青霉素高产菌株的理性筛选

选育青霉菌优势菌种的具体操作流程英文回答：To select advantageous strains of Penicillium, a specific procedure can be followed. The first step is to obtain a diverse collection of Penicillium strains from different sources such as soil, plants, or food products. These strains can then be cultured individually on appropriate media to obtain pure cultures.Once pure cultures are obtained, the next step is to screen the strains for desired characteristics. This can be done by assessing their ability to produce secondary metabolites with antimicrobial activity or other desirable traits. For example, if the goal is to find strains with high antibiotic production, a bioassay can be performed to test the inhibitory effect of each strain against a panel of bacteria or fungi.After the initial screening, the strains with the mostpromising characteristics can be selected for further evaluation. This can involve testing their ability to produce the desired metabolites under different growth conditions, assessing their stability and productivity over time, and evaluating their resistance to environmental stresses.In addition, it is important to consider the genetic diversity of the selected strains. This can be done by analyzing their DNA using techniques such as PCR or sequencing. By comparing the genetic profiles of the strains, it is possible to identify unique genetic markers that may be associated with the desired traits.Once the most advantageous strains have been identified, they can be further optimized through strain improvement techniques such as mutagenesis or genetic engineering. These techniques can be used to enhance the production of desired metabolites or to introduce new traits into the strains.Overall, the process of selecting advantageous strainsof Penicillium involves obtaining a diverse collection of strains, screening them for desired characteristics, evaluating their genetic diversity, and optimizing the selected strains through strain improvement techniques. By following this procedure, it is possible to identify strains with enhanced properties that can be used for various applications such as antibiotic production or bioremediation.中文回答：选择优势的青霉菌菌株可以按照以下具体流程进行。

青霉素发酵工艺流程青霉素是一种广谱抗生素，广泛应用于临床医学、畜牧养殖、农业等领域。

其制备过程主要是利用青霉菌进行发酵。

以下是青霉素发酵工艺流程的简要介绍。

首先，选用高产菌株进行繁种。

经过筛选和改良的青霉菌菌株具有较高的产青霉素能力。

通过筛选，从已有的菌株库中挑选出一个能够产生高效青霉素产量的菌株，进行培养扩大。

接下来，进行菌种扩大培养。

利用白垩液培养基培养菌种，保持培养基的稳定性。

菌种的培养过程中要注意控制温度、PH 值、氧气供应等因素。

控制好这些因素，就可以使菌种的增殖速度达到最大化。

进行主发酵。

将已经增殖好的菌种接种到主发酵罐中，添加适当的基质，如磷酸盐、蛋白胨等，提供菌体生长所需要的营养物质。

控制好温度、PH值、搅拌速度等因素，同时保证氧气供应充分，有利于菌体的生长和产生青霉素。

进行青霉素分泌期发酵。

在主发酵结束后，通过一定的处理方式，将菌体分离出来，损坏菌体，将菌体内的青霉素释放出来。

方法有机械破碎法、超声破碎法等。

进行青霉素提取和纯化。

提取过程主要是利用有机溶剂将青霉素从发酵液中提取出来。

纯化过程则是通过各种化学方法，如薄层层析、反渗透、离子交换等，去除杂质，提高纯度。

进行药品制剂。

经过提取和纯化后的青霉素需要进行制剂，使其成为适合临床使用的产品。

根据药物的性质和要求，选择合适的制剂方法和辅料，制备出片剂、注射液等型态的青霉素。

以上就是青霉素发酵工艺流程的基本步骤。

在实际生产中，这只是一个简化的流程，实际操作中还需要进行各种监测和控制，确保发酵过程中各项参数控制合适，从而提高产量和质量，并减少成本和废物产生。

青霉素发酵工艺的不断改进和优化，使得青霉素的产量和质量得到大幅提升，为人们提供了更好的抗生素选择。

青霉素高产菌株高通量检测和筛选方法的研究王丽丽;张春晓;刘晓红;陈晓波【摘要】Objective To estabolish a rapid penicillin titer detecting method to facilitate the high-throughput screening of penicillin-producing strains. Methods Penicillinase was employed to hydrolysis penicillin to penicillanic acid, which would react with iodine. Results The penicillin titer can be quantified within 10min at room temperature regardless of other by-products in the fermentation broth. In addition, and more than 200 samples can be simultaneously assessed by one operator within 10min. Conclusion This novel method provide a platform for highthroughput screening penicillin high producing strains.%目的:建立高通量筛选青霉素高产菌株的方法.方法:采用青霉素酶水解青霉素形成青霉噻唑酸,产物与碘液反应,以淀粉为指示剂,青霉素含量与碘液用量呈现良好的线性关系.结果:在室温条件下,不超过10min,可并行检测多个发酵液样品的青霉素含量,该方法简便、迅速、微量并且不受发酵液中其他杂质成分的干扰,也可在10min内对超过200个发酵液样品中的青霉素含量进行相对评估,淘汰90%以上的低效价菌株.结论:提供了高通量筛选青霉素高产菌株的方法.【期刊名称】《中国抗生素杂志》【年(卷),期】2011(036)003【总页数】4页(P183-186)【关键词】青霉素;青霉素酶;高通量检测;高通量筛选【作者】王丽丽;张春晓;刘晓红;陈晓波【作者单位】河北科技大学生物科学与工程学院,石家庄,050018;河北科技大学生物科学与工程学院,石家庄,050018;河北科技大学生物科学与工程学院,石家庄,050018;河北科技大学生物科学与工程学院,石家庄,050018【正文语种】中文【中图分类】Q319+.5青霉素生产离不开优良的菌株，各国科学工作者经过几十年的艰苦努力，不断选育优良菌种[1-3]，使生产水平逐步提高。

青霉素发酵操作规程青霉素是一种广泛应用于临床医学的抗生素，其生产主要依赖于霉菌发酵技术。

以下是青霉素发酵操作的规程：一、菌株选取与预处理1. 选择高产的青霉菌株，如青霉菌属（Penicillium）或念珠霉菌属（Aspergillus）。

2. 青霉菌株经过连续传代，筛选得到高产菌株。

3. 青霉菌株在含有20%葡萄糖的培养基中培养，温度为25-30摄氏度，pH为6.0-7.0。

4. 青霉菌株所用的贮藏物和传代培养基要消毒，以防止杂菌污染。

二、发酵培养基的配制1. 培养基的配制可采用以下配方：葡萄糖20g/L，麦芽粉20g/L，酵母粉2g/L，酵母浸粉10g/L，氨盐混合液100ml/L（含无机氮7.5g/L，有机氮1.5g/L），氢氧化锂0.5g/L，乳糖5g/L，氯化钠2g/L，柠檬酸二钠2g/L，硫酸镁 0.5g/L，纯水 1000ml。

2. 上述配方中的成分按比例称取粉末，加入适量纯水溶解，调节pH至6.0-7.0，然后加入适量纯水至最终体积。

三、发酵罐的消毒与接种1. 发酵罐内表面应经过严格的清洁和消毒，如用75%乙醇清洁，然后用蒸汽消毒至121摄氏度，压力为15磅/平方英寸，持续30分钟。

2. 青霉素发酵种子可采用液体或固体发酵培养基接种。

3. 液体接种：用适量的种子培养物接种进入消毒好的发酵罐中，接种量约为发酵罐容积的3-5%。

4. 固体接种：将适量的种子培养物加入消毒好的固体发酵培养基中，然后将其均匀分布在发酵罐内。

四、发酵条件的控制1. 温度控制：发酵初期温度设定为25摄氏度，后期升高至28-30摄氏度，根据青霉菌的生长和代谢情况可调整温度。

2. pH控制：发酵罐内的pH值通常为6.0-7.0，可通过添加适量的无机酸或碱来控制。

3. 溶氧控制：发酵罐内的溶氧量应保持在5-20%之间，可通过调节搅拌速度、气体流速来控制。

4. 搅拌速度：发酵初期的搅拌速度设定为200-300转/分钟，后期可增加至400-500转/分钟。

青霉素提取原始方法青霉素是一种重要的抗生素，广泛用于医疗和农业领域。

它的发现和提取方法对医学和生命科学领域有着深远的影响。

本文将介绍青霉素的提取原始方法，希望对相关领域的科研工作者和技术人员有所帮助。

首先，青霉素的提取需要合适的青霉菌菌株。

通常情况下，青霉素是由青霉菌属真菌产生的，因此需要从自然界或者实验室中获得合适的青霉菌菌株。

在实验室中，可以通过筛选和培养来获得高产青霉素的菌株，以便后续的提取工作。

其次，青霉素的提取需要合适的培养基和培养条件。

青霉菌在合适的培养基和培养条件下才能够高效产生青霉素。

一般来说，青霉菌的培养基中需要含有合适的碳、氮源以及一定的微量元素。

同时，培养条件包括温度、pH值、氧气供应等因素，都会对青霉素的产生产生影响，因此需要进行合理的调控。

接下来，青霉素的提取需要合适的提取方法。

目前常用的提取方法包括溶剂提取、离子交换树脂吸附提取等。

溶剂提取是将青霉素所在的培养液与有机溶剂进行萃取，然后通过浓缩和结晶得到青霉素。

而离子交换树脂吸附提取则是利用离子交换树脂对青霉素进行吸附和解吸，最终得到青霉素。

不同的提取方法适用于不同的情况，需要根据具体情况选择合适的提取方法。

最后，青霉素的提取需要进行纯化和检测。

提取得到的青霉素往往伴随着其他杂质，需要进行纯化工作以获得高纯度的青霉素。

纯化方法包括结晶、色谱等，可以根据需要选择合适的纯化方法。

同时，为了确保青霉素的质量和纯度，还需要进行相关的检测工作，包括质量分析、结构鉴定等。

总之，青霉素的提取是一个复杂而重要的工作，需要在菌株、培养条件、提取方法以及纯化检测等方面进行合理的设计和操作。

希望本文介绍的青霉素提取原始方法对相关领域的科研工作者和技术人员有所帮助，也希望大家在实践中能够不断总结和改进提取方法，为青霉素的应用和发展做出贡献。

青霉素生产工艺流程
《青霉素生产工艺流程》
青霉素是一种重要的抗生素，具有广谱的抗菌作用，被广泛应用于医疗和兽医领域。

青霉素的生产工艺流程经过多年的改进和优化，已经变得非常高效和可靠。

青霉素的生产过程通常包括以下几个主要步骤：
1. 青霉素菌株的筛选和培养：首先需要从大量的霉菌中筛选出高产青霉素的菌株，然后通过发酵技术将这些菌株进行大规模培养。

培养过程中需要控制好温度、pH值、氧气和营养盐的
供应，以保证霉菌的生长和产酸。

2. 青霉素的提取：当青霉素产量达到一定水平后，需要对发酵液进行提取。

常用的提取方法包括溶剂萃取、树脂吸附和离子交换等。

这些方法可以有效地将青霉素从发酵液中提取出来，并去除其他的杂质。

3. 青霉素的纯化和结晶：提取出的青霉素需要进行进一步的纯化和结晶，以提高其纯度和稳定性。

这一步通常包括多次结晶、过滤和干燥等操作，最终得到结晶度高、纯度高的青霉素粉末。

4. 青霉素的包装和贮存：最后，生产出的青霉素粉末需要进行严格的质量监控和包装，然后存放在干燥、阴凉的环境中，以确保其质量和稳定性。

总的来说，青霉素的生产工艺流程经过多年的发展和完善，已经变得非常成熟和高效。

通过严格控制每一个生产环节，可以生产出高质量的青霉素产品，为人类健康事业做出贡献。

青霉素菌株的培育原理青霉素是一种由霉菌产生的抗生素，广泛用于临床医学中的抗感染治疗。

青霉素的生产首先需要培养出高产量的青霉素菌株。

本文将介绍青霉素菌株的培育原理，包括菌株的选育、培养基的选择和优化，以及培养条件的控制等方面。

青霉素菌株的选育是培养高产量青霉素的关键步骤。

选育青霉素菌株主要是通过从自然环境中筛选或基因改造的方法得到的。

自然环境中有很多能产生青霉素的霉菌，如盘尼西林蓝霉菌(Penicillium chrysogenum) 和秋霉(Penicillium notatum) 等。

这些菌株可以通过传代培养或继代培养得到高产青霉素的菌株。

培养基的选择和优化是培育青霉素菌株的重要步骤。

培养基是提供菌株生长所需的营养物质和环境条件的基础。

对于青霉素菌株的培养，需要使用一种含有碳源、氮源、无机盐和生长因子等的培养基。

常用的培养基有复合碳氮盐培养基(complex carbon-nitrogen-salt medium) 和液态发酵培养基(liquid fermentation medium) 等。

在培养基中添加适当的激素和辅酶等物质，可以促进菌株的生长和产生青霉素的能力。

培养条件的控制也是培养青霉素菌株的关键因素。

青霉素的生产需要适宜的温度、pH值、氧气浓度等环境条件。

一般来说，适宜的温度范围是20-28摄氏度，但不同的菌株可能有不同的最适温度。

pH值通常在5-7之间，过高或过低的pH 值都会影响青霉素的产量。

此外，适宜的氧气浓度也是促进青霉素产量的重要因素。

一般来说，青霉素的产量在高氧气浓度下会较低，而在较低的氧气浓度下会较高。

除了上述因素外，培养青霉素菌株还需要注意以下几点。

首先，培养容器和培养方式的选择也会影响青霉素的产量。

常用的培养容器有培养瓶、发酵罐等，而培养方式包括液态发酵和固态发酵等。

其次，菌株的接种量、培养时间和采样方式等也需要根据具体情况进行调整。

最后，外界环境的卫生和操作的注意事项也会对菌株的培养产生重要影响。

生产青霉素的利用原理青霉素是一种抗生素药物，被广泛应用于临床医疗和疾病治疗。

它的生产利用原理是通过培养和利用青霉菌（Penicillium）属真菌菌株的代谢产物来得到。

青霉素的生产首先需要选取高产菌株。

在实际应用中，主要选择Penicillium chrysogenum和Penicillium notatum多个种类的真菌为产生青霉素的菌株。

高产菌株的选取是通过筛选大量的菌株并进行菌株变异，然后通过测定菌株产生的青霉素的量来确定。

青霉素的生产过程可分为以下几个主要步骤：1. 选取合适的培养基：青霉素的生产需要营养丰富的培养基。

典型的培养基包括糖类（如葡萄糖）、氮源（如氨基酸、酵母提取物等）、无机盐（如钠、钾、镁、磷等）和合适的pH值等。

2. 温度和通气条件的控制：青霉菌的生长和产量受到温度和通气条件的影响。

一般来说，青霉菌的生长温度为25-28，适宜的通气条件为充分供氧，通气速度适中，保持适当的培养液搅拌使之保持均匀。

3. 青霉素的产生：真菌经过不断生长和增殖后，菌落会分泌出青霉素。

青霉素是一种次级代谢产物，通常在真菌处于生长或繁殖的末期时产生。

为了增加青霉素的产量，青霉菌的生长过程通常会通过操作和处理来进行调节。

例如，添加一定的诱导剂、抑制剂或通过调节培养基中的氨基酸浓度来促进青霉素的生成。

4. 提取和纯化：经过一段时间后，菌落中积累的青霉素将导致胞外产物增加，此时就可以进行青霉素的提取和纯化。

青霉素的提取一般使用溶剂法，通过分离菌体和培养液，将青霉素与其他废物分离开。

提取后，青霉素需要进行纯化处理，以去除其他污染物和杂质。

纯化工艺通常包括沉淀、过滤、浓缩等步骤。

5. 质量控制和包装：提取和纯化后的青霉素需要进行质量检验，以确保符合药品的相关标准。

常见的质量控制项目包括抗菌活性测试、微生物限度测试、有害杂质检验等。

通过严格的质量控制，确保青霉素产品符合应用要求。

同时，对合格的青霉素进行包装，以确保其在贮存和运输过程中的稳定性和安全性。

青霉素降解的菌株筛选及分子机理解析前言：青霉素是一种广泛应用的抗生素，在人类医疗和畜牧业生产中具有重要的地位，但是它的过度使用也会带来很多的问题。

作为地球村的一员，我们需要不断探索青霉素在生态系统中的降解机制，以期为人类的健康和环境保护作出更大的贡献。

一、青霉素降解的菌株筛选1. 重要性青霉素分子结构复杂，它的降解需要微生物群落协同作用。

因此，在对青霉素进行生物降解研究时，需要考虑微生物群落的生态特征和共生机制。

2. 筛选过程青霉素降解的菌株筛选涉及从环境中分离出微生物，并进行形态特征、生理生化特性、16S rRNA序列和降解特性等方面的分析。

3. 筛选结果经过长时间的筛选和鉴定，目前已经发现多种可以降解青霉素的菌株，包括：酸杆菌（Acinetobacter）、放线菌（Actinomycetes）、假单胞菌（Pseudomonas）等。

二、青霉素降解的分子机理解析1. 青霉素的分子结构青霉素是由β-内酰胺环扩展和侧链改变而成的类似物，具有芳香环、酰胺键和侧链等结构。

2. 青霉素的降解代谢途径青霉素在微生物体内经过水解、酯化、羟化等多步反应，最终被分解成为较简单的物质，其中包括：芳香性羧酸、硫酸盐、腈、醛、酮等。

3. 青霉素降解的分子机理青霉素降解的分子机理涉及多个关键酶的调节和协作作用，包括：β-内酰胺酶、UDP葡糖醛酸酰化酶、羧酸化酶等。

具体地说，β-内酰胺酶通过水解β-内酰胺环扩展；UDP葡糖醛酸酰化酶可使降解代谢物被修饰为类似糖苷的化合物，利于后续的异化和甲基化反应；羧酸化酶是降解代谢的重要步骤，它能够将芳香环上的羧基转化为羧酸，从而有利于降解代谢物的稳定性和易溶性。

三、青霉素降解的实际应用1. 生态环保青霉素作为抗生素类药物，其过度使用会对环境和生态造成潜在威胁。

而发现青霉素降解的菌株和探究其降解分子机理，将有助于制定更加可持续的环保政策和优化现有的农业、畜牧业生产技术。

2. 新型材料的制备青霉素的降解代谢物中包含多种含氮、含氧、含硫等官能团，这些官能团可以用于合成新型的聚合物、纳米材料、离子液体等，具有重要的科研和工程应用价值。

青霉素菌种选育的新方法
青霉素是一种广泛应用于临床的抗生素，但由于细菌的耐药性不断增强，传统的青霉素菌种选育方法已经难以满足临床需求。

因此，科学家们正在不断探索新的青霉素菌种选育方法，以提高青霉素的疗效和治愈率。

近年来，基因编辑技术的发展为青霉素菌种选育带来了新的机遇。

科学家们通过基因编辑技术，可以精准地修改细菌的基因组，使其具有更强的抗药性和更高的产药能力。

例如，科学家们可以通过基因编辑技术，将青霉素合成途径中的关键基因进行改造，使其产生更多的青霉素，或者使其对抗药物的能力更强。

此外，人工智能技术的应用也为青霉素菌种选育带来了新的思路。

科学家们可以通过人工智能技术，对大量的细菌基因组数据进行分析和挖掘，找到与青霉素合成相关的基因，从而筛选出具有更高产药能力的菌株。

这种方法不仅可以提高青霉素的产量，还可以减少对环境的污染和资源的浪费。

除此之外，生物学家们还在探索其他的青霉素菌种选育方法。

例如，利用微生物共生的方式，将青霉素合成途径中的关键基因转移到其他微生物中，从而产生更多的青霉素。

此外，还有一些生物学家正在研
究利用植物和动物的共生菌株，来产生更高效的青霉素。

总之，青霉素菌种选育是一个复杂而重要的领域，科学家们正在不断
探索新的方法和技术，以提高青霉素的疗效和治愈率。

基因编辑技术、人工智能技术、微生物共生等方法都有着广阔的应用前景，相信在不
久的将来，我们将会看到更多的青霉素菌种选育的新方法的出现。

青霉素的生产工艺流程青霉素，又称青霉素素，是一种广谱抗菌药物，被广泛应用于临床治疗感染疾病。

青霉素的生产工艺流程主要包括菌种选育、培养、分离提纯和精制等步骤。

首先是菌种选育。

常用的产青霉素菌种有青霉菌、盘尼西林菌等。

通过对不同菌种进行筛选和培养，筛选出高产青霉素的菌株作为生产用菌种。

接下来是培养。

选育的菌株被接种到培养基中进行大规模的发酵培养。

培养基中的组成物质和培养条件对菌株的生长和产青霉素的产量有着重要影响。

培养过程中需要控制温度、pH值、氧气供应等参数，以保证菌株的生长和产青霉素的稳定。

随后是分离提纯。

菌种培养完成后，通过分离提纯的步骤，筛选出存在于发酵液中的青霉素产物。

一般的分离提纯方式包括离心、超滤、浓缩、结晶等。

这些步骤的目的是将青霉素与其他杂质分离开来，得到纯度较高的青霉素产物。

最后是精制。

经过分离提纯得到的青霉素产物，还需要进行精制工艺，进一步提高其纯度和质量。

精制工艺主要包括结晶、干燥、粉碎等步骤。

通过这些工艺步骤，得到的青霉素产品质量更高，可以满足医药工业的要求。

青霉素的生产工艺流程是一个复杂而精细的过程。

在整个过程中，需要严格控制各个环节的条件和参数，以确保产出的青霉素产品质量稳定、纯度高。

同时，还需要保证生产过程的卫生和安全，防止细菌、污染物等危害产物的产生。

随着科技的不断进步，生产工艺流程也在不断改进和优化。

通过新技术的应用，可以提高青霉素的产量和纯度，减少生产成本，推动抗生素生产的发展。

总的来说，青霉素的生产工艺流程包括菌种选育、培养、分离提纯和精制等步骤。

这些步骤的顺利进行，可以保证生产出质量优良的青霉素产品，用于临床疾病的治疗。

青霉素的生产对于维护人类健康具有重要意义，需要高度重视和合理管理。

青霉素⾼产菌株的理性筛选遗传育种与⽣物合成⽂章编号:1001-8689(2007)07-0403-02青霉素⾼产菌株的理性筛选娄忻　张莉　刘靓　张⽟莲　陈丽华　刘静　贺建功(华北制药集团新药研究开发有限责任公司　微⽣物药物国家⼯程研究中⼼,　⽯家庄050015)摘要:　以青霉素⽣产菌种87117#为出发菌种,采⽤紫外线诱变复合前体动态后处理的⽅法,结合限氧条件下的摇瓶筛选,从177⽀前体抗性株中筛出XY -137#⾼产突变株。

该菌株摇瓶效价平均提⾼了8.8%,且遗传特性稳定,单位菌丝产物合成能⼒强。

XY -137#菌株在百吨罐中经过近百批的⽣产验证,其放罐效价、发酵指数、罐批产量平均提⾼了3.83%、5.66%和2.69%。

关键词:　紫外诱变;　动态后处理;　理性筛选;　青霉素⾼产菌株中图分类号:T Q 465.1 ⽂献标识码:ARational screening of penicillin high producing strainLo u Xin,　Zhang Li,　Liu Liang,　Zhang Yu-lian,　Chen Li-hua,　Liu Jing and H e Jian-g ong(N ew Dr ug R&D Co.,L td of N or th China Phar macentical Co rp.,N ational Eng ineering Resear ch Center of M icro bial M edicine ,　Shijiazhuang 050015)ABSTRACT U sing Penicillium chry sogenum #87117as starting strain ,a penicillin high yield str ain #XY-137w as obtained by U V irr adiation com bined w ith precurso r-resistant strain in shake flask selection metho d under lim ited o xygen.Penicillin potency of strain #XY-137w as increased by 8.8%cultured in shaking flasks.Average pr oductivity o f about 100batches ferm entation level w as increased by 2.69%～5.66%than that of strain #87117in 100-ton ferm entor .KEY WORDS U V m utagenesis;　Dynamic po st-treatment;　Rational screening ;　Penicillin high-pr oducing strain收稿⽇期:2007-03-15 修回⽇期:2007-05-08作者简介:娄忻,⼥,⽣于1963年,⾼级⼯程师。

青霉素高产菌株的培育原理青霉素是一种重要的抗生素，广泛应用于临床医学领域。

为了提高青霉素的产量，需要培育出高产菌株。

青霉素高产菌株的培育原理主要涉及四个方面：基因筛选，优化培养条件，代谢工程和遗传改造。

1. 基因筛选基因筛选是通过筛选出具有青霉素高产潜力的微生物菌株。

常用的筛选策略包括：•亲和筛选法：利用青霉素对微生物的抑制作用，将微生物菌株培养于含有青霉素的培养基上，观察哪些菌株能够生长并形成抑制圈的菌落。

•抗性筛选法：将一种或多种对青霉素抗性基因导入到微生物菌株中，并在含有青霉素的培养基上培养，观察哪些菌株能够生长。

•高通量筛选法：利用基因组学和转录组学的高通量技术，对大量的微生物菌株进行筛选，鉴定并克隆与青霉素合成相关的基因。

基因筛选的目标是选出具有高青霉素合成潜力的菌株，为后续的培养条件优化和代谢工程提供基础。

2. 优化培养条件优化培养条件是提高青霉素产量的关键步骤。

常见的优化方法包括：•培养基优化：通过优化培养基的配方，如碳源、氮源、矿盐和pH值等，来提高细胞生长和代谢活性。

•培养条件调控：控制培养温度、pH、氧气供应和搅拌速度等条件，以提高细胞生长速度和代谢产物的积累。

•添加辅助物质：如添加青霉素前体、诱导剂、辅助酶等，以促进青霉素的合成。

•产量监测和调控：通过检测菌体内青霉素产量的变化，了解其合成规律，并根据需要进行调控。

培养条件的优化旨在为高青霉素产量的菌株提供适宜的生长环境，促进青霉素的合成。

3. 代谢工程代谢工程是通过改造微生物的代谢途径，增强青霉素合成的能力。

主要包括：•基因表达调控：通过调控青霉素合成相关基因的表达，使其在合成途径中起到更重要的作用。

•代谢途径优化：通过改造青霉素生物合成的关键酶或代谢途径，提高酶的催化能力和底物利用效率。

•异源基因导入：导入其他微生物中的相关基因，增加青霉素合成途径的多样性和复杂性。

代谢工程的目标是改造微生物的代谢途径，增强青霉素的合成能力，提高其产量。

一株高产果胶酶青霉菌株的筛选鉴定蓝丽精;周琴;蔡琪敏;董夏梦;汪鹏荣;蒋冬花【摘要】从淤泥中筛选、分离纯化,得到了一株高产果胶酶的青霉菌株,编号为L5.根据培养特征、形态特征和内转录间隔区(ITS)序列分析,将L5菌株鉴定为草酸青霉菌(Penicillium oxalicum).该菌株在28℃,pH 6.0,摇床转速160 r/min条件下培养70 h,其果胶酶活性可达39 940 U·mL-1·min-1.%A high-yield pectinase strain L5 was screened from sludge. It was identified as Penicillium oxali-cum by morphological observation, and internal transcribed spacer (ITS) sequence analysis. This strain was cultured at the condition of 28 ℃ , pH 6. 0, 160r/min for 70 h, its pectinase activity re ached to 39 940 U · mL-1 · min -1 .【期刊名称】《浙江师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(034)004【总页数】5页(P452-456)【关键词】果胶酶;酶活性;草酸青霉;筛选【作者】蓝丽精;周琴;蔡琪敏;董夏梦;汪鹏荣;蒋冬花【作者单位】浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004;浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004;浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004;浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004;浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004;浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004【正文语种】中文【中图分类】Q93能够分解果胶质的酶称作果胶酶(pectinase)［1］．该酶可分为:原果胶酶、裂解酶(PL)、多聚半乳糖醛酸酶(PG)和果胶酯酶(PE)［2］．相应地，测量酶活性的方法也有很多，如滴定法、黏度下降法、脱胶作用时间法、还原糖测定法、紫外吸收测定法等．本实验酶活性测定均采用还原糖测定法中的 3，5-二硝基水杨酸(DNS)法［3］．果胶酶主要应用于食品加工业，在纺织、环境保护、饲料加工、生物制浆、木材防腐等行业中也有广泛的应用［4］．文献［5］还研究了草酸青霉(Penicillium oxalicum)果胶酶的诱导抗病作用．果胶酶主要由微生物和植物合成．微生物中的真菌、放线菌和细菌［6］都能产生果胶酶的相关酶系．目前国内外研究与应用较多的是细菌和霉菌，其中黑曲霉(Asperillus niger)是国际公认的安全菌株，所以最受关注［7］．此外，酵母菌［8］、链霉菌和根霉［9］等也有相关的报道，而关于草酸青霉(Penicillium oxalicum)的相关报道甚少，草酸青霉(Penicillium oxalicum)产果胶酶的液体发酵更是鲜有报道．果胶酶的传统工业化生产主要采用固体发酵法，但液体发酵法具有发酵条件参数易于测量、再现性强、易于控制等优点．本实验从污泥中筛选到一株高产果胶酶的草酸青霉，运用液体发酵法对其酶活性进行了相关研究．1 材料和方法1．1 菌株来源以从山东、四川、海南、浙江等地采集的土壤、昆虫、动物内脏、腐烂水果等100多份样品为材料，分离筛选获得高产果胶酶菌株．1．2 培养基1)马铃薯葡萄糖培养基(PDA):马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂 15 ～20 g，水 1 000 mL，pH 6．0．2)产果胶酶筛选培养基:果胶30 g，NaNO3 3 g，K2HPO4·3H2O 3．3 g，KCl 0．5 g，Fe2(SO4)3 0．01 g，(NH4)2SO420 g，MgSO40．24 g，CaCl2 0．15 g，KH2PO43．8 g，琼脂粉20 g，溴酚蓝0．2 g，水1 000 mL，pH 6．0．3)摇瓶种子培养基:果胶4 g，(NH4)2SO4 1 g，KH2PO43．8 g，K2HPO4·3H2O 0．2 g，水 100 mL，pH 6．0．4)摇瓶基础培养基:桔皮粉4 g，米糠4 g，(NH4)2SO41 g，KH2PO43．8 g，K2HPO4·3H2O 0．2 g，水 100 mL，pH 6．0．1．3 初筛取适量土样、昆虫、腐烂果实等磨碎后加无菌水，于28℃培养24 h，然后取0．1 mL培养液进行涂布，培养3 d．产果胶酶的菌落着生的蓝色培养基有黄色水解圈生成，挑取水解圈明显的菌落进行复筛［10］．1．4 复筛在筛选培养基中挑取水解圈大的单菌落，通过测定和计算其变色圈直径和菌落生长圈直径的比值(Dp/Dc)进行复筛．在培养皿的中心分别接入初筛获得的菌种，接种后培养皿置28℃恒温培养箱中培养3 d．测量各菌落生长圈的直径Dc和变色圈的直径Dp，选择Dp/Dc值较大的菌种备用，最终选取一株果胶酶活性高的菌株进行实验．1．5 摇瓶培养将复筛获得的菌种经PDA斜面培养后，用无菌水配成1．0×106的孢子悬浮液，取2 mL(摇瓶装液量的5%)接入种子摇瓶培养基中，回转式摇床转速为160 r/min，28℃培养24 h后，取3．2 mL(摇瓶装液量的8%)种子液接入摇瓶培养基中继续培养70 h．摇瓶装液量均为250 mL三角瓶中装40 mL．1．6 粗酶液的提取发酵液在4℃，10 000 r/min离心10 min，取上清液作为粗酶液．1．7 酶活性测定采用 3，5-二硝基水杨酸(DNS)法［3］测定酶活性．吸取0．2 mL适当稀释的酶液于试管中，加1．8 mL 0．4%的果胶底物溶液，50℃水浴反应30 min后，加2 mL DNS试剂终止反应，沸水浴10 min，冷却后蒸馏水定容到15 mL，摇匀．空白对照:吸取0．2 mL煮沸的稀释酶液于试管中，加2 mL DNS试剂和1．8 mL 0．4%的果胶底物溶液，50℃水浴反应30 min，沸水浴10 min，冷却后蒸馏水定容到15 mL，摇匀．在540 nm波长处测定吸光度．在上述反应体系中，以每毫升果胶酶液降解果胶底物1 min产生1 μg还原糖定义为1个酶活性单位．1．8 培养时间对产果胶酶的影响取3．2 mL(摇瓶装液量的8%)种子液接入40个250 mL装液量为40 mL的三角瓶内，160 r/min，28℃摇瓶培养，每隔2 h取样．接着，将菌体一并用滤纸过滤，然后用烘箱于50℃烘至恒重，再用分析天平称菌丝体干质量．实验重复3次．1．9 菌种鉴定1．9．1 培养和形态特征观察将菌株在PDA培养基平板上培养3 d，用显微镜观察其菌丝、分生孢子梗、分生孢子等特征．1．9．2 DNA提取与ITS序列分析取PDA培养基平板上培养3 d的新鲜菌丝体50 mg，加液氮研磨成粉末，用试剂盒提取DNA．利用真菌通用引物 ITS1:5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'和ITS4:5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'进行rDNA的内转录间隔区(ITS)序列扩增，测序由上海生物工程有限公司完成．将测得的ITS序列在GenBank数据库进行BLAST比对，通过同源性分析对菌株进行分子水平的鉴定．2 结果2．1 产果胶酶菌株的分离筛选利用产果胶酶的菌株可以使加溴酚蓝的培养基产生黄色水解圈的原理，本实验从土壤、腐烂水果等生境复筛得到黄色水解圈较大的7株霉菌(见图1和图2)，对其进行Dp/Dc值及酶活性的测定，结果见表1．图1 筛选所获部分菌落图(a)L1;(b)L2;(c)L3;(d)L4;(e)L6;(f)L7图2 L5菌株的培养特征和形态特征表1 7株产果胶酶菌株的Dp/Dc值和酶活性比较images/BZ_173_258_405_2083_472.pngL1 1．6 0．6 2．67 36 148 L2 2．7 1．0 2．70 30 935 L3 1．9 0．7 2．71 32 235 L4 2．9 1．2 2．42 22 204 L5 2．8 1．0 2．80 39 940 L6 2．5 0．9 2．78 32 598 L7 2．8 1．2 2．33 18 032由表1可以看出，菌株的酶活性随着Dp/Dc值增大而增大，L5菌株的Dp/Dc值最高，相应的酶活性为39 940 U·min－1·m L－1．L5 菌株是从浙江东阳荷塘淤泥中筛选得到的．图2(a)为L5菌株在溴酚蓝筛选培养基上的黄色水解圈照片．2．2 培养时间对L5菌株产果胶酶的影响对每隔2 h取样得菌体进行干质量测量，并绘制生长曲线见图3．由图3可知:将菌体从种子培养基中接入摇瓶培养基约需0～10 h的停滞期;接着10～24 h，菌丝生长，菌体质量进入对数期;其后曲线趋于平缓，24～68 h是菌体质量的稳定期;从68 h始，菌体开始自溶，进入衰亡期．每隔2 h测量一次L5菌株产生的果胶酶酶活性，以酶活性为纵坐标、培养时间为横坐标绘制曲线(见图3)．由图3可知:在2～70 h内，L5菌株产果胶酶的活性逐渐上升，在菌体稳定期结束时酶活性达到最大值39 940 U·min－1·mL－1;在76～80 h内，果胶酶的活性下降．图3 L5菌株的生长曲线2．3 L5菌株的分类鉴定2．3．1 形态学鉴定1)培养特征:PDA培养基上，28℃培养3 d即形成较典型的菌落，菌落中间呈蓝绿色，边缘为白色，直径约19 mm，轮廓规则，外观呈绒毛状．2)形态特征:28℃ PDA培养基上培养3 d，显微镜下观察L5菌株的菌丝形态、分生孢子梗的分枝情况、帚状枝及瓶梗的类型等显微形态特征．由图2可见:菌丝细胞丝状交织，具横隔;分生孢子梗不具足细胞，帚状枝为对称双轮型，瓶梗细长渐变尖锐;分生孢子椭圆形，呈蓝绿色．2．3．2 ITS的PCR扩增与序列分析用真菌通用引物ITS1/ITS4对L5菌株进行PCR扩增，获一长度为572 bp的目的片段．将测序所得序列在美国国立生物技术信息中心(NCBI)进行BLAST比对和同源性分析，结果表明L5菌株的ITS序列与Penicillium oxalicum同源性最高达99%．基于L5菌株的ITS序列建立的系统发育树见图4，结合形态特征鉴定，将L5菌株鉴定为草酸青霉菌(Penicillium oxalicum)［11］．图4 基于L5菌株的ITS序列建立的系统发育树3 讨论与结论果胶酶的研究应用迄今已有70多年的历史，其用途广泛，现阶段产量已是世界四大酶制剂之一，而中国现有的生产果胶酶工艺存在着很多问题，如固体发酵成本高、生产率低、易染菌等．面对国外果胶酶产品的优势，我国必须利用丰富的微生物资源，研究新的生产工艺，加紧筛选出拥有自主知识产权、低成本、无污染、满足市场需求的商业化果胶酶．本研究从污泥中筛选得到一株高产果胶酶的菌株，对其进行了形态学鉴定，并对其进行了ITS测序，确定其为草酸青霉菌．该菌的ITS序列基因已登录GenBank，登录号为:HQ680452．本研究利用浙江来源丰富的桔皮和米糠作为摇瓶培养基材料，研究表明:该菌株在28℃，培养基初始pH 6．0，转速160 r/min的条件下，培养70 h果胶酶活性最高，可达39 940 U·min－1·mL－1;并且，该菌株利用成本低廉、天然、含果胶的植物材料为培养基，不仅实现了废物再利用，也可以使其高产．可见，对该菌株的研究具有潜在的意义，其应用前景广阔．参考文献:［1］李祖明，张洪勋，白志辉，等．微生物果胶酶研究进展［J］．生物技术通报，2010(3):42-49．［2］Soriano M，Diaz P，Pastor F I．Pectinolytic systems of two aerobic sporogenous bacterial strains with high activity on pectin［J］．Current Microbiology，2005，50(2):114-118［3］武莹浣，叶汉英．果胶酶微生物筛选和酶活测定方法研究［J］．食品与机械，2010，26(2):57-60．［4］薛长湖，张永勤，李兆杰，等．果胶及果胶酶研究进展［J］．食品与生物技术学报，2005，24(6):94-99．［5］彭霞薇，谢响明，白志辉，等．草酸青霉BZH-2002果胶酶系的纯化及其诱导抗病作用［J］．应用与环境生物学报，2006，12(6):750-753．［6］Soares M M C N，Da S R，Carmona E C，et al．Pectinolytic enzyme production by Bacillus species and their potential application on juiceextraction［J］．World Journal of Microbiology and Biotechnology，2001，17(1):79-82．［7］张红霞，江晓路，牟海津，等．微生物果胶酶的研究进展［J］．生物技术，2005，15(5):92-95．［8］Blanco P，Sieiro C，Diaz A，et al．Short communication:Differences between pectic enzymes produced by laboratory and wild-type strains of Saccharomyces cerevisiae［J］．World Journal of Microbiology and Biotechnology，1997，13(6):711-712．［9］Saito K，Kawamura Y，Oda Y．Role of the pectinolytic enzyme in the lactic acid fermentation of potato pulp by Rhizopus oryzae［J］．Journalof Industrial Microbiology and Biotechnology，2003，30(7):440-444．［10］张浩森，缪静，余晓斌．果胶酶高产菌株的筛选及产酶条件的研究［J］．生物学杂志，2008，25(1):28-30．［11］魏景超．真菌鉴定手册［M］．上海:上海科学技术出版社，1979．。

青霉素菌的分离和筛选土壤中青霉素菌的分离和筛选（一）实验目的1、了解采集土样的要求和方法。

2、掌握由土壤中分离稀有放线菌的基本原理和操作技术。

3、学习并掌握微生物的纯培养技术。

(二)实验原理采用适宜(选择)培养基和培养条件，或加入某种抑制剂有利于目标微生物的生长，从而分离获得目标微生物的纯培养：常用稀释平板分离法和划线分离法在固体培养基上形成单个菌落。

抗生素（antibiotics）是由微生物（包括细菌、真菌、放线菌属）或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其它活性的一类次级代谢产物，能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质青霉素属于青霉素类抗生素，干扰细菌细胞壁的合成而产生抗菌作用。

（三）实验材料1含菌种的土壤，学校旁边的土层中获取2.复筛实验菌种：金黄色葡萄球菌，曲霉3.培养基和试剂：高氏一号培养基，高氏一号初筛培养基（含青霉素），试剂：青霉素，硝酸钾，氯化钠，重铬酸钾，4.实验器材：无菌试管，烧杯，移液管，三角瓶,天平,接种环，高压锅灭菌锅,显微镜.（四）实验步骤1.培养基配制①：高氏一号改良培养基：可溶性淀粉20g，硝酸钾1g,氯化钠0.5g，K2HPO4 ?3H2O 0.5g，MgSO4?7H2O 0.5g，FeSO4?7H2O 0.01g，琼脂20g，水1000ml，终浓度为50×10-5重铬酸钾，pH7.2～7.4。

配制时，先用冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000ml。

112℃灭菌20分钟。

冷却后，倒致平版数个。

②：初筛培养基：改良高氏一号培养基（在原来配置的高氏一号琼脂培养基灭菌后，再分别加入青霉素终浓度为10-3，10-4，10-5的药剂），倒致平版数个2.样品采样：取样时应取土壤表层下5～10cm处土样，干后混匀；3 制备稀释液：（1）. 称取土壤1g（或量取1nl水样），放入99mL无菌水的三角瓶中，振荡10min，即为稀释10－2的土壤悬液。

高产青霉菌的育种方法青霉菌是一种广泛应用于工业中的微生物，其代表菌种为青霉属（Penicillium）。

其中，青霉菌 Penicillium chrysogenum 是广泛应用的一种菌株，它可以产生青霉素等抗生素。

育种方法是培育高产的菌株的重要途径之一。

本文将介绍高产青霉菌育种的方法。

1.菌株的保存与筛选首先，要从已存在的菌株中挑选出适合育种的菌株。

在保存时，可将其用保鲜膜或瓶盖密封后，在4℃的冰箱中保存。

此外，为了筛选出合适的高产菌株，应对分离的菌株进行生长速率、代谢产物以及生物量等多个方面进行分析，筛选代谢产物含量高、生长速率快、生物量大的菌株。

2.遗传变异当已筛选出可用菌株后，可通过化学物质或电磁辐射等方法对其进行遗传变异。

具体方法包括：用致突变剂，如乙酰胺、尿素或亚硝酸钠等化学物质，或电磁辐射来引起基因突变。

这样，突变的菌株会在生长产生变异，产生高产代谢产物的菌株便能被筛选出来。

3.基因工程基因工程是将合成的DNA片段作为外源基因导入细胞内的一种方法，常用于改良微生物。

对高产菌株进行基因工程，可把生产抗生素所需的酵素基因导入高产菌株中，以提高其产量。

此外，还可利用基因重组技术得到可产生定点变异的菌株，并通过限制性内切酶和DNA连接酶来完成基因片段的克隆。

4.培养条件的优化培养条件对菌株的生长和代谢产物的产量有着重要的影响。

优化培养条件是获得高产菌株的关键。

在培养过程中，可根据不同菌株的需求适当调整培养介质的 pH 值、温度、气体浓度、养分等因素，以提高其生长和产量。

总之，高产青霉菌的育种需要通过多种方法进行筛选和选择，以达到最优的产量。

同时，需要通过科学合理的培养方法对其进行优化，最终获得高产菌株，从而为工业生产提供优质的原料。

试题答案分析四种育种⽅法的⽐较如下表：杂交育种诱变育种单倍体育种多倍体育种⽅法杂交→⾃交→选优辐射诱变、激光诱变、化学药剂处理花药离体培养、秋⽔仙素诱导加倍秋⽔仙素处理萌发的种⼦或幼苗原理基因重组基因突变染⾊体变异（染⾊体组先成倍减少，再加倍，得到纯种）染⾊体变异（染⾊体组成倍增加）诱变育种⼀般采⽤的⽅法有物理和化学两类：如射线照射、亚硝酸等．①航天育种是诱变育种，利⽤失重、宇宙射线等⼿段诱发⽣物基因突变．②诱变育种具有的优点是可以提⾼突变率，缩短育种周期，以及能⼤幅度改良某些性状．缺点是成功率低，有利变异的个体往往不多；此外需要⼤量处理诱变材料才能获得所需性状．解答解：选育青霉素⾼产菌株时，可⽤⼀定剂量的X射线处理青霉素菌株，使其发⽣基因突变，从⽽获得⾼产菌株，属于诱变育种．故选：B．点评本题考查育种⽅式以及原理的相关知识，意在考查学⽣的识记能⼒和判断能⼒，运⽤所学知识综合分析问题的能⼒．分析四种育种⽅法的⽐较如下表：杂交育种诱变育种单倍体育种多倍体育种⽅法杂交→⾃交→选优辐射诱变、激光诱变、化学药剂处理花药离体培养、秋⽔仙素诱导加倍秋⽔仙素处理萌发的种⼦或幼苗原理基因重组基因突变染⾊体变异（染⾊体组先成倍减少，再加倍，得到纯种）染⾊体变异（染⾊体组成倍增加）诱变育种⼀般采⽤的⽅法有物理和化学两类：如射线照射、亚硝酸等．①航天育种是诱变育种，利⽤失重、宇宙射线等⼿段诱发⽣物基因突变．②诱变育种具有的优点是可以提⾼突变率，缩短育种周期，以及能⼤幅度改良某些性状．缺点是成功率低，有利变异的个体往往不多；此外需要⼤量处理诱变材料才能获得所需性状．解答解：选育青霉素⾼产菌株时，可⽤⼀定剂量的X射线处理青霉素菌株，使其发⽣基因突变，从⽽获得⾼产菌株，属于诱变育种．故选：B．点评本题考查育种⽅式以及原理的相关知识，意在考查学⽣的识记能⼒和判断能⼒，运⽤所学知识综合分析问题的能⼒．。