食用菌母种转管 实验

实验五母种、原种接种扩大培养（板书用）一、实验目的熟悉母种、原种接种操作技能。

二、实验材料和用具接种箱或超净工作台，恒温培养箱，接种钩（针），酒精灯，镊子、、火柴，记号笔，记录本，75％酒精及棉球、95％酒精，母种试管斜面，灭菌好的原种培养基。

三、实验步骤与方法1.无菌测定灭菌后的培养基，随机抽出数支斜面试管培养基，置25—28℃的温箱中培养3天，培养基表面仍光滑，无杂菌出现，证明灭菌彻底，即可供接种使用。

2.接种操作过程无菌操作要点：①无菌箱在启用前先灭菌，将待接种的斜面试管、酒精灯、火柴、接种针等放入箱内，紫外线照射半小时以上。

超净工作台则要先灭菌20分钟。

②双手洗净。

打开工作灯，将双手伸入接种箱内，点燃酒精灯。

用75%酒精的棉球擦拭双手，擦拭方向由前向后。

③左手平托两支试管，拇指按住试管底部，外侧一支是供接种用的菌种试管，内侧一支是待转接母种的斜面试管，两支试管的斜面都应朝上。

右手持接种钩，将接种钩的顶端烧红，并将整条接种柄在火焰上过几次灭菌。

④将两支试管的管口部分靠近火焰，用右手同时夹住两个棉塞。

拔掉两支试管的棉塞，并立即以火焰灼烧管口，并适当转动。

操作过程在不离酒精灯火焰一寸远处进行。

⑤用冷却的接种钩，在长满菌丝的斜面挖取少许菌丝及培养基，然后轻轻抽出试管。

迅速伸进待接试管中，将种块置于培养基的中部，盖好塞子。

接种过程中，应注意保持试管与桌面平行，不要远离酒精的火焰，周而复始。

一支母种可扩接20—25支试管。

贴上标签（或用记号笔），注明菌种或菌株名称及日期。

⑥原种接种：3．菌种培养接好种的试管和原种，放在25℃条件下培养，每隔2-3天检查一次。

遇有杂菌的试管要及时选出，以免污染其他试管。

7～10天后菌丝就可长满试管。

原种30天左右长满。

作业：归纳原种和试管种的接种全过程。

实验五母种接种扩大培养一、实验目的通过对接种箱常规消毒、斜面试管培养基母种(即一级种)接种和培养，基本熟悉母种接种操作技能。

食用菌栽培技术综合性实验植物生产国家级实验教学示范中心《食用菌栽培技术综合性实验》实验项目一览表序号123实验名称原种、栽培种的培育菌种保藏及复壮平菇袋栽建议学时数2学时2学时4学时每组人数4人4人4人克雷姆斯兰县/可以选克雷姆斯兰县克雷姆斯兰县克雷姆斯兰县实验一、原种、栽培种的培育一、实验教学目的能制作适宜培养料，独立完成接种前的准备工作，用无菌操作法准确进行原种、栽培种的接种。

并通过培养观察，分析自己的接种结果。

二、实验基本原理母种、原种、栽培种都是具有统一血缘关系的祖孙三代，品性相同，只是越来越多，越来越健壮。

菌种生产就是从母种开始，到栽培种为止。

原种和栽培种的培育方法基本相同，只是在接种时接的菌种级别不一样。

两菌种培养基的配方可以相同，也可有所区别，由于栽培种经过了母种及原种两次的驯化，其培养基可比原种培养基更粗放些。

三、所牵涉的课程及知识点在该实验中，涉及到了农学类和生物学类专业教学计划中设置的部分专业基础课、专业课，如微生物学（菌丝降解纤维素等，…）、仪器分析(……)，……四、仪器设备及实验材料1.器具：菌种瓶、棉塞、打孔棒、菌种袋、接种耙、大镊子、酒精灯、火柴、酒精棉球、标签、高压灭菌锅、接种箱、消毒药品等。

2．材料：棉籽壳、麸皮、蔗糖、石灰粉、过磷酸钙、母种、原种等。

五、实验内容与方法（一）实验内容1、培养料的配制2、菌种瓶及菌种袋的灌装3、原种的注射4、栽培种的注射（二）方法步骤两菌种的生产过程基本相同，主要区别是注射时取接的菌种不一样。

1.培养基的酿制（1）配方与配制①颗粒培养基（麦粒、玉米粒等）配方：粮食粒98.5%，石膏粉1%，碳酸钙0.5%。

酿制：将晒干的粮食粒晒干，用1%石灰水泡胀，文火煮熟15～20min(甜而狗屎，勿破皮)，捞起晾晒至并无明水后拌入余料。

原种多采用颗粒培养基。

②棉籽壳麦麸培养基配方：棉籽壳87%，麦麸10%，白糖1%，石灰1%，过磷酸钙1%。

配制：将棉籽壳、麦麸、石灰混合为主料，余料溶解于少量水后浇入主料中。

一、实验目的1. 掌握母种转管及培养的基本操作流程；2. 熟悉无菌操作技术，确保菌种纯度；3. 了解食用菌母种在培养过程中的注意事项，提高菌种繁殖能力。

二、实验原理母种转管及培养是指将原始菌种接种到培养基上，经过一定时间的培养，使其繁殖成一定数量的菌丝体，以便进行后续的菌种扩繁和栽培。

无菌操作技术是保证菌种纯度的重要手段。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：马铃薯、葡萄糖、琼脂、水、食用菌菌种、无菌试管、无菌培养基、酒精灯、接种针、接种环、镊子、酒精棉球、火焰炉、培养箱等。

2. 实验仪器：天平、三角瓶、烧杯、漏斗、玻璃棒、剪刀、棉花、线绳、牛皮纸、皮筋、纱布等。

四、实验步骤1. 培养基配制（1）称取马铃薯200g，去皮，切成小块，加水1200-1300ml，煮沸20min；（2）用双层纱布过滤，取滤液1000ml；（3）将滤液加热至将沸腾时，加入琼脂15-20g，不断搅拌；（4）待琼脂完全溶解后，加入葡萄糖20g，搅拌均匀；（5）用精密pH试纸检测pH值，调整至自然pH值；（6）将培养基分装到无菌试管中，每管约10ml，塞上棉塞；（7）将试管置于高压蒸汽灭菌器中，121℃灭菌30min。

2. 接种（1）将灭菌后的试管取出，待其冷却至室温；（2）用火焰炉烧灼接种针、接种环，待其冷却；（3）用接种针从原始菌种中挑取少量菌丝，接种到无菌培养基上；（4）用火焰炉烧灼接种针、接种环，待其冷却；（5）将接种后的试管放入培养箱中，25℃恒温培养。

3. 转管（1）待菌丝长满试管斜面后，用火焰炉烧灼接种针、接种环，待其冷却；（2）用接种针将菌丝挑取到新的无菌培养基上；（3）将接种后的试管放入培养箱中，25℃恒温培养。

4. 培养与观察（1）定期观察菌丝生长情况，记录菌丝生长速度、颜色、形态等；（2）发现杂菌感染时，及时挑除；（3）待菌丝长满试管斜面后，即可进行后续的菌种扩繁和栽培。

五、实验结果与分析1. 在实验过程中，严格按照无菌操作技术进行操作，确保菌种纯度；2. 通过观察菌丝生长情况，发现菌丝生长速度较快，颜色正常，无杂菌感染；3. 经过转管培养，菌丝繁殖能力得到提高。

食用菌菌种母种1级种简法复制创新技术食用菌母种1级种简法复制创新技术摘要：食用菌菌种母种1级种简法复制创新技术，是利用优质的极品食用菌脱毒菌种母种试管在全敞开式无菌开放条件下进行菌丝体试管50倍扩管、分离移植、简法复制的生产创新技术。

具有生产工艺简单、操作技术便捷、原料易得、成本低廉、经济适用等技术创新优势，食用菌从业者和创业者均可无门槛的复制应用和受益。

该创新技术是湖北省宜都市湾市食用菌天麻繁育场技术总监胡文华研发成功的。

关键词：食用菌母种 1级菌种培养基复制创新技术概述：食用菌菌种1级母种的复制生产是食用菌从业者和创业者的入门技术。

由于该入门技术除了高昂的生产设备投入之外，还需要繁杂的技术工艺和精湛的操作技能作为支撑，因而一直留存于科研院所和少数食用菌科研工作者手里，使众多食用菌从业者和终端生产者望而生畏，只有花重金购买。

湖北省宜都市湾市食用菌天麻繁育场技术总监胡文华，经过30多年研发成功的食用菌菌种复制简法生产创新技术，其复制生产创新工艺和操作技能已经简化到了简单得不能再简单的程度，任何食用菌从业者和食用菌终端生产者均可无条件的简法复制创新生产，驱动了食用菌产业创亿万财富之梦想。

现将其简法复制创新生产技术介绍如下：1. 食用菌菌种母种试管培养基简法复制生产1食用菌菌种1级母种（18毫米×180毫米玻璃试管装，简称试管母种，下同）培养基使用的原料是马铃薯、葡萄糖、琼脂（简称PDA培养基），以及在PDA培养基中再添加蛋白胨等价格昂贵的物质原料成为“加富培养基”，其工艺繁杂，生产操作费时费力。

食用菌菌种母种试管培养基简法复制生产采用湖1北3省8宜72都市52湾市33食用58菌天麻繁育场技术总监胡文华发明的“广谱通用型食用菌菌种培养基生产技术”。

这种广谱通用型食用菌菌种培养基以颗粒型谷物为原料，谷粒、麦粒、玉米粒均可，简称颗粒培养基（下同），又称天然无公害培养基。

这种颗粒培养基制作方法特别简单，取谷粒、麦粒、玉米粒一种或多种，与胡文华发明的食用菌种包衣剂混合均匀后，就可以分装试管了。

实验一食用菌分类与形态观察•目的: 了解食用菌分类方法, 学会观察食用菌形态结构。

•材料: 各种伞菌的新鲜子实体（香菇、平菇、金针菇、茶树菇、白灵菇、杏孢菇、白平菇）, 子囊菌的干品, 野生食用菌的标本。

平菇、香菇的孢子印。

分类参考书, 显微镜等。

•方法：1.取新鲜子实体观察伞菌的结构, 绘图说明。

2.观察平菇孢子印颜色、大小、形状。

•完成下列表中内容。

食用菌分类与形态观察表1. 中生2. 偏生3. 侧生4. 无菌柄5。

圆柱形 6. 棒状7. 纺锤形8. 棒锤形9. 分枝状10. 基部联合11. 基部膨大呈球形12. 基部膨大呈臼状13. 菌柄扭转14. 基部延长呈假根状圆形 2. 半圆形 3. 圆锥形 4. 卵圆形 5. 钟形 6. 半球形7. 斗笠形8. 匙形9. 扇形10. 漏斗形11. 喇叭形12. 浅漏斗形13. 圆筒形14. 马鞍形1. 子囊菌门盘菌目羊肚菌科(子囊果具蜂窝形或吊钟形菌盖)块菌目块菌科和地菇科角菌目麦角、虫草2. 担子菌门木耳目、银耳目、花耳目属于胶质菌类,非褶菌目、伞菌目鬼笔目和马勃目属于腹菌类实验二母种培养基制作一、实验目的掌握斜面试管培养基的配制、消毒与灭菌等制作过程, 为菌种转管、组织分离制作母种打下基础。

二、常用培养基配方1. 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)去皮马铃薯200克, 葡萄糖20克, 琼脂20克, 水1000毫升, pH自然。

2.PDA综合培养基去皮马铃薯200克, 葡萄糖20克, 琼脂20克, 磷酸二氢钾3.0克, 硫酸镁1.5克, 维生素B10.05克, 水1000毫升, pH自然。

三、实验材料和用具天平、电炉, 18×180毫米试管, 止水夹。

纱布, 棉塞, 牛皮纸, 皮筋, 手套、菜板、刀、恒温箱, 三角漏斗、支架（每组一套）。

手提式高压灭菌锅。

马铃薯、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂等。

四、实验步骤与方法1. PDA培养基的配制2. 装管、捆把3. 灭菌锅内加适量水→灭菌物品放内锅→加热→压力表0.05Pa 时放气→压力表1.15Pa (121-126℃)时计时30分钟。

食用菌的实验实验一母种培养基的制作一、本次实验的目的和要求学会母种培养基的配制方法，了解食用菌母种制作的工艺流程和制作母种的基本技能。

二、实验内容或原理母种培养基配制。

工艺流程：培养基配方培养基的配制分装试管理灭菌摆斜面三、需用的仪器或试剂等仪器：接种箱或超净工作台、高压灭菌锅、电炉、天平、试管、试管架、漏斗、漏斗架、橡皮管、玻璃管。

试剂：、马铃薯、葡萄糖、琼脂等。

四、实验步骤1.培养基配方以PDA培养基为例，马铃薯（去皮）200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml。

为经强化营养或准备保藏菌种，可添加KH2PO43g、MgSO4.7H2O1.5g、VB110mg。

2.培养基配制首先将马铃薯去皮、洗净、挖去芽眼、切成薄片，称取200 g，放入铝锅中用1000ml清水加热煮沸，维持20min左右，煮至软而不烂为止。

用双层湿沙布过滤，然后取滤液并补足蒸发损失的水分。

再加入琼脂继续加热泪，待琼脂溶化后，添加葡萄糖及其它成分，搅拌均匀后准备装管。

3.分装试管培养基配制后应趁热分装。

装管时勿使管内外壁沾上溶液，以免浸湿棉塞，污染杂菌。

装管后塞上棉塞。

棉塞的大小、松紧度应适宜，以用手提棉塞、试管不脱落为准。

然后每10支度试管扎成一捆，棉塞上方用牛皮纸包好，避免灭菌时被水蒸汽浸湿。

4.灭菌灭菌前将水加至锅内水位标记高度。

将试管放入锅内，盖上锅盖，对角旋紧锅上螺旋，并闭排气阀，开始加热，当锅内蒸汽大量排出时再继续排汽3-5 min，关闭放气阀。

当压力表指针指到0.15 Kg/cm2时（灭菌所需压强）开始计时，继续维持该压强30min。

灭菌结束持压力表指针自然回到”0”位时打开放汽阀，排出锅内剩余蒸汽后，打开锅盖。

注意切忌在压力表未到”0”位时就放汽，以免试管内的培养基向上冲浸湿棉塞，造成以后菌种的污染。

5、摆斜面当培养基的温度降到60℃时，将试管斜面放在木棒上，使呈斜面，斜面的长度以占试管长度的1/2为宜。

实验一母种培养基配制（4 学时）一、实验目的掌握固化培养基的配制，学会棉塞的制作方法。

分析有天然原料与无天然原料培养基在配制过程中的不同。

二、基本技能训练内容制备马铃薯滤液；融化琼脂；培养基的分装；棉塞的制作。

三、主要仪器设备与材料天平、称量纸、牛角匙、精密pH 试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、漏斗架、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、棉花、线绳、牛皮纸、皮筋、纱布、电炉、菜刀、菜板、小铝锅等；马铃薯、葡萄糖或蔗糖、麸皮、琼脂、水。

四、实验方法1、配方（PDA）:马铃薯200g，葡萄糖20g,琼脂15~20g,自来水1000ml, pH自然。

2、制作方法1）制滤液：马铃薯去皮和芽眼，切成0.5mm粗的长条，称取200g放入锅中，加水1000ml, 将其煮沸后再文火煮20min。

用双层纱布过滤，滤液用水定容至1000ml。

2）化琼脂：将滤液加热至即将沸腾时加入琼脂，不断搅拌（控制火力不要使培养基溢出或烧焦）。

琼脂完全融化后加入剩余原料，并使其溶解（用热水不足水量）。

3）分装：通过漏斗装置，趁热将培养基分装于试管中，装量约占试管高度的1/4（分装三角瓶以不超过其容积的一半为宜）。

管口或瓶口不要沾染培养基。

4）制棉塞：棉花以白色长绒的不脱脂棉花为宜。

根据试管口大小取棉花，将其卷成棉塞，最好外包一层纱布。

将棉塞塞入试管口。

棉塞长度约6~7cm，塞入试管2/3。

要求外表光滑，外包的纱布无皱折，松紧适宜等。

5）包扎：管口堵入棉塞后7 或9 支试管扎一捆，棉塞部分用牛皮纸包扎。

在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。

五、实验报告要求完成实验报告、详细记录培养基配制过程，并回答分装的技术要求有哪些？实验二母种的转管与组织分离（2 学时）一、实验目的清楚无菌操作要点，熟练操作母种转管、组织分离技术。

能正确分析自己的接种结果。

二、基本技能训练内容接种环境的处理；母种的转管；组织分离。

三、主要仪器设备与材料超净工作台、酒精灯、接种环、火柴、尖头镊、酒精棉球、大镊子、75%酒精、标签纸等；空白斜面培养基、平菇母种、平菇子实体等。