地高辛标记核酸探针的标记方法

DIG Random Labeling and Detection KitⅠ（POD）(for color detection withDAB)DNA探针标记和检测试剂盒Ⅰ产品编号：MK1008保存期：一年-20℃冰冻保存。

用途：用于DNA探针的随机引物标记及各种膜上杂交和原位杂交。

工作量：可用于标记0.1—3μg的探针6次及1000张切片的原位杂交或12次10×10cm膜上杂交检测。

原理所谓DNA探针，实质上是一段已知的基因片段，应用这一基因片段即可与待测样品杂交。

如果靶基因和探针的核苷酸序列相同，就可按碱基配对原则进行核酸分子杂交，从而达到检查样品基因的目的。

在随机引物法标记反应液中，有随机合成的六聚体核昔酸(hexanucleotide)作为引物，dATP、dCTP、dGTP、dTTP和D1G-11-dUTP作为合成底物，以单链DNA作为模板，在Klenow 酶的作用下，合成掺入地高辛的DNA链。

以地高辛标记的探针与靶基因DNA链杂交后，再通过免疫反应来进行检测。

一般通过酶标抗地高辛抗体来检测，就可以肯定杂交反应的存在。

免疫检测采用过氧化物酶系统，DAB显色。

敏感性很高。

可用于膜上杂交和原位杂交。

试剂盒内容：1. DIG Random Labeling Mix(高效)，25μl2.Biotin—MouseAnti—Digoxin200μl3. SABC—POD200μl4. DAB Stock Solution5ml5. Blocking Reagent，5g特点：（1）标记属高效标记反应。

以1μg DNA探针为例，1小时反应即可产生0.8μg标记探针，20小时可产生2μg左右的标记探针。

（2）试剂将标记反应所需的引物、核苷酸、DIG-11dUTP和Klenow酶等混合在一起。

一次标记只需吸取一次标记液，使用至为简便。

（3）标记反应适于下述对象：a.DNA从10ng—3μg。

b.不等的DNA长度100bp—10kb。

地高辛标记探针的Southern 杂交（DIG High Primer DNA Labeling and Detection Starter Kit I ，Cat.No.11 745 832 910，Roche Diagnostics GmbH，Germany）1. 探针标记步骤（20µl 体系）：1)将10ng-1µg模板DNA用无菌去离子水补足至16µl。

2)沸水浴或干浴锅98 ℃ 10分钟，使DNA变性成单链并迅速冰浴冷却。

3)充分混匀DIG-high Primer （1#管），并取4 µl至变性DNA管，混匀并离心。

4)37 ℃温育1小时或过夜（最大到不超过20小时）。

5)停止反应，加2 µl 0.2M EDTA（pH 8.0）或65 ℃加热10分钟。

2. 探针标记效率检测：将地高辛标记好的探针作一系列的稀释，点到一条尼龙膜上，同时用地高辛标记的control DNA作对照标准，120℃固定30分钟；然后用地高辛抗体免疫检测，按BNT/BCIP显色步骤显色；比较显色结果，选择带有可以接受的背景的最高探针浓度做正式的杂交。

操作步骤如下：1)根据表1 DIG-High Prime DNA标记及检测试剂盒理想条件下探针的标记产量将标记的探针稀释到1ng/μl，将试剂盒提供的control DNA稀释到1ng/μl (原始浓度是5ng /μl)，然后按照表2作一系列的稀释探针及control DNA表1 DIG-High Prime DNA标记及检测试剂盒理想条件下探针标记产量表2)将上述稀释的2-9 号管的control DNA 及探针DNA各取1μl点膜3)120℃固定30分钟或紫外交链3-5分钟4)将膜放入装有20ml Maleic acid buffer 的塑料器皿中，室温振荡2分钟5)将膜放入10ml Blocking solution中室温温育30分钟6)将膜放入10ml Antibody solution 中室温温育30分钟7)用10ml Washing buffer 洗2次，每次15分钟8)在10ml Detection buffer 平衡2-5分钟9)将膜放入2ml 新配制的Color substrate solution 中暗室条件下显色。

原位核酸分子杂交技术原位核酸分子杂交技术简称原位杂交(in situ hybridization ISH)是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待检测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合而形成杂交体，然后再应用与标记物相应的检测系统，通过组织化学或免疫组织化学方法在被检测的核酸原位形成带颜色的杂交信号，在显微镜或电子显微镜下进行细胞内定位。

这一技术为研究单一细胞中DNA和编码各种蛋白质、多肽的相应mRNA的定位提供了手段，使从分子水平研究细胞内基因表达及有关基因调控提供了有效的工具。

可视为组织化学或免疫细胞化学中革命性的突破。

原位杂交技术已应用于基础研究如基因组图(Gene mapping),转基因检测,基因表达定位(localization of gene expression),核DNA和RNA的mRNA的排列和运输(arrangement and transport of mNA),复制(replication)和细胞的分类(Sorting of cells)。

临床研究应用在细胞遗传学(Cytogenetics),产前诊断(Prenatal diagnosis),肿瘤和传染性疾病的诊断,生物学剂量测定(biological dosimetry)和病毒学的病原学诊断等。

随着核酸探针的制备,标记方法和基本操作方法的不断改进,新的技术不断涌现,相信在不久的将来,原位杂交技术将会更广泛的被应用于各个学科,并不断为生命科学提供新的资料,开拓新的领域。

第一节原位核酸分子杂交技术的发展原位杂交1969年美国耶鲁大学Gall和Pardue首先创立的，他们用爪蟾核糖体基因探针与其卵母细胞杂交，确定该基因定位于卵母细胞的核仁中。

与此同时，Buongiorno Nardelli 和Amaldi,John及其同事等相继利用同位素标记核酸探针进行了细胞或组织的基因定位。

Orth(1970)应用3H标记的兔乳头状瘤病毒cRNA探针与兔乳头状瘤组织的冰冻切片进行杂交，首次用原位杂交技术检出了病毒DNA在细胞中的定位。

地高辛标记核酸病理形态学检测方法的建立及应用杨雪;勾文峰;丁蕾;肖丽君;高野康雄;郑华川【摘要】目的建立地高辛标记原位杂交(ISH)和原位PCR(ISP)方法,探讨其在病理形态学检测中的应用.方法以细胞cDNA或质粒DNA为模板制备地高辛探针,ISH 检测肺癌、胃癌或结直肠癌切片上JCV T抗原DNA、beclin 1和SERCA3 mRNA表达水平.在肺癌和胃癌切片上扩增地高辛标记的JCV T抗原DNA.杂交或标记后,进行抗地高辛碱性磷酸酶反应并行NBT/BCIP或Fuchsin显色.结果 PCR 扩增获得高纯度地高辛标记DNA探针,甲酰胺杂交液杂交显示JCV T抗原存在于JCI细胞的细胞核中,beclin 1和SERCA3 mRNA阳性信号见于结肠癌和癌旁黏膜上皮细胞质中.ISP扩增了地高辛标记的JCV T抗原DNA,显色后发现JCV T抗原主要定位在JCI细胞、肺泡上皮细胞和肺癌细胞核、胃癌及癌旁黏膜细胞核中.NBT/BCIP显色比Fuchsin显色更为敏感,甲基绿复染使得上述2种显色更加清晰.结论地高辛标记的ISH和ISP操作简便,敏感度高,NBT/BCIP显色和甲基绿复染图像美观.%Objective To introduce the methodology of in situ hybridization (ISH) and PCR (ISP) by digoxin labeling and explore their application in pathomorphological detection and research studies. Methods The digoxin-labeled probes were prepared using cell cDNA or plasmid as template. JC virus (ICV) T antigen DNA,beclin 1 and SERCA3 mRNA were examined on the slides of lung,gastric or colorectal carcinoma by ISH. Additionally, JCV T antigen DNA was amplified and labeled by digoxin on the tissue sections of lung and gastric carcino-ma as well as their adjacent normal tissue by ISP. Anti-digoxin alkaline phosphase was reacted and colored by NBT/BCIP or Fuchsin. Re-sults The preparation ofdigoxin-labeled probes is simple using PCR. ISH showed that JCV T antigen DNA was localized in the nuclei of JCI cells after hybridization in formamide buffer. ISH results also confirmed the distribution of beclin 1 and SERCA3 mRNA in the cytoplasm of colorectal carcinoma cells. JCV T antigen DNA was labeled by digoxin and observed in the nuclei of alveolar cells,gastric epithelial cells, lung and gastric cancer cells by ISP. NBT/BCIP color development was more sensitive than Fuchsin and methyl green staining was beautiful for both NBT/BCIP and Fuchsin. Conclusion Digoxin-labeling ISH and ISP methods were simple and sensitive. Beautiful figures could be obtained using NBT/BCIP color development and methyl green staining. ISH and ISP established in this study were available and applicable for most laboratories.【期刊名称】《中国医科大学学报》【年(卷),期】2012(041)011【总页数】4页(P977-980)【关键词】原位杂交;原位PCR;核酸;病理形态学检测【作者】杨雪;勾文峰;丁蕾;肖丽君;高野康雄;郑华川【作者单位】中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学研究室,病理与病理生理研究所,沈阳110001;中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学研究室,病理与病理生理研究所,沈阳110001;解放军463医院检验科,沈阳110042;承德医学院基础部免疫教研室,河北承德067000;日本神奈川县立癌中心临床研究所,横滨241-0815;中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学研究室,病理与病理生理研究所,沈阳110001【正文语种】中文【中图分类】Q503原位检测核酸的病理学方法主要有原位杂交（in situ hybridization，ISH）和原位 PCR（in situ polymerase chain reaction，ISP）。

原位杂交(In situ hybridization)一、目的掌握核酸探针原位杂交操作技术，并利用该技术对单细胞的靶目标进行定位，用于细胞生物学基础研究。

二、原理原位杂交技术（in situ hybridization）是分子生物学和组织化学成功结合的产物，是特定标记的已知序列核酸作为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交并对其实行检测的方法。

其基本原理是含互补序列的标记DNA或RNA片段，即探针，在适宜的条件下与细胞内特定的DNA或RNA形成稳定的杂交体。

原位杂交能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究而不受同一组织中其它成分的影响，因此对于那些细胞数量少且散在于其他组织中的细胞内DNA或RNA研究更为方便；由于原位杂交不需要从组织中提取核酸，对于组织中含量极低的靶序列有极高的敏感性，并可完整地保持组织与细胞的形态，更能准确地反映出组织细胞的相互关系及功能状态。

三、仪器设备烘箱，切片机，展片机，染色缸，湿盒，原位PCR仪，显微镜、镊子、量筒、烧杯、吸水纸、枪与枪头、载玻片、盖玻片、冰盒等。

四、材料和试剂1．材料：带有病原体的水生动物，如感染WSSV病毒的对虾、感染虹彩病毒的水生动物等。

2．试剂：Davidson’s AFA固定液:330 ml 95％乙醇220 ml 福尔马林（37～39％甲醛水溶液）115 ml 冰醋酸335 ml H2O混匀后封口，室温放置；DIG标记与检测试剂盒（Roche公司）；TNE：50 mmol/L Tris-HCl 6.57 g Tris Base10 mmol/L NaCl 0.58 g NaCl1 mmol/L EDTA 0.37 g EDTAddH2O 900 ml （定容至1L）用HCl调pH至7.4，高压灭菌，4℃保存；0.4% 甲醛：37～39％% 甲醛 5.4 mlddH2O 495 ml；蛋白酶K溶液(Pr.K，10 mg/ml)：10 mg Pr.K 溶于1 ml TNE中（用时现配）；20×SSC：3 mol/L NaCl 175.32 g NaCl0.3 mol/L柠檬酸钠88.23 g 柠檬酸钠ddH2O 900 ml （定容至1L）调pH至7.0，高压灭菌，4℃保存；2×SSC：20×SSC 100 mlddH2O 900 ml0.45 µm 滤膜过滤，4℃保存；20×Denhardt’s溶液：0.4％牛清血蛋白0.4 g牛清血蛋白0.4％聚蔗糖0.4 g聚蔗糖0.4％聚乙烯吡咯烷酮0.4 g聚乙烯吡咯烷酮ddH2O 100 ml0.45 µm 滤膜过滤，4℃保存；25％硫酸葡聚糖：25 g硫酸葡聚糖溶于80 ml ddH2O（定容至100 ml），-20℃保存；杂交液：4×SSC50% 甲酰胺1×Denhardt’s5% 硫酸葡聚糖0.5 mg/ml鲑精DNA4℃保存；BufferI：100 mmol/L Tris-HCl 12.11 g Tris Base150 mmol/L NaCl 8.77 g NaCl用HCl调pH至7.5，定容至1L，高压灭菌，4℃保存，；BufferII：0.5% Blocking agent 0.5 g Blocking agentBufferI 100 ml低温加热溶解，4℃保存一星期；BufferIII：100 mmol/L Tris-HCl 12.11 g Tris Base100 mmol/L NaCl 5.84 g NaCl50 mmol/L MgCl2 10.16 g MgCl2•6H2OddH2O 990 ml（定容至1L）用HCl调pH至9.5，0.45 µm 滤膜过滤，4℃保存；BufferIV：10 mmol/L Tris-HCl, pH8.0, 1 mmol/LEDTA；显色液（NBT/BCIP使用液）：20 µl NBT/BCIP + 1ml BufferIII。

地高辛标记的cDNA探针检测 IL-6mRNA表达的方法姜蓉;王莎莉;王亚平;郑敏;王勇【期刊名称】《解剖学杂志》【年(卷),期】2001(024)002【摘要】@@ IL-6(interleukin-6)是一种由多种细胞分泌的细胞因子,在血液病及心、脑疾病时有异常表达.IL-6被认为是目前治疗各种血小板减少症的最佳药物,在治疗白细胞减少症及抗白血病、抑制肿瘤转移及骨髓移植方面也有重要作用.迄今,IL-6的检测多采用以细胞培养为基础的生物学活性检测,该方法不仅难以反映IL-6基因转录水平,而且特异性和灵敏度均受到限制.本文采用随机引物法对人IL-6cDNA探针进行地高辛标记,核酸分子原位杂交技术,建立了在转录水平上直观检测IL-6mRNA表达的实验技术,为研究IL-6的基因表达与调控奠定了基础.【总页数】3页(P189-191)【作者】姜蓉;王莎莉;王亚平;郑敏;王勇【作者单位】重庆医科大学基础医学院;重庆医科大学基础医学院;重庆医科大学基础医学院;重庆医科大学基础医学院;重庆医科大学基础医学院【正文语种】中文【中图分类】R329【相关文献】1.地高辛(DIG)和碱性磷酸酶标记cDNA探针检测PRSV [J], 姜玲;张红艳;张明涛;刘小梅;伏卉2.地高辛标记的cDNA探针检测GM-CSFm RNA表达 [J], 王亚平;王勇;郑敏;姜蓉;李静3.地高辛标记cDNA探针检测苹果茎痘病毒 [J], 杨俊玲;董雅凤;李世访;张尊平;何峻4.地高辛标记cDNA探针检测植物谷胱甘肽过氧化物酶基因表达及方法研究 [J], 苗雨晨;王建政;宋纯鹏5.地高辛标记cDNA探针检测猪繁殖与呼吸综合征病毒 [J], 李广明;姜平;李玉峰;秦承学因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

仅仅研究于生命科学，不适合在诊断过程使用只能在体外使用地高辛DNA标记和检测试剂盒1和NBT/BCIP一起用于颜色检测通过酶联免疫法采用地高辛-dUTP进行随机引物DNA标记，碱性标记和检测货号：11 745 832 910此试剂盒储存条件-15o C—-25o C此试剂盒可对10ng-3ugDNA进行12次标记反应可检测100cm2面积的杂交膜24张指导手册2009.11版1前言1.1内容表1前言 (2)1.1内容表 (2)1.2试剂盒内容 (3)2简介 (5)2.1产品概述 (5)3步骤和所需材料 (8)3.1开始之前 (8)3.2地高辛DNA标记 (9)3.3 标记效率的测定 (11)3.4 DNA 的转移和固定 (14)3.5杂交 (16)3.6免疫检测 (18)3.7 DNA印记的洗脱和再杂交 (20)4结果 (21)4.1典型的结果 (21)5附录 (23)5.1故障排除 (23)5.2引用 (24)5.3订购信息 (25)1.2 试剂盒内容附加仪器与所需试剂除了上表中列出的试剂外，你必须准备一些溶液。

在下表中，你可以找到不同操作程序需要准备的设备概要。

*标记的产品可以从Roche Applied Science 获得2 介绍2.1 产品概况实验原则此试剂盒采用地高辛（DIG），一种甾类半抗原，去标记DNA探针从而通过酶免疫分析应用地高辛标记DNA探针可以用于：所有类型的滤膜杂交总基因组DNA中单拷贝基因的检测，甚至对于高度复杂的生物也可以进行检测，如人，大麦和小麦。

样品材料至少100bp的DNA片段线性的质粒，cos质粒或者λDNA超螺旋的DNA实验时间此表格列出了每一步实验所需的反应时间检测数量一个试剂盒足够用于：不超过3ug的模板DNA的12个标准的标记反应和100cm2有24个斑点的检测质量控制根据操作步骤中的描述，对未标记的对照品DNA（PBR328）进行标记，0.1pg同源DNA 在点杂交中通过16h的显色来检测（1pg同源DNA可以通过1小时的显色进行检测）。

地高辛标记探针的DNA印迹方案Southern blot using DIG Prober(分子生物学实验室)Step I 采用地高辛高效标记混合物(ROCHE) 标记DNA探针1 以质粒为模板，PCR扩增序列特异性片段，回收片段，并测定浓度浓度测定：将回收产物取1μl稀释5倍，标准分子量的标记物MAKER分别点1μl，2μl，4μl，6μl.然后比较回收产物的条带亮度与MAKER比较后，可以粗略估算浓度。

2 取1μg模板（第1步扩增回收产物）于1.5ml的eppendorf管中，加入灭菌双蒸水至终体积为16μl。

3 沸水浴处理10min后迅速于冰上冷却使DNA变性（1）摇匀DIG-High Prime（vial 1），取4μl加入已热变性的模板DNA中，混匀后，瞬时离心，37℃保温20h，65℃处理10min终止反应。

4取１μl电泳检测，标记后的条带稍大于标记前片断。

５标记好的DNA探针－20℃保存。

Step II 基因组DNA酶切1 提取高质量的基因组DNA，浓度>1μg/μl ; 测定浓度的方法同测定探针浓度方法一样。

2 选择合适的内切酶（酶切的DNA量20μg左右。

注意考虑到纯化的损失，约30%，酶切DNA浓度过大时，可以考虑多做几管做浓缩）。

50μl酶切反应体系：EcoR I (15U/μl ) 5μl10×M buffer 5μlgDNA 10μl（约10-20μg）ddH2O up to 50μl注：有些内切酶需加BSA，请参照内切酶说明（包括最适酶切温度）。

3 37℃酶切12h （电泳检测），视酶切情况可延长酶切时间，直至酶切完全。

65℃保温10min停止酶切反应。

Step III 预电泳和电泳1 配制0.8 %的琼脂糖凝胶（大胶40ml左右，胶薄较好，利于转膜）。

2 加入适量上样缓冲液（Loading Buffer）点样，点上质粒做对照。

注：两边的点样孔尽量空出来；点上marker,再单独一点样孔用溴酚兰做指示，防止跑过。

地高辛标记核酸探针的应用
刘剑凯; 洪敏
【期刊名称】《《白求恩医科大学学报》》
【年(卷),期】1995(021)004
【摘要】本工作中以肿瘤多药耐受基因ＭＤＲ－１的ｃＤＮＡ的限制片段（５Ａ）为模板ＤＮＡ，把模板ＤＮＡ用随机引物法标记上地高辛标记的脱氧尿苷三磷酸ＤＩＧ－ｄＵＴＰ。

将此地高辛标记的核酸探针与变性的同源质粒及部分头颈肿瘤组织ＲＮＡ进行点杂交后，用抗地高辛－碱性磷酸酶及其底物进行酶联免疫分析，探讨了应用这种非放射性地高辛标记的ＤＮＡ探针及其检测系统的敏感性以及应用价值。

【总页数】2页(P432-433)
【作者】刘剑凯; 洪敏
【作者单位】不详
【正文语种】中文
【中图分类】R730.43
【相关文献】
1.应用地高辛标记的寡聚核酸探针检测副溶血弧菌 [J], 蒋鲁岩;陈光哲;祝长青;秦敏;张常印
2.地高辛标记核酸探针的标记方法及其在食用菌研究领域的应用 [J], 葛丹;陈明杰;曹文伟
3.地高辛标记核酸探针技术及其在动植物检疫中的应用 [J], 罗满林;蔡宝祥
4.地高辛标记核酸探针其应用近况 [J], 罗满林;李光富
5.地高辛标记核酸探针技术在家兔视网膜C－sis原癌基因检测中的应用 [J], 刘旭阳
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PCR法标记地高辛探针用于原位杂交检测
郑兴武
【期刊名称】《临床检验杂志》
【年(卷),期】1996(14)6
【摘要】ＰＣＲ法标记地高辛探针用于原位杂交检测郑兴武肖桂元饶颖竹戴盛明
周少雄（湛江中心人民医院，广东湛江５２４０３７）关键词人乳头瘤病毒聚合酶链反应原位杂交对于地高辛（Ｄｉｇ）核酸探针的标记，经典的方法是随机引物法，ＰＣＲ技术的兴起和发展带来了新的手段。

本研...
【总页数】1页(P306)
【作者】郑兴武
【作者单位】湛江中心人民医院;湛江中心人民医院
【正文语种】中文
【中图分类】R446.6
【相关文献】
1.地高辛标记探针原位杂交法检测肝病患者外周血单个核细胞中TTV-DNA [J],
刘暘;其其格
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星耀;高冬玲;姜国忠;张云汉
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于癌基因表达研究 [J], 鲍家驹;沈德瑜
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地高辛标记dna探针原理
地高辛标记DNA探针是一种通过标记染色体上的特定DNA序列用于鉴定、检测和定位目标DNA的技术。

其原理主要涉及两方面，一是DNA杂交，二是标记检测。

首先，标记DNA探针通过与目标DNA发生杂交反应，将DNA探针上的特定DNA序列与目标DNA上的互补序列结合，使探针与靶标DNA 形成双链DNA杂交物。

这种杂交反应通常在高温下进行，以便将DNA 双链分离，随后在低温下进行，以便使探针和目标DNA结合。

其次，标记检测通过将探针的DNA序列与荧光染料等标记物进行连接，以获得可见的信号。

在探针杂交反应后，如果探针成功与目标DNA结合，则标记物也会随之结合，反之则不会结合。

通常通过显微镜或荧光成像系统观察标记信号来确定目标DNA的存在。

因此，地高辛标记DNA探针的原理主要基于DNA杂交和标记检测技术，可以用于检测和定位目标DNA，为分子生物学等领域的研究提供了有力的支持。

地高辛标记核酸探针的标记方法地高辛标记核酸探针的标记方法核酸探针已被广泛用于筛选重组克隆、基因多样性的种性检测和真菌种群内及种群之间的系统发育关系评价。

最早使用的放射性同位素标记核酸探针具有敏感性高、特异性好、分辨力强的特点，但放射性同位素标记也存在着一系列令人困扰的问题,如成本高、探针半衰期短、放射性物质危害人体健康等。

而且在进行放射性同位素标记实验时,需要有专门的实验室及相应的实验保护设施，还需要由经过培训的专业人员来操作,因而限制了在普通实验室进行分子生物学实验。

近几年发展起来的非放射性核酸探针大多通过酶促、光化学和化学手段掺入一种报道基团,这种报道基团可通过高灵敏度的冷光、荧光或金属沉淀等检测系统检测。

另外,应用pH电极或感应器技术的电化学检测系统也有报道。

在这些检测系统中,灵敏度最高的是生物素- 亲合素检测系统和半抗原-抗半抗原地高辛检测系统。

由于生物样品中常含有内源性生物素及生物结合蛋白，生物素标记的核酸探针会发生一些非特异性结合，从而影响实验效果。

与生物素-亲合素系统同样具有高灵敏度，却减少了非特异性结合的地高辛检测系统，已为人们所接受,并得到广泛的应用。

地高辛(Digoxigenin ,DIG) 又称异羟基洋地黄毒甙元，是一种类固醇半抗原分子。

其化学结构如图1 所示。

采用人工方法可以将地高辛的线型间隔臂与dUTP 连接起来,形成DIG-11-dUTP，通过随机引物法或PCR法将其掺入到DNA探针中。

RNA探针的标记是使用噬菌体信息编码的RNA聚合酶，通过体外转录将DIG-11-dUTP掺入到RNA探针中。

寡核苷酸探针的标记则是通过末端转移酶催化，在3,末端加上DIG-11-dUTP/dATP 或DIG-11-ddUTP 尾巴。

对于目的DNA 或RNA 来说，分子杂交后,杂交部分可通过ELISA 实验程序加以检测，即加入一种结合有碱性磷酸酶的地高辛-特异性抗体，它与地高辛半抗原分子形成酶联抗体-半抗原(DIG) 复合物，再加入相应的显色底物，使杂交部分得以显示。