前景如何？ 4. 人类基因组计划完成的社会意义和科学意义是什么？答案： 1. 分子生物学是从分子水平研究生命本质的一门新兴边缘学科，它以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究对象，是当前生命科学中发展最快并正在与其它学科广泛交叉与渗透的重要前沿领域。

狭义：偏重于核酸的分子生物学，主要研究基因或 DNA 的复制、转录、表达和调节控制等过程，其中也涉及与这些过程有关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。

分子生物学的发展为人类认识生命现象带来了前所未有的机会，也为人类利用和改造生物创造了极为广阔的前景。

所谓在分子水平上研究生命的本质主要是指对遗传、生殖、生长和发育等生命基本特征的分子机理的阐明，从而为利用和改造生物奠定理论基础和提供新的手段。

这里的分子水平指的是那些携带遗传信息的核酸和在遗传信息传递及细胞内、细胞间通讯过程中发挥着重要作用的蛋白质等生物大分子。

这些生物大分子均具有较大的分子量，由简单的小分子核苷酸或氨基酸排列组合以蕴藏各种信息，并且具有复杂的空间结构以形成精确的相互作用系统，由此构成生物的多样化和生物个体精确的生长发育和代谢调节控制系统。

阐明这些复杂的结构及结构与功能的关系是分子生物学的主要任务。

2. 分子生物学主要包含以下三部分研究内容：A.核酸的分子生物学，核酸的分子生物学研究核酸的结构及其功能。

由于核酸的主要作用是携带和传递遗传信息，因此分子遗传学（moleculargenetics）是其主要组成部分。

由于 50 年代以来的迅速发展，该领域已形成了比较完整的理论体系和研究技术，是目前分子生物学内容最丰富的一个领域。

研究内容包括核酸/基因组的结构、遗传信息的复制、转录与翻译，核酸存储的信息修复与突变，基因表达调控和基因工程技术的发展和应用等。

赵亚华分子生物学第10章

赵亚华分子生物学第10章

第10章遗传密码1.遗传密码：是指DNA链上的核苷酸与蛋白质链上的氨基酸的对应关系。

2.密码子：是指mRNA链上三个连续的核苷酸决定一个特定的氨基酸，mRNA上特定的核苷酸序列对应蛋白质链上特定的氨基酸序列3.U UU（Phe）、CCC（Pro）、AAA（L ys）是最早得到破译的密码子，polyG因为易于形成多股螺旋，不宜作为mRNA，就无法翻译出对应的蛋白质。

4.1964年，Nirenberg用人工合成的三核苷酸取代mRNA，在没有GTP时，不能合成蛋白质，但是核苷酸三联体却能与其对应的氨酰tRNA一起结合在核糖体上，当通过硝酸纤维素滤膜时，该复合物留在膜上。

用这种核糖体结合技术可以直接测出三联体对应的氨基酸。

5.除甲硫氨酸和色氨酸只有一个密码子之外，其余氨基酸均有1个以上的密码子。

已知多肽合成的第一个氨基酸为甲酰甲硫氨酸（原核生物）或甲硫氨酸（真核生物），但甲硫氨酸的密码子只有一个，说明编码多肽链内部甲硫氨酸和起始氨基酸用的是同一个密码子。

6.C rick等最早推测决定蛋白质中氨基酸序列的遗传密码编码在核酸分子上，其基本单位是按照5’→3’方向编码、不重叠、无标点的三联体密码子。

AUG为甲硫氨酸兼起始密码子，UAA、UAG和UGA为终止密码子。

若插入或删除一个核苷酸，就会使这以后的读码发生错位，发生移码突变。

7.在绝大多数的生物体中使用AUG为起始密码子（有报道全部的真核生物使用AUG为起始密码子），也有极少数是使用GUG为起始密码子的。

UAA、UAG、UGA是终止密码子，不编码任何一种氨基酸。

这3种密码子及其别名是：UAA为赭石型密码子，UAG为琥珀型密码子，UGA为蛋白石型密码子。

8.遗传密码的基本特性：密码的简并性、密码的变偶性、遗传密码的通用性和变异性。

9.密码的简并性：同一种氨基酸具有两个或更多密码子的现象称为密码子的简并性。

对应于同一种氨基酸的不同密码子称为同义密码子，色氨酸和甲硫氨酸只有1个密码子。

2021年分子生物学模拟试卷与答案(10)

2021年分子生物学模拟试卷与答案(10)

2021年分子生物学模拟试卷与答案10一、单选题(共30题)1.两个微溶于水的分子或分子的某些部位之间的相互作用是A：氢键B：疏水相互作用C：离子键D：范德华引力【答案】：B【解析】：2.复制中的RNA引物作用是A：使DNA聚合酶Ⅲ活化B：解开DNA双链【答案】：B【解析】：3.DNA的一级结构是指__________的排列顺序。

A：戊糖B：氨基酸C：碱基D：磷酸【答案】：C【解析】：4.逆转录酶合成DNA的方向是A：从5’端一3’端B：从3’端一5’端C：从N端一c端D：从C端一N端【答案】：A【解析】：5.高度重复基因序列大多数存在于A：原核生物B：病毒C：真核生物D：噬菌体【答案】：C【解析】：6.催化合成hnRNA的酶是A：DNA聚合酶B：RNA聚合酶IC：RNA聚合酶IID：RNA聚合酶Ⅲ【答案】：C【解析】：7.多聚核糖体A：是核糖体大、小亚基聚合B：是核糖体小亚基与mRNA聚合C：在蛋白质合成中出现D：是氨基酸在核糖体上聚合【答案】：C【解析】：8.1979年，Rich对d(CGCGCG)结晶进行X射线衍射分析得到的DNA 结构模型为A：A型B：B型C：C型D：Z型【答案】：D【解析】：9.下列不参与构成核小体核心颗粒的组蛋白是A：H4B：H2AC：H1D：H3【答案】：C【解析】：10.DNA变性的原因是A：温度升高是唯一的原因B：磷酸二酯键断裂C：多核苷酸链解聚D：互补碱基之间氢键断裂【答案】：D【解析】：11.不属于tRNA的一级结构的特点是A：看‘A位和P位B：二级结构呈三叶草形C：三级结构为“倒L”形D：有反密码子环【答案】：A【解析】：12.限制性核酸内切酶切割DNA后产生【答案】：A【解析】：13.在己知序列的情况下获得目的DNA最常用的是（）A：筛选cDNA文库B：筛选基因组文库C：化学合成法D：聚合酶链式反应【答案】：D【解析】：14.启动子是指RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段序列。

分子生物学

分子生物学

名词解释1．内含子2．promotor3核小体4．增强子， SNP5．复制子（replicon）6．Polymerase chain reaction(PCR)7．操纵子8．密码子9 后随链冈崎片段10．启动子11．负调控12．基因治疗13．Stop codon14．cDNA文库15．半保留复制填空题1．Oligo(dT)-纤维素可以用来分离纯化真核生物的。

2．大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ的主要活性为方向聚合酶活性和核酸外切酶活性。

3.Avery的肺炎链球菌的转化实验证实转化源为。

4．DNA的复制过程中连续合成的是，不连续合成的是。

3．在核糖体上合成多肽，移位时所需要能量的供给者是。

4．The two DNA chains are held together by hydrogen bonds between pairs of bases; adenine (A)always pairs with and guanine(G)always pairs with 。

5．大肠杆菌RNA聚合酶中提供催化部位的是和。

6．DNA端粒的复制是由酶催化进行的。

7.写出下列简称的中文全称single strand DNA-binding protein（SSB），promotor ，intron 。

8．染色体上的蛋白质包括和。

9．mRNA 3’端通常含有多聚腺苷酸，可以通过用来分离纯化。

10．DNA的复制过程中连续合成的是，不连续合成的是。

11．原核生物的启动子主要包括和。

22．真核生物mRNA的5’端具有结构，3’端具有结构。

13．在蛋白质的合成过程中，分子上的识别mRNA分子上的密码子并与之配对。

9．乳糖操纵子和色氨酸操纵子是两个调控的例子。

cAMP-CAP蛋白通过控制起作用。

7．在真核细胞中，都有一种特别的起始tRNA 识别起始密码子，它携带一种氨基酸，即，作为蛋白质合成的起始氨基酸。

8．蛋白质的生物合成是以_______为模板，以________为原料直接供体，以_______为合成杨所。

现代分子生物学第三版课后习题及答案(共10章)

现代分子生物学第三版课后习题及答案(共10章)

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分子生物学名词解释

名词解释1. 基因（gene）：2. 结构基因（structural gene）：3. 断裂基因（split gene）：4. 外显子（exon）:5. 内含子（intron）:6. 多顺反子RNA（polycistronic/multicistronic RNA）:7. 单顺反子RNA（monocistronic RNA）:8. 核不均一RNA（heterogeneous nuclear RNA, hnRNA）:9. 开放阅读框（open reading frame, ORF）:10. 密码子（codon）:11. 反密码子（anticodon）:12. 顺式作用元件（cis-acting element）:13. 启动子（promoter）:14. 增强子（enhancer）:15. 核酶（ribozyme）16. 核内小分子RNA（small nuclear RNA, snRNA）17. 信号识别颗粒（signal recognition partic le, SRP）18. 上游启动子元件（upstream promoter element）19. 同义突变（same sense mutation）20. 错义突变（missense mutation）21. 无义突变（nonsense mutation）22. 移码突变（frame-shifting mutation）23. 转换（transition）24. 颠换（transversion）（三）简答题1. 顺式作用元件如何发挥转录调控作用？2. 比较原核细胞和真核细胞mRNA的异同。

3. 说明tRNA分子的结构特点及其与功能的关系。

4. 如何认识和利用核酶？5. 若某一基因的外显子发生一处颠换，对该基因表达产物的结构和功能有什么影响？6. 举例说明基因突变如何导致疾病。

（四）论述题1. 真核生物基因中的非编码序列有何意义？2. 比较一般的真核生物基因与其转录初级产物、转录成熟产物的异同之处。

分子生物学第十章


限制酶的发现
大肠杆菌的限制 — 修饰系统中，该系统由两种酶组成： 限制酶（分解和识别DNA的酶） 修饰酶（改变碱基结构，免遭限制酶分解）
甲基化修饰Am/Cm 两种酶作用于同一DNA的相同部位
（一）限制酶的命名
（1）以该菌株的属名的第一个字母及种名的头两个字母组 成三个斜体字母的略语表示 （2）同一种细菌若有不同菌株，则在属名种名后再加上株 名 （3）若一个菌株中有几种酶时，以罗马字加以区分 （4）同一属细菌种名头两个字母完全相同，其中一个菌的 酶可改用词头后的另一个字母来代替
• 一种质粒在一个细胞内存在的数目，称为质粒的拷贝数 • 质粒拷贝数由复制类型决定，并因此分为两类 1.严紧型质粒 复制与宿主染色体同步，拷贝数较少，1-3 个/细胞 2· 松弛型质粒 复制与宿主染色体不同步，可以单独复制，
拷贝数较多， 10-500个/细胞 • 在重组DNA技术中，为了提高目的DNA的扩增效率或目的基 因的表达效率，常采用松弛型质粒作为载体
个氨基酸
• ④多克隆位点，位于lacZ'编码区内 • ⑤大肠杆菌乳糖操纵子的调节基因lacI
pUC系列载体都是成对构建的。它们在结构上基本一致，只 是多克隆位点所含限制位点的排列顺序相反
2· 特点 和pBR322相比 • ①分子量更小，拷贝数更高，不用氯霉素处理就 可以在每个细胞内扩增500-700个拷贝 • ②所含的LacZ′适合于用α-互补和蓝白筛选技术
(二) pBR322载体
有两个抗药性基因，每 个抗性基因中均含有单克 隆位点，外源DNA插入后
使相应的抗性基因失活，
宿主细胞失去相应的抗药 性，不能在含相应抗生素 的培养基中生长，这一现 象称为插入失活。
质粒pBR322的抗性基因筛选示意图

分子生物学10 多肽链的折叠

第十章多肽链折叠与翻译后加工10.1 翻译后加工•多肽链的修剪、剪切或剪接•N-端添加氨基酸•氨基酸残基的修饰•二硫键的形成•添加辅助因子（金属离子、辅酶或辅基）•多肽链的折叠和四级结构的形成10.2 多肽链翻译后的定向与分拣10.1 翻译后加工•为什么要进行翻译后加工？1) 增加功能性2) 实现定向和分拣3) 调节活性4) 提高机械强度5) 改变识别多肽链的剪切：前胰岛素的剪切N-端添加氨基酸：蛋白质拼接反式拼接形成二硫键添加辅助因子多肽链的折叠---分子伴侣：Hsp70，触发因子分子伴侣及其主要功能，Hsp70的作用机理P263 ；触发因子的概念及结构特点P264-26510.2 蛋白质翻译后的定向与分拣•定向与分拣：蛋白质合成后所经历的转移和定位的过程称为蛋白质的定向与分拣。

•细胞内蛋白质定向、分拣的途径分为：共翻译途径——在翻译延伸还没有结束的时候就被启动翻译后途径——需要在翻译结束以后才被启动。

分为识别、移位和成熟三步10.2.1 共翻译途经•信号肽：是一段在一级结构上连的续氨基酸序列，是蛋白质分拣信号。

能够引导蛋白质从细胞液进入内质网、高尔基体、胞外、细胞核、线粒体叶绿体和过氧化物酶体。

•信号斑：是存在于已折叠的蛋白质表面的三维分拣信号。

信号肽学说及作用机理重点10.2.2翻译后途经：细胞核编码的线粒体基质蛋白的定向转移信号肽学说图解14本章要点• 多肽链的折叠：--分子伴侣：Hsp70，触发因子• 翻译后的定向分拣：共翻译途径• 作业 P276-1。

分子生物学名词解释

一、名词解释1、分子生物学（狭义）：研究核酸和蛋白质等大分子的形态、结构特征及其重要性、规律性和相互关系的科学，主要研究基因的结构和功能及基因的活动。

2、分子生物学（广义):在分子的水平上研究生命现象的科学，涵盖了分子遗传学和生物化学等学科的研究内容。

3、基因：是具有特定功能、能独立发生突变和交换的、“三位一体”的、最小的遗传单位。

4、顺反子：基因的同义词，是一个具有特定功能的、完整的、不可分割的最小遗传单位。

5、增色效应：当进行DNA热变性研究时，温度升高单链状态的DNA分子不断增加而表现出A260值递增的效应。

6、变性温度：DNA双链在一定的温度下变成单链，将开始变性的温度至完全变性的温度的平均值称为DNA的变性温度。

7、DNA的复性：DNA在适当的条件下，两条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象。

8、C值：一种生物中其单倍体基因组的DNA总量。

9、C值悖论：C值和生物结构或组成的复杂性不一致的现象。

10、重叠基因：共有同一段DNA序列的两个或多个基因。

11、重复基因：基因组中拷贝数不止一份的基因。

12、间隔基因（断裂基因）：就是基因的编码序列在DNA分子上是不连续的，为不编码的序列所隔开。

13、转座子：在基因组中可以移动的一段DNA序列。

14、转座：一个转座子从基因组的一个位置转移到另一个位置的过程。

15、假基因：基因组中存在的一段与正常基因非常相似但不能表达的DNA序列。

16:、DNA 复制：亲代双链的DNA分子在DNA聚合酶等相关酶的作用下，别以每条单链DNA为模板，聚合与模板链碱基对可以互补的游离的dNTP,合成两条与亲代DNA分子完全相同的子代双链DNA分子的过程。

17、复制子：从复制起点到复制终点的DNA区段称为一个复制子。

18、复制体：在复制叉处装备并执行复制功能的多酶复合体。

19、复制原点（复制起点）：DNA分子中能独立进行复制的最小功能单位。

20、端粒：染色体末端具有的一种特殊结构，对维持染色体的稳定起着十分重要的作用。

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三、离子交换层析
• 离子交换层析 离子交换层析（ion exchange chromatography, IEC）是 根据物质自身所带电荷的不同进行分离的层析技术。如二 乙基氨基乙基－交联葡聚糖（DEAE-Sephadex）层析就 是使用带有正电荷的二乙基氨基乙基（DEAE）的带电基 团作为树脂填料来分离物质。这些带有正电荷的DEAESephadex吸附带有负电荷的物质如蛋白质并与之相结合。 这些带有负电荷的物质所带的负电荷越多，它们之间的结 合也就越紧密。
四、原位杂交
• 原位杂交（(in situ hybridization, ISH）是 原位杂交（ ） 让细胞中的染色体扩散，使DNA部分变性 产生能与标记探针杂交的单链，通过染色 确定染色体所在，而通过放射自显影确定 目的基因所在，从而确定目的基因在哪一 条染色体上。
• 将DNA探针用能被荧光 抗体检测的二硝基酚标记， 可以确定肝糖磷酸化酶基 因位于人11号染色体上， 染色体用碘化丙啶（PI） 染色，发出红色荧光；而 以红色为背景，位于11 号染色体上的抗体探针的 黄色是很明显的。这种使 用荧光标记探针的技术就 是荧光原位杂交 （Fluorescence in situ hybridization FISH）。
DNA分型（DNA typing）技术，又称 分型（ 指纹技术， 分型 ）技术，又称DNA指纹技术，是对人类基因 指纹技术 组中具有多态性的重复序列进行基因分型的技术。 组中具有多态性的重复序列进行基因分型的技术。
三、RNA印迹杂交 印迹杂交
• Northern blot用于判断完整RNA的量和大小，这 是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素 膜上的方法。DNA印迹技术由Southern于1975年 创建，称为Southern印迹技术。RNA印迹技术正 好与DNA相对应，故被趣称为Northern印迹杂交 印迹杂交， 印迹杂交 与此原理相似的蛋白质印迹技术则被称为 Western blot。
• 离子交换剂是通过化学反应将带电基团引人到惰 性支持物上而形成的，如带电基团呈正电，则能 结合阴离子，称为阴离子交换剂 阴离子交换剂(anion 阴离子交换剂 exchanger)。由于被分离的各种离子所带电荷的 多少不同，它们对交换剂的亲和力就有差异，因 此经过不同浓度离子的交换与洗脱过程，使不同 的离子依先后顺序被洗脱下来，从而达到分离目 的。 • 同样原理，也可以用带有负电荷的离子交换树脂 来对包括蛋白质在内的带有正电荷的物质进行分 离。离子交换层析中，基质上带有负电荷的基团， 称之阳离子交换剂 阳离子交换剂（cation exchanger）。 阳离子交换剂
• S1 mapping the 5′-end of a transcript.
指纹和DNA分型 二、DNA指纹和 指纹和 分型
• 这种DNA分型的方法是由Alec Jefferys和他的同 事们在1985年发现的，他们在研究一段来源于α 球蛋白基因的DNA片段时发现这个片段含有一段 重复多次的序列，这种重复的DNA被称为微卫星 微卫星 DNA（microsatellite DNA）。 • 每一个人的这些序列的重复方式都是不一样的， 两个人有相同序列重复方式的几率是极微的，它 们像指纹一样具有唯一性，因而又称为DNA指纹 指纹 （DNA finger print）。
第一节 生物大分子的分离
一、凝胶电泳
凝胶电泳在分子生物学研究中分离蛋白质和 核酸是很常见的。 核酸是很常见的。
凝胶电泳（gel electrophoresis）是一大类技 凝胶电泳 术，被科学工作者用于分离不同物理性质（如 大小、形状、等电点等）的分子。凝胶电泳常 用的有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳 两种。
四、非放射性示踪
• 放射性示踪剂最大的优点就是灵敏度高， 不过现在很多非放射性示踪剂 non非放射性示踪剂( 非放射性示踪剂 radioactive tracer) 也有了很高的灵敏度， 而且免除了放射性示踪剂造成的放射性污 染和对人体的危害。目前最常用的非放射 性示踪剂是生物素和地高辛
Detecting nucleic acids with a nonradioactive probe.
• 放射自显影 放射自显影（radioautography； autoradiography）的原理是利用放射 性同位素所发射出来的带电离子(α或β 粒子)作用于感光材料的卤化银晶体， 从而产生潜影，这种潜影可用显影液 显示，成为可见的"像"，因此，它是利 用卤化银乳胶显像检查和测量放射性 的一种方法。分子生物学家用得最多 的乳胶胶片是X光片。
聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 在蛋白质的分离中，电泳所用的凝胶通常是聚丙 在蛋白质的分离中， 烯酰胺。 烯酰胺。
如果要测定某一个酶的组成多肽， 如果要测定某一个酶的组成多肽，就需要用某种方 法将这个酶的组成多肽（也称为亚基） 法将这个酶的组成多肽（也称为亚基）分开再进行 电泳。通常使用去垢剂（十二烷基磺酸钠， 电泳。通常使用去垢剂（十二烷基磺酸钠，SDS） ） 使这个酶变性从而将其亚基彼此分开。 使这个酶变性从而将其亚基彼此分开。
第四节 转录子的作图和定量分析
分子生物学的一个任务是转录子 转录子（mRNA） 转录子 的作图（定位起点和终点）与定量分析 （测定一定时间内的转录数量）。除了 Northern blot以外，还有多种方法进行酶 切作图和定量分析。
一、S1作图 作图
• S1作图 作图（S1 mapping）是采用S1核酸酶对RNA 作图 进行作图的方法，用于定位RNA的5’-和3’-末端以 及定量分析一定时间内细胞中的某种RNA。 • 原理：标记一条能够和目的转录产物杂交的单链 DNA探针，而不是标记转录产物本身，探针必须 包含转录产物起点或终点的序列。探针与转录产 物杂交后，使用S1核酸酶消化单链DNA和RNA。 因此，转录产物保护探针的一部分不被降解。
四、凝胶过滤层析
• 凝胶过滤层析 (gel filtration chromatography) 又称排阻 排阻 层析（molecular-exclusion 层析 chromatography）或分子 筛方法，主要是根据蛋白质 的大小和形状，即蛋白质的 质量进行分离和纯化。
第二节 标记示踪剂
一、放射自显影
琼脂糖凝胶电泳
DNA凝胶电泳。由于DNA带有磷酸基团， DNA通常带有负电荷，所以DNA在凝胶中是 从负极向正极移动的。由于DNA分子大小不 同，小分子DNA在凝胶中移动时受到的阻力 要比大分子DNA小，所以电泳结果DNA按其 分子大小分布。通过荧光染料将DNA染色， 就可以在紫外光照射下观察凝胶上DNA的分 布情况。 未知分子量大小的DNA通过和已知标准分子量 大小的DNA一起凝胶电泳，然后观察比较它 们在凝胶上的位置就可以判断未知DNA分子 量大小。同样的凝胶电泳分离原理也适用于 RNA。
• 只有一条带，说明DNA样品中只有一个基 因有与cDNA探针互补的序列，当然，这个 基因可能有多个拷贝，但每个拷贝只有一 个所用酶的酶切位点，只是产生的条带颜 色比较深而已。但是如果有多条带，就可 能有多个基因有与cDNA探针互补的序列， 但并不能确定有多少个。因为如果一个基 因有多个酶切位点，也会产生多条带。
精确检测DNA片段中放射性的量
• 通过观察放射 自显影条带的 深浅来粗略估 计，也可以用 光密度计扫描 放射自显影条 带进行准确估 计。
二、磷光成像
• 磷光成像 (phosphorescence imaging) 的工 作原理在于：同位素标记的杂交结果在磷屏 上曝光，曝光是32P等核素核衰变同时发射β 射线，首先激发磷屏上分子，使磷屏吸收能 量分子发生氧化反应，以高能氧化态形式储 存在磷屏分子中。激光扫描磷屏，对于激发 态高能氧化态磷屏分子发生还原反应，即从 激发态回到基态时多余的能量以光子形式释 放，从而被探测器捕获进行光电转换，磷屏 分子回到还原态。
• 凝胶电泳能测定这部分的大小，通过被保护部分的范围 就能确定转录产物的起点和终点。 • 与转录产物杂交的DNA探针部位被保护，包括末端标记。 探针被保护部分的大小可根据凝胶电泳已知片段大小的 marker DNA来判断。探针的右末端（标记的BamHI） 位置已清楚，被保护的探针长度就能说明左末端的位置， 即转录起始位点。 • S1作图同样可以用于定位转录产物的3’-末端。 • S1作图不仅可以定位转录末端，还可测定转录浓度。
五、定点突变
• 定点突变 定点突变（site-directed gene mutagenesis）是 指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的 DNA片段（可以是基因组，也可以是质粒）中引 入所需变化（通常是表征有利方向的变化），包 括碱基的添加、删除、点突变等。 • 定点突变 定点突变能迅速、高效的提高DNA所表达的目的 蛋白的性状及表征，是基因研究工作中一种非常 有用的手段。
• 计算机接受电信号， 经处理形成屏幕图 像这是一个伪彩色 图，不同颜色代表 不同的放射性强片 高数十倍，可以检 测最弱的信号。
X 光 片 的 最 大 饱 和 度 在 10, 000dpm （ disintegrations per minute，射线每分 ， 钟衰变次数） ， 所以一条 钟衰变次数 ） 所以一条50, 000dpm的条 的条 带与一条10, 000dpm的条带看起来是没有 带与一条 的条带看起来是没有 差别的。而磷光成像检测的是放射性强度， 差别的。而磷光成像检测的是放射性强度， 所以10, 000dpm与50, 000dpm之间的差别 所以 与 之间的差别 是很明显的。 是很明显的。
第十章 分子生物学的研究方法
• 本章概要： 本章概要： • 生物大分子的分离 ， 标记示踪剂 ， 核酸杂 生物大分子的分离， 标记示踪剂， 转录子的作图和定量分析， 交 ， 转录子的作图和定量分析 ， 体内测定 转录速率， DNA和蛋白质的相互作用 和蛋白质的相互作用， 转录速率 ， DNA 和蛋白质的相互作用 ， 基 因工程的基础和原理。 因工程的基础和原理。