实验7 食用菌母种的制作与转管技术

食用菌母种制作的两种简易方法
一、灰树花母种制作
1. 收集准备
选择新鲜的床树花，将彩色的花芯拆开，将母种和母粉分离出来，然后收集并保存在干燥的玻璃杯中。

2.加工加工
将母粉放入清水中浸泡2~3小时，然后用手轻轻挤压，将母粉中的器官质质因子都细化拌和均匀，待水质变得透明后即可取出。

3.蒸煮蒸煮
将母粉放入不锈钢锅中，将水添加到母粉的一半位置，然后加入适量盐及其他调料，浓度不应过于浓稠，并将温度调节到90~100℃，蒸煮数小时，直到母粉颜色发生变色，再加入适量的植物油使其更加香，即熟母粉即可回收。

二、松露母种制作
1.收集准备
选择新鲜的松露，将其细切粉末，并加入少量水混合成浆，导出松露的母种。

2.提取精粹
将提取的母种放在碗里，过滤掉母粒状的淤泥，然后将其加入少量水重复搅拌，分离母粉与母粒，然后用一滤纸将母粉过滤至精粹完成。

3.蒸煮母粉
将精粹放入不锈钢锅中，然后加入水、盐、酱油等调料，并加入植物油以香，将温度控制在90~100℃，不时的翻动内容物蒸煮30分钟，再加入少量冷水即可取出。

做出的母粉可直接拌入食物中食用。

食用菌母种的制作方法：培养基配制，灭菌、菌种分离、培养及管理一、食用菌菌种瓶的选择用100毫升医用盐水瓶代替试管作盛装培养基的容器。

二、培养基的配制1．配方：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂18～20克，水1000毫升。

2．制作：马铃薯挖去芽眼，去皮洗净，切成薄片后加水，在铝锅中煮沸25～30分钟，用4层纱布过滤，取滤液放入铝锅中，加入琼脂，小火加热并不断搅拌，待琼脂溶化后加入葡萄糖，加开水补足1000毫升，搅匀，趁热装入盐水瓶中，每瓶装8～10毫升，塞上棉塞棉塞要求干燥、松紧、长度合适，再用牛皮纸包住棉塞及瓶口部分，用胶圈扎紧瓶口。

三、灭菌采用高压灭菌，若没有专用高压锅，可用家用高压锅进行灭菌。

方法是：将装好培养基的菌种瓶放置在高压锅中，瓶间留有空隙，不可堆放过紧，以利蒸汽循环，灭菌彻底。

当压力表指针指到0．05时，打开放气阀，集中排出冷空气，使压力降到零时，关闭排气阀进行升压灭菌，自动放气后保持30分钟家用普通高压锅灭菌1．5小时，让其自然冷却，取出放置在接种箱中备用。

四、菌种分离主要采用组织分离法。

通常是从食用菌子实体内部分离纯菌种，操作时，从子实体内切取一小块组织，放在培养基中培养可长出纯菌种，且菌丝萌发快，遗传性状稳定，后代不易发生变异。

1．种菇消毒：种菇采下后，切去菌柄，放入洗净的盘内，在装有紫外灯的接种箱内照射20～30分钟。

2．接种块切取：在已消毒的接种箱内，撕开子实体，用经酒精灯火焰杀菌冷却的小刀，在菌柄与菌盖交接处内部切取黄豆大小组织块，放入菌种瓶内培养基上培养。

3．接种块选择部位：接种块选择部位因食用菌种类不同而异，菇体肥厚的种菇，在菌盖外缘菌盖皮和菌褶交接处切取组织块进行分离。

菌体小、盖薄、柄空的菌类如金针菇，应快速击掉菌盖，用接种针钩取菌柄顶端生长点组织进行分离。

菌肉极薄菌柄中空孢子不易萌发的伞菌类，可采用子实层分离法，选取半破膜的子实体，移入培养基上，菌丝萌发后即转入新的培养基上。

一般食用菌母种(一级种)制作母种制作的基本工艺流程为母种(由科研单位、大专院校、菌种保藏专门机构引进)一培养基制备一接种一培养检查一成品。

(一)常用培养基及配方培养基是食用菌菌种生长所需营养的基质。

培养基要具备四个条件，第一，要含有所培养的菌株生长所需要的各种营养物质，如糖类、有机氮、矿物质等。

第二，所含养分浓度和状态要利于食用菌的吸收和利用。

如食用菌母种培养基使用葡萄糖的浓度多在2％左右，过高和过低都不利于菌丝的生长；食用菌对氮素的吸收优先吸收有机氮，因此，原种和栽培种的培养基中应添加有机氮源，如麦麸、米糠等。

第三，要有适宜的酸碱度(pH)，食用菌多数喜偏酸性，pH5.0～6.5。

第四，经过严格灭菌，保持无菌状态。

这最后一点是要通过灭菌才能达到的，然而，灭菌的高温能破坏培养基中的许多化学成分，并能降低pH。

这一点必须在配制时就考虑到。

这就要求从使用的营养型药品试剂上，要尽量选用热稳定性好的种类，配制时，灭菌前的pH要略高于使用时所需的适宜酸碱度。

一般高压蒸汽灭菌0．1～0．12兆帕30分钟，培养基的pH下降0．1～0．3。

高压灭菌切勿压力过高，时间过长，以利培养基保持良好的营养和适宜的pH。

目前食用菌母种生产上使用的都是固体培养基，以琼脂(洋菜)为凝固剂，琼脂的用量从10～24克不等，这依琼脂的质量而定，使用时用量要参考产品使用说明书。

此外，当制作相同培养基时，高温季节要较常量多用些，以利凝固，低温季节可按常量使用；较酸的培养基也要较pH较高的培养基琼脂用量多些。

1．通用培养基通用培养基有多种配方，几乎通用于各类食用菌，常用的配方如下：(1)PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基) 马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，琼脂10或20克，水1升。

(2)综合马铃薯培养基马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水1升。

(3)马铃薯麦麸综合培养基马铃薯200克，麦麸100克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水1升。

食用菌母种生产技术食用菌母种生产技术母种生产主要包括培养基制备、纯种分离或转管扩大、培养等环节。

一、母种培养基制备1.母种培养基常用配方（1）PDA培养基：马铃薯(去皮，下同)200克，葡萄糖20克，琼脂18-20克，水l000毫升。

（2）加富PDA培养基①综合PDA培养基：马铃薯200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，维生素B110毫克，琼脂18-20克，水1000毫升。

②蛋白胨－综合PDA培养基：在加富PDA培养基①中添加5克蛋白胨。

③麦麸－PDA培养基：在培养基（1）中添加100克麦麸。

④麦芽汁－PDA培养基：在培养基（1）中添加50克大麦芽。

（3）鲜蘑菇浸出液培养基：鲜蘑菇200-250克，葡萄糖20克，琼脂18-20克，水1000毫升。

将蘑菇切碎，煮30分钟，取其液汁。

（4）粪汁培养基：干马粪或牛粪150克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000毫升。

将马粪或牛粪打碎，煮沸30分钟，取其溶液。

（5）完全培养基（CM）培养基：蛋白胨2克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾0.46克，硫酸镁0.5克，磷酸氢二钾1克，琼脂18-20克，水1000毫升。

2.母种培养基制作方法不同配方培养其制作方法基本相同，现以综合PDA培养基为例介绍其制作方法。

（1）培养基制作。

将土豆洗净、去皮、挖去芽眼及变青绿部分，称取200克，切成约长宽各2厘米厚3毫米左右的薄片，在1200毫升水煮沸10－15分钟，然后用4－6层纱布过滤，倒掉残渣并洗净铝锅。

将滤液倒入锅内，加清水补足 1000毫升，同时放入琼脂并重新开始加热，最好小火加热，不断搅拌至琼脂完全溶化，再用纱布过滤一次，补水至1000毫升。

最后依次将称好的葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和维生素加入，继续加热并搅拌至全部溶化，停止加热。

如果要加入蛋白胨需将蛋白胨用冷水溶化后加入，可以避免蛋白胨因结块而分散不均。

图3－11 试管分装（2）分装试管。

左手持3-4支试管，管口朝上，令下端整齐，上移试管至漏斗软管，插入试管内约3厘米。

一、实验目的1. 掌握母种转管及培养的基本操作流程；2. 熟悉无菌操作技术，确保菌种纯度；3. 了解食用菌母种在培养过程中的注意事项，提高菌种繁殖能力。

二、实验原理母种转管及培养是指将原始菌种接种到培养基上，经过一定时间的培养，使其繁殖成一定数量的菌丝体，以便进行后续的菌种扩繁和栽培。

无菌操作技术是保证菌种纯度的重要手段。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：马铃薯、葡萄糖、琼脂、水、食用菌菌种、无菌试管、无菌培养基、酒精灯、接种针、接种环、镊子、酒精棉球、火焰炉、培养箱等。

2. 实验仪器：天平、三角瓶、烧杯、漏斗、玻璃棒、剪刀、棉花、线绳、牛皮纸、皮筋、纱布等。

四、实验步骤1. 培养基配制（1）称取马铃薯200g，去皮，切成小块，加水1200-1300ml，煮沸20min；（2）用双层纱布过滤，取滤液1000ml；（3）将滤液加热至将沸腾时，加入琼脂15-20g，不断搅拌；（4）待琼脂完全溶解后，加入葡萄糖20g，搅拌均匀；（5）用精密pH试纸检测pH值，调整至自然pH值；（6）将培养基分装到无菌试管中，每管约10ml，塞上棉塞；（7）将试管置于高压蒸汽灭菌器中，121℃灭菌30min。

2. 接种（1）将灭菌后的试管取出，待其冷却至室温；（2）用火焰炉烧灼接种针、接种环，待其冷却；（3）用接种针从原始菌种中挑取少量菌丝，接种到无菌培养基上；（4）用火焰炉烧灼接种针、接种环，待其冷却；（5）将接种后的试管放入培养箱中，25℃恒温培养。

3. 转管（1）待菌丝长满试管斜面后，用火焰炉烧灼接种针、接种环，待其冷却；（2）用接种针将菌丝挑取到新的无菌培养基上；（3）将接种后的试管放入培养箱中，25℃恒温培养。

4. 培养与观察（1）定期观察菌丝生长情况，记录菌丝生长速度、颜色、形态等；（2）发现杂菌感染时，及时挑除；（3）待菌丝长满试管斜面后，即可进行后续的菌种扩繁和栽培。

五、实验结果与分析1. 在实验过程中，严格按照无菌操作技术进行操作，确保菌种纯度；2. 通过观察菌丝生长情况，发现菌丝生长速度较快，颜色正常，无杂菌感染；3. 经过转管培养，菌丝繁殖能力得到提高。

实验一母种培养基的制作一、本次实验的目的和要求学会母种培养基的配制方法,了解食用菌母种制作的工艺流程和制作母种的基本技能.二、实验内容或原理母种培养基配制.工艺流程：培养基配方培养基的配制分装试管理灭菌摆斜面三、需用的仪器或试剂等仪器：接种箱或超净工作台、高压灭菌锅、电炉、天平、试管、试管架、漏斗、漏斗架、橡皮管、玻璃管.试剂：、马铃薯、葡萄糖、琼脂等.四、实验步骤1.培养基配方以PDA培养基为例,马铃薯〔去皮〕200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml.为经强化营养或准备保藏菌种,可添加KH2PO43g、MgSO4.7H2O1.5g、VB110mg.2.培养基配制首先将马铃薯去皮、洗净、挖去芽眼、切成薄片,称取200 g,放入铝锅中用1000ml清水加热煮沸,维持20min左右,煮至软而不烂为止.用双层湿沙布过滤,然后取滤液并补足蒸发损失的水分.再加入琼脂继续加热泪,待琼脂溶化后,添加葡萄糖及其它成分,搅拌均匀后准备装管.3.分装试管培养基配制后应趁热分装.装管时勿使管内外壁沾上溶液,以免浸湿棉塞,污染杂菌.装管后塞上棉塞.棉塞的大小、松紧度应适宜,以用手提棉塞、试管不脱落为准.然后每10支度试管扎成一捆,棉塞上方用牛皮纸包好,避免灭菌时被水蒸汽浸湿.4.灭菌灭菌前将水加至锅内水位标记高度.将试管放入锅内,盖上锅盖,对角旋紧锅上螺旋,并闭排气阀,开始加热,当锅内蒸汽大量排出时再继续排汽3-5 min,关闭放气阀.当压力表指针指到0.15 Kg/cm2时〔灭菌所需压强〕开始计时,继续维持该压强30min.灭菌结束持压力表指针自然回到"0”位时打开放汽阀,排出锅内剩余蒸汽后,打开锅盖.注意切忌在压力表未到"0”位时就放汽,以免试管内的培养基向上冲浸湿棉塞,造成以后菌种的污染.5、摆斜面当培养基的温度降到60℃时,将试管斜面放在木棒上,使呈斜面,斜面的长度以占试管长度的1/2为宜.冷却后即成斜面培养基.五、教学方式以分组的形式进行实验、讨论六、考核要求掌握母种培养基的配制比例与高压灭菌方法.根据提交的实验报告、实验过程与结果,评分方式为优、良、中、及格、不及格.七、实验的报告要求要求有观察记载数据,完成实验报告与作业.实验二菌种的分离与培养一、本次实验的目的和要求掌握母种转管继代培养技术,了解食用菌制作母种的基本技能.二、实验内容或原理本实验以组织分离为例进行菌种分离与培养,工艺流程：种菇的选择与消毒组织块的切取菌丝培养三、需用的仪器或试剂等仪器：接种箱或超净工作台、解剖刀、牛角勺、棉花、纱布、酒精灯等.试剂：75%酒精、高锰酸钾、富尔马林等.四、实验步骤菌种的分离与培养〔本实验以组织分离为例〕种菇的选择与消毒选择出菇早,菇形正,菇盖肥厚,具有该品种特征,无病虫害、无杂菌污染,子实体八九分成熟的作为种菇.种菇选定后,用75%酒精进行表面消毒.组织块的切取将斜面培养基放进接种室、接种箱或超净工作台内,用紫外灯〔或化学药品〕进行消毒0.5h以上,关闭紫外灯后20min后,再开始进入接种室内进行接种.接种是一项技术性很强的工作,需要在无菌的环境中以无菌操作方法进行接种,才能减少污染.无菌操作是接种过程中最基本的操作方法,要求操作熟练,动作迅速.用无菌刀在菇柄或菇盖中部纵切一刀,然后用手将菇体掰成两面三刀半,在菌柄和菌盖交界处用刀切取0.3-0.5cm2的小方块组织,将其移接到试管内培养基的中央,将其移接到试管内培养基的中央.菌丝培养接种后置于25℃恒温箱中培养,2-3天后可见组织块周围发生白色绒毛状菌丝,此时每天要检查杂菌污染情况.培养7-10天后,菌丝即可长满斜面. 观察记载详细观察比较母种菌丝生长发育动态,计算出平均每天菌丝生长速度.菌落的直径〔mm〕-菌种块直径〔mm〕试管内菌丝生长的速度= 菌落生长的时间〔d〕观察母种菌丝的表面形态特征.通过镜检,观察菌丝细胞核的变化规律及锁状联合的形成.五、教学方式以分组的形式进行实验、讨论六、考核要求要求组织分离成功率在50%以上.根据提交的实验报告、实验过程与结果,评分方式为优、良、中、及格、不及格.七、实验的报告要求要求有观察记载数据,完成实验报告.实验三原种与栽培种制作一、本次实验的目的和要求学会原种与栽培种培养基的配制方法,掌握原种与栽培种的接种技术,了解食用菌原种与栽培种制作的工艺流程和制作的基本技能.二、实验内容或原理1.原种与栽培种培养基配制工艺流程：培养基配料→装瓶〔或装袋〕→灭菌→冷却→接种2.掌握原种与栽培种的接种操作技术接种箱消毒→器械消毒→无菌接种→菌丝培养三、需用的仪器或试剂等仪器：接种箱、高压灭菌锅、750毫升广口瓶、酒精灯、接种勾等.试剂：75%酒精、气雾消毒剂、棉籽壳、木屑、麸皮、石膏粉、棉花等.四、实验步骤1.配方本实验以棉籽壳为主料培养基为例.配方为：棉籽壳78%,麦麸或米糠20%,过磷酸钙1%,蔗糖1%.2.拌料先根据要做原种的数量,算出各种原料的用量,然后称量、混合,加水拌料.混给予时,先将棉籽壳和玫麸混合在一起,过磷酸钙和糖混溶在拌料用的水中.拌料时,边加水边搅拌,边测试含水量.3.含水量的测定拌好料后,用手抓一把培养料,捏在手中紧握,手指缝中有水印但以水不往下滴为适,此时含水量为62%-64%.4.装瓶将拌好的培养料装入原种瓶或塑料袋中央,边装边压实〔但不得过紧〕,一直装到瓶肩处为宜.5.擦瓶将瓶口和瓶外粘的培养料擦掉,以免接种后污染杂菌.6.封口用棉塞塞住瓶口或用透气膜包住瓶口,再包一层防潮纸〔或牛皮纸〕,用线绳将瓶口扎好,准备灭菌.7、灭菌灭菌方法同母种的灭菌方法,压强为1.4-1.5Kg/cm2 ,1.5-2.0h8、接种挑取母种培养基一小块,置于原种或栽培种培养基中央孔边,随即按原样封口.9、菌丝培养接种后的原种,置于25℃的培养室培养.3-5天后菌丝即可恢复生长.5-7天菌丝开始伸入培养基内.当菌丝长满瓶后,即可直接分移栽培种,栽培种菌丝长满面瓶后,需要养菌1-2周,以增加菌丝量及增强菌丝活力后,再用于生产.10.观察记载观察原种菌丝的表面形态特征.五、教学方式以分组的形式进行实验、讨论六、考核要求掌握原种与栽培种培养基的料水比例与高压、常压蒸汽灭菌方法,要求原种与栽培种成功率在90%以上.根据提交的实验报告、实验过程与结果,评分方式为优、良、中、及格、不及格.七、实验的报告要求要求有观察记载数据,完成实验报告.实验四食用菌栽培技术一、本次实验的目的和要求学会平菇或金针菇栽培袋的的制作方法,掌握其出菇管理技术.二、实验内容或原理1.平菇或金针菇栽培袋制作工艺流程：栽培原料配制→装袋→灭菌→冷却→搬入接种室→接种室消毒→接种→适温培养菌丝2、出菇管理：控温→调温→通风→采收→补水三、需用的仪器或试剂等仪器与设备：接种箱、高压灭菌锅或常压灭菌灶、接种铲、酒精灯.试剂：75%酒精、气雾消毒剂、棉籽壳、木屑、麸皮、石膏粉等.四、实验步骤1.配方本实验以棉籽壳为主料培养基为例.配方为：棉籽壳78%,麦麸或米糠20%,过磷酸钙1%,蔗糖1%.2.拌料先根据要做原种的数量,算出各种原料的用量,然后称量、混合,加水拌料.混给予时,先将棉籽壳和玫麸混合在一起,过磷酸钙和糖混溶在拌料用的水中.拌料时,边加水边搅拌,边测试含水量.3.含水量的测定拌好料后,用手抓一把培养料,捏在手中紧握,手指缝中有水印但以水不往下滴为适,此时含水量为62%-64%.4.装袋将拌好的培养料装入塑料袋中央,边装边压实〔但不得过紧〕,一直装到2/3长为宜.5.套环用双套环或纤维绳扎实袋口,准备灭菌.6.灭菌灭菌方法同原种栽培种的灭菌方法.7..接种挑取栽培种培养基一小块,置于栽培袋中,随即按原样封口.8.菌丝培养接种后的栽培袋,置于培养室培养.3-5天后菌丝即可恢复生长.5-7天菌丝开始伸入培养基内.当菌丝长满袋后,移入菇房.9.出菇管理控温、调温、通风、采收、补水五、教学方式以分组的形式进行实验、讨论六、考核要求掌握平菇或金针菇栽培袋的制作技术,要求制袋成功率在95%以上.根据提交的实验报告、实验过程与结果,评分方式为优、良、中、及格、不及格.六、实验的报告要求要求有观察记载数据,完成实验报告.实验五食用菌栽培与加工现场参观一、本次实验的目的和要求通过参观食用菌栽培与加工现场,增强食用菌规模化生产或工厂化生产与食用菌加工的感性认识.二、实验内容或原理参观金针菇、平菇、香菇等食用菌大型菇场或加工厂.三、需要的实验材料无四、实验步骤参观→收集资料→总结、归类→撰写实验报告→课堂讨论实验六食用菌电化教学一、目的要求通过观看食用菌生长发育和栽培新技术的录像片,让学生观看食用菌菌丝体及子实体生长发育的动态过程,了解当前不同地区食用菌栽培的特色,学习食用菌栽培新技术.二、实验仪器有关食用菌菌丝及子实体生长发育和栽培技术的光盘或DVD.三、方法步骤在放映前,指导教师先对有关食用菌菌丝、子实体生长特点和栽培技术提出几个问题,请学生在观看时注意记录,观看完毕之后,针对问题进行讨论.。

实验七食用菌母种的扩大培养一、实验目的深入理解食用菌母种的含义、重要性和生产上的作用。

学会常用母种培养基的配制方法，掌握母种转管继代培养技术，了解食用菌母种制作的工艺流程和制作母种的基本技能。

二、实验原理食用菌母种是指从大自然首次分离得到的纯菌丝体，多通过孢子分离法、组织分离法和菇木分离法获得纯菌丝体。

因其在试管里培养而成，并且是菌种生产的第一步骤，因此又被称为试管种或一级种。

纯菌丝体在试管斜面上再次扩大繁殖后，则形成再生母种。

它既可以繁殖原种，又适于菌种保藏。

母种的扩大培养是从一支母种转接、培养、扩繁成若干支母种的过程，整个过程期间，须在无菌环境条件下，进行母种菌的转接、培养与扩繁。

三、实验所需1. 菌种：平菇、杏鲍菇、金针菇、灰树花等。

2. 材料试剂：马铃薯、葡萄糖、琼脂、酵母膏、75%酒精等。

3. 仪器用具：天平、电炉、熬制锅、刀砧、小刀、玻棒、纱布、漏斗架、漏斗（套接橡胶管和）、止水夹、试管（18×180mm左右）、棉花、橡皮筋、牛皮纸（报纸）、棉线、铁筐、高压灭菌锅、超净工作台、酒精棉瓶、长柄镊子、接种具（钩、锄等）、酒精灯、火柴、垫架、标签、笔等。

四、实验内容（一）母种培养基配制（1）培养基配方常用培养基PDA：马铃薯（去皮去芽眼）200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml、酵母膏2.5g。

（2）培养基配制将马铃薯去皮洗净、挖去芽眼，称取200g，用刀砧切碎，放入熬制锅（内壁有容积刻度）中，加入清水，电炉加热煮沸后调小火力，维持约20min，煮至软而不烂为止。

用双层湿沙布过滤，得过滤薯液，再向过滤液中加入琼脂20g继续加热，待琼脂溶化后，添加葡萄糖20g及酵母膏2.5g，补足水分至1000ml，搅拌均匀煮沸溶化后准备装管。

（3）分装试管培养基配制后应趁热分装。

装入培养基占试管的1/4~2/5处，装管时控制好止水夹头，对培养基流向、流速、流量进行控制，勿使管内外壁沾上培养液，以免浸湿棉塞，易受杂菌污染。

食用菌母种制作技术母种是从子实体中提纯，复壮获得母种，人工栽培蘑菇成功的关键是菌种，只有优良的菌种才能达到优质高产，这是种植蘑菇高产的第一个要素。

母种制作：母种培养基配制：母种培养基的原料是马铃薯，葡萄糖，蛋白胨，水，琼脂粉，以配制一千毫升的母种培养基为例，将马铃薯去皮后称重200克，葡萄糖20克，琼脂粉20克，蛋白胨10克，用量杯量取1000毫升的水倒入锅中，用刀将马铃薯切成片加入锅中，用文火煮沸，煮至用筷子轻轻一插既可插入，这时可以用四层的纱布过滤煮好的马铃薯汁，然后倒在量桶里，看一下，如果不足一千毫升可加水补足一千毫升，在倒入锅中煮，最后加入称好的葡萄糖、琼脂粉、蛋白胨，为了防止锅底烧焦要边加热边搅拌，煮至完全溶化，母种培养基就配制好了。

母种培养基的分装：母种培养基配制好后要分装以试管中，这里用到的试管规格为18毫米X200毫米，每7根试管扎成一捆，分装培养基时用漏斗下面接一根塑料管，在通塑料管接装到试管内，分装量为试管高度的五分之一左右，分装完后及时用棉塞装试管口塞住，防止其它杂菌侵蚀。

要注意，母种培养基的温度降到45度以下时凝固，所以分装过程要在母种培养基凝固之前完成。

母种培养基的灭菌：用白纸包裹试管口，在用绳子将白纸扎紧，将试管放入高压来菌锅中高压来菌，盖上锅盖，压紧螺帽，在压力为0.5MPa条件下持续来菌30分钟，来菌完后在让其在锅内自然冷却一小时，待压力为零时就可以打开锅将试管取出来，这样母种的培养基就制作好了。

制作母种：母种接种：母种的接种也是在无菌工作室的无菌箱中进行的，另外要选取品质优，长势好的蘑菇来提取菌丝，分别用酒精棉球擦拭双手和蘑菇表面进行消毒，点燃酒精灯然后把长柄小刀放在酒精灯火焰上消毒2至3秒钟，用消毒后的小刀割开新鲜蘑菇的菌柄，在菌柄与菌盖连接处用小刀切割一小块蘑菇组织，打开母种培养基试管瓶塞，为了避免杂菌感染，要将试管口靠近酒精灯火焰，用长柄钩针钩取切割好的蘑菇组织带到试管中，放在试管培养基斜面的中部，退出长柄钩针，将棉塞在火焰上消毒，塞住试管口，母种的接种工作就完成了。

食用菌母种的制作培养用试管制成斜面培养基，并接种原始试管种(保留种，并用于生产的母种即为生产母种，可用于扩接原种。

1．培养基配方配方一综合马铃薯培养基马铃薯 200克葡萄糖20克磷酸氢二钾2克硫酸镁0.5克维生素B110毫克琼脂20克水1000毫升 PH值自然配方二合成培养基马铃薯 200克葡萄糖20克磷酸二氢钾2克蛋白胨10克牛肉膏5克酵母膏5克硫酸镁0.8克水1000毫升 PH值自然2．培养基制作方法先将马铃薯洗净去皮切成簿片，称取200克，加水1000毫升，煮沸15—20分钟，用4层纱布过滤，取其滤液并补足水至1000毫升，加入琼脂20克，再加热，琼脂溶化后，再加入其它配方中的药品。

培养基的分装，应在培养凝固前进行（琼脂培养基40℃凝固）一般用漏斗，或分装瓶，下端连接一段软橡皮管，橡皮管下面再连接一水段玻璃管，在橡皮管上安装一个止水弹簧夹，分装时将玻璃管细口插入试管内，但不要碰到管壁，每支试管装入量为度管长度1/4。

装好后塞上棉塞，每10支试管扎一捆，棉塞上用塑料纸封扎好，用线绳捆扎起来。

3．灭菌将分装后的试管扎捆好，放入高压蒸气灭菌锅，在1公斤/厘米压力下(锅入温度达121℃)灭菌20分钟,使微生物包括芽子色全部杀死。

待压力降到0度时，慢慢放出锅内气体，趁培养基没有凝固时，将试管摆成斜面。

4．接种与培养通过无菌操作方法将菌种接入试管斜面上，置28℃、3天后将温度降至24℃继续培养，12—15天左右，菌丝长满整个试管斜面，即成(生产)母种。

原种的制作母种接种到原种培养基上，进行扩大繁殖育种即为原种，原种一般采用广口瓶或袋装。

1．培养基配方配方一木屑麸皮培养基阔树木 78% 麸皮 20% 糖 1% 石膏粉 1% 水 65% PH值自然配方二棉籽壳木屑混合培养基棉籽壳 90% 糖 1% 麸皮 5% 过磷酸钙 3% 石膏粉 1% PH值自然2．拌料与装袋选用新鲜无霉变原料，根据生产所需的数量，计算配料总量，将麸皮、石膏粉均匀的混合在培养料里，糖和过磷酸钙溶于水解后，按上述干料量加入水，比例为1：1、3拌匀，培养料含水量60%为宜，含水量以手紧握培养料指缝间有水欲滴为宜。