姜黄素逆转紫杉醇耐药研究进展

姜黄素联合紫杉醇对前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭
体内外的影响的开题报告
本研究旨在探究姜黄素（curcumin）联合紫杉醇（paclitaxel）对前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭体内外的影响。

该研究将采用细胞实验和小鼠移植瘤模型实验。

在细胞实验中，我们将选取前列腺癌PC3细胞进行处理。

根据文献报道，姜黄素和紫杉醇都可以抑制癌细胞的增殖和侵袭。

因此，我们将选取不同剂量的姜黄素和紫杉醇来处理PC3细胞，并通过MTT实验和Transwell实验来检测细胞增殖和侵袭能力的变化。

同时，我们将选取最佳剂量的姜黄素和紫杉醇进行联合处理，并进行MTT实验和Transwell 实验，以评估联合处理对PC3细胞增殖和侵袭的影响。

在小鼠移植瘤模型实验中，我们将选取裸鼠作为实验对象，将PC3细胞移植到其体内，形成移植瘤模型。

将移植瘤裸鼠随机分为四组，分别是对照组、姜黄素组、紫杉醇组和姜黄素联合紫杉醇组。

每组分别给予相应的处理剂量，连续处理4周。

最后，测量移植瘤的大小和质量，并观察裸鼠的生存情况。

本研究预计可以从细胞实验和小鼠移植瘤模型实验中探究姜黄素联合紫杉醇对前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭体内外的影响，为该联合治疗方案在前列腺癌治疗中的应用提供参考。

姜黄素与紫杉醇联用对人子宫内膜癌细胞增殖的影响及其机制研究目的探讨姜黄素（CCM）与紫杉醇（PIX）联用对人子宫内膜癌细胞（Ishikawa）增殖的影响及其机制。

方法（1）设置对照组（不加药物）、CCM 组（不同浓度的CCM）、PIX组、联合组（PIX联合不同浓度的CCM）；（2）采用MTT法检测不同浓度的CCM联合PIX对细胞活力的影响；（3）流式细胞术检测细胞凋亡率；（4）免疫组化法检测Caspase-3蛋白表达情况。

结果CCM联用PIX能抑制人子宫内膜癌细胞的增殖（P 1.15表明两药作用协同；q1.15，表明两药作用协同（表1）。

2.2 不同浓度的CCM联用PIX对人子宫内膜癌细胞Ishikawa凋亡的影响流式细胞术结果显示，CCM组、PIX组及联合组人子宫内膜癌细胞Ishikawa 的凋亡率均显著高于对照组（P < 0.01），随着CCM剂量的增加，凋亡率呈升高趋势（P < 0.05），且联合组凋亡率又分别高于单用CCM、PIX组（P < 0.01）（表2）。

2.3 Caspase蛋白表达的结果与对照组比较，各实验组中Caspase-3蛋白的表达均升高，且随CCM浓度的升高，Caspase-3的表达升高，联合组Caspase-3蛋白的表达分别高于单独应用CCM、PIX组，差异有统计学意义（P < 0.05）（表3）。

3 讨论子宫内膜癌为女性生殖道三大恶性肿瘤之一，也是常见的妇科恶性肿瘤，占女性全身恶性肿瘤的7%，占女性生殖道恶性肿瘤的20%～30%[7]。

近年来此病发病率呈上升趋势，在部分国家发生率已高于宫颈癌，成为最常见的女性生殖道恶性肿瘤[8]。

细胞凋亡对子宫内膜癌的发生起负性调节作用。

细胞凋亡与Caspase 的激活有关，半胱氨酸蛋白酶Caspase-3是Caspase家族成员中执行细胞凋亡的关键蛋白酶，激活后产生诱导细胞凋亡的作用。

在子宫内膜癌组织中，Caspase-3处于低表达水平，可以抑制肿瘤细胞的凋亡，可能是子宫内膜癌发病机制之一。

姜黄素逆转P—gp介导的胃癌多药耐药分子机制的研究目的：探讨姜黄素对P糖蛋白介导的胃癌多药耐药的逆转作用及其可能的分子机制。

方法：采用二苯基溴化四氮唑蓝法检测人胃癌细胞株加药后的增殖，碘化丙啶染色法检测细胞凋亡率，Westernblot法检测P-AKT和P-gp的表达量。

结果：姜黄素合用阿霉素处理细胞48h，阿霉素的浓度在0.05～5ug/ml 时，加入姜黄素25umol/l，耐药细胞生存率下降明显（P＜0.05），尤以阿霉素0.25ug/ml 和姜黄素25umol/l二者联合使用时耐药细胞生存率下降最明显。

单用阿霉素组细胞的凋亡率为（13.2±1.9）%，采用在阿霉素基础上联合使用姜黄素后细胞凋亡率为（21.3±2.8）%，与单独使用阿霉素相比，阿霉素与姜黄素联合使用诱导细胞凋亡的作用显著增强（P＜0.05）。

与单用阿霉素0.25 ug/ml相比，联合使用姜黄素后p-Akt和P-gp的表达量明显降低（P＜0.01），2组间Akt的表达量差异无统计学意义（P>0.05）。

结论：姜黄素不增加阿霉素对SGC7901细胞毒性作用；对于SGC7901细胞株，姜黄素明显增加阿霉素细胞毒性；姜黄素明显抑制了p-Akt和P-gp蛋白的表达。

姜黄素可能通过抑制Akt信号通路降低P-gp的表达进而逆转多药耐药。

标签：姜黄素；P糖蛋白；阿霉素；多药耐药；逆转胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，在我国其发病率居各类肿瘤的首位[1]，然而肿瘤多药耐药性的出现严重影响了胃癌的治疗效果，抑制或者逆转胃癌多药耐药对于胃癌的治疗具有重要意义[2]。

研究肿瘤MDR及其预防与逆转是肿瘤化疗中函待解决的问题，亦是目前肿瘤研究的难点及热点领域。

如何让化疗药物增效减毒是目前肿瘤化疗中函待解决的另一个问题。

姜黄素前期研究发现，具有良好的抗肿瘤作用。

1材料与方法1.1材料姜黄素、二苯基溴化四氮唑蓝、二甲基亚砜均购自美国Sigma公司，阿霉素购自深圳万乐药业公司。

姜黄素类多药耐药逆转剂的设计、合成及活性研究肿瘤作为威胁人类健康的最重要的疾病之一，每年的发病率呈上涨趋势。

全世界越来越多的研究者投身于肿瘤治疗的研究当中。

化学疗法在肿瘤的治疗发挥着重要的作用，然而由于肿瘤细胞多药耐药（multidrug-resistance MDR）的出现，使得化疗药物的疗效大大降低。

研究表明，90%的肿瘤患者化疗失败是由于肿瘤细胞的多药耐药导致的。

因此，肿瘤多药耐药逆转剂的研究和开发已成为抗肿瘤研究中的首要任务。

姜黄素作为传统中药姜黄中的抗肿瘤活性成分之一，具有广谱抗癌的功效。

已有研究表明，姜黄素对肺癌、乳腺癌、胃癌、结肠癌、白血病、黑色素瘤、前列腺癌等均有效。

由于姜黄素在治疗肿瘤方面具有毒性低、疗效确切、多靶点作用的特点，近年来倍受药物化学和药理学研究的关注。

此外，国内外很多学者还报道了姜黄素对耐药肿瘤细胞具有提高药物敏感度的功能，证实了姜黄素具有一定的多药耐药逆转能力，为姜黄素类化合物在抗肿瘤中的使用提供了新的思路。

肿瘤多药耐药产生的机制很多，然而最为人们所熟知的是肿瘤细胞表面过表达的药物外排泵将化疗药物排出细胞外，从而降低了药物在细胞内的累积。

P糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白（MRP1）和乳腺癌耐药蛋白（BCRP）是三种具有外排化疗药物功能的膜蛋白，都属于ABC转运蛋白家族成员。

其中以P-gp介导的MDR研究的最为深入。

针对P-gp为靶点的多药耐药逆转剂的发展经历了三代：第一代逆转剂由于具有较大的毒副作用因而被淘汰；第二代逆转剂毒副作用有所降低，但大都会影响药物代谢；第三代逆转剂通过计算机辅助药物设计为手段开发的具有高效低毒、高亲和力、无明显药代动力学改变等特点，目前仍在研发当中。

因此，探索研究新的高效低毒的P-gp抑制剂成为研究热点。

本文以传统中药姜黄中的有效成分姜黄素作为先导化合物，以P-gp为作用靶点，结合已有的构效关系理论，通过对其进行结构修饰以期得到更加高效低毒的MDR逆转剂。

姜黄素逆转卵巢癌多药耐药的研究进展马珊珊(综述);马玲(审校)【摘要】卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤，多数卵巢癌患者就诊时已属晚期，丧失手术机会，化学治疗（化疗）是主要的治疗手段，然而对化疗药物的多药耐药是影响预后的主要因素。

姜黄素能够从多种途径逆转卵巢癌多药耐药（ MDR），而且不良反应小，近年来对其研究也越来越受到重视。

该文较为全面地综述了卵巢癌MDR发生的机制及姜黄素逆转MDR的机制。

%Ovarian cancer is a common gynecologic malignant tumor ,and the majority of ovarian cancer patients are at advanced stages when diagnosed,which means loss of the surgery opportunity.Chemotherapy is the main treatment for ovariancancer,however,multidrug resistance is the main factor influencing the progno-sis.Study found that curcumin can reverse multidrug resistance in ovarian cancer with small toxicity .In recent years the research on it has been paid more and more attention .Here is to make a comprehensive review of the mechanisms of multidrug resistance in ovarian cancer and the reversal mechanism of curcumin .【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2014(000)023【总页数】3页(P4272-4274)【关键词】姜黄素;卵巢癌;多药耐药【作者】马珊珊(综述);马玲(审校)【作者单位】蚌埠医学院研究生部，安徽蚌埠 233000;蚌埠医学院第一附属医院妇科肿瘤科，安徽蚌埠 233000【正文语种】中文【中图分类】R737.31卵巢癌是女性生殖系统较为常见的恶性肿瘤，病死率很高[1]。

姜黄素联合紫杉醇对肺癌细胞PC9凋亡的影响王荣俊;童斯浩【摘要】Objective:To study the apoptosis-inducing effects ofcurcumin( CUR) combined with paclitaxel( PA) on lung cancer cell line PC9. Methods:The PC9 cells were treated with different concentrations of single drug or two drugs combination. The anti-proliferative effect of drug was measured using MTT. The effects of single drug and two drugs combination on the cell cycle distribution and apoptosis were measured by flow cytometry. The expressions of apoptosis-related protein were detected by western blotting. Results:Two drugs could inhibit the prolification of PC9 cells with time-and concentration-dependent manner,and the profilication inhibiting rate of curcumin combined with paclitaxel was higher than that of CUR or PA. The apoptosis and G0/G1 phase arrest of PC9 cells treated with drug combination significantly enhanced(P<0. 01). The protein expression changes of Caspase-3,Bcl-2 and Bax in PC9 cells teated with drug combination were significantly more than that with single drug(P<0. 01). Conclusions:The CUR and PA can inhibit the proliferation of human lung cancer cell PC9,induce apoptosis,block cellG0/G1 phase and inprove the Caspase-3 activity. Two drugs combination can significnatly promote the PC9 cells apoptosis.%目的:研究姜黄素联合紫杉醇对人肺癌细胞PC9凋亡的影响.方法:将不同浓度梯度姜黄素和紫杉醇单用(单药组)和联合(联合组)作用于PC9细胞,MTT法测定其对PC9的增殖抑制作用,流式细胞术检测单药和双药联合对细胞周期分布和凋亡的影响,Western blot法检测凋亡相关蛋白表达的变化.结果:两药均以时间和剂量依赖方式抑制PC9细胞的增殖,联合组抑制作用大于单药组(P<0.01).两药均能诱导PC9细胞发生凋亡和G0/G1期阻滞,联合组细胞凋亡和G0/G1期阻滞作用显著增强(P<0.01).Western blot法检测显示,联合组Caspase-3蛋白、Bcl-2、Bax的改变显著大于单药组(P<0.01).结论:姜黄素、紫杉醇可抑制人肺癌PC9细胞增殖,诱导其凋亡,阻滞细胞G0/G1期,伴随Caspase-3活性上调,且两者联合应用可显著促进细胞凋亡.【期刊名称】《蚌埠医学院学报》【年(卷),期】2016(041)012【总页数】3页(P1549-1551)【关键词】肺肿瘤;姜黄素;紫杉醇;凋亡【作者】王荣俊;童斯浩【作者单位】合肥职业技术学院医学分院,安徽巢湖238000;安徽医科大学附属巢湖医院肿瘤科,安徽巢湖238000【正文语种】中文【中图分类】R734.2肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，随着工业化进程加快及全球环境恶化，在我国已成为发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，寻找低毒高效的治疗手段是肺癌面临的巨大挑战[1-2]。

[收稿日期]2015⁃05⁃08[基金项目]蚌埠医学院科技发展基金项目(Bykf12A15)[作者单位]蚌埠医学院第一附属医院妇瘤科,安徽蚌埠233004[作者简介]马珊珊(1987-),女,硕士,住院医师.[通信作者]马　玲,硕士研究生导师,副教授,主任医师.E⁃mail:939228560@[文章编号]1000⁃2200(2016)10⁃1269⁃04㊃基础医学㊃姜黄素逆转卵巢癌对紫杉醇耐药的实验研究马珊珊,马　玲[摘要]目的:通过观察姜黄素作用人卵巢癌A2780/Taxol 细胞株后,逆转该细胞株对紫杉醇的耐药作用,研究卵巢癌细胞对紫杉醇耐药的原因及姜黄素逆转耐药机制㊂方法:人卵巢癌A2780/Taxol 细胞株在体外培养,将细胞分为对照组(A 组)和实验组(不同浓度姜黄素组作用细胞)㊂用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测2组细胞与相同浓度紫杉醇联用后细胞的生长抑制情况;Western blot 方法检测2组细胞内P⁃糖蛋白(P⁃gp)和蛋白激酶C⁃α(PKC⁃α)的表达情况㊂结果:四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法得出联合用姜黄素各组细胞生长抑制率均高于A 组(P <0.05~P <0.01);Western blot 检测联合用姜黄素各组多药耐药蛋白⁃1/P⁃gp 和PKC⁃α表达均较A 组显著降低(P <0.01)㊂结论:姜黄素通过阻碍卵巢细胞中多药耐药蛋白⁃1/P⁃gp 和PKC⁃α的表达,增加紫杉醇对细胞的毒性,降低细胞的耐药性㊂[关键词]卵巢肿瘤;姜黄素;紫杉醇;耐药[中图法分类号]R 737.31 [文献标志码]A DOI :10.13898/ki.issn.1000⁃2200.2016.10.003Experimental study of curcumin reversing drug resistance in ovarian canceMA Shan⁃shan,MA Ling(Department of Gynecologic Oncology ,The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College ,Bengbu Anhui 233004,China )[Abstract ]Objective :To observe the reverse effects of curcumin on Taxol resistance to human ovarian cancer A2780/Taxol cells and analyze the mechanism of the reverse effect of curcumin.Methods :Ovarian cancer cell A2780/Taxol were cultured in vitro ,the cells were divided into control group(group A)and experimental groups (different concentrations of curcumin),the cell growth inhibition rate combined with the same concentration of paclitaxel in the two groups were detected by by thiazotyl blue tetrazolium bromide (MTT).The protein expressions of P⁃glycoprotein(P⁃gp)and Protein Kinase C⁃α(PKC⁃α)in the two groups were detected by Western blot method.Results :Compared with group A,the cell growth inhibition rates were higher in all experimental groups (P <0.05to P <0.01).The results of Western blot were shown that the expressions of P⁃gp and PKC⁃αin experimental group were significantly lower than those in A group(P <0.01).Conclusions :Curcumin blocked the products of multi⁃drug resistant protein⁃1/P⁃gp and PKC⁃αinovarian cancer cells,then increased the toxicity of paclitaxel on the cell and reduced the drug resistance.[Key words ]ovarian neoplasms;curcumin;paclitaxel;drug resistance 卵巢癌是女性生殖系统较为常见的肿瘤,发病率占第三位,死亡率却占第一位[1]㊂因卵巢位于盆腔,发生恶性肿瘤时症状非常隐蔽,患者感觉不适时已进入晚期,丧失手术治疗的最佳时期,固化疗成为卵巢癌首选的治疗方法㊂卵巢癌虽对一线化疗药物紫杉醇敏感,但效果较短暂,极易产生耐药,要降低卵巢癌死亡率必须要克服卵巢癌对紫杉醇的耐药问题㊂姜黄素是姜黄科植物中提取的一种植物多酚,具有抗炎㊁抗凝㊁抗粥样动脉硬化等作用[2],姜黄素还具有抗肿瘤作用,也是美国国立肿瘤研究所承认的预防肿瘤药物[3]㊂近年来随着耐药研究的不断深入,发现姜黄素能改善肿瘤细胞耐药性,提高药物敏感性,一定程度上逆转肿瘤的耐药[4]㊂本实验通过人卵巢癌紫杉醇耐药A2780/Taxol 细胞株在体外培养,不同浓度姜黄素作用细胞株四甲基偶氮唑盐微量酶反应(MTT)比色法检测2组细胞增殖情况;Western blot 方法检测2组细胞内P⁃糖蛋白(P⁃gp)和蛋白激酶C⁃α(PKC⁃α)的表达情况㊂探讨姜黄素对该细胞株耐药逆转作用及姜黄素逆转卵巢癌耐药的机制,为姜黄素逆转耐药作用应用于临床提供参考依据㊂1　材料与方法1.1　实验材料　人卵巢癌紫杉醇耐药株A2780/Taxol 购自上海拜力生物公司,姜黄素㊁二甲基亚砜(DMSO)购自Sigma 公司,紫杉醇购自深圳万乐药业有限公司,MTT 购自Fluka 公司,β⁃Actin 一抗㊁鼠抗人多药耐药⁃1单克隆抗体(Mdr⁃1mAb)㊁山羊抗人PKC⁃α多克隆抗体(pAb)皆来自Santa 公司㊂辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG抗体㊁辣根过氧化物酶标记兔抗山羊IgG抗体均来自Biosharp 公司㊂1.2　实验方法　将人卵巢癌A2780/Taxol细胞株置于含10%胎牛血清的1640培养基,内含双抗(链霉素100U/mL,青霉素100U/mL)1mL培养,放置于37℃㊁5%CO2细胞培养箱,待细胞贴壁80%以上时,以0.25%胰酶消化传代㊂1.2.1　MTT比色法检测姜黄素对细胞增殖的影响　实验分为:对照组(A组)(紫杉醇100μg/mL),实验组(B㊁C㊁D㊁E组)(紫杉醇100μg/mL分别联合姜黄素10μmol㊁20μmol㊁40μmoLl和80μmol)㊂(1)取生长状态良好的对数期细胞,将细胞消化后用含10%的胎牛血清稀释至每200μL约6000个细胞,以每孔200μL接种于96孔板,待细胞贴壁后弃上清液,加入无胎牛培养基培养24h;(2)按实验规定的药物浓度干预,每一浓度设3个复孔,同时设置调零孔;(3)分别干预24h后每孔加入MTT液10μL(5mg/mL),混匀,37℃孵育4h,弃上清液,每孔各加入DMSO150μL,震荡10min,在酶标仪检测每孔吸光度值(即检测波长490nm各孔的吸光度值),以抑制率=(1-实验组吸光度值/对照组吸光度值)×100%的公式计算每组抑制率㊂1.2.2　Western blot法测定细胞P⁃gp㊁PKC⁃α的表达　取对数生长期的人卵巢癌A2780/Taxol细胞,分成:对照组(A组),实验组(B㊁C㊁D㊁E组)(姜黄素10μmol㊁20μmol㊁40μmol和80μmol干预24h)㊂1.2.2.1　细胞总蛋白的提取　取各组细胞消化后加PBS重悬,以2000r/min离心8min,弃上清液;加细胞裂解液,置4℃,30min后每隔10min震荡1次,共震荡3次,再离心后取上清液置于另1个EP 管中,-80℃保存备用;取20μL上清液放置于小EP管中,进行蛋白定量(按试剂盒说明书操作)㊂1.2.2.2　SDS⁃聚丙烯酰胺凝胶电泳　将通过蛋白定量分析的蛋白质样品,与裂解液混合使每10μL 含蛋白50μg,再与5×SDS上样缓冲液4∶1混合, 90℃煮沸10min;制备7.5%5mL及10%5mL的分离胶并分别配以5%的浓缩胶,分别加入Marker 5μL及煮过的A㊁B㊁C㊁D㊁E组蛋白10μL;再恒压80V电泳约30min,待溴酚蓝示踪染料到达分离胶的底部时,更换电压120V电泳约1h,待溴酚蓝示踪染料到达浓缩胶的底部时,停止电泳㊂1.2.2.3　转膜　将转膜的夹板浸润于转膜液中,黑板在下,从下往上的顺序依次是:黑板㊁海绵和三层滤纸,根据Marker切取目的蛋白所在的分离胶㊁聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(先置于甲醇中浸泡5min)㊁三层滤纸和白板,扣好(注意每层之间赶尽气泡)㊂将转膜夹放入转移槽,放入冰盒,以保证转膜温度4℃;接通电源,以恒流200mA,100min转膜后切断电源㊂1.2.2.4　蛋白质的免疫印迹　(1)封闭:将PVDF 膜取下放入蛋白封闭液中,摇床上震荡2h㊂(2)抗孵育:将转移后的PVDF膜分别浸泡于对应的抗体混合液:β⁃Actin一抗稀释液㊁鼠抗人Mdr⁃1mAb稀释液㊁山羊抗人PKC⁃αpAb稀释液,置4℃冰箱过夜后,用缓冲液漂洗3次,每次均在摇床上震荡10min㊂二抗孵育:将一抗孵育后的PVDF膜分别浸泡于辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG抗体稀释液㊁辣根过氧化物酶标记兔抗山羊IgG抗体稀释液,于室温中孵育2h后,将PVDF膜置于含TBST 缓冲液的培养皿中,摇床上缓慢震荡,10min后换入新的缓冲液,共3次㊂1.2.2.5　化学发光,显影,定影　(1)根据Millipore 化学发光试剂盒使用说明书操作,暗室中将A㊁B两种液体1∶1混合,将混合好的液体均匀滴加到二抗孵育过的PVDF膜上,放置1~2min,除去PVDF膜上多余液体㊂将用显影溶液处理后PVDF膜放置于曝光机上曝光及显色㊂并以β⁃Actin作为参照,靶条带的密度与内参密度的对比作为各组实验的数据,每组实验重复3次㊂1.3　统计学方法　采用方差分析和q检验㊂2　结果2.1　姜黄素联合紫杉醇对人卵巢癌A2780/Taxol 细胞增殖的影响　联合用药各组细胞的抑制率均较A组明显升高(P<0.05~P<0.01);B组细胞抑制率均显著低于C㊁D和E组(P<0.01);而C㊁D和E 组细胞抑制率差异均无统计学意义(P>0.05)(见表1)㊂　表1　不同浓度姜黄素联合紫杉醇对人卵巢癌A2780/ Taxol细胞抑制率比较(x±s)分组n细胞抑制率/%F P MS组内A30.295±0.0133B30.326±0.0145**C30.444±0.0131**△△61.96<0.010.002D30.428±0.0165**△△E30.423±0.0167**△△ q检验:与A组比较**P<0.01;与B组比较△△P<0.012.2　Western blot法测定人卵巢癌A2780/Taxol细胞P⁃gp和PKC⁃α的表达　A组PKC⁃α和Mdr⁃1/ P⁃gp表达水平均明显高于B㊁C㊁D㊁E组(P<0.01), B组PKC⁃α表达水平亦均高于C㊁D㊁E组(P< 0.05),而C㊁D㊁E组2种蛋白表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)(见图1㊁表2)㊂　表2　不同浓度姜黄素干预卵巢癌A2780/Taxol细胞P⁃gp 和PKC⁃α蛋白灰度值表达(n i=3;x±s)分组PKC⁃α/β⁃actin P⁃gp/β⁃actinA 1.32±0.15 1.58±0.26B0.81±0.11**0.86±0.12**C0.56±0.06**△0.62±0.09**D0.54±0.09**△0.61±0.03**E0.53±0.05**△0.59±0.08**F35.1227.38P<0.01<0.01MS组内0.0100.020 q检验:与A组比较**P<0.01;与B组比较△P<0.013　讨论 卵巢癌对紫杉醇耐药的原因非常复杂,而在众多耐药机制中表现最突出㊁最常见的是Mdr,卵巢癌Mdr是多基因参与的复杂过程,Mdr基因由Mdr⁃1和Mdr⁃3组成,仅Mdr⁃1表达与肿瘤耐药性有关[5]㊂以Mdr基因Mdr⁃1编码P⁃gp为主要机制之一,人体内许多组织㊁细胞均有P⁃gp表达,P⁃gp在正常细胞内的生物学功能是泵出外源性化学物质,保护机体免受伤害㊂有研究[6]发现,耐药细胞内均存在P⁃gp 的高表达㊂癌细胞内P⁃gp通过泵除细胞内抗肿瘤药物,减少肿瘤细胞内有效药物浓度致肿瘤的耐药,从而促使肿瘤细胞耐药[7]㊂紫杉醇的疏水性决定它与P⁃gp有较强的亲和力,卵巢癌耐药细胞中P⁃gp 过表达说明细胞耐药的主要机制为P⁃gp生物泵作用㊂随着研究的深入发现,磷酸化的P⁃gp才具有生物泵功能,细胞膜上磷酸化的P⁃gp越多,泵出细胞内化疗药物的速度越快,肿瘤细胞内化疗药物浓度越低,耐药程度越高㊂研究[8]发现,PKC⁃α与P⁃gp 的磷酸化存在正比关系,PKC⁃α可通过促进P⁃gp磷酸化增加细胞的耐药性㊂还有研究[9]发现,紫杉醇耐药的卵巢癌细胞存在P⁃gp高表达,并存在PKC⁃α协同表达现象,而在紫杉醇敏感的细胞中两者皆不表达㊂本实验通过MTT比色法得出联合用姜黄素各组细胞生长抑制率均高于A组(P<0.05~P<0.01)㊂这在一定程度上说明姜黄素能降低癌细胞对紫杉醇的耐药性,增加癌细胞对紫杉醇的敏感性,并有一定量效关系㊂Western blot联合用姜黄素各组Mdr⁃1/P⁃gp和PKC⁃α表达均较A组显著降低(P<0.01),降低P⁃gp表达能够抑制P⁃gp的生物泵功能,降低癌细胞对紫杉醇泵除作用,增加细胞内有效药物浓度㊂降低PKC⁃α表达能够减慢P⁃gp磷酸化速度,降低细胞对紫杉醇的泵除速度,增加细胞内紫杉醇有效药物浓度,促使肿瘤细胞凋亡,从而逆转细胞的耐药性㊂本实验结果表明,姜黄素能逆转人卵巢癌A2780/Taxol细胞对紫杉醇的耐药性,通过抑制癌细胞内P⁃gp㊁PKC⁃α的表达,降低癌细胞对紫杉醇的泵除,增加细胞内有效药物浓度㊂而且姜黄素作用靶点多,不良反应轻,逆转癌细胞耐药的同时可提高机体的免疫力[10]㊂[参考文献][1]　KARST A M,RONNY D.Ovarian cancer pathogenesis:a model inevolution[J].J Oncol,2010,2010(2010):932371. [2]　张晓冲,翟光喜.姜黄素生理功能及其药用前景[J].中国医药指南,2012,10(2):62.[3]　肖旭阳,王晓东.姜黄素抗肿瘤机制研究进展[J].辽宁医学院学报,2006,27(1):56.[4]　张慧珠,杨林,刘淑梅,等.中药活性成分体外逆转肿瘤细胞多药耐药性的研究[J].中药材,2001,24(9):655.[5]　CECILIA M,SILVIA D,CATHERINE L,et al.Inhibition ofP⁃glycoprotein⁃mediated Multidrug Resistance(MDR)by N,N⁃bis(cyclohexanol)amine aryl esters:further restriction of molecularflexibility maintains high potency and efficacy[J].Bioorg MedChem Lett,2011,21(1):106.[6]　PATEL N R,ALOK R,DMITRIY M,et al.Reversal of multidrugresistance by co⁃delivery of tariquidar(XR9576)and paclitaxel using long⁃circulating liposomes[J].Int J Pharm,2011,416(1): 296.[7]　MARTINS A,VASAS A,SCHELZ Z,et al.Constituents ofcarpobrotus edulis inhibit P⁃glycoprotein of MDR1⁃transfected mouse lymphoma cells[J].Anticancer Res,2010,30(3):829.[收稿日期]2015⁃07⁃29[作者单位]蚌埠医学院第一附属医院1.风湿免疫科,2.放射科,安徽蚌埠233004;3.安徽医科大学公共卫生学院流行病学和卫生统计学系,安徽合肥230032[作者简介]梅永君(1973-),男,硕士,副主任医师,讲师.[通信作者]李志军,硕士研究生导师,主任医师,教授.E⁃mail:lizhijun@[文章编号]1000⁃2200(2016)10⁃1272⁃03㊃临床医学㊃强直性脊柱炎患者骨密度的影响因素分析梅永君1,王　旸1,曹玉茹1,李志军1,陈琳洁1,石士奎2,潘海峰3[摘要]目的:分析强直性脊柱炎(AS)患者腰椎和股骨颈骨密度(BMD)改变与年龄㊁性别㊁病程㊁髋关节病变及急性时相反应物之间的关联㊂方法:选取91例确诊AS 患者,采用双能X 线吸收法测定腰椎(L 2~L 4)㊁股骨颈BMD 值,骨质疏松诊断标准用T 值表示㊂结果:男性AS 患者腰椎㊁股骨颈BMD 均低于女性AS 患者(P <0.05)㊂AS 合并髋关节病变患者与无髋关节病变患者股骨颈BMD 差异无统计学意义(P >0.05)㊂患者年龄与腰椎BMD T 值呈负相关关系(P <0.05),而患者病程㊁急性时相反应物与AS 患者BMD 均无相关关系(P >0.05)㊂结论:AS 患者男性比女性更易发生骨量减少和骨质疏松,随着年龄的增加,腰椎骨质疏松发生增多㊂病程㊁髋关节病变以及急性时相反应物对AS 患者BMD 改变无显著影响㊂[关键词]脊柱炎,强直性;股骨颈;骨密度[中图法分类号]R 593.23 [文献标志码]A DOI :10.13898/ki.issn.1000⁃2200.2016.10.004Analysis of the relevant factor affecting bone mineral densityin patients with ankylosing spondylitisMEI Yong⁃jun 1,WANG Yang 1,CAO Yu⁃ru 1,LI Zhi⁃jun 1,CHEN Lin⁃jie 1,SHI Shi⁃kui 2,PAN Hai⁃feng 3(1.Department of Rheumatology and Immunology ,2.Department of Radiology ,The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College ,Bengbu Anhui 233004;3.Department of Epidemiology and Biostatistics ,School of Public Health ,Anhui Medical University ,Hefei Anhui 230032,China )[Abstract ]Objective :To analyze the correlation of the bone mineral density(BMD)changes of lumbar and femoral neck with age,gender,disease duration,hip lesion and acute phase reactant in patients with ankylosing spondylitis (AS).Methods :The BMD of lumbar(L 2-L 4)and femoral neck were detected using Dual⁃energy X⁃ray absorptiometry method,and T value was used as the diagnosis criteria of osteoporosis.Results :The BMD of lumbar and femoral neck in male AS patient was significantly lower than that infemale AS patient(P <0.05).The difference of the BMD of femoral neck between the patients with AS complicated with and without hip lesion was not statistically significant(P >0.05).The T value of BMD of lumbar was negatively correlated with the age of patient (P <0.05),but the disease duration and acute phase reactant were not correlated with the BMD of AS patient (P >0.05).Conclusions :Compared with female AS patient,the osteopenia and osteoporosis in male AS patient are ease to happen,and the occurrence rate of osteoporosis of lumbar increases with the age of patient increasing.Disease duration,hip lesion and acute phase reactant have no significant influence on the BMD change in AS patient.[Key words ]spondylitis,ankylosing;femoral neck;bone density 强直性脊柱炎(AS)是一种慢性炎症性风湿病,主要累及中轴关节,最常见并发症包括髋关节病变㊁骨量减少和葡萄膜炎等㊂髋关节病变发生率约为25%[1],是最常见的致残因素㊂AS 患者骨密度(BMD)的下降较为普遍,有研究[2]报道,在脊柱炎的病程早期阶段,腰椎和股骨颈骨量减少高达47%,AS 骨质疏松的发病机制仍然不清楚,目前普遍认为系统性的炎症反应起主要作用[3-4],BMD 的改变可能与年龄㊁性别㊁病程㊁疾病活动指数和急性时相反应物等因素相关[5-6],但目前没有一致的结论㊂最近的一项研究[7]揭示腰椎磁共振提示急性炎症改变与BMD 密切相关,AS患者合并髋关节病[8]　WANG NN,ZHAO LJ,WU LN,et al .Mechanistic analysis oftaxol⁃induced multidrug resistance in an ovarian cancer cell line[J].Asian Pac J Cancer Prev,2013,14(9):4983.[9]　LEE FY,BORZILLERI R,FAIRCHILD CR,et al .BMS⁃247550:a novel epothilone analog with a mode of action similar to paclitaxel but possessing superior antitumor efficacy [J ].ClinCancer Res,2001,7(5):1429.[10]　潘国凤,张晓东,朱晓新.姜黄素抗肿瘤作用及其机制研究最新进展[J].中药药理与临床,2007,23(5):247.(本文编辑　马启)。