芽孢杆菌常用培养基配方

芽孢杆菌常用培养基配方

（按理说，该实验的所有培养基都在这了，后红字更为清楚些。。。摘自百度）

一、肉汤琼脂培养基：蛋白胨10g ，牛肉膏15g ，NACL15g ，

蒸馏水1000ml ，琼脂18g 。调节, 灭菌。如果用液体做培养基，则去掉琼脂即可。100 mL/组，其中20 mL液体培养基/250 mL △中（内装玻璃珠10颗）；50 mL固体斜面培养基分装在试管中：5mL/支，10支。

2、或是（J-琼脂培养基：胰蛋白胨5g,酵母膏15g, 磷酸氢

二钾3g,葡萄糖2g, 琼脂20g, 蒸馏水1000ml。调节—

30min灭菌。）

二、过氧化氢酶测定

1、试剂：3-10%过氧化氢

2、接种与培养：一般将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上，30度下

培养1-2天。

3、试验方法：取一干净载玻片，在上面加一滴3-10%的双氧水，

挑取1环1-2天的的菌苔，在双氧水溶液中涂抹，如有气泡出

现（O2），作为过氧化氢酶阳性，无泡为阴性。也可以将过氧

化氢液直接加入斜面上，观察气泡的产生。

三、需氧性测定

1、培养基：酪素水解物20g,葡萄糖

10g, ,NACL5g,HOCH2SO3Na1g,HSCH2COONa2g,琼脂15g,蒸馏水1L。调节，分装试管，，30min灭菌，培养基不摆斜面。

2、接种与观察：用一小环的肉汤菌液，穿刺接种到上述培养基中

（穿刺管底），一般与30 度培养3-7天观察结果。若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿穿刺线生长则为厌氧菌。

四、酪素水解（用于检测不同种类的芽孢杆菌是否具有分解酪素的

特点）

1、培养基

（1）脱脂牛奶制备取新鲜牛奶，煮沸后去掉上层油脂，再经离心脱脂（3000r/min,10min）,除去上层油脂，即为脱脂牛奶。（2）牛奶平板的制备取50ml的脱脂牛奶放入一只三角瓶中，另外称1.5g琼脂置于含有50ml蒸馏水的另外3只三角瓶中，然后将两液分开灭菌，，带冷至45-50摄氏度时，速将两液混匀倒平板，即为牛奶平板。将平板倒置过夜，使表面水分干燥。

2、接种与观察

将测试菌种以三点法点接在牛奶平板上，一般于30度培养1,3,5,7和14天，如菌落周围和下面呈透明，表明酪素已被分解。

培养基

可溶性淀粉3g/L 蛋白胨10g/L 酵母膏3g/L KH2PO41.5g/L K2HPO42g/L

MgSO4 0.1g/L PH —（富集用）

肉汤（NA）培养基（营养琼脂）：

蛋白胨10g/L 牛肉膏3-5g/L NaCl5g/L —（保存计数或分离纯化用）

营养琼脂：麦芽汁培养基=1：1混合使用，菌落不易扩散，形态特征典型

蛋白胨10g/L 酵母膏5g/L 葡萄糖3.5g/L NaCl5g/L K2HPO4 0.5g/L

MgSO4 3g/L MnSO4 25mg/L PH —（分离纯化用）

产淀粉酶菌株筛选培养基：

可溶性淀粉3-5g/L 蛋白胨10g/L 牛肉膏3-5g/L NaCl 5g/L —（用于淀粉酶产生菌分离筛选）

产蛋白酶菌株筛选培养基

1.5.1酪素培养基：

★★2.1.5.葡萄糖1g/L，酵母膏1g/L，酪素4-5g/L，K2HPO4 1g/L，KH2PO4 0.5g/L，MgSO4 0.1g/L 蒸馏水1000ml，。

另：葡萄糖0.5g/L，酪素10g/L，NaCl 5g/L K2HPO4 0.5g/L，KH2PO4 0.5g/L，

琼脂20g/L

2.1.5.牛肉膏3g/L或酵母浸粉5g/L 酪素10g/L NaCl 4-5g/L —

先将酪素用少量2%氢氧化钠润湿，玻棒搅动，再加适量的蒸馏水，在沸水浴中加热搅拌至完全溶解（10-15min），补足1000mL蒸馏水，加入其他成分，调PH 分装灭菌。

2.1.5.酵母膏0.05g/L 酪素4g/L KH2PO4 0.36g/L Na2HPO4 1.1g/L MgSO4 0.5g/L NaCl 0.16g/L FeSO4 0.002g/L CaCl2 0.002g/L ZnCl2 0.014g/L

酪素母液制备：4g酪素溶解于的30-35mL的氢氧化钠溶液中，水浴溶解20min，

溶解完毕后加入60-70℃热水定溶到培养基加20mL.

★★2.1.5.2脱脂奶培养基：

牛肉膏3g/L（酵母浸粉5g/L）蛋白胨10g/L NaCl5g/L 脱脂奶粉10-12g/L，（用于蛋白酶产生菌的筛选）

将脱脂奶（粉）加水溶解制成10℅溶液，于115℃加热灭菌20-30min，与牛膏蛋白胨固体培养基1：9混合均匀倒平板。

2.1.6纤维素产生菌培养基：

CMC-Na2g/L蛋白胨10g/L 酵母膏5g/L NaCl5g/L

（用于纤维素产生菌的筛选）

2.1.7促芽胞形成培养基：

土壤浸出液1000mL 蛋白胨5g/L 牛肉膏6g/L —

蛋白胨1g/L 酵母膏0.7g/L 葡萄糖1g/L (NH4)2SO40.2g/L MgSO40.2g/L K2HPO4 1g/L —（分离纯化用）

产芽孢培养基：蛋白胨10g/L 牛肉膏3-5g/L NaCl5g/L .玉米粉0.5g/L 酵母膏0.1g/L —

2.1.8产蛋白酶发酵培养基：

玉米粉30g/L 豆饼粉20g/L 麸皮10g/L 磷酸二氢钠4g 磷酸二氢钾0.3g/L 碳酸钠1.0g/L—八层纱布塞，牛皮纸扎好。

2.1.9产淀粉酶发酵培养基：

玉米粉40g/L 豆饼粉20g/L 蛋白胨5g/L 硫酸铵4g/L 磷酸二氢钠8g/L 磷酸二氢钾3g/L —八层纱布塞，牛皮纸扎好。

产酶培养基（蛋白淀粉酶）：蛋白胨10g/L 酵母膏5g/L 葡萄糖1g/L 可溶性淀粉5g/L 磷酸二氢钾2g/L MgSO4 0.5g/L CaCl2 0.2g/L

分离纯化（或复壮）

2.2.1冻干管的活化及菌种复壮：

活化：用无菌吸管吸取无菌水滴入安管中，轻荡使干菌体溶解成菌悬液，

做梯度稀释后取涂布或直接划线于肉汤（麦芽汁）培养基平皿，或转