《分子生物实验》教学课件:实验二 哺乳动物白细胞DNA分离
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dna提取课件DNA提取课件DNA提取是生物学实验中常见的一项技术,它可以从细胞中分离出DNA分子,为后续的实验研究提供基础。
本文将介绍DNA提取的原理、步骤以及在科学研究和医学应用中的重要性。
一、DNA提取的原理DNA提取的原理基于细胞的结构和化学性质。
细胞是生物体的基本单位,其中包含了DNA分子。
DNA分子是由碱基、糖和磷酸组成的巨大分子,它们通过特定的键结合在一起,形成螺旋状的双链结构。
DNA提取的过程主要包括细胞破碎、蛋白质去除和DNA沉淀。
首先,细胞膜需要被破坏,以使DNA从细胞中释放出来。
这可以通过机械破碎、酶解或化学方法来实现。
接下来,蛋白质需要被去除,以避免对DNA的干扰。
最后,通过加入盐和酒精等物质,可以使DNA沉淀下来,从而分离出纯净的DNA。
二、DNA提取的步骤DNA提取的步骤可以分为样本准备、细胞破碎、蛋白质去除和DNA沉淀等几个阶段。
首先,需要准备样本。
样本可以是植物组织、动物组织、细菌或真菌等。
样本的选择和处理对于提取DNA的质量和效果至关重要。
接下来,进行细胞破碎。
这可以通过机械方法(如研磨或振荡)或化学方法(如酶解)来实现。
破碎后的细胞释放出DNA分子。
然后,进行蛋白质去除。
蛋白质会干扰DNA的提取和纯化过程,所以需要将其去除。
这可以通过加入蛋白酶等物质来实现。
最后,进行DNA沉淀。
通过加入盐和酒精等物质,可以使DNA分子沉淀下来。
沉淀后的DNA可以通过离心等方法分离出来。
三、DNA提取的重要性DNA提取在科学研究和医学应用中具有重要的意义。
首先,DNA提取是进行分子生物学实验的基础。
无论是基因克隆、PCR扩增还是基因测序,都需要从细胞中提取纯净的DNA。
DNA提取的质量和纯度直接影响后续实验的结果和可靠性。
其次,DNA提取在遗传学研究中起着关键作用。
通过提取DNA,可以分析基因的组成和结构,研究基因在遗传传递中的作用和变异。
这对于理解遗传性疾病的发生机制、进行基因治疗以及种群遗传学研究等方面具有重要意义。
《生化与分子生物学》实验讲义天津医科大学生物医学工程系2005年实验一自抗凝血中提取哺乳动物细胞基因组DNA一、实验目的1、了解核酸的基本特性。
2、掌握DNA提取和鉴定的方法。
二、实验原理核酸的分离与提取是分子生物学研究中很重要的基本技术,核酸样品的质量可能直接关系到后续实验的成败。
核酸包括DNA、RNA两种分子,在真核细胞中都是以与蛋白质相结合的状态存在(DNA与组蛋白形成核小体,再折叠缠绕成染色体),真核生物基因组DNA 为双链线性分子,存在于细胞核内。
基因组DNA的提取需经过DNA的释放(破膜)、DNA与蛋白质的分离,DNA的沉淀等过程。
分离纯化核酸的总原则:1、保证核酸一级结构的(核苷酸序列)的完整性,全部的遗传信息均储存在一级结构中。
2、排除其它分子的污染。
a)对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子。
b)生物大分子:蛋白质、多糖和脂质。
c)其它核酸分子:RNA.三、实验试剂1、TKM缓冲液10 mmol/L Tris-HCl pH 7.6 (Tris 三羟甲基氨基甲烷)10 mmol/L KCl2 mmol/L EDTA4 mmol/L MgCl22、TE缓冲液10 mmol/L Tris-HCl1 mmol/L EDTA pH 8.03、10%SDS4、饱和氯化钠四、实验步骤1、取0.5ml EDTA抗凝的全血于清洁的1.5ml Eppendorf离心管中。
2、加入0.5ml TKM缓冲液,13μl Triton X-100(终浓度为1.2%),颠倒混匀。
在台式离心机上离心,5,000rpm×10分钟。
(低渗破红细胞膜)。
3、倾去上清液,在离心管中加入1.0ml TKM缓冲液,混匀后离心,5,000rpm ×10分钟,重复步骤3两次。
(清洗)4、于沉淀中加入200μl TKM缓冲液和15μl 10%SDS(终浓度为0.7%),混匀后于55℃保温20分钟。
(破白细胞膜)注:此步中可加入少量蛋白酶K。