小鼠免疫组织及免疫细胞的观察

⼩⿏脾脏细胞原代培养及观察计数实验报告-⼭东⼤学⼩⿏脾脏细胞原代培养及观察计数【实验⽬的】1.学习掌握细胞培养的基本原理以及具体⽅法，并对⼩⿏脾细胞进⾏原代培养；2.掌握⽆菌操作的具体过程及⽆菌操作台的使⽤；3.学习掌握染⾊法鉴别细胞的⽣死状态的原理及⽅法；4.学习使⽤⾎球计数板对细胞总数及活细胞数进⾏计数；【实验原理】1.细胞培养细胞培养指的是在⽆菌条件下，把动、植物细胞从组织中取出，在体外模拟体的⽣理环境，使离体的细胞在体外⽣长和繁殖，并且维持其结构和功能的⼀种培养技术。

动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。

从供体获得组织细胞，在⽆菌条件下，⽤胰蛋⽩酶消化或机械分散等⽅法，将动物组织分散成单个细胞开始⾸次培养长出单层细胞的⽅法称为细胞的原代培养。

当培养的动物细胞⽣长增殖达到⼀定密度，形成致密的单层细胞时，⽤胰蛋⽩酶将细胞消化分散成单细胞，从⼀个容器中以1：2或其他⽐例转移到另⼀个容器中扩⼤培养的⽅法，称为细胞的传代培养。

传代培养的累计次数就是细胞的培养代数。

⾼等⽣物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某⼀群细胞在体的功能活动是⼗分困难的。

但如果把活细胞拿到体外培养、增殖并进⾏观察和研究，则要⽅便和简单得多。

被培养的动物细胞是⾮常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进⾏研究可以帮助⼈类揭开⽣、⽼、病、死的规律，探索优⽣、抗衰⽼和防治各种疾病的途径和机制，也可以⼈为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，使其向有利于⼈类健康长寿的⽅向发展。

因此动物细胞体外培养技术是研究细胞分⼦机制⾮常重要的实验⼿段，被⼴泛应⽤于医学、⽣物技术、基因⼯程等研究领域。

细胞培养的意义:具有其他⽣物技术⽆可⽐拟的优点；培养条件易改变和控制，便于单因⼦分析；便于⼈们直接对细胞结构、细胞⽣长及发育等过程的观察；在⽣物学的各个领域（如分⼦⽣物学、细胞⽣物学、遗传学、免疫学、肿瘤学及病毒学等）已被⼴泛应⽤。

细胞培养的局限性：在脱离机体复杂环境下，细胞培养条件与躯体环境有⼀定距离；观察到的结果有时难以正确反映机体的状况；细胞培养得到的产物少。

医学免疫学实验指导病原生物与免疫学教研室实验一免疫系统组织和细胞形态学一、实验目的观察小鼠胸腺、脾脏等免疫器官及免疫细胞二、实验内容机体免疫系统由免疫器官、免疫细胞、免疫分子组成。

该系统具有识别和排除抗原性异物、维持机体内环境稳定和生理平衡的功能是执行体液免疫和细胞免疫的物质基础。

本次实验主要观察免疫器官大体解剖学、免疫细胞的形态学特征。

小鼠是啮齿目中体形较小的动物淋巴系统很发达包括胸腺、脾脏、淋巴管、外周淋巴结及肠道派氏集合淋巴结。

本实验在带教老师?傅枷陆馄市∈蠊鄄煨叵佟⑵⒃嗟让庖咂鞴俨⒅蒲 科 鄄煨∈竺庖呦赴 ?一小鼠免疫器官解剖学观察【材料】动物昆明种小白鼠。

试剂3来苏尔水瑞特氏染液。

器材眼科镊眼科剪玻片。

【方法】小鼠脱臼处死投入盛有3来苏尔水的缸内浸泡5分钟。

取出小鼠仰卧位置于试验台上使动物腹部朝上。

以镊子提起耻骨处皮肤用剪刀沿正中线直剪开至下颌部然后钝性分离皮肤再把皮肤向四肢剪开。

注意观察腹壁用剪刀沿正中线自阴部至膈肌为止剪开观察腹腔液量及性状观察脾脏。

切开膈肌剪断胸骨翻起胸骨观察胸腺、心脏及肺脏胸腺位于小鼠胸腔心脏前上方内有许多大淋巴细胞即前胸腺细胞及特定的上皮网状细胞分泌胸腺激素。

解剖结束深埋动物。

二免疫细胞的形态观察【材料】动物昆明种小白鼠。

试剂3来苏尔水瑞特氏染液pH8.6硫酸盐缓冲液20盐酸甲醇。

器材眼科镊眼科剪玻片。

【方法】准备洁净玻片两张一张用于推片另一张用于固定标本。

剪断小鼠尾巴取血或小鼠眼球取血迅速在玻片上涂血膜制备血涂片自然干燥。

瑞氏染色染色甲醇固定标本分钟亦可省略滴加瑞氏染液数滴覆盖血膜染色分钟再加等量的pH8.6硫酸盐缓冲液或新制蒸馏水用洗耳球吹打使之与染液混匀静置染色810分钟弃去染料水洗。

脱色用20盐酸甲醇脱色肉眼观察玻片呈粉红色为宜显微镜下观察结果。

细胞特征细胞细胞是由胸腺内的淋巴干细胞分化而成的是淋巴细胞中数量最多、功能最复杂的一类细胞占外周血液淋巴细胞总数的7580。

小鼠脾脏切片实验报告简介小鼠脾脏是一个重要的免疫器官，承担着过滤和保护机体免受外界微生物和有害物质入侵的功能。

本实验旨在通过对小鼠脾脏进行组织切片的方法，观察和分析脾脏的组织结构以及免疫细胞的分布情况。

实验材料和方法材料1. 实验小鼠（种类、数量等）2. 0.9%生理盐水3. 4% 碱性缓冲液（pH值7.2-7.4）4. 氯仿、醇、苯胂、二乙基氨基乙醇、玻片、显微镜方法1. 准备小鼠的脾脏组织样本：取出小鼠，将其腹部剖开，谨慎取出脾脏并放入0.9%生理盐水中清洗，去除附着在外表的血液。

2. 组织固定：将脾脏样本切块，放入4% 碱性缓冲液中固定，室温下静置2小时。

3. 组织块预处理：脾脏样本去除碱性缓冲液，用氯仿清洗，然后置于含有逐渐增加浓度的醇中，最终浓度为99%的醇溶液，室温下静置4小时。

4. 组织脱水：将脱水后的组织块置于苯胂中，进行脱脂处理。

5. 渗透：将组织块放入苯胂和二乙基氨基乙醇的混合液中，渗透24小时，确保组织块彻底渗透。

6. 切片：将渗透好的组织块置于切片机中，用切片钻制备薄切片（厚度约为5μm），并将薄切片放在玻片上。

7. 干燥：将薄切片放在恒温箱中，用适当温度和时间进行干燥。

8. 上浮脱脂：将干燥后的切片放入40的水中上浮脱脂，然后将切片挂在显微镜载玻片上。

实验结果通过显微镜观察小鼠脾脏切片的结果显示，小鼠脾脏由红髓区和白髓区组成。

红髓区呈现为较为紧密的细胞结构，细胞核显著，呈圆形或椭圆形，周边可见大量红细胞。

白髓区则由较稀疏的细胞结构组成，细胞核呈现为细长形或圆形，周围分布有淋巴细胞集群。

小鼠脾脏切片中可见到免疫细胞的聚集。

由于脾脏是免疫系统中的重要器官，免疫细胞如淋巴细胞、巨噬细胞和浆细胞等在切片中可以观察到。

淋巴细胞呈现为较大的圆形细胞核，周围有少量细胞质。

巨噬细胞则呈现为较大的细胞体积，细胞核较大，细胞质丰富，常位于红髓区中。

浆细胞则呈现为中等大小的圆形或椭圆形细胞，细胞质内可见到免疫球蛋白的沉积。

摘要：基于选择实验动物时的差异性原则，对豚鼠、大鼠和小鼠的脾脏、胸腺、淋巴组织的形态以及其石蜡切片进行比较研究，探讨免疫器官的差异，为免疫相关实验中实验动物的选择提供参考。

方法分别采集豚鼠、大鼠和小鼠的血液进行血常规及血液生理生化检测，采集脾脏、胸腺进行形态和切片观察比较。

观察血涂片可以看到豚鼠、大鼠和小鼠外周血液中免疫细胞有一定差别。

根据血常规和血液生理生化检测可见在部分指标差异极显著，部分指标差异显著。

器官外观以及石蜡切片分别有不同之处。

关键词：豚鼠；大鼠；小鼠；免疫器官；对比研究豚鼠、大鼠和小鼠免疫器官的对比研究宋春雷，俞磊，高文波，陈尚琛（江苏农林职业技术学院江苏镇江212400）收稿日期：2024-02-02基金项目：2020年江苏农林职业技术学院大学生创新创业训练计划项目：豚鼠与大鼠免疫器官的比较研究（202013103030Y ）。

作者简介：宋春雷（1979.11—），男，山东临沭人，博士，讲师，研究方向：免疫与畜禽疾病防治。

doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2024.04.050现代生命科学领域的教学、生产、研究活动无法离开实验动物而展开，选择适当的实验动物对于实验来说至关重要。

而实验动物的选择一般都要遵守差异性原则，挑选合适的实验动物，必须遵守差异性原则[1]。

基于此原则，对豚鼠和小鼠的免疫器官进行比较研究，以期为免疫相关的研究选择实验动物时提供参考。

豚鼠血清中含有丰富的补体，免疫学实验中补体来源大多为豚鼠，且豚鼠致敏反应非常迅速，适合用于过敏反应的研究。

此外豚鼠相较于大鼠、小鼠最特殊的地方在于豚鼠和人类一样自身无法合成机体所需的维生素C ，必须通过食物获得。

大鼠的优点是便于获得也很容易获得杂交的亲代。

而小鼠对外界环境变化及外来刺激敏感，被广泛用于各种实验。

为探究三者之间的差异性，本研究采集豚鼠、大鼠与小鼠的脾脏、胸腺、淋巴结从形态特征等组织学特点入手进行比较。

免疫学实验报告免疫学实验报告免疫学是研究机体免疫系统的科学，通过实验研究，我们可以更好地了解免疫系统的功能和作用。

本次实验旨在探究免疫系统对外部病原体的应对机制以及免疫细胞的活性。

实验一：外源性抗原刺激下的免疫反应首先，我们选择了小鼠作为实验对象。

将小鼠分为两组，一组注射了抗原A，另一组注射了生理盐水作为对照组。

注射后，我们观察到注射抗原A的小鼠出现了明显的免疫反应，如红肿、瘙痒等症状，而对照组的小鼠则没有出现这些症状。

为了进一步研究免疫反应的机制，我们对两组小鼠进行了淋巴细胞计数。

结果显示，注射抗原A的小鼠的淋巴细胞数量明显增加，而对照组的小鼠则没有明显变化。

这表明，外源性抗原的刺激可以引发免疫系统的活化，进而增加淋巴细胞的数量。

实验二：免疫细胞的活性研究为了进一步了解免疫系统的活性，我们进行了一系列的实验。

首先，我们选择了巨噬细胞作为研究对象。

通过给巨噬细胞添加外源性抗原，我们观察到巨噬细胞的吞噬能力明显增强。

这表明，免疫系统可以通过巨噬细胞来清除体内的病原体。

接着，我们研究了T细胞的活性。

通过给T细胞添加外源性抗原，我们发现T 细胞的增殖能力明显增强。

这说明，T细胞在免疫反应中起到了重要的作用，能够识别并攻击体内的病原体。

实验三：免疫系统的记忆性为了研究免疫系统的记忆性，我们进行了一项长期实验。

首先，我们注射了抗原A给小鼠，观察到小鼠出现了免疫反应。

然后，经过一段时间的休息，我们再次注射了抗原A给同一批小鼠。

令人惊讶的是，这次注射后，小鼠的免疫反应明显减弱，甚至没有出现明显症状。

这表明，免疫系统具有记忆性，能够对之前接触过的抗原做出更快、更有效的应对。

结论通过本次实验，我们深入了解了免疫系统的功能和作用。

免疫系统对外部病原体的应对机制是多样的，包括免疫反应、巨噬细胞的吞噬能力以及T细胞的攻击能力。

同时，免疫系统还具有记忆性，能够对之前接触过的抗原做出更快、更有效的应对。

这些研究结果对于深入理解免疫系统的功能和作用具有重要意义。

小鼠免疫组织及免疫细胞的观察【实验原理】免疫器官、组织及细胞是机体免疫系统的重要组成部分。

中枢免疫器官包括胸腺和骨髓，是T淋巴细胞及其他各类免疫细胞发生、发育和分化的场所，外周免疫器官包括脾胀、淋巴结和粘膜相关淋巴组织是免疫应答的场所。

各类免疫细胞直接参与免疫系统对抗原类物质的免疫应答，完善的免疫器官组织结构和正常的免疫细胞种类和数量是机体免疫功能发挥正常的基本条件。

【试剂和器材】小鼠、棉签、解剖台、平皿、大头针、手术剪子、手术镊子、载玻片、瑞士染液、细胞筛【操作方法】1.取一只小鼠，采用颈部脱臼法处死，将小鼠放到解剖台上，沿腹中线剪开皮肤且不破坏腹膜和胸膜，剪开腹膜，打开腹腔和胸腔，观察胸腺所在的位置和形状。

2.分离脾细胞：取出脾胀，去除其周围的脂肪组织，用剪子剪碎脾脏，放入细胞筛中，用载玻片清研脾胀，滴加生理盐水，使脾细胞分散成细胞悬液。

3.脾细胞染色观察：取少量细胞悬液置于载玻片上，与室温晾干，加瑞士染色液甲染色1min，甩掉染液，用瑞士染色液乙染色5min，用自来水冲洗，让染液漂走，置于光学显微镜下观察染色脾细胞。

【结果观察】小鼠脾细胞瑞士染色镜下观察【注意事项】1.正确抓取小鼠，防止被鼠咬伤。

2.脾脏分离完整，清研轻柔。

3.染色时间不宜过长或过短。

.【讨论】脾脏具有多种重要的生理功能, 参与并调节血液、免疫、内分泌系统的运转, 绝非可有可无;脾脏功能在疾病的不同阶段扮演不同的角色,有时甚至完全相反, 即具有双向性、时向性的特点。

1.脾切除术后暴发性感染全脾切除术后 OPSI 的发生率约为 1 %～2.4 %。

虽然 OPSI的发生率不是很高,但脾脏切除后,在由肺炎球菌导致的感染中毒性休克中, 50 %患者的病情迅速进展, 并最终导致死亡。

脾脏为全身最大的淋巴器官, 血循环相当丰富, 且脾脏具有延缓微循环的作用, 有利于清除和吞噬多种抗原, 减轻机体感染的发生。

同时脾脏拥有大量重要的免疫细胞及免疫因子, 如 T 细胞、B 细胞、K 细胞、单核巨噬细胞、自然杀伤细胞、杀伤细胞、淋巴因子活化杀伤细胞(LAK 细胞)、树突状细胞。

小鼠炎症指标炎症是机体对于外界刺激的一种非特异性反应，它是机体免疫系统的一部分，旨在保护机体免受损害。

而小鼠是炎症研究中常用的实验动物，通过观察和测量小鼠体内的炎症指标，可以了解炎症状态和炎症反应的程度。

1. 白细胞计数：白细胞是机体免疫系统中的重要成分，对于炎症反应起着关键作用。

通过观察小鼠体内白细胞的数量变化，可以初步判断炎症的严重程度。

白细胞计数的上升往往意味着炎症反应的加剧。

2. C反应蛋白（CRP）：CRP是一种急性期蛋白，它在炎症反应中起着重要的作用。

炎症引起的细胞损伤会导致CRP的合成和释放增加，因此测量小鼠体内的CRP水平可以间接反映炎症的程度。

3. 细胞因子：细胞因子是一类介导炎症反应的重要分子，如肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素-1（IL-1）。

测量小鼠体内这些细胞因子的水平可以直接反映炎症反应的程度和类型。

4. 体温变化：炎症反应往往伴随着局部组织的充血和渗出，导致体温升高。

通过测量小鼠体温的变化，可以初步了解炎症的程度和范围。

5. 组织病理学变化：炎症反应引起的组织病理学变化是炎症指标中最直接的体现。

通过对小鼠炎症部位进行组织病理学检查，可以观察到炎症细胞浸润、组织坏死和纤维化等变化，进一步了解炎症的程度和类型。

6. 活性氧和氧自由基：炎症反应可以导致活性氧和氧自由基的生成增加，从而导致细胞和组织的氧化损伤。

通过测量小鼠体内活性氧和氧自由基的水平，可以了解炎症引起的氧化应激的程度。

7. 炎症相关基因表达：炎症反应会导致多个炎症相关基因的表达水平发生变化，通过测量小鼠体内这些基因的表达水平，可以初步了解炎症反应的程度和类型。

8. 血液和尿液生化指标：炎症反应对机体的代谢和内分泌等方面产生影响，可以导致血液和尿液生化指标的改变。

通过测量小鼠体内这些指标的变化，可以了解炎症对机体其他系统的影响。

总结起来，小鼠炎症指标是炎症研究中的重要内容，通过对小鼠体内炎症指标的观察和测量，可以初步判断炎症反应的程度和类型，为炎症相关疾病的预防和治疗提供理论依据。