超声波诱变筛选虾青素高产菌株_刘艳

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利用UV和ARTP诱变筛选优良性状的球等鞭金藻

利用UV和ARTP诱变筛选优良性状的球等鞭金藻作者：陈建楠陈由强薛婷来源：《福建农业科技》2020年第02期摘要：为获取优良性状的球等鞭金藻突变藻株，通过紫外和等离子体诱变育种技术对球等鞭金藻进行诱变和高通量筛选。

结果表明：共筛选出了7株优良性状的突变藻株，分别为YB1Z2、ZA2、ZA5、Q2B5ZWYB、Z3YB4、Z3YB11、JN31，其藻液尼罗红染色测定油脂含量的荧光比值都大于原始藻株，突变藻株YB1Z2、ZA2、ZA5、Z3YB4、JN31比生长速率相比于原始藻株提高了1.38、1.22、1.33、1.10、1.37倍，突变藻株YB1Z2的生长速率最快，其次是突变藻株JN31。

突变藻株YB1Z2、Q2B5ZWYB、Z3YB4、Z3YB11、JN31的岩藻黄素单位含量均高于原始藻株，其中突变藻株YB1Z2、Z3YB11提高了1.07、1.08倍。

突变藻株YB1Z2、ZA2、ZA5、Q2B5ZWYB、Z3YB4、Z3YB11的不饱和脂肪酸含量比原始藻株提高了1.22、1.09、1.08、1.18、1.13、1.18倍，突变藻株YB1Z2、ZA5、Z3YB4、Z3YB11、Q2B5ZWYB的多不饱和脂肪酸（C22∶6）DHA含量比原始藻株提高了1.28、1.27、1.26、1.21、1.21倍。

利用紫外和等离子体诱变育种技术对球等鞭金藻进行诱变筛选，获得了7株优良性状的突变藻株，为后续的研究和基础饵料藻提供了很好的种质资源。

关键词：球等鞭金藻;生长速率;岩藻黄素;不饱和脂肪酸;诱变筛选中图分类号：Q938文献标志码：A文章编号：0253-2301（2020）02-0009-08DOI：10.13651/ki.fjnykj.2020.02.002Abstract：In order to obtain the mutants of Isochrysis galbana with excellent characters， the mutation and high throughput screening of Isochrysis galbana was carried out by using the ultraviolet and plasma mutation breeding technologies. The results showed that a total of seven mutants with excellent characters were screened out， which were YB1Z2， ZA2， ZA5， Q2B5ZWYB，Z3YB4， Z3YB11， JN31， respectively. The fluorescence ratio of oil content determined by Nile red staining in the algal solution was higher than that of the original strain. The growth rate of the mutant YB1Z2， ZA2， ZA5， Z3YB4 and JN31 was 1.38， 1.22， 1.33， 1.10 and 1.37 times higher than that of the original strain， and the growth rate of YB1Z2 was the fastest， followed by JN31. The contents of fucoxanthin per unit in the mutant YB1Z2， Q2B5ZWYB， Z3YB4，Z3YB11 and JN31 were all higher than that of the original strain， among which the mutant YB1Z2 and Z3YB11 increased by 1.07 and 1.08 times. The content of unsaturated fatty acids in the mutant YB1Z2， ZA2， ZA5， Q2B5ZWYB， Z3YB4 and Z3YB11 was 1.22， 1.09， 1.08， 1.18，1.13 and 1.18 times higher than that of the original strain. The DHA content of polyunsaturated fatty acids （C22∶6）in the mutant YB1Z2， ZA5， Z3YB4， Z3YB11 and Q2B5ZWYB was 1.28，1.27， 1.26， 1.21 and 1.21 times higher than that of the original strain. In conclusion， the mutation screening of Isochrysis galbana was carried out by using the ultraviolet and plasma mutation breeding technologies， and then seven mutants with excellent characters were obtained， which provided good germplasm resources for the subsequent research and basic bait algae.Key words：Isochrysis galbana;Growth rate;Fucoxanthin;Unsaturated fatty acid;Mutation screening球等鞭金藻Isochrysis galbana是一種富含岩藻黄素和油酸、亚油酸、二十二碳六烯酸（DHA）等多种不饱和脂肪酸的海洋单细胞微藻[1-3]，是我国养殖海产鱼类幼苗和双壳类幼虫的基础饵料藻[4]。

一种高产DHA裂殖壶菌突变菌株的筛选方法[发明专利]

专利名称：一种高产DHA裂殖壶菌突变菌株的筛选方法专利类型：发明专利
发明人：刘宪华,李建涛,汪光义,叶会科,张赛
申请号：CN201910859437.3
申请日：20190911
公开号：CN112481348A
公开日：
20210312
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种高产DHA裂殖壶菌突变菌株的筛选方法，具体是，将野生型裂殖壶菌菌株经过ARTP 诱变处理，经烯草酮平板培养基定向初筛，磷酸香草醛法和摇瓶发酵培养测定的DHA产量为复筛，筛选后获得高产DHA菌株。

本发明涉及到的高产DHA筛选方法具有操作简单，筛选成功率高，能快速获取大量目的菌株等诸多优势。

申请人：天津大学青岛海洋技术研究院
地址：266200 山东省青岛市鳌山卫街道青岛蓝色硅谷核心区莱青路2-2号
国籍：CN
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法夫酵母高产虾青素发酵工艺的建立

法夫酵母高产虾青素发酵工艺的建立
梁玲玲;徐作武;卢越巧;杨一恭;刘燕;邵东;陈克杰
【期刊名称】《化工管理》
【年(卷),期】2022()9
【摘要】为建立与虾青素高产菌株相适应的发酵工艺,研究运用正交试验设计优化了发酵培养基配方成份,并在补料摇瓶上确定了碳源补加工艺,且进一步地在70 L发酵罐上对获得的新工艺进行验证。

结果表明,影响法夫酵母(Phaffia rhodozyma)虾青素生产的因素,按照主次顺序及影响由大到小排列为碳源>酵母抽提物>乳
酸>(NH_(4))_(2)SO_(4)>蛋白胨>KH_(2)PO_(4)>微量元素。

该研究建立了法夫酵母高产虾青素的生产工艺,为虾青素的商业化生产提供了坚实的基础。

【总页数】4页(P137-140)
【作者】梁玲玲;徐作武;卢越巧;杨一恭;刘燕;邵东;陈克杰
【作者单位】浙江医药股份有限公司新昌制药厂
【正文语种】中文
【中图分类】TQ920.6
【相关文献】
1.高产虾青素红法夫酵母的选育和工艺优化
2.诱变筛选高产虾青素法夫酵母及发酵条件优化
3.产虾青素红法夫酵母的发酵工艺优化
4.法夫酵母PLX-All发酵纤维素酶水解物合成虾青素
5.法夫酵母高产虾青素的选育及发酵条件的优化
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产黄原胶微生物的筛选和高产菌株的选育

项目来源院 2020 年河北省大学生创新创业训练计划 (项目编号院 s202010101017)遥
通讯作者：张彩凤
参考文献 [1] 秦方袁詹晓北. 黄原胶前提取过程中菌体的去除
[J] . 食品与机械袁 2018袁 3 (14)院 17 ~ 18. [2] 白先放袁周韶南袁卢洁. 紫外线诱变高产黄原胶菌
40 s、80 s 和 120 s，设计紫外照射距离分别为 20 cm、 30 cm 和 40 cm。 1.5 黄原胶的纯化提取。通过对诱变结果观察对比，淘汰生长相对迟缓和菌落较小的黄单胞菌株，选取几
株生长速度较快的菌株再进行摇瓶发酵，得到发酵液，再通过提取黄原胶，并测定其黄原胶产量。取 200 ml 发酵液置于离心管中，向发酵液中添加 5 g 的 CaCl2，在发酵液温度 65 ℃、pH 值 5.5 的条件下添加蛋白酶 1 万 U，酶解 3 h；在发酵液温度 40 ℃，pH 值 9.5 的条件下，添加溶菌酶 1 万 U 并维持 6 h，酶解全部完成后灭酶醇提，称量其干重。并与标准菌株进行对比，得到高产的正突变菌株。相对提取率(%) = 突变株黄原胶回收量 / 对照株黄原胶回收量。 2 结果与分析 2.1 菌种的获得与培养。经增殖和选择培养分离到菌株，菌落形态和生理生化鉴定结果符合黄单胞菌属特征。试验得到菌种生长曲线(图 1)。由图 1 可看出，适合黄单胞菌的生长温度为 20 ℃ ~ 35 ℃，40 ℃时黄单胞菌基本停止生长，60 ℃为它的致死温度。
株 [J] . 吉林农业袁 2010袁 11 (2)院 8 ~ 12. [3] 张伊宁. 黄原胶和变性淀粉在提升方便面汤底口感
中的应用 [J] . 现代食品袁 2020袁 13 (1)院 59 ~ 62. [4] 赵兰坤袁朱心双袁王均成袁等. 高透明黄原胶提取

虾青素的功能及国内研究进展

虾青素的功能及国内研究进展作者：刘艳冯印李佳来源：《农业与技术》2013年第07期摘要：虾青素的化学名称为3，3′-二羟基-4，4′-二酮基-β，β′-胡萝卜素，是一种红色素，可以赋予观赏鱼、三文鱼、虾和火烈鸟粉红的颜色。

其化学结构类似于β-胡萝卜素。

虾青素是类胡萝卜组的一种，也是类胡萝素合成的最高级别产物。

本文主要介绍工业上天然虾青素的功能及国内外研究进展。

关键词：虾青素；功能应用；国内外研究进展中图分类号：Q562 文献标识码：A虾青素（astaxanthin）是一种次要的类胡萝卜素，它具有较强的抗氧化性，也被报道称对人体有益，广泛地应用于食品，化妆品和制药行业[1]，虾青素在促进抗体产生、增强动物的免疫功能、抗氧化、淬灭自由基的产生方面起着重要的作用。

抗氧化剂可以消灭人体内的自由基，不但可以缓解衰老、神经系统疾病、心血管疾病等，甚至可以防止这些疾病的发生。

由于这些好的疗效及其无毒害的特点，虾青素一定会在生活中普遍应用，故此进行研究与检测。

目前市场上的虾青素主要是人工合成的产品，利用微藻生产虾青素还存在一些技术性难题。

但是随着人们对天然产品的逐渐认可和微藻生物技术的不断进步，大规模培养红球藻商业化生产天然虾青素是一种很有开发前景的产业。

1 虾青素在化妆品中的应用虾青素作为自然界中最强的抗氧化维生素，具有“超级维生素E”的美誉，其抗氧化活性是维生素E的550倍，能够有效的保护皮肤免受紫外线（UVA，UVB）的损害，在皮肤受到光照时消耗腐胺，作为潜在的光保护剂，用于阻止皮肤光老化防止诱发皮肤癌。

其超强的消灭自由基的能力，可以防止皮肤细胞受到自由基的损伤，减少皱纹及雀斑的产生。

虾青素除了具有许多药用和添加剂用途外，现阶段作为新型化妆品原料以其优良的特性广泛应用于膏霜、乳剂、唇用香脂、护肤品等各类化妆品中。

2 在饲料工业上的应用蛋鸡饲料中加入2.95%的红法夫酵母，蛋黄的最大吸光度从571nm提高到593nm，而加入10.85%的黄玉米时，仅提高到575nm。

一株虾青素产生菌的筛选诱变及初步鉴定

一株虾青素产生菌的筛选诱变及初步鉴定侯旭;闵伟红;赵君;方丽【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2011(032)001【摘要】从土壤中筛选获得一株虾青素高产菌株,命名为CTD004,采用紫外-可见分光光度计测得该菌株虾青素产量为28.8mg/L.通过对该菌株进行菌落形态观察,革兰氏染色和相关生理生化鉴定实验,以及利用16S rDNA序列的系统发育学分析,初步鉴定该菌株为假单胞菌属细菌,与GQ120653.1的亲缘关系较近.采用紫外诱变的方法提高该菌株产虾青素的能力,结果显示:菌液最佳的稀释倍数为10-6,最佳的诱变时间为15s,诱变后虾青素产量为64.6mg/L,比原菌虾青素产量增加了35.8mg/L,5次传代实验结果表现出较好的遗传稳定性.【总页数】4页(P145-148)【作者】侯旭;闵伟红;赵君;方丽【作者单位】吉林农业大学食品科学与工程学院发酵工程实验室,吉林长春,130118;吉林农业大学食品科学与工程学院发酵工程实验室,吉林长春,130118;吉林农业大学食品科学与工程学院发酵工程实验室,吉林长春,130118;吉林农业大学食品科学与工程学院发酵工程实验室,吉林长春,130118【正文语种】中文【中图分类】Q93.331【相关文献】1.高产虾青素红发夫酵母的诱变和筛选方法分析 [J], 田小群;朱明军;梁世中2.红法夫酵母原生质体制备条件优化及紫外诱变高产虾青素菌株筛选 [J], 何璞;任泽焕;何润清;王瑞霞3.虾青素产生菌单线态氧NTG诱变育种 [J], 朱记丰;吕玉华;李世杰4.烷化剂NTG诱变虾青素产生菌红法夫酵母的研究 [J], 吴江;刘子贻;朱寿民5.诱变筛选高产虾青素法夫酵母及发酵条件优化 [J], 刘晓桐;孙欣宇;刘玥;王一惠;刘冰南因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

产虾青素海洋酵母菌YS-185的鉴定及发酵条件优化（可编辑）

产虾青素海洋酵母菌YS-185的鉴定及发酵条件优化第卷第期渔业科学进展. 。

. .,年月产虾青素海洋酵母菌一的鉴定及发酵条件优化何磊刘均忠秦胜利。

于佳民孙谧农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所,青岛上海海洋大学食品学院,。

青岛科技大学化工学院,大连海洋大学食品学院,摘要以法将实验室保藏的株产虾青素的海洋酵母菌一鉴定为粘红酵母。

以海洋酵母菌一为试验菌株,运用摇瓶发酵优化的方式,探索培养基组分和发酵工艺条件对该菌发酵的影响。

实验结果表明,该菌生长最适培养基组分为葡萄糖 / 、蛋白胨 / ,最适生长起始值为 . 、转速 / 、接种量、温度℃;虾青素合成的最佳培养基组分葡萄糖 /、蛋白胨 / ,最佳虾青素合成条件:. ,转速/ ,接种量 ,培养温度℃。

发酵优化后的虾青素产量 ./ / ,较优化前的 ./ / 提高了 . 。

温度对酵母菌的生长和虾青素的合成都有显著影响。

海洋酵母菌一优化后的发酵条件有规模化生产虾青素的应用潜力。

关键词虾青素含量发酵优化正交实验中图分类号 ; . 文献识别码文章编号 ? ? ? ? 一? ?。

? , , , , 。

,,。

,,, , . ? . ?. ? / , / , . ,/ , / ,山东省年科学技术发展计划资助通讯作者。

: . .收稿日期: ? ;接受日期:作者简介:何磊 ,男,硕士研究生,主要从事海洋产物资源与酶工程研究。

? : . , : 渔业科学进展第卷℃./ , / , . , / , /℃. . . ?. / . / .?.虾青素化学名称为 , 二羟基一 ,胡萝卜素 , 一二酬,分子式为宋光泉等,是一种非维生素源类胡萝卜素,在体内不转变为维生素 ,发挥多重生理功效,如抗肿瘤活性】; .。

虾青素清除自由基能力比一胡萝卜素高倍,比维生素高倍“ .,因此在食品、医药及饲料添加剂等行业广泛应用祝美云等。

虾青素的合成有两种途径:一是化学方法合成,化学合成虾青素比较困难,合成成本偏高,产品价格昂贵,技术为少数跨国公司掌握梁春梅。

协同诱变法选育虾青素高产优良酵母菌株

（．ＧａｇｈｕＣ１ｕｎｚｏＤＣ＆Ｐｅｔｒ５０８２ｏｌｆ￡Ｓ１，ＳｎＹｔｅｎ．Ｇａｇｈｕ５０７ｒ ’ｔ１００；．Ｃｉｖ．ｏｃ．ｕｅｓｌｉｕｎｚｏ１２５） — ｒＵ
ａｄＮＴＧｙｅｇｔａｌｎｃｅｎｄｗｉｈａｔｍｙｉａｄｏｔｉｅｉｈａｔｘｎｈｎ— ｒｄｃｎｔｎｔｓｒｉｎｓｎｒｅｉｌｙａｄｓｒｅｅｔｎｉｅｎＡｎｂａｎｄａｈｇｓａａｔｉｐｏｕｉｇｍｕａｔａｎＧＨ１ｃ・
野生茵株缩短了２；生菌株Ｇ４ｈ野Ｈ１的最适生长温度为２Ｏ℃ ，于２高８℃ 则不生长，突变茵株Ｇ－．的最而Ｈ１１７
适生长温度为２３８— Ｏ℃ 。比野生菌株Ｇ提高８—１Ｈ１Ｏ℃ 。首次采用协同诱变的方法成功选育了虾青素高产
７．．Ｔｈｅｕｔｈｗｅｈｔｔｅｉｓｙｅｄｏｓａａｔｉｓａｉｈａ０ｐｇ１ｅｒｓｌｓｓｏｄｔａｈｔｉｌｆａｔｘｎｈｎｗａｓｈｇｓ１２０．／ｇＤＣＷｏｉｓｈｇｒｔａｈｔｆｕｒｔｍｅｉｈｅｈｎｔａ
初步研究其生长特性。对野生型茵株Ｇ用紫外线（Ｖ）亚硝基胍（Ｔ协同诱变，Ｈ１ｕ和ＮＧ）用抗霉素Ａ筛选，选育出虾青素高产突变菌株Ｇ－．。突变菌株Ｇ１７１的虾青素最高产量达ｌ２０ｐ／Ｃ，Ｈ１１７Ｈ－．０－ｇＤＷ比野生菌株ｇＧＩ的虾青素最高产量２１ｐ／Ｃ高出４倍。且生长加快，到最高生物量和最高虾青素产量的时间比Ｈ７，ｇＤＷｇ并达

法夫酵母生物法生产虾青素的研究进展

法夫酵母生物法生产虾青素的研究进展刘颖【摘要】虾青素是一种酮式类胡萝卜素,在功能饲料、食品、化妆品和医药等方面具有广阔的应用前景.法夫酵母是天然生产虾青素的主要微生物之一,本文旨在介绍通过基因工程培养、诱变及发酵工艺优化等方法来提高法夫酵母生物合成虾青素的新进展.【期刊名称】《发酵科技通讯》【年(卷),期】2012(041)003【总页数】4页(P47-50)【关键词】虾青素;法夫酵母;生物合成【作者】刘颖【作者单位】青岛科技大学化工学院山东青岛266042【正文语种】中文近年来，随着生活水平的不断提高，人们对自身健康及食品安全愈加重视。

人类的衰老、许多疾病的产生与自由基、有害活性氧等分子抑制人体免疫系统的自身防御、修复功能息息相关[1]。

虾青素(Astaxanthin)是β-萝卜素 3,3-二羟基-4,4-二羰基的衍生物，被称作“超级抗氧化剂”并以其独特的结构、化学性质及生物学优势引起了国内外的广泛关注。

其主要作用机制是通过分子中的共轭结构淬灭有害氧、羟基及共轭不饱和双键清除自由基[2]。

欧盟、日本等国家已许可其作为膳食营养补充剂等，国内市场已有跨国公司化学合成的虾青素产品，主要用作饲料添加剂。

目前，虾青素的主要来源是从水产品的加工废料中提取、利用某些藻类、酵母菌生产及采用化学合成方法生产[3]。

天然虾青素与化学产品在其功能、应用等方面截然不同。

而约占市场份额97%的虾青素产品皆为化学合成，就市场竞争而言，通过基因工程培养、诱变筛选高产菌株、调整发酵工艺等方法优化法夫酵母(Phaffia rhodozyma)等主产虾青素产品微生物对提高虾青素生物制品的产量具有深远的意义。

化学合成仍是的目前获取虾青素的最低廉的生产方法，主要反应为1分子C15-磷盐与一分子C10-二醛分子的Wittig反应[4]。

产物中包括虾青素的各种同分异构体及外消旋体的混合物，由于虾青素分子结构复杂故其合成困难、化学合成品价格昂贵。

虾青素高产菌的选育

3
讨论
表!
出发菌株与 #$%& 不同变异株间发酵比较
粗多糖（*） ’"’1 ’"32 &"6& ’"!% &"2! ’"53 ’"57 &"72 &"%& !"51 !"%5 !"16 ’"73 总粗多糖（-+,’&&-.） ’’"3 ’5"! 6"7 ’1"2 2"2 ’7"5 ’7"3 ’&"5 %"7 !5"2 3’"! !6"’ !’"% &"&!2 &"&35 &"&!% &"&36 &"&37 &"&31 &"&37 &"&35 &"&37 &"&1! &"&37 &"&1% &"&13 &"22 ’"’& ’"’! ’"’7 ’"&7 ’"’7 ’"’% ’"’7 ’"’1 ’"&! ’"’7 ’"’& ’"’7
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常压室温等离子体诱变粘红酵母筛选高产油脂菌株及发酵条件优化

常压室温等离子体诱变粘红酵母筛选高产油脂菌株及发酵条件优化刘雅婷;刘宏娟;王艳萍;张建安【摘要】The Rhodotorula glutinis was mutagenized by atmospheric and room temperature plasma ( ARTP) . The optimal mutation condition was 60 s at 120 W,under this condition the lethality rate was 90%. The strain LA1 with high lipid production was screened from mutagenized Rhodotorula glutinis by Sudan black B staining method. The lipid productivity and lipid content of LA1 increased by 17. 59%and 46. 08% respectively comparing with Rhodotorula glutinis. The fermentation conditions of LA1 were optimized as follows:initial mass concentration of glucose 70 g/L, with (NH4 )2 SO4 as nitrogen source and C/N 53. Under these conditions, the lipid productivity, biomass, lipid content and lipid yield of LA1 in-creased by 123. 9%,56. 6%,43. 0% and 43. 5% respectively, and the fatty acid composition of the lipid of LA1 was similar to that of vegetable oil.%以粘红酵母( Rhodotorula glutinis)为出发菌株,采用常压室温等离子体对其进行诱变。

重离子束辐照诱变及高通量筛选金霉素高产菌株

重离子束辐照诱变及高通量筛选金霉素高产菌株韩鹏军;李冰;李书至;刘娟【摘要】应用不同剂量12C+6重离子束对金霉素链霉菌出发菌株B9-34-125进行辐照诱变,并应用96和48孔板高通量筛选金霉素高产菌株.结果表明:当重离子束12C+6离子的辐照剂量为60Gy时,对金霉素链霉菌的诱变效果显著,筛选出5株优势菌株,其中Z-1452菌株摇瓶发酵效价较对照提高14.4％,60m3发酵效价较对照提高5.7％,产量提高了2.6％.【期刊名称】《中国抗生素杂志》【年(卷),期】2018(043)008【总页数】3页(P1031-1033)【关键词】金霉素;重离子束;孔板;高通量筛选;效价检测【作者】韩鹏军;李冰;李书至;刘娟【作者单位】驻马店华中正大有限公司,驻马店463000;驻马店华中正大有限公司,驻马店463000;驻马店华中正大有限公司,驻马店463000;驻马店华中正大有限公司,驻马店463000【正文语种】中文【中图分类】R978金霉素(chorotetracycline, CTC)属于四环素类广谱抗生素，有预防疾病、改善消化代谢、抑制有害微生物，促进有益微生物生长的作用，因此其在医疗、畜牧业和农业上有广泛的用途[1]。

目前，金霉素的生产水平趋于稳定，为了再度提高生产效能，就需加大优势菌株的筛选。

传统的菌种筛选以摇瓶为主，工作量大，效率低。

近年来，随着高通量筛选技术的发展，孔板筛选技术在其他放线菌的筛选中取得了很好的效果[2]，能显著提高筛选效率，为高通量筛选金霉素高产菌株提供了较好的参考。

重离子束诱变育种与传统的辐射法及化学诱变剂相比，具有损伤轻、突变率高、突变谱广、遗传相对稳定、易于获得理想的新菌种等特点[3]，对菌种的选育是较理想的方法。

和传统的杂交育种相比，具有育种周期短、突变易稳定等优点。

近几年，重离子束在生物诱变育种上的应用越来越多[4-6]。

本研究采用不同剂量的12C+6重离子束对金霉素链霉菌进行诱变处理，之后使用96孔板和48孔板对大量突变株进行筛选，最终获得了生产效能稳定的金霉素高产菌株。

粘红酵母虾青素高产菌株的选育及小试产品的应用

脂性，易溶于氯彷、丙酮、和二硫化碳中，氧化后苯它即为虾红素（ｓｃｎａ。ａｔｅｅ）ａ
配制方法（）略。
用于保存菌种，
１２２ＹＰ固体培养基．．ＥＤ
用于活化菌种和菌种培
虾青素主要是从水产品加工工业的废弃物中提养。配方为葡萄糖１５，．％酵母膏ｌ，白胨ｌ。％蛋％取、培养藻类生产和利用某些酵母菌发酵生产。近来，１３试剂．ＦＨｆａｎ—ｌｏｈ．ｏｆｎｍａｃｅ等人利用化学合成的技术已获１３１丙酮、ｒ．．石油醚、蒸馏水、和氯化钠溶液。饱得全反式虾青素，被批准作为大马哈鱼的饵料添加１３２Ｅ并．．ＭＳ试剂５ｏ／抗霉素Ａ溶液，配制ｍｍｌｍｌ剂。方法为取抗霉素Ａ１．２，３７ｍｇ溶于５ｌｍ乙醇中。目前，用酵母发酵生产虾青素的过程中，国外１３３ｐ７０的磷酸缓冲液配制方法：甲液：在．．Ｈ＝．主要是利用红发夫酵母菌。红发夫酵母菌属于胆子菌０２ＮＨＰ４・ＨＯ（Ｏ０ｌ．Ｍａ２Ｏ２２１０ｍ中含３．ｇ９；１２）３ｍｌ纲的范菲亚酵母属。红发夫酵母最早由Ｐａ等人于乙液：０２ａＨＯｈｆ．ＭＮ２Ｐ・７２１Ｏ０ｌ中含５．ｇＨＯ（０ｍ３７）ｍｌ１７９０年在美国的阿拉斯加的高山上和１３本北海道一６１。带山区落叶树的渗出液中分离的。后经Ｍｉｅ鉴定并２试验内容与结果ｌｒｌ命名为新属范菲亚属（也译为红发夫酵母属）１７２１高产菌株的诱变选育。９６．年Ａｄｒｓ发现能产生虾青素，１８ｎｅｅ等ｗ９０年Ｊｈｎｏ２１１抗霉素Ａ诱变选育ｏｎｓｎ．．把发酵培养菌体应用于鲑鱼和鲟鱼的饵料中，获得并配制３０ｌ０ｍ固体培养基，化固体培养基后冷却溶

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生物技术虾青素（astaxanthin），是一种类胡萝卜素，化学名称为3，3′－二羟基－4，4′－二酮基－β，β′－胡萝卜素，又名虾黄素，虾黄质或龙虾壳色素。

天然虾青素于自然界广泛的存在，尤其是在海洋环境中。

大量研究证明，虾青素具有增强免疫力；抗衰老；降低心血管疾病和由化学因素诱发的癌症发病率；增加对有害生物的抵抗力；维护眼睛和中枢神经健康；抗氧化能力极强，增强肌肉力量和耐受力等重要的生理功能，而且对人体绝对安全。

因此，虾青素在食品工业、饲料工业、化妆品工业、保健品和医药工业等方面具有广阔的应用前景[1-2]。

本论文以CTD004为出发菌株，对其进行超声波诱变，提高了该菌生产虾青素的能力，采用这种传统的生物物理学方法，不但生产出的产品安全无毒副作用，而且可以提高虾青素产量。

１　材料与方法１．１　材料与试剂1.1.1　菌株　CTD004菌株（自命名，经初步鉴定属于假单胞菌属）：吉林农业大学发酵工程实验室。

1.1.2 培养基及试剂1.1.2.1　基础培养基　蛋白胨10.0 g，葡萄糖10.0 g，KH2PO4 1.0 g，MgSO4·7H2O 1.0 g，酵母膏2.0 g，定容至1 L蒸馏水中，pH 7.2～7.5，121℃，灭菌20 min。

1.1.2.2　发酵培养基　蛋白胨10.0 g，可溶性淀粉10.0 g，KH2PO4 1.0 g，MgSO4·7H2O 1.0 g，酵母膏2.0 g，定容至1 L蒸馏水中，pH 7.2～7.5，121℃，灭菌20 min。

虾青素标准样品（购于Sigma公司），二甲基亚砜、氯仿、甲醇、冰醋酸、蛋白胨、葡萄糖、可溶性淀粉、酵母膏、KH2PO4、MgSO4·7H2O均为进口分装或国产分析纯。

１．２　方法1.2.1　菌种超声波驯化和筛选　1.2.1.1　菌悬浮液的制备　将出发菌株接种于固体培养基上，32℃培养16 h（种龄处于对数期），用接种环移一个虾青素菌落至无菌试管中（9 mL装有玻璃珠的生理盐水），振荡10 min 过滤，即得菌体悬浮液。

1.2.1.2　超声波驯化　取菌体悬浮液15 mL在20kHz，200 w，工作电压200 v的超声条件照射不同时间（2 min，1 min，30 s），按10倍系列稀释法稀释，分别取稀释倍数为l0-5、10-6、10-7 3个稀释度0.1mL涂布于平板上，培养120 h，挑取颜色较深的菌落扩大培养，重复上述操作3轮。

1.2.2　诱变筛选方案第一轮诱变：以CTD004为出发菌株，经超声波诱变，在初筛平板上选出200株颜色较深的菌株，进行摇瓶复筛，选出5株发酵产青素良好的菌株进行第二轮诱变。

第二轮诱变：以第一轮所选5株为出发菌株，经超生波诱变，在初筛平板上，每株选出40株颜色较深的菌株，共200株颜色较深的菌株，进行药瓶复筛，选出5株发酵产青素良好的菌株进行第三轮诱变。

第三轮同上。

1.2.3　分析测定　标准曲线的绘制：精确称取0.1g虾青素样品，用混合破壁提取试剂定容至100 mL，分别取1 mL，2 mL，3 mL，4 mL，5 mL，6 mL，7 mL，8 mL 加入8个100mL容量瓶内，定容摇匀，配置成浓度为0.01、 0.02、 0.03 、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08 mg/mL，在480 nm下测定配制溶液的吸光度。

以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标作曲线图，所得曲线即为虾青素的标准曲线，其标准曲线的方程为（Y=1.2786X-0.0088）。

胞内虾青素含量测定[3]：发酵液中虾青素的含量采用分光光度法进行测定，由于虾青素是一种细胞内色素，需要混合破壁提取试剂提取。

甲醇与氯仿按体积比5：1配成试剂Ⅰ，冰醋酸与二甲基亚砜按体积比5：1配成试剂Ⅱ，将试剂Ⅰ与试剂Ⅱ按体积比3：1配成混合破壁试剂。

50 mL发酵液经8 000 r/min离心10 min后，用蒸馏水洗两遍，离心得鲜菌体，搅拌后加入混合破壁试剂，环境温度为30℃。

搅拌，于8 000 r/min离心10 min 得提取液，480 nm下，以混合破壁试剂作为参比液调零，测定其OD值。

将OD值代入虾青素的标准曲线，即可算出发酵液中虾青素的含量。

２　结果与分析２．１　不同超声波处理时间的诱变效应筛选　超声波对菌株CTD004有明显的致死效应，致死率随照射剂量增大而增大，短时间超声波处理会给筛选带来大量的工作量，而负突变较多的出现在偏高的剂量中，为保证有较高的筛选机率，因此选择死亡率在85%左右的超声波处理：处理时间为1 min。

超声波诱变筛选虾青素高产菌株刘艳1　李佳2　冯印1（1　长春科技学院，长春　130000；　2　辽宁省粮食科学研究所，沈阳　110000）摘　要　以CTD004为出发菌株，经超声波诱变，获得一株高产虾青素菌株，结果显示：此菌株在用20 kHz，200 w，工作电压200 v条件下处理30 s，虾青素的产量明显提高，诱变后虾青素产量为190.6 mg/L，比出发菌株增加了126.0 mg/L。

经5次传代培养，虾青素产量稳定。

关键词　虾青素；超声波；诱变中图分类号　Q 93 文献标志码　B作者简介：刘艳（1981-），讲师，主要从事发酵工程方面的研究。

收稿日期：2013-09-12栽培育种现将其栽培技术介绍如下。

１　种植模式小麦于10月上旬播种，并预留套种行，6月上旬收获；青蒜于小麦播种后采用地膜覆盖种于套种行内，12月开始收获，3月净地；地膜西瓜于3月底4月初育苗，5月上旬定植，7月上中旬成熟上市；三樱椒于西瓜定植后接着定植，9月末～10月上旬收获。

２　小麦栽培技术２．１　品种选择　因为是套种，应缩短共生期，品种应选择高产、优质、早熟综合抗性好的小麦品种，如周麦18、周麦22等。

２．２　整地播种　整地前施腐熟的有机肥或堆肥45～60 t/hm2，配合施用氮磷钾复合肥750 kg/hm2，锌肥15 kg/hm2，硼肥75 kg/ hm2，然后整地深耕25.0 cm以上，耙平耙细，准备播种，播种时每6行小麦预留1个套种行，小麦行距离22.0 cm，套种行宽80.0 cm，每个种植带的宽度为1.9 m，于10月上旬播种，播种深度为3.0～5.0 cm。

２．３　田间管理　小麦田间管理重在小麦返青，后视苗情进行追肥浇水，群体大时可推迟到起身拔节期；群体小时在返青后及时追肥浇水，以促进春季分蘖，提高有效穗数和产量，一般追施尿素30 kg/hm2，并注意浇好孕穗、灌浆水，另外在小麦开花后即进入灌浆期，应叶面喷施0.3%～0.5%磷酸二氢钾，每7 d喷小麦-青蒜-西瓜-三樱椒高效栽培技术李新荣（河南省周口市农业干部学校，河南周口　466000）摘　要　小麦-青蒜-西瓜-三樱椒种植模式是太康县在原有的小麦西瓜棉花种植方工的基础上改进而来，此种植模式不仅提高了复种指数和单位面积经济效益，又降低农业生产成本，极大地刺激了农民的生产积极性。

关键词　种植基础；种植模式；经济效益中图分类号　S651 文献标志码　B作者简介：李新荣（1974-），农艺师，从事农技推广工作。

收稿日期：2013-09-11２．２　三轮超声波诱变结果　通过表1可以看出，出发菌株CTD004经过三轮超声波诱变，处理条件为20 kHz，200 w，工作电压200 v，处理1min，在第三轮里CTD004-102-5-17菌株的产虾青素能力最高，为190.6 mg/L。

３　讨论CTD004出发菌株是假单胞菌属，是好氧微生物，经超声波处理后能改变菌株的细胞壁膜结构，加大菌株的通透性，使有利物质如氧气，碳源，及产物顺利进出，甚至是发生突变。

经超声处理的菌株CTD004-102-5-17，对其进行胞内及胞外虾青素含量测定，均比出发菌株产虾青素含量提高。

因此采用这种传统的生物物理学方法，不但生产出的产品安全无毒副作用，而且可以提高虾青素的产量。

参考文献[1]　徐学明，金征宇，刘当惠. 饲用色素虾青素的生产与应用.饲料工业，2002，21（2）：12-14.[2] GOMES J，KUMAR D. Production of L-methione by submergedfermentation： a review. Enzyme andMicrobial Technology， 2005， 37（1）： 3-18.[3]　许培雅，郑裕国，沈寅初. 分光光度法测定红发夫酵母中虾青素含量. 浙江工业大学学报，2001，6（29）：121～123.表１　超声波诱变结果诱变次数出发菌株诱变时间／ｍｉｎ致死率／%代表菌株虾青素含量（ｍｇ／Ｌ）第一轮ＣＴＤ００４１８４．２０%ＣＴＤ００４-１６８．３４ＣＴＤ００４-１０２７０．８９ＣＴＤ００４-１２３７６．２６ＣＴＤ００４-１３４５６．３２ＣＴＤ００４-１６８４９．７８第二轮ＣＴＤ００４-１１８５．３０%ＣＴＤ００４-１-１０７９．８０ＣＴＤ００４-１０２８４．７０%ＣＴＤ００４-１０２-５８９．４０ＣＴＤ００４-１２３８３．６０%ＣＴＤ００４-１２３-２８９６．４０ＣＴＤ００４-１３４８２．５０%ＣＴＤ００４-１３４-３５８７．５０ＣＴＤ００４-１６８８１．６０%ＣＴＤ００４-１６８-１８５．７０第三轮ＣＴＤ００４-１-１０１８２．２１%ＣＴＤ００４-１-１０-５１３５．６０ＣＴＤ００４-１０２-５８３．４１%ＣＴＤ００４-１０２-５-１７１９０．６０ＣＴＤ００４-１２３-２８８４．１１%ＣＴＤ００４-１２３-２８-３１６７．８０ＣＴＤ００４-１３４-３５８２．５７%ＣＴＤ００４-１３４-３５-６１８７．９０ＣＴＤ００４-１６８-１８０．５６%ＣＴＤ００４-１６８-１-２１１６９．８０。