应用PCR试剂盒对奶牛结核病的检测
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奶牛结核病的诊断页数:2
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奶牛结核病的流行特点与防治页数:5
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奶牛结核病检疫与净化页数:4
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奶牛结核病和布鲁氏菌病检测页数:1
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牛结核病抗体检测试剂盒
BOVIGAMTM牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测试剂盒牛结核病的体外诊断试剂盒，仅限兽医诊断实验室使用一、简介牛结核病是由牛结核分枝杆菌感染引起的一种疾病，世界各国均有发生，在奶牛业中具有非常重要的地位。
在一些国家，某些奶牛群的总体发病率接近60-70％。
二、描述BOVIGAM TM 是一种牛结核病的体外快速诊断试剂盒，其原理基于血液T 淋巴细胞对牛结核分枝杆菌PPD 的细胞免疫反应。
结核菌素PPD 抗原递呈到全血组织培养物中的淋巴细胞后，感染牛结核分枝杆菌的细胞就能产生IFN-γ，并通过基于单克隆抗体的夹心ELISA 检测到。
未感染牛结核分枝杆菌的淋巴细胞不会产生IFN-γ，因此，γ-干扰素的检测与牛结核分枝杆菌感染相关。
BOVIGAM TM 在牛结核菌素皮肤试验后使用。
在皮肤试验检测出阴阳性结果后3-30天，可用γ-干扰素试验来确诊。
三、现场研究用澳大利亚、美国、爱尔兰、新西兰、意大利和西班牙的13 000头牛进行田间试验，结果表明BOVIGAM TM 在诊断牛结核病时更敏感，甚至能检出早期感染牛。
在USDA/ARS/国家动物疾病中心的家畜细菌病研究中心(美国爱荷华州Ames)，用20头对灭活牛结核分枝杆菌敏感的Hereford 食用牛进行了实验室对照研究。
比较了BOVIGAM TM 对美国PPD 和辉瑞澳大利亚PPD 的反应，表明不管用美国的PPD 还是用澳大利亚的PPD 刺激，所有牛都表现为阳性。
另外，新西兰的研究表明，试剂盒的特异性不受皮肤试验的影响，在尾根皱襞试验（CFT ）后3-30天使用时，本试剂盒比颈部皮肤试验（CCT ）更加敏感。
四、试剂盒组成试剂盒储存于2-8℃。
除酶标结合物外，所有试剂在使用前恢复至室温(22° ± 5°C)。
用完后立即放回2-8℃。
1.酶标板（包被γ-干扰素抗体） 2块96孔板 10块96孔板30块96孔板 可直接使用2.牛γ-干扰素阳性对照（含0.01%的硫柳汞）1×1.0mL 2×1.0mL 3×2.0mL冻干，用去离子水或蒸馏水重新溶解 3.牛γ-干扰素阴性对照（含0.01%的硫柳汞）1×1.0mL 2×1.0mL 3×2.0mL冻干，用去离子水或蒸馏水重新溶解 4.绿色稀释液（血浆稀释缓冲液，含0.01%硫柳汞）1×15mL 1×60mL 1×175mL可直接使用5.20×洗液（含0.01%的硫柳汞） 1×100mL 3×125mL 2×500mL 用去离子水或蒸馏水稀释6.100×酶标结合物（HRP 标记的抗牛γ-干扰素抗体，含0.01%的硫柳汞） 1×0.5mL 1×1.5mL 2×2.0mL冻干，用去离子水或蒸馏水重新溶解 7a.蓝色稀释液（5倍浓缩的酶标结合物稀释缓冲液，含0.01%的硫柳汞） N/A 1×25mL N/A用去离子水或蒸馏水稀释 7b.蓝色稀释液（酶标结合物稀释缓冲液，含0.01%的硫柳汞） 1×30mL N/A2X175mL可直接使用8.底物缓冲液（含H 2O 2）1×30mL 1×125mL 2×175mL 可直接使用 9.100倍浓缩的显色剂溶液（含溶于DMSO的TMB ）1×0.5mL 1×1.5mL 2×2.0mL用底物缓冲液稀释10.终止液(0.5M H 2SO4) 1×15mL 1×75mL 1×175mL可直接使用广州市瑞品生物技术有限公司 广州市瑞品生物技术有限公司 五、试剂盒未提供的材料A. 采血1. 肝素锂真空管 每头动物1支2. 18号针头－1寸 每头动物1支3. 针管 每位采血人员2-3支B. 血液培养1. 无菌的5或10mL移液器 每头动物1根2. 无菌的24孔组织培养板 每8头动物1块3. 分装用的枪头（5mL） 每群动物3支4. 无菌的磷酸盐缓冲液(0.01M pH7.2) 每头动物100µL5. Bovigam牛型提纯结核菌素(PPD) 150头动物1支6. Bovigam禽型提纯结核菌素(PPD) 150头动物1支C. 收获血浆1. 100-1000 µL枪头 每头动物3支2. 用于储存血浆的1mL离心管(放在96孔板架上)和盖子 每30头动物1个架子D. 牛γ-干扰素酶免疫试验1. 12道移液器吸头 每头动物3支2. 各种规格的聚丙烯管、酶免疫试验的试剂反应槽和枪头实验仪器1. 37℃培养箱2. 精密可调移液器（1mL）3. 1mL、5mL、10mL的移液器4. 100mL、1L、2L的量筒5. 6L去离子水或蒸馏水6. 12道移液器（50µL-300µL）7. 微量振荡器（可选）8. 洗板机9. 酶标仪（必须含450nm和620-650nm的滤光片）六、试剂配制1. 抗原Bovigam试剂盒在美国已被批准用于牛结核病的诊断。
牛副结核分枝杆菌的分离及鉴定
牛副结核分枝杆菌的分离及鉴定LIU Hong-xiu;CHENG Yu-di;DANG Guang-hui;LI Tian-tian;LI He;CUI Zi-yin;SONG Ning-ning;CHEN Li-ping;LIU Si-guo【摘要】为进一步确定新疆某奶牛场疑似感染副结核病的病原菌,本研究采集了37头疑似患病奶牛的直肠刮取物,应用卵黄琼脂培养基对其进行分枝杆菌的分离培养,经菌落形态观察、抗酸染色以及多重PCR等方法对分离菌进行病原学鉴定,并利用副结核分枝杆菌亚型鉴定引物进行PCR扩增及测序分析.结果显示,分离培养的7株分离菌均为抗酸染色阳性的分枝杆菌;经多重PCR鉴定,其中3株谱型与副结核分枝杆菌k10参考株一致;进一步通过基因分型的PCR扩增及测序分析,确定这3株分离菌均为牛副结核分枝杆菌.本研究为进一步开展该菌病原学和流行病学研究提供了必要的研究资料.【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2018(040)012【总页数】4页(P1177-1180)【关键词】副结核分枝杆菌;分离培养;多重PCR;亚型鉴定【作者】LIU Hong-xiu;CHENG Yu-di;DANG Guang-hui;LI Tian-tian;LI He;CUI Zi-yin;SONG Ning-ning;CHEN Li-ping;LIU Si-guo【作者单位】【正文语种】中文【中图分类】S852.61副结核病(Paratuberculosis)又称为副结核性肠炎，是由副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis，MAP)引起的反刍动物的慢性消化道疾病，该病以顽固性腹泻、渐进性消瘦、肠黏膜增厚并形成皱襞为特征。
世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须通报的动物疫病，我国将其列为B类疫病。
根据菌株的培养特性及致病力将MAP分为牛型、羊型和生物中间型3个亚型[1]。
使用16联牛乳房炎病原菌核酸检测试剂盒研究的文章
使用16联牛乳房炎病原菌核酸检测试剂盒研究的文章牛乳房炎是奶牛的常见疾病之一，也是乳制品产业面临的挑战之一。
牛乳房炎会导致乳汁中含有大量的细菌和病原菌，其中包括16种主要的致病菌。
为了解决这个问题，研究人员开发了16联牛乳房炎病原菌核酸检测试剂盒用于快速、准确的检测和鉴定牛乳中的病原菌。
该研究的论文题为《16联牛乳房炎病原菌核酸检测试剂盒的开发与应用研究》，发表于《科技期刊》。
该研究从奶牛乳汁样本中分离纯化了16种常见的致病菌，并获取了它们的核酸序列信息。
基于这些信息，研究人员设计合成了特异性引物和探针，并借助PCR技术建立了16联牛乳房炎病原菌核酸检测试剂盒。
测试剂盒包括了所有16种病原菌的引物和探针，可以同时检测这些菌株是否存在于牛乳中。
根据PCR放大产物的大小和序列特征，研究人员可以确定病原菌的种类以及其数量。
该研究通过对多个牛乳样本进行测试，验证了该方法的可靠性和准确性。
该研究进一步应用了该测试剂盒于奶牛乳房炎的实际监测中。
研究小组对多家奶牛养殖场的乳汁样本进行了检测，并分析了检测结果与传统方法的一致性。
结果表明，该测试剂盒能够准确检测到乳汁中的病原菌，并且与传统方法结果相符。
这项研究的结果具有重要的实际意义。
一方面，该测试剂盒的开发可以提高奶牛乳房炎的监测效率和准确性，减少了操作时间和人力成本。
另一方面，该测试剂盒还可以帮助畜牧业生产者快速识别感染乳牛，及时采取措施，减少疫情传播。
值得注意的是，尽管该测试剂盒已经取得了较好的效果，但仍然存在一些限制。
首先，该测试剂盒只能检测到16种主要的致病菌，无法覆盖所有可能的病原菌。
其次，该测试剂盒需要PCR技术的支持，因此在一些资源有限的地区可能难以实施。
综上所述，16联牛乳房炎病原菌核酸检测试剂盒是一项具有重要意义的研究成果。
该研究通过利用PCR技术，成功开发了一种快速、准确的检测方法，可以对乳汁中的16种主要致病菌进行检测和鉴定。
这一成果在奶牛养殖业中具有重要的应用前景，可以帮助提高乳制品质量和畜牧业的生产效益。
γ-干扰素释放法检测奶牛结核病的比较试验
64牛结核病（bovine tuberculosis）是由牛型分枝杆菌等所引起的一种人兽共患的慢性消耗性传染病，被世界动物卫生组织（OIE）列为需通报的动物疫病。
目前，我国主要采用牛型提纯结核菌素（PPD）进行单纯颈部皮试变态反应（SCT）来进行牛结核病的检疫，对于阳性牛应进行隔离或扑杀，但是许多被扑杀的牛并没有区分检疫方法可能造成的假阳性，这对牛结核病的检疫，奶牛业的发展造成了巨大的阻力。
掌握我市奶牛结核病现状、检测淘汰感染奶牛意义重大，因此采用灵敏度更高、特异性更好的检测方法具有广泛应用价值。
为此，本研究旨在γ—干扰素释放试验（IGRA）的应用优势，通过比对单纯颈部皮试变态反应（SCT）、比较皮试变态反应（CCT）和γ—干扰素释放试验（IGRA）之间的效果，为临床实际应用提供依据。
1 材料与方法1.1 PPD与试剂盒皮肤试验用牛型PPD和禽型γ—干扰素释放法检测奶牛结核病的比较试验倪谷音1，毛爱民2，范 锋2（1.无锡市动物园管理处，江苏无锡 214000；2.无锡市动物疫病预防控制中心，江苏无锡 214021）摘要：目的评价γ—干扰素释放试验（IGRA）牛结核病检疫过程中的效果。
方法在牛结核病检疫过程中对皮试初筛为结核病和疑似结核病的89（74/15）头奶牛同时进行r干扰素试验、单纯颈部皮试变态反应（SCT）和比较皮试变态反应（CCT）检测，结果单纯颈部皮试变态反应二次检疫中89头牛均判为阳性，单纯颈部皮试变态反应与比较皮试变态反应的阳性符合数为67头。
阳性符合率为75.3％；γ—干扰素释放试验和单纯颈部皮试变态反应检测两者的阳性符合数为64头，阳性符合率为71.9％；γ—干扰素释放试验与比较皮试变态反应的阳性符合数为58头，阳性符合率为79.5 ％。
阴性符合数为16头，阴性符合率为48.4 ％；结论γ—干扰素释放试验在保持较高灵敏度的同时，具有比变态反应更好的特异性。
关键词：牛结核；γ—干扰素试验；单纯颈部皮试变态反应；比较皮试变态反应中图分类号：S852.618；S855.2 文献标识码：B 文章编号：1005-944X（2014）01-0064-03A Comparative Study of γ—Interferon Release Assay in Bovine TuberculosisNi Guyin1，Mao Aimin2，Fan Feng2（1.Wuxi Zoo Management Offi ce， Wuxi， Jiangsu 214000；2. Wuxi Center for Animal Disease Prevention And Control， Wuxi， Jiangsu 214021）Abstract：Objective To evaluate the effect of γ—interferon release assay （IGRA） in bovine tuberculosis detection.Method 89（74 positive/15 suspicious） dairy cows preliminarily screened with skin test were tested byγ—inerfer-on release assay （IGRA）， simple cervical allergy skin test （SCT） and comparative allergy cervical test （CCT）.Result 89 cows were considered as bovine tuberculosis positive in SCT， and 67 of them were considered as posi-tive in CCT with the positive coincidence of 75.3%. 64 cows were considered as positive both in IGRA and SCT with the positive coincidence of 71.9%. 58 cows were considered as positive both in IGRA and CCT， with the positive coin-cidence of 79.5%. 16 cows were considered as negative， with the negative coincidence of 48.4%. Conclusion The γ—interferon release was of higher sensitivity and better specifi city than the other two allergy tests.Key words：bovine tuberculosis；γ—interferon release assay； simple cervical allergy skin test； comparative aller-gy skin test基金项目：江苏省2012农业三新工程《奶牛布病，结核病防治集成技术的推广应用》项目资助，SXGC[2012]0322014年第31卷第1期PPD购自中国兽医监察所；IGRA试剂盒购自瑞士Prionics公司。
应用聚合酶链式反应(PCR)技术检测牛结核病
自天 根 生 化 科 技 ［ 京 ］ 限公 司 ， 良罗 氏 培 养 基 由贵 州 省 北 有 改 防疫站结核病研究所惠赠。
２个 月 ， 常 规 的 结 核 菌 素 皮 内 反 应 检 测 方 法 ， 断 有 报 道 而 不 存 在非 特异 性 反 应 。Ｐ Ｒ 技 术 因具 有快 速 、 异 和 敏 感 等 优 Ｃ 特 点 已广 泛 应 用 于 临 床 标 本 的检 测 中 。本 研 究 根 据 牛 结 核 分
一
枝 杆 菌 复合 物 的 插 入 序 列 Ｉ６ １ Ｓ ｌＯ的 基 因 序 列 设 计 引 物 ， 建
立 了 快 速 、 感 、 异 的诊 断 牛 结 核 病 的 Ｐ Ｒ 检 测 方 法 ， 敏 特 Ｃ 并 应 用 于奶 牛 奶 样 标 本 及 全 血 样 本 的 检 测 中 ， 牛 结 核 病 的 流 为
研 究 所 畜 禽 疫 病 研究 室分 离鉴 定 。
氏培 养 基 上 ，７℃培 养 约 １ ～３ ， 集 菌 体 于 １ ５ｍｌ 心 ３ ５ ０ｄ 收 ． 离
管 中 ， 入 Ｔ 缓 冲 溶 液 ２ ０ １蛋 白 酶 Ｋ ４ １裂 解 液 加 Ｅ ０ ， Ｏ ， １０“， 分 混 匀 ，Ｏ℃水 浴作 用 １ ～ ２ ｉ， 入 无 水 乙 醇 ６ ｌ充 ６ ５ ０ｒ ｎ 加 ａ ２ ０”， 用 吸 附 柱 收 集 Ｄ ０ ｌ采 ＮＡ 模 板 ， 洗 剂 为 ７ 的 乙 醇 。 清 Ｏ 对 照 菌 株 胸 膜 肺 炎 放 线 杆 菌 、 肠 杆 菌 、 氏梭 菌 、 氏 杆 大 魏 巴 菌 、 门 氏菌 、 葡 萄 球 菌 、 球 菌 Ｄ 沙 金 链 ＮＡ 模 板 的提 取 方 法 与 牛分枝杆菌 Ｄ ＮＡ 模 板 的 提 取 方 法 相 同 。
断 提 供 了科 学 依 据 。
奶牛结核病检测方法
奶牛结核病检测方法奶牛结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，可以影响奶牛的健康和生产能力，还可以通过食用患有结核病奶牛的牛奶和肉类传播给人类。
因此，对奶牛结核病进行及早的检测和防控非常重要。
下面将介绍几种常用的奶牛结核病检测方法。
一、皮内试验皮内试验是目前最常用和经济实用的奶牛结核病检测方法之一。
这种方法通过在奶牛的皮肤下注射结核菌抗原，观察注射部位是否产生特异性的变应反应来判断奶牛是否感染结核菌。
结果的判断是根据注射后48~72小时观察注射部位是否有明显的硬结和红肿，硬结直径大于10mm者为阳性反应，表明该奶牛可能感染有结核菌。
需要注意的是，皮内试验属于间接试验，存在一定的假阴性和假阳性的可能性，因此在实际应用中需要与其他检测方法相结合来判断奶牛结核病的感染情况。
二、血清学检测血清学检测是通过检测奶牛血液中特异性抗体的存在来诊断奶牛结核病。
常用的血清检测方法包括血液凝集试验、酶联免疫吸附试验和胶体金试验等。
这些方法的原理是将感染结核菌的奶牛的血清与结核菌抗原进行反应，然后通过不同的检测方法观察血清的凝集、发色等反应，判断是否存在结核菌的感染。
相比于皮内试验，血清学检测方法具有操作简单、准确性高等优点，但也存在着一定的假阳性和假阴性的可能性，因此也需要与其他方法相结合来判断奶牛结核病的感染情况。
三、结核菌培养结核菌培养是通过在适当的培养基中培养样本中的结核菌，然后观察菌落的生长情况和形态特征来判断奶牛是否感染结核菌。
这种方法是目前诊断结核病的“金标准”，对确定结核病感染的确诊具有重要意义。
但是，结核菌培养的过程需要较长时间，通常需要培养4-6周才能得到结果，因此不太适合作为常规的奶牛结核病筛查方法。
此外，结核菌培养的操作较为复杂，需要较高的实验室技术和设备条件。
四、核酸检测核酸检测是通过检测奶牛体内结核菌的核酸（基因）来判断是否感染结核菌。
这种方法的优点是操作简便、结果快速，对于早期结核病感染的检测具有较高的灵敏度和特异性。
γ-干扰素释放法检测奶牛结核病的比较试验
试 验 研 究
干扰素释放 法检 测 奶牛 结核 病 的 比较试 验
一
毛爱 民 ， 倪谷音 ， 范 锋
（ １ ． 江苏 省 无锡市 动物疫病 预 防控制 中心 ；２ ． 无锡市 动物 园管理 处 ，无锡 ２ １ ４ ０ ０ ０）
摘 要： 目的评价 ｒ 干扰素释放试验（ Ｉ ＧＲ Ａ） 牛 结核病检 疫过程 中的效果。在 牛结核病检疫过程 中对皮试初 筛为结核
”
＋
－＋
・
社， １ ９ ７ ９ ： ２ ０ — ６ ４ ．
［ ５ ］ 刘月英 ， 等． 淡水螺类 与人们的关系ｆ Ｊ １ ． 动物学杂志， １ ９ ７ ７ ， ３ ： ４ ６ — ４ ８ 【 ６ １ 周贵， 等． 东毕血 吸虫 中间宿主一 淡水螺 的研究［ Ｊ １ ． 吉林农业 大学
学报， １ ９ ９ ６ ， １ ８ （ １ ） ： ５ ９ — ６ ３ ．
数为６ ４头，阳性符合 率为 ７ １ ． ９ ％； 一干扰素释放试验与 比较皮试 变态反应 的阳性符合数 为 ５ ８头 ，阳性符合率为
７ ９ ． ５ ％。阴性符合数为 １ ６头 ， 阴性符合率为 ４ ８ ． ４％。 结论 一干扰素释放试验在保持 较高灵敏度的 同时， 具有比变态
反 应更 好 的 特 异性 。
我市春季奶牛两病 监测 中单纯牛 型 Ｐ Ｐ Ｄ初 １ ． ４ 单 纯颈部皮试 变态反 应 试验参 照国家标准 《 动物结
１ ． ２ 试验 用牛
・
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干扰素释放 法检 测 奶牛 结核 病 的 比较试 验
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毛爱 民 ， 倪谷音 ， 范 锋
（ １ ． 江苏 省 无锡市 动物疫病 预 防控制 中心 ；２ ． 无锡市 动物 园管理 处 ，无锡 ２ １ ４ ０ ０ ０）
摘 要： 目的评价 ｒ 干扰素释放试验（ Ｉ ＧＲ Ａ） 牛 结核病检 疫过程 中的效果。在 牛结核病检疫过程 中对皮试初 筛为结核
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［ ５ ］ 刘月英 ， 等． 淡水螺类 与人们的关系ｆ Ｊ １ ． 动物学杂志， １ ９ ７ ７ ， ３ ： ４ ６ — ４ ８ 【 ６ １ 周贵， 等． 东毕血 吸虫 中间宿主一 淡水螺 的研究［ Ｊ １ ． 吉林农业 大学
学报， １ ９ ９ ６ ， １ ８ （ １ ） ： ５ ９ — ６ ３ ．
数为６ ４头，阳性符合 率为 ７ １ ． ９ ％； 一干扰素释放试验与 比较皮试 变态反应 的阳性符合数 为 ５ ８头 ，阳性符合率为
７ ９ ． ５ ％。阴性符合数为 １ ６头 ， 阴性符合率为 ４ ８ ． ４％。 结论 一干扰素释放试验在保持 较高灵敏度的 同时， 具有比变态
反 应更 好 的 特 异性 。
我市春季奶牛两病 监测 中单纯牛 型 Ｐ Ｐ Ｄ初 １ ． ４ 单 纯颈部皮试 变态反 应 试验参 照国家标准 《 动物结
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奶牛结核病——结核菌素变态反应检测技术
并结合点眼 ， 以前者为主， 后者为辅 ， 不仅有助于疑 ２ 应用检 测 ． 检 似病例的确诊 ， 而且可查 出隐性病例。此法常用于 ２ １ 定期检测 每年 定期 开展奶 牛 结核 病监 测 （ 引进 牛只 的检 疫 和牛群 的定期 检验 。 疫） 。凡结果呈 阳性牛群 视 为结 核病 污 染 牛群 ， 隔 每 １ １ 皮 内 注 射 方 法 ． ３ ４ 重 点监 测 （ ０～ ５ｄ 检疫 ） 次 ， 续 ３次 监 测 （ 一 连 检 准 备工作 ： 牛结 核菌 素 、 器械 等 ； 牛只编 号 ， 术部 疫 ） 不再发 现附 眭牛 时 ， 才视 为健 康 牛 群。病 牛所产
奶牛结 核病是 由结核分 枝杆 菌引起 的人畜 共患 传染 病 ， 核病牛是 主要 传染 源和传 播源 ， 结 每头病 牛 对周 围牛群都 有很 大威胁 。呼吸道 和消化道 感染是 主要 的传 播途 径 。牛 是 家 畜 中最 易感 染 的动 物 ， 特 别 是奶 牛 ， 次是水 牛 。若 不及 时发现 、 其 处理 、 净化 ， 不 仅会 给奶牛饲 养 业 ห้องสมุดไป่ตู้成 严 重 危 害 ， 而且 严 重威 胁 着人 体 的健康 。
剪毛 ， 尺测量 术部 皮肤 厚度 ， 作记 录 。 卡 并 犊 牛于出生后 ２ ０日龄 、０ １０—１０ 日龄和 ６月龄 连续 ２
注射 部位 ： 牛 （ 犊 ６月龄 内 ） 肩胛 部 ； 牛 （ ， 大 ６月 龄 以上 ） 一侧颈 中部 上三 分之一处 。 ， 注射剂 量 ： 内 注 射 牛 结 核 菌 素 原 液 ， 年 牛 皮 成
奶牛调人后要立即向当地动物防疫监督机构报检同时隔离饲养观察12个月并经当地动物防疫监督机构监督检测确定健康无疫病时才能混群饲养
浙江畜牧 兽 医
实验室检测奶牛结核病的方法比较
表２ Ｙ一 千扰素技术与Ｐ Ｐ Ｄ 皮 内变态反应技术 的比较 Ｐ Ｐ Ｄ 皮ห้องสมุดไป่ตู้内变态反应 试验 ｙ一 干扰素Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试验
测 结核 病 早期 感 染 的能 力 ，通 过体 外 刺激 培养 ，检测 只 需要 采 集 次血 样 ，而 且 试验 特 异性 好 ，检 测 敏感 性 高 。商 品化 牛结 核 下 异性 好 和 灵敏 度 高 ，但 是 该方 法 成 本较 高 ， 目前 不 适合 全 面 推广 干 扰 素试验 试 剂盒 ，容 易 实现标 准 化 ，排 除了Ｐ Ｐ Ｄ 变 态 反应 结 使用 。 国 内 已经 开 始研 发 低 成 本 的 一 干 扰素 牛 结 核 病 诊 断试 剂 果判 定 人 为 因素 影响 。但 是 牛结 核 分 枝杆 菌下 一 干扰 素 检测 试 剂 盒 ，该试 剂 盒研 发成 功后 将 改变 我 国牛结 核病 的诊 断 方法 。 盒 价格 较 高 ，建 议 目前 将 该方 法 用 于复 核 检查 牛型 Ｐ Ｐ Ｄ 变 态 反应 阳性 牛 ，剔 除部 分 假 阳性 牛 型Ｐ Ｐ Ｄ 反 应 ，尽 量 减少 不 必要 的经 济 ４ 结 论 干 扰 素检 测 技 术 是 一 种 新 型 牛结 核 病 检 测 方 法 ，具 有 检 损失 。
７ ３ １ ６ ０ ０ ；
７ ３ １ ６ ０ ０ ）
恒 温箱 中 ，运送 到 实验 室 ，并 在 采血 后第 ２ ０ ｈ 进 行培 养 。轻轻 颠倒
试管ｌ ０ 次 ，在无 菌 条件 下 ，用 一 次性 自动移 液 器将 抗凝 血 加入 ２ ４ 孔 组织 培 养板 ，每 头 奶牛 加３ 孑 Ｌ １ ． ５ ｍ ｌ 血样 。每 个血 样 ３ 个孔 分别 加 入１ ０ ０ １ Ｐ Ｂ Ｓ 、禽 型提 纯结 核 菌素 、牛 型结核 菌 素将 含有 血液 和抗 原 的组 织 培养 板在 ３ ７ ％恒 温培 养箱 中孵育 ２ １ ． ５ ｈ 。孵 育后 将 ２ ４ 孔 板 在 室 温下 （ ２ ５ ℃ ），５ ０ ０ ｒ ｍ ｉ ｎ ，离 ， ￣ ｌ Ｏ ｍ ｉ ｎ ，小 心 吸 取上 层 血浆 ， 放入１ ． ５ ｍ ｌ 的离 心 管 中 。然 后按 照 试剂 盒 说 明对 一 干扰 素上 清 液 进 行检 测 。结果 判定 标 准 ：阴性 ＝ 牛 型提 纯结 核菌 素 的Ｏ Ｄ 一 阴性 抗 １ 材料 与方法 １ ． １ 材 料 原的Ｏ Ｄ＜０ ． １ 或 牛 型提 纯 结核 菌 素 的Ｏ Ｄ 一 禽 型提 纯结 核 菌 素 的Ｏ Ｄ １ ． １ ． １ 试剂 盒 ＜０ ． １ 。 阳性 ＝ 牛 型提 纯结 核 菌素 的Ｏ Ｄ 一 阴性抗 原 的Ｏ Ｄ ≥Ｏ ． １ 且 牛型 瑞 ￣Ｐ ｒ ｉ ｏ ｎ ｉ ｃ ｓ 公 Ｂ ｏ ｖ ｉ ｇ ａ ｍ牛 结核 分 枝 杆菌 一 干扰 素 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检 提 纯结 核菌 素 的Ｏ Ｄ 一 禽型 提纯结 核 菌素 的Ｏ Ｄ ≥０ ． １ 。 测试 剂盒 ，购 买 于北 京测 迪科 技 有 限公 司 。 ２ 结果 １ ． １ ． ２ 主 要 试 剂 （ １ ）牛型 提纯 结核 菌 素 （ Ｐ Ｐ Ｄ） 皮 内变态 反应 试验 选定 永 靖 牛结 核 菌素 由 哈药 集 团生 物疫 苗有 限公 司生产 ，Ｂ ｏ ｖ ｉ ｇ ａ ｍ牛型 县 ３ ９ 个奶 牛养 殖 场 （ 户 ）饲养 的５ ３ １ 头奶 牛进 行结 核病 检疫净 化 ， 提纯 结 核菌 素 （ Ｂ ｏ Ｐ Ｐ Ｄ）和Ｂ ｏ ｖ ｉ ｇ ａ ｍ 禽 型 提纯 结核 菌 素 （ Ａ ｖ Ｐ Ｐ Ｄ） 每年 ３ ～４ 月份 和 ９ —１ ０ 月份 分 为两次 进行 集 中检测 ，累计检 测３ １ ４ ０ 购买 于北 京测 迪科 技 有 限公 司 。 头 次 。检 出疑 似 阳性 牛 １ １ 头 ，在颈 部对 侧 复 检 的同 时 ，采集 血 液 １ ． １ ． ３ 试验 牛群 样本 。通 过皮 内变态 反应 法复 检排 除疑似 阳性牛４ 头 ，实 际阳性 牛 选择 全 县 饲 养 的 ５ ３ １ 头 奶 牛 ，从 ２ ０ １ ４ 年 开 始 到２ ０ １ ６ 年 ，每 年 为７ 头 ，奶牛 结核 阳性 率０ ． ２ ２ ％。 （ 详见 表 １ ） ３～ ４ 月份 和９ —１ ０ 月份 ，进 行结 核病 检 测 。 表１ ２ ０ １ ４ ￣２ ０ １ ６ 年全县奶牛结核病检测统计表 单位 ：头 、％ １ ． ２ 方法 １ ． ２ ． １ 牛型提 纯 结核 菌素 （ Ｐ Ｐ Ｄ ）皮 内变态反 应 试验 依 据 国 家 标 准 《动 物 结 核 病 诊 断 技 术 （ＧＢ ／ Ｔ１ ８ ６ ４ ５ — ２ ０ ０ ２ ）》 ，在 奶 牛 颈 部 用牛 型 Ｐ Ｐ Ｄ 进行 皮 内变 态反 应 试 验 ，剂 量 为２ ０ ０ ０ Ｉ Ｕ ／ 头 ，分 别在 注 射 前 和 注射 后 ７ ２ ｈ 测 量 皮肤 厚 度 ，并 计 算 （ ２ ）牛结 核 一 干扰 素检测 试验 出皮厚 差 ，对 于 皮厚 差在 ２ ． Ｏ ｍ ｍ以上 的 （ 包括２ ． ０ ａ ｒ ｍ）疑似 阳性 牛 通过 牛 结 核 一 干扰 素 检 测技 术 对 １ １ 头 疑 似 阳性 牛 进 行实 验 再 进行 对侧 重 复检 查 ，依 据 国家标 准判 断结 果 。 室血 清学 检 测 ，排 除 假 阳性奶 牛 ６ 头 ，最终 确定 结 核 阳性 牛５ 头， １ ． ２ ． ２ 牛结核 ｖ 一 干扰 素检 测 试验 奶 牛结 核 阳性 率０ ． １ ６ ％。 皮 内试 验第 ３ ｄ 采集 单侧 阳性 牛的血 液 （ 每 头６ ｍ１ ），放 入肝 素 抗 凝 管 中 ，轻轻 颠 倒 ３ ～５ 次 ，使肝 素 和 血液 充 分混 匀 ，放 人 ２ ２ ％
测 结核 病 早期 感 染 的能 力 ，通 过体 外 刺激 培养 ，检测 只 需要 采 集 次血 样 ，而 且 试验 特 异性 好 ，检 测 敏感 性 高 。商 品化 牛结 核 下 异性 好 和 灵敏 度 高 ，但 是 该方 法 成 本较 高 ， 目前 不 适合 全 面 推广 干 扰 素试验 试 剂盒 ，容 易 实现标 准 化 ，排 除了Ｐ Ｐ Ｄ 变 态 反应 结 使用 。 国 内 已经 开 始研 发 低 成 本 的 一 干 扰素 牛 结 核 病 诊 断试 剂 果判 定 人 为 因素 影响 。但 是 牛结 核 分 枝杆 菌下 一 干扰 素 检测 试 剂 盒 ，该试 剂 盒研 发成 功后 将 改变 我 国牛结 核病 的诊 断 方法 。 盒 价格 较 高 ，建 议 目前 将 该方 法 用 于复 核 检查 牛型 Ｐ Ｐ Ｄ 变 态 反应 阳性 牛 ，剔 除部 分 假 阳性 牛 型Ｐ Ｐ Ｄ 反 应 ，尽 量 减少 不 必要 的经 济 ４ 结 论 干 扰 素检 测 技 术 是 一 种 新 型 牛结 核 病 检 测 方 法 ，具 有 检 损失 。
７ ３ １ ６ ０ ０ ；
７ ３ １ ６ ０ ０ ）
恒 温箱 中 ，运送 到 实验 室 ，并 在 采血 后第 ２ ０ ｈ 进 行培 养 。轻轻 颠倒
试管ｌ ０ 次 ，在无 菌 条件 下 ，用 一 次性 自动移 液 器将 抗凝 血 加入 ２ ４ 孔 组织 培 养板 ，每 头 奶牛 加３ 孑 Ｌ １ ． ５ ｍ ｌ 血样 。每 个血 样 ３ 个孔 分别 加 入１ ０ ０ １ Ｐ Ｂ Ｓ 、禽 型提 纯结 核 菌素 、牛 型结核 菌 素将 含有 血液 和抗 原 的组 织 培养 板在 ３ ７ ％恒 温培 养箱 中孵育 ２ １ ． ５ ｈ 。孵 育后 将 ２ ４ 孔 板 在 室 温下 （ ２ ５ ℃ ），５ ０ ０ ｒ ｍ ｉ ｎ ，离 ， ￣ ｌ Ｏ ｍ ｉ ｎ ，小 心 吸 取上 层 血浆 ， 放入１ ． ５ ｍ ｌ 的离 心 管 中 。然 后按 照 试剂 盒 说 明对 一 干扰 素上 清 液 进 行检 测 。结果 判定 标 准 ：阴性 ＝ 牛 型提 纯结 核菌 素 的Ｏ Ｄ 一 阴性 抗 １ 材料 与方法 １ ． １ 材 料 原的Ｏ Ｄ＜０ ． １ 或 牛 型提 纯 结核 菌 素 的Ｏ Ｄ 一 禽 型提 纯结 核 菌 素 的Ｏ Ｄ １ ． １ ． １ 试剂 盒 ＜０ ． １ 。 阳性 ＝ 牛 型提 纯结 核 菌素 的Ｏ Ｄ 一 阴性抗 原 的Ｏ Ｄ ≥Ｏ ． １ 且 牛型 瑞 ￣Ｐ ｒ ｉ ｏ ｎ ｉ ｃ ｓ 公 Ｂ ｏ ｖ ｉ ｇ ａ ｍ牛 结核 分 枝 杆菌 一 干扰 素 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检 提 纯结 核菌 素 的Ｏ Ｄ 一 禽型 提纯结 核 菌素 的Ｏ Ｄ ≥０ ． １ 。 测试 剂盒 ，购 买 于北 京测 迪科 技 有 限公 司 。 ２ 结果 １ ． １ ． ２ 主 要 试 剂 （ １ ）牛型 提纯 结核 菌 素 （ Ｐ Ｐ Ｄ） 皮 内变态 反应 试验 选定 永 靖 牛结 核 菌素 由 哈药 集 团生 物疫 苗有 限公 司生产 ，Ｂ ｏ ｖ ｉ ｇ ａ ｍ牛型 县 ３ ９ 个奶 牛养 殖 场 （ 户 ）饲养 的５ ３ １ 头奶 牛进 行结 核病 检疫净 化 ， 提纯 结 核菌 素 （ Ｂ ｏ Ｐ Ｐ Ｄ）和Ｂ ｏ ｖ ｉ ｇ ａ ｍ 禽 型 提纯 结核 菌 素 （ Ａ ｖ Ｐ Ｐ Ｄ） 每年 ３ ～４ 月份 和 ９ —１ ０ 月份 分 为两次 进行 集 中检测 ，累计检 测３ １ ４ ０ 购买 于北 京测 迪科 技 有 限公 司 。 头 次 。检 出疑 似 阳性 牛 １ １ 头 ，在颈 部对 侧 复 检 的同 时 ，采集 血 液 １ ． １ ． ３ 试验 牛群 样本 。通 过皮 内变态 反应 法复 检排 除疑似 阳性牛４ 头 ，实 际阳性 牛 选择 全 县 饲 养 的 ５ ３ １ 头 奶 牛 ，从 ２ ０ １ ４ 年 开 始 到２ ０ １ ６ 年 ，每 年 为７ 头 ，奶牛 结核 阳性 率０ ． ２ ２ ％。 （ 详见 表 １ ） ３～ ４ 月份 和９ —１ ０ 月份 ，进 行结 核病 检 测 。 表１ ２ ０ １ ４ ￣２ ０ １ ６ 年全县奶牛结核病检测统计表 单位 ：头 、％ １ ． ２ 方法 １ ． ２ ． １ 牛型提 纯 结核 菌素 （ Ｐ Ｐ Ｄ ）皮 内变态反 应 试验 依 据 国 家 标 准 《动 物 结 核 病 诊 断 技 术 （ＧＢ ／ Ｔ１ ８ ６ ４ ５ — ２ ０ ０ ２ ）》 ，在 奶 牛 颈 部 用牛 型 Ｐ Ｐ Ｄ 进行 皮 内变 态反 应 试 验 ，剂 量 为２ ０ ０ ０ Ｉ Ｕ ／ 头 ，分 别在 注 射 前 和 注射 后 ７ ２ ｈ 测 量 皮肤 厚 度 ，并 计 算 （ ２ ）牛结 核 一 干扰 素检测 试验 出皮厚 差 ，对 于 皮厚 差在 ２ ． Ｏ ｍ ｍ以上 的 （ 包括２ ． ０ ａ ｒ ｍ）疑似 阳性 牛 通过 牛 结 核 一 干扰 素 检 测技 术 对 １ １ 头 疑 似 阳性 牛 进 行实 验 再 进行 对侧 重 复检 查 ，依 据 国家标 准判 断结 果 。 室血 清学 检 测 ，排 除 假 阳性奶 牛 ６ 头 ，最终 确定 结 核 阳性 牛５ 头， １ ． ２ ． ２ 牛结核 ｖ 一 干扰 素检 测 试验 奶 牛结 核 阳性 率０ ． １ ６ ％。 皮 内试 验第 ３ ｄ 采集 单侧 阳性 牛的血 液 （ 每 头６ ｍ１ ），放 入肝 素 抗 凝 管 中 ，轻轻 颠 倒 ３ ～５ 次 ，使肝 素 和 血液 充 分混 匀 ，放 人 ２ ２ ％
奶牛二类常见疫病及防控策略
Disease Prevention奶牛二类常见疫病及防控策略曹荣生沂南县马牧池畜牧兽医站，山东临沂 276300摘 要：奶牛常见的二类疫病有3 种，为牛结节性皮肤病、牛传染性鼻气管炎和牛结核病。
本文通过分析这3 种疫病的病原特点、临床症状、诊断方法，分析流行趋势，探讨防控新策略，为有效控制、净化和根除提供参考。
牛结节性皮肤病主要流行于虫媒活跃的夏秋季节，以皮肤上出现硬而凸起的结节为临床症状，以加强饲养管理，适当免疫接种为主要防控策略；牛传染性鼻气管炎20～60 日龄犊牛易感性高，临床表现呼吸道型、生殖道型、角膜结膜型、肠炎型等多种类型且常同时存在，以免疫、检测，扑杀阳性牛等为根除措施；牛结核病以组织器官结节性肉芽肿、干酪样及钙化坏死病灶为特征的慢性消耗性畜间人兽共患病，以肺结核、淋巴结核、乳房结核、肠结核等多见，采取监测净化、检疫监管、无害化处理等综合防控措施。
关键词：奶牛；牛结节性皮肤病；牛传染性鼻气管炎；牛结核病；防控文章编号：1671-4393（2023）12-0060-06 DOI:10.12377/1671-4393.23.12.130 引言中华人民共和国农业农村部规定的二类动物疫病是指可造成重大经济损失、需要采取严格控制、扑灭措施的疫病。
37 种二类动物疫病中，多种动物共患病7 种，牛病3 种，分别是牛结节性皮肤病（Lumpy skin disease，LSD）、牛传染性鼻气管炎（传染性脓疱外阴阴道炎，Infectious bovine rhinotracheitis,IBR）和牛结核病（bovine tuberculosis，BTB）。
这些传染病不仅影响奶牛健康、生产性能和繁殖性能，降低泌乳量，还可严重影响牛奶及牛奶制品的品质，潜在病原体甚至引起交叉感染，威胁人的身体健康，可能引发社会公共卫生问题。
生产实践中，为做好这些疫病的防控，要认真分析疫病流行情况，探讨防控新策略，通过疫情上报与调查、疫区和受威胁区划定、疫区内消毒灭源和威胁区内易感动物紧急免疫等措施，有效控制、净化和根除疫情。
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９０６ （ ］ ３ ０ ４） 、胸 膜 肺 炎 放 线 杆 菌 、大 肠 杆 菌 购 自巾 国药 生 物 制 品 检 定 所
异 等优 点
关 键 词 ：奶 牛 ；牛 结 核 病 ；血 液 ；奶 ；
泛 应 用 ，并 成 功 地 解 决 了 究 旨在
≤ 霹 霉ｊ 零
资源 育繁
≥ ＿
应 用 Ｐ Ｒ试 剂盒对 奶牛结核病 的检测 Ｃ
吴 位 珩 孙 启 跃 ｔ 景 峨 杨 莉 文 才 智 。 琼 ｚ 茂 生 ¨ 徐 乐 杨
（ ，贵 州省 畜牧兽 医研 究所 ５ ０ ０ ；２ １ ５ ０ ５ ，贵 州省农 科 院 ５０ ０ ） ５０ ６
［ ５ ８ ５２ ， 其 理 论 跨 幅 约 ３ ７ ｐ 引 Ｘ ７３． 】 １ｂ 。
物 序 列 如 下 ： 上游 引 物 ： ５一 ＣＴ ＧＣ Ｃ Ｇ
ＡＧＣ ＧＴ Ｃ ＧＴ Ａ ＧＧ Ｃ ＧＧ一 下 游 引 ３，
核 和 脑 结 核 。 目前 ， 兽医 临 床 对 该 病
诊 断 仍 普 遍 采 用 传 统 的 皮 内 变 态 反 应 （Ｐ Ｐ Ｄ）检 测 ，这 些 方 法 不 仅 复 杂 费 时 ，
且敏 感 性 低 、特 异 性 差 ，那 么 结 核 病 的 准 确 诊 断 就 显得 极 为 重 要 ，近 年来 ，
物 ：５一 Ｃ Ｃ Ｃ Ｃ Ｃ Ｃ Ｔ Ａ Ｇ ＣＧ ＧＴ ＣＡ ＧＣ Ｇ
司 合成 。
１１４ 参 考 菌 株 ．． 牛分枝杆 菌参考菌株 （ 号 为 编
３６ ％ 结 果 表 明 ：Ｐ ． ７ ＣＲ 试 剂盒 在 检 测
牛 结 核 病 不 同 标 本 中 显 示 出 快 速 、 特
建立在 现代分 子生物 学基 础上 的 Ｐ Ｒ Ｃ
技 术 ． 在 结 核 病 病 原 检 测 上 得 到 了 广
病 的 数 量 ．达 到 Ｐ Ｒ 检 测 技 术 在 诊 断 Ｃ
链 球 菌 由贵 州 省 畜 牧 兽 医 研 究 所 畜 禽 疫 病研 究室 分 离 保 存 。
１１５ Ｃ 试 剂 盒 ．． Ｐ Ｒ
牛 结 核 病 （ ｏ ｉｅｔｂ ｒｕｏｉ）是 Ｂ ｖｎ ｕ ｅｃ ｌｓｓ
一
牛 结 核 病 标 本 时 的 推 广 应 用 的 目的 。
摘 要 ： 应 用 聚 合 酶 链 式 反 应 技 术 制 备
萎 缩 ，泌 乳 停 止 。 第 种 是 肠 结 核 ， 以 消 瘦 和 持 续 下 痢 ， 或 腹 泻 和 便 秘 交 替 现 为 特 点 ．粪 便 呈 稀 粥 状 ，混 有 粘 液 或 脓 性 分 泌 物 ， 味 腥 臭 ，生 长 缓 慢 ，最 后 消 瘦 死 亡 。 此 外 ， 结 核 杆 菌 还 可 以侵 害 其 他 器 官 ，故 可 发 生 睾 丸 结 核 、 子 宫 结 核 、淋 巴 结 核 、浆 膜 结
① 将 牛分枝 杆 菌接 种于 改 良罗 氏
培 养 基 上 ，３ ℃ 培 养 约 １ ～ ０天 ，收 ７ ５３
１１３ ＣＲ 引 物 ．． Ｐ 根 据 Ｇｅ Ｂ ｎ 中 牛 结 核 分 枝 杆 菌 ｎ ａｋ
的 Ｐ ＣＲ 式 剂 盒 ． 对 贵 州 省 某 奶 牛 场 １ ０份 血 样 和 奶样 标 本 中 的 结核 分 枝 杆 ４ 菌 进 行 检 测 ，结 果 显 示 ：在 １ １份 奶 １
复 合物 的插 入 序 列 Ｉ ６ Ｓ １ ０的基 因 序 列 ， １
由 贵 州 省 畜 牧 兽 医 研 究 所 畜 禽 疫 病 研 究 室生 产
１２ 试 验 方 法 ．
种 人 畜 共 患 的 慢 性 传 染 病 ，该 病 的
现将 检测 试 验 报 告 如下 。
１ 材 料 和 方 法 １１ 试 验 材 料 ．
传 播 流 行 直 接 影 响 着 畜 牧 业 生 产 发 展 和 人 类 身 体 健 康 。 该 病 致 病 原 为 结 核 分 枝 杆 菌 ，牛 感 染 结 核 病 经 过 非 常 缓 慢 ． 由 于 患 病 器 官 不 同 ． 临 床 症 状 各
设 计 ｌ对 引 物 ． 序 列 号 为 ：
样 中 有 ８份 为 阳性 ， 阳性 检 出率 ７ ％。 － ２
在 ３ ９份 血 样 中 １ 头 牛 为 阳 性 ． 阳 性 ２
检 出 率 为 ３ ．６ ． 试 验 对 Ｐ Ｄ 检 测 ０７ ％ ．本 Ｐ 与 Ｐ ＣＲ 检 测 法 进 行 验 证 ． 将 １ ０ 头 ２０
（ 京 ） 副 结 核 分 枝 杆 菌 、多 杀 性 巴 北 。
氏 杆 菌 、沙 ¨ 氏菌 、金 黄 色 葡 萄 球 菌 、
样 品 ； 牛结 核 分 枝杆 菌 ；Ｐ Ｒ 试 剂 盒 ； Ｃ
检 测 ：试 验
利 用 已建 立 的 Ｐ Ｒ诊 断 技 术 对 牛 结 核 Ｃ 病 检 测 基 础 上 ，进 一 步 扩 大 检 测 结 核
不 一致 ， 主要 分 为 以 下 种 ：第 一 种 是肺 结 核 ．特点 是 长期 顽 固性 干 咳 ，
１ ． 细菌 培 养和染 色体 Ｄ Ａ 的 ．１ ２ Ｎ
提 取
１１１ 试 验 动 物 ．．
贵 州 省 某 奶 牛 场 共 计 １０ ２ ０头 牛 ，
Ｐ Ｄ 变 态 反 应 阳 性 牛 或 疑 似 牛 结 核 病 Ｐ 的 奶 样 、 粗样 共 计 １ ０份 。 ４ １１２ 试 剂 ．． 牛 结 核 菌 素 ． 批 号 为 ： ２ ０ １ ０１ ０ ，
ＣＣ ３ ， 由 上海 捷 瑞 生 物 Ｔ 程 行 限 公 Ａ一
牛 中 Ｐ Ｄ 检 测 阳性 牛 和 可 疑 牛 ，再 用 Ｐ
Ｐ ＣＲ 法进 行 检 测 ．Ｐ ＣＲ 法 阳性 牛 共 计 ２ 头 份 ， 阳 性 检 出 率 为 １６ ％ ，Ｐ Ｄ Ｏ ．７ Ｐ
法 阳 性 牛 ２ 头 份 ． 阳 性 检 出 率 为 ４