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HPLC使用注意事项高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分析方法，适用于各种样品类型和复杂性。
为了确保HPLC的准确性和可靠性，有一些注意事项需要遵守。
以下是HPLC使用时的一些重要注意事项：1.选择合适的柱：根据所分析样品的性质和分离要求，选择适合的柱型、柱长度和粒径。
柱的性能直接影响到分离效果和峰形。
应定期检查柱的状态，保证柱的稳定性和工作寿命。
2.使用纯净的溶剂：使用优质的溶剂和试剂，避免其中含有杂质和离子，以免对实验结果产生影响。
可以使用反渗透水或高纯度的有机溶剂来制备溶液。
3.准备标准溶液：为了定量分析，准备一系列浓度递增的标准溶液。
确保标准溶液的准确度和精确度，并定期检查标准溶液的品质。
4.样品的准备：样品的准备非常重要，特别是对于复杂的样品，如生物样品。
样品应进行适当的前处理，以去除杂质、浓缩或降低干扰物浓度。
对于有机溶剂不溶的样品，可以使用溶剂萃取、固相萃取或其他样品处理方法。
5.控制流动性：流动性是保证HPLC分析准确性和重复性的关键。
使用适当的流速和流动相，以确保样品在柱中的适当保持时间和效果。
流速过高可能导致峰形变形或样品无法分离。
6.梯度洗脱的选择：在一些复杂的分离中，可以使用梯度洗脱来提高分离效果。
梯度洗脱时，需要根据样品特性和分离要求，选择合适的洗脱曲线和梯度程序。
7.实验参数的记录：在进行HPLC分析时，应详细记录实验参数，如流速、温度、柱型、流动相组成等。
这些参数记录对于结果的追溯和比较具有重要意义。
此外，还应记录任何异常或非典型结果，以便根据这些信息进行排查。
8.清洗和维护设备：定期进行HPLC设备的清洗和维护，以确保设备的正常运行和长期稳定性。
这包括清洗进样器、列室和检测器等部件。
定期更换柱和相关设备，以确保结果的准确性。
9.安全操作：在操作HPLC时，应遵守实验室的安全规范，确保个人安全和设备的安全。
避免使用有毒、易燃或易爆的溶剂，正确处理和处理废液。
10.定期校正和质量控制：定期校正和质量控制是确保HPLC分析准确性和可靠性的重要步骤。
岛津液相色谱仪使用注意事项1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用大比例的去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml 以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。
清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边清洗，然后插入新的流动相中。
更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
1、样品的前处理：a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质c、使用0.45µm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
HPLC使用注意事项
1.使用前请仔细阅读《Agilent 1260 HPLC工作原理、使用与维护》。
2.首次使用必须在负责人的指导下完成。
3.每次使用填写《HPLC使用登记表》。
4.样品的前处理：
最好使用流动相溶解样品；使用0.45µm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
5.使用前检查溶剂瓶流动相剩余，不足0.3L时请及时添加，并更改bottle filling
设置（添加溶剂时滤头不可露出液面；溶剂少于0.2L时仪器自动停止工作）。
6.若需更换色谱柱，应先用溶剂冲洗好色谱柱，再把色谱柱的两头用密封螺丝密封好
即可；更换后平衡30min待仪器稳定时再进样测试。
7.每日开机测试前，用1.0ml/min流速平衡系统，待仪器稳定后方可进样测试。
8.首次使用时，在view-preference下添加以自己名字命名的文件夹，方便数据保存。
9.新建方法时，建议在ye-lab方法基础上修改。
10.正常流速为0.5-1.0 ml/min（2.0-5.0ml/min为不接色谱柱或排空阀打开时的清
洗管路排气泡流速）。
11.序列进样时，最后一个样品选择100号样品瓶，使用wash或wash-stop清洗色谱
柱（白天测试且有其他同学会在当天测试时，选择wash方法，使流速降为0.1ml/min；
序列在晚间停止时，选择wash-stop方法，使流速降为0且关闭紫外灯）。
HPLC，即高效液相色谱法，是一种在分析化学、有机化学、生物化学等领域有着广泛应用的技术。
在使用HPLC进行实验时，需要注意以下事项：流动相的纯度：流动相必须是高纯度的，以保证色谱柱和检测器的性能。
如果流动相中含有杂质，可能会堵塞色谱柱，影响分离效果。
流动相的脱气：流动相在使用前需要进行脱气处理，以避免在实验过程中产生气泡，干扰实验结果。
样品处理：对于复杂的样品，需要进行适当的预处理，如提取、浓缩、纯化等，以去除干扰物质，提高分离效果。
色谱柱的清洗和维护：色谱柱是HPLC的核心部件，需要定期清洗和维护，以保证其性能和使用寿命。
检测器的选择：根据实验需求选择合适的检测器，如紫外检测器、荧光检测器等。
实验条件的选择：根据实验需求选择合适的实验条件，如流速、流动相组成、柱温等。
数据的记录和处理：实验过程中需要记录详细的实验数据，并采用适当的软件进行数据处理和分析。
总之，使用HPLC进行实验需要注意细节，严格遵守实验操作规程，以保证实验结果的准确性和可靠性。
hplc的注意事项-回复公式高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于生物医药、食品安全和环境科学等领域。
在使用HPLC进行实验时，有一些注意事项需要遵守，以确保结果的准确性和可重复性。
本文将逐步介绍HPLC的注意事项。
第一步：设备准备在进行HPLC实验之前，首先要确保设备的正常运行。
检查液相色谱仪的仪器参数，如流量、温度、压力和检测器的灵敏度等。
确保所有设备和仪器都处于良好的工作状态，并且有足够的试剂和耗材。
第二步：样品准备正确的样品准备是进行HPLC分析的关键。
首先，确定分析的目的和需求。
根据实验目的选择合适的溶剂和样品制备方法。
特别是对于复杂的样品，如生物样品，可能需要进行样品前处理，如蛋白质沉淀、固相萃取等。
第三步：试剂选择选择适当的试剂是确保HPLC实验成功的关键。
根据需要选择合适的溶剂、流动相和内标等。
溶剂的纯度和质量对实验结果至关重要，因此应尽量使用高纯度的试剂。
在选取流动相时，要考虑分离效果、分离时间和方法的可重复性。
选择合适的柱也是确保HPLC分析成功的关键。
柱的选择应考虑分离目标、样品性质和需求。
常见的柱类型有反相柱、离子交换柱和手性柱等。
在选择柱时，还要注意柱的尺寸、填充物和使用寿命等。
第五步：方法优化在进行HPLC实验之前，需要进行方法的优化。
优化的主要目标是提高分离效果、减少分离时间和提高方法的可重复性。
优化的关键点包括流量、温度、柱温控制、梯度程序和检测器的选择等。
通过优化方法，可以获得更好的实验结果。
第六步：系统稳定在进行HPLC实验之前，需要进行系统的稳定。
根据设备和方法要求，进行系统预运行和平衡。
确保系统的压力、流量和温度等参数在稳定的范围内。
在进行实验之前，还要做好基线的调整和峰形图的检查。
第七步：实验操作在进行实验操作时，需要注意以下几点。
首先，要准确记录所有的实验条件和参数，如溶剂的选择、柱的类型和条件、流量和梯度程序等。
其次，要严格控制实验过程中的温度，尤其是对于温度敏感的化合物。
HPLC使用操作和注意事项HPLC（高效液相色谱法）是一种常用的分析技术，广泛应用于化学、生物和环境等领域。
在进行HPLC分析时，操作和注意事项非常重要，可以确保数据的准确性和可靠性。
以下是HPLC使用操作和注意事项：1.仪器准备和检查-在进行HPLC分析之前，确保仪器处于正常工作状态，并进行必要的检查和校准。
-检查并确保溶剂瓶、移液器、混匀器、色谱柱等零件的完整性和安装正确。
2.样品准备-样品应根据需要进行稀释或提纯。
-样品应避免与空气接触，以防止氧化或降解。
-对于固态样品，可以使用溶剂进行提取。
-对于液态样品，应尽量使用无色或低吸光度的溶剂。
-样品必须先过滤，以去除悬浮物和杂质。
3.HPLC系统设置-根据试验要求设置合适的流速、温度和检测方式。
-设置正确的进样量和进样方式，确保准确和稳定的进样。
-检查色谱柱的状态，确保它处于正常工作条件。
4.溶剂和试剂准备-使用HPLC级别的纯溶剂和试剂，以确保分析结果的准确性。
-为了避免测定结果的误差，必须使用纯化的水和有机溶剂。
-按照仪器的要求准备缓冲液。
5.进样与洗脱-采用适当的进样模式，如体积进样或峰进样。
-进样体积应根据样品浓度和检测灵敏度进行优化。
-洗脱条件是决定分析分离效果和峰形的关键因素，应根据实验要求进行优化。
6.数据分析-分析HPLC数据时，应先进行标定，确定峰的保留时间和相对峰面积。
-根据标定峰的结果，进行峰识别和定量分析。
-结果应进行统计分析，并计算相对标准偏差以评估数据的可靠性。
除了上述操作，使用HPLC时还需要注意以下事项：1.安全操作-使用HPLC时，应遵守实验室的安全规定，佩戴个人防护装备，如手套和安全眼镜。
-与高压液体及其设备一起操作时，必须特别小心。
2.色谱柱保养-定期进行色谱柱的保养和洗脱，以确保其性能和寿命。
-使用适当的保护柱，避免杂质和有害物质进入色谱柱。
3.仪器保养-定期清洗和保养仪器零件，如移液器和混匀器。
-定期更换空气过滤器和溶剂瓶，以防止污染。
HPLC使用注意事项1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。
清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。
更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
高效液相色谱常见故障的断定及解决诊状可能的原因解决方法(一)保留时间变化1.柱温变化柱恒温，必要时需配置恒温箱2.等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够用》25mmol/L的缓冲液4.柱污染每天冲洗柱5.柱内条件变化稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命采用保护柱(二)保留时间缩短1.流速增加检查泵,重新设定流速2.样品超载降低样品量3.键合相流失流动相PH值保持在3"7.5检查柱的方向4.流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加柱恒温(三)保留时间延长1.流速下降管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化3.键合相流失同前(二)34.流动相组成变化同前(二)45.温度降低同前(二)5(四) 出现肩峰或分*1.样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏更换进样器转子(五)鬼峰1.进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物处理样品3.柱未平衡重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) 每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相) 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水(六) 基线噪声1.气泡(尖锐峰) 流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机噪声) 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声更换氘灯4.电干扰(偶然噪声) 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾1.柱超载降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品4.同前(四)4 同前(四)45.同前(四)3 5.同前(四)36.死体积或柱外体积过大连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(八)峰展宽1.进样体积过大同(四)12.在进样阀中造成峰扩展进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载进小浓度小体积样品液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
HPLC使用注意事项高效液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于分析化学和生物化学领域的分离技术。
在使用HPLC时，以下是一些需要注意的事项：1.选择合适的柱：根据样品性质和分离要求选择适当的柱。
不同的柱材料和填料对样品的分离效果有不同的影响。
2.样品准备：样品的准备对于HPLC分析至关重要。
样品应该是纯净的，不含杂质。
如果有需要，可以通过萃取、浓缩或衍生化等方法对样品进行前处理。
3.流动相的选择：选择合适的流动相对于分离效果也是至关重要的。
流动相可以是各种溶剂或它们的混合物。
对于高效液相色谱来说，通常使用的是有机溶剂如甲醇、乙腈等。
还需要注意一些流动相的pH值，应根据样品的性质来选择。
4.流速和梯度条件：选择适当的流速和梯度条件以满足分离的需求。
流速过高可能会导致柱压升高和分离效果下降。
而流速过低则会降低分离效率。
5.注射量：注射量应根据样品和柱的容量来确定。
一般来说，注射量不宜过大，以免超出柱的容量范围。
6.检测器的选择：根据分析目的选择适当的检测器。
常用的检测器包括紫外可见光检测器、荧光检测器和质谱检测器等。
不同的检测器对不同的化合物有不同的灵敏度和选择性。
7.标定和校准：在进行HPLC分析之前，应该进行标定和校准以确保分析结果的准确性和可靠性。
标准品的选择和制备应严格按照相关的规范进行。
8.维护和保养：定期进行仪器和柱的维护和保养以保证仪器的正常运行。
比如清洗柱、更换柱和检测器的流体以及检查泄漏和杂质等。
9.数据分析和解释：在获得分析数据后，进行相应的数据分析和解释。
对峰进行积分、计算峰面积和峰高度等指标，并与标准品进行比较分析。
10.安全措施：在进行HPLC分析时，应遵守相关的安全操作规程，避免接触有毒和易燃物质。
总之，正确使用HPLC技术需要注意上述方面的事项，以保证分析结果的准确性和可靠性。
通过合理的实验设计和操作，可以获得满意的分离效果和分析结果。
高效液相色谱分析技术的使用注意事项引言：高效液相色谱（High-performance liquid chromatography，简称HPLC）是一种广泛应用于药物分析、食品检测、环境监测等领域的分析技术。
作为一种高精密、高灵敏度的分析方法，HPLC在科研实验室和工业生产中得到了广泛的应用。
然而，正确使用HPLC技术需要注意一些关键的使用注意事项，以确保分析结果的准确性和可靠性。
一、样品制备在进行高效液相色谱分析之前，样品制备是必不可少的步骤。
优质的样品制备是保证分析结果准确性的前提。
正确的样品制备过程可以包括样品的预处理、提取、净化等步骤。
在样品制备过程中，务必遵循标准化的操作流程和使用适当的试剂和溶剂。
二、仪器设置正确设置HPLC仪器是保证高效液相色谱分析效果的关键。
在设置仪器的过程中，需要注意以下几个方面：1. 流动相：选择合适的流动相液体以及其比例是一项重要任务。
适当的流动相选择可以提高分析分离的效果和分辨率。
2. 柱温：保持柱温稳定是确保分析结果准确的重要因素。
高温容易导致柱效果变差，低温则可能导致柱内压力过高。
因此，需要根据分析物的性质选择适宜的柱温。
3. 检测器：要正确选择和设置检测器，以确保能够准确测量样品的峰面积、保证检测的灵敏度和可靠性。
4. 注射体积：确定合适的样品注射体积以及注入速度是确保高效液相色谱分析准确性的另一个关键因素。
三、质量控制为了确保分析结果的准确性和可靠性，在使用高效液相色谱分析技术时需要进行质量控制。
质量控制可以包括以下几个方面：1. 标准曲线：建立合适的标准曲线是定量分析的基础。
通过使用一系列浓度已知的标准溶液，构建样品分析物浓度与峰面积之间的线性关系，以便后续样品的定量分析。
2. 内标法：使用内标物进行定量分析可以提高结果的准确性。
内标物应该与目标分析物性质相似，但不会干扰样品中其他化合物的检测。
3. 干扰物的去除：在样品制备过程中，一些杂质和干扰物可能会影响分析结果的准确性。
岛津液相色谱仪使用注意事项
1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用大比例的去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml 以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇
等)，因为纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。
清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边清洗，然后插入新的流动相中。
更换无互溶性的
流动相时要用异丙醇过渡一下。
色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
1、样品的前处理：
a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质
c、使用0.45µm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
2、流动相的配制：液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流
动相具备以下的特点：
a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
b、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。
c、流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果；同时降低柱压降，延长
液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配
制。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流
动相中的微量氧与样品发生作用。
3、流动相流速的选择：因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。
对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。
对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml ／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml／min为佳。
当选用最佳流速时，分析时间可能延长。
可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
注意：
a．由于甲醇廉价，对于反相柱推荐使用甲醇体系(必须使用乙腈的场合除外)。
b．对于正相柱推荐使用沸程为30-60℃的石油醚或提纯后的己烷作流动相，没有提纯的己烷不得使用。
用水最好使用超纯水(电阻率大于18兆欧)，去离子水及双蒸水中含有酚类杂质，有可能影响分析结果。
c．含水流动相在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜。
最好加入叠氮化钠，防止细菌生
d．流动相要求使用0.45 µm滤膜过滤，除去微粒杂质。
e．使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能
HPLC六通阀进样器的使用及保养
六通阀进样器是高效液相色谱系统中最理想的进样器，它是由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成。
美国Rheodyne公司的六通阀进样器最为通用，各大HPLC仪器制造商均以此产品作为仪器的进样器。
工作原理：
1、手柄位进样(Load)位置时，样品经微量进样针从进样孔注射进定量环，定量环充满后，多余样品从放空孔排出；
2、将手柄转动至进样(Inject)位置时，阀与液相流路接通，由泵输送的流动相冲洗定量环，推动样品进入液相分析柱进行分析。
有关六通阀进样器的使用及保养事宜(仅供参考)：
1、手柄处于Load和Inject之间时，由于暂时堵住了流路，流路中压力骤增，再转到进样位，过高的压力在柱头上引起损坏，所以应尽快转动阀，不能停留在中途。
在HPLC系统中使用的注射器针头有别于气相色谱，是平头注射器。
一方面，针头外侧紧贴进样器密封管内侧，密封性能好，不漏液，不引入空气；另一方面，也防止了针头刺坏密封组件及定子。
2、六通阀进样器的进样方式有部分装液法和完全装液法两种。
使用部分装液法进样时，进样量最多为定量环体积的75％，如20uL的定量环最多进样15uL的样品，并且要求每次进样体积准确、相同；使用完全装液法进样时，进样量最少为定量环体积的3至5倍，即20uL的定量环最少进样60至100uL的样品，这样才能完全置换样品定量环内残留的溶液，达到所要求的精密度及重现性。
推荐采用100ul的平头进样针配合20ul满环进样。
3、可根据进样体积的需要自已制作定量环，一般不要求精确计算定量环的体积，譬如，一根名义上10uL 的定量环，实际是9uL还是10uL并不重要，因为被测样品和校正样品的进样体积保持一致，在计算结果时误差都被抵消了。
4、进样样品要求无微粒和能阻死针头及进样阀的物质，样品溶液均要用0．45um的滤膜过滤。
防止微粒阻塞进样阀和减少对进样阀的磨损。
为防止缓冲盐和其它残留物质留在进样系统中，每次结束后应冲洗进样器，通常用不含盐的稀释剂、水或不含盐的流动相冲洗，在进样阀的Load和Inject位置反复冲洗，再用无纤维纸擦净注射器针头的外侧。
