实验四 种子生活力测定

实验四种子生活力测定一、实验目的和要求了解测定种子生活力的基本原理，并学会其操作程序。

种子生活力：种子潜在的发芽能力。

二、测定原理四唑：2,3,5－三苯基氯(溴)化四唑（C19H15N4Cl(Br)）的简称为，为白色粉末，水溶液无色。

染色原理：种胚活细胞中的脱氢酶产生氢，与浸入种胚内的四唑发生作用，产生红色稳定而不扩散的三苯基甲（TPF）。

判断标准：凡种胚染成红色者表示有生活力，不染色的种子为无生活力的种子；不染色的部位为坏死的部位，根据坏死组织出现的部位及其分布可以判断种子的生活力。

三、材料及器具材料：刺槐器具及药品：烧杯、解剖刀、解剖针、镊子、培养皿、量筒、滤纸、手持放大镜、玻璃棒、取样匙、1%四唑等四、方法及步骤1. 测定样品的提取从净度测定后的纯净种子中随机提取50粒种子（四分法）。

3次重复。

同时准备部分种子作为后备。

2. 种子预处理（浸种，同发芽测定）3. 溶液配制溶液A：9.078g KH2PO4溶于1000mL水；溶液B：11.876g Na2HPO4·2H2O溶于1000mL水；缓冲液配制：溶液A：溶液B以2:3比例混合;1%的四唑溶液配制：称取四唑1g溶于100mL的缓冲溶液，现配现用。

4. 取种胚、染色处理剥除外种皮和内种皮，取出种胚后放入盛有清水的玻璃皿；记录空粒、腐烂粒及病虫害感染种粒。

如取胚时由于人为因素而破坏种胚，可从后备种子中补取；种胚剥取结束后一起放入四唑溶液，使溶液淹没种仁，上浮者要压沉。

置黑暗处，保持30～35℃染色2～3h。

5. 结果鉴定经过染色的种子分组放在潮湿的滤纸上，借助于手持放大镜或实体显微镜逐粒观察。

有生活力：种胚和胚乳完全着色；无生活力：种胚和胚乳完全不着色；根据种胚或胚乳上未着色的斑块的位置和大小判断种子有无生活力（种胚不染色的最大面积不超过1/4子叶末端）。

6. 种子生活力计算生活力的百分率根据3个重复组计算，不带小数，重复组间最大容许误差与发芽测定的规定相同，最后以3组生活力百分率的平均值为该种子批的生活力。

实验四种子生活力测定一、目的要求应用化学药剂处理和生物化学法快速测定体眠种子生活力并比较不同方法的效果。

二、材料用具（一）材料：水稻和玉米种子（二）药品：2．3—5一氯化三苯基四氮唑和红墨水等。

三、方法步骤（一）四唑盐类法：1．在洁净的水稻种子中，随机数取试样2份，各100粒剥去谷壳，浸入30℃的水中6－8小时。

2．用2．3．5－氯化三苯基四氮唑配制成的溶液，装在棕色玻璃瓶里，保存在黑暗中。

3．将已剥去壳的软化的米粒沿种胚纵切，取其一半浸于已配好的药液中，放于暗处（最好用棕色发芽皿盛放），经24小时可观察结果，如果提高温度可以缩短处理时间（40℃1小时）。

4．观察结果：凡种胚的主要构造染成深红色者为有生活力的种子，凡种胚的主要构造染成浅红色或不染色者为无生活力的种子。

5．具体种子具体做法：取水稻种子样品200粒，去壳，放纸间或水中30℃预湿12h，沿种子侧面胚纵切，放入0.1%四唑溶液35℃染色1-2h，凡是胚的主要构造染成正常鲜红色，或胚根尖端2/3不染色而其他部分正常染色的种子为有生活力种子。

（二）红墨水染色法：1．从洁净玉米种子随机数取试样二，各100粒，于30℃温水中浸2-3小时。

2．配制红墨水溶液，用红墨水加水配成1：60的溶液。

3．取出软化过的种子，沿胚切成对半，取其半粒种子。

4．浸入红墨水溶液，15分钟后取出，用清水冲洗。

5．观察结果：凡种胚的主要构造不染色或染色浅者为有生活力的种子，凡种胚染色者为无生活力的种子。

四、结果表示与报告计算各个重复中有生活力的种子数，重复间最大容许差距不得超过附表（生活力测定重复间的最大容许差距）的规定，平均百分率计算到最近似的整数。

种子生活力快速测定实验人员：候勇 2012年度国培班果蔬花卉专业试验目的：种子生活力是指种子的发芽潜力，即发芽力，是判断种子质量的重要指标；要了解种子生活力的大小，最可靠的方法是测定种子的发芽率。

种子的发芽率是指在适宜条件下种子发芽的百分数，它是鉴定种子质量的主要依据，在确定播种量以及种子生理研究中具有重要意义。

本实验的目的就是快速测定种子生活力的方法。

实验仪器及材料：1、仪器：电热恒温培养箱、培养皿、烧杯、镊子、单面刀2、试剂：3%TTC溶液、0.1%BTB溶液、1%BTB琼脂凝胶、红墨水5%3、材料：玉米、小麦吸胀种子方法一：红墨水染色法实验原理：红墨水染色法是根据活种子细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的透性，而死种子的胚细胞原生质膜则丧失此性质，于是染料进入死细胞而染色。

操作步骤：1、浸种：取不同种子一部分用沸水煮5-10min，作为死种子；一部分用凉水浸泡一昼夜，吸涨备用。

2、染色：取已吸涨种子100粒，玉米种子可在中间阔面将胚纵切为两半将其中一半放入培养皿中，用5%红墨水染色。

3、结果观察：经过5-8min，倒出红墨水，多次用清水清洗后观察胚的颜色，凡是胚部不着色的为生活良好的种子，有略带红色的说明生活力较弱，都染红的说明无生活力。

结果：活种子%=胚不着色的种子数/供试种子*100 50%=5/10*100方法二：BTB变色法实验原理：活种子进行呼吸作用呼吸空气中的O2，放出CO2。

CO2溶于水成为H2CO3，H2CO3解离为H+和HCO3-，使得种子周围环境的酸度增加。

BTB法通过测定酸度的变化来判断种子活性。

BTB 变色范围为PH6.0—7.6,酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为PH7.1）。

色泽差异显著，易于观察。

操作步骤：1%BTB染色将吸胀的小麦种子分别整齐地埋于1%BTB琼脂凝胶两个培养皿中，胚向下，间距约1cm。

培养皿置于30C培养箱中培养0.5h，在光亮处下观察，种子附近呈现深黄色晕圈的是活种子，用沸水中杀死的种子分别进行对照。

实验四生活力测定一、目的种子生活力测定的目的是：1. 快速估测种子样品的生活力，特别是休眠种子样品的生活力；2. 某些样品在发芽测定结束时剩有较多的休眠种子未能萌发，此时可以逐粒测定这些种子的生活力，也可以再取一份样品测定样品的生活力。

二、定义种子生活力是用染色法测得的种子潜在的发芽能力。

三、应用范围本测定适用于附录B表B2给出方法的树种四、原理1. 四唑测定原理应用2，3，5-三苯基氯化（或溴化）四唑（2，3，5-triphenyl tetrazolium chloride of bromide）的无色溶液作为指示剂，以显示活细胞中所发生的还原过程。

这种指示剂被种子吸收，在种子组织内与活细胞的还原过程起反应，从脱氢酶接受氢。

在活细胞中，2，3，5-三苯基氯化四唑经氢化作用，生成一种红色而稳定的不扩散物质，即三苯基甲肤（triphenyl formazan）。

这样就能识别种子中红色的有生命部分和不染色的死亡部分。

除完全染色的有生活力种子和完全不染色的无生活力种子外，还会出现一些部分染色的种子。

在这些部分染色种子的不同部位看到其中存在着或大或小的坏死组织，它们在胚和（或）胚乳（配子体）组织中所处的部位和大小（不一定是颜色的深浅），决定着这些种子是有生活力还是无生活力。

不过同组织的健全程度相关的颜色差异仍然被认为具有决定性意义，主要是因为在某种程度上，它们有助于识别出健全、衰弱或死亡组织并确定其位置。

2. 靛蓝测定原理靛蓝（indigo carmine）为蓝色粉末，分子式为C16H8N2O2（SO3）2Na2。

靛蓝能透过死细胞组织使其染上颜色。

因此，染上颜色的种子是无生活力的。

根据胚染色的部位和比例大小来判断种子有无生活力。

五、试剂1. 使用氯化（或溴化）四唑的水溶液，浓度随树种而略有不同，见表B2中的规定。

如果所使用蒸馏水的pH值不在6.5~7.5范围之内，可将四唑溶于缓冲溶液。

缓冲溶液的配制方法如下：溶液a--在1 000ml水中溶解9.078g磷酸二氢钾(KH2PO4);溶液b--在1 000ml水中溶解11.876g磷酸氢二钠（Na2 H2PO4o2H2O），或9.472g磷酸氢二钠（Na2 H2PO4）。

种子活性测定实验报告1. 引言种子活性是指种子在适宜的环境下发芽并形成新的植株的能力。

测定种子活性有助于评估种子的品质和提高农作物的产量。

本实验旨在通过测定种子的发芽率和活力指数来评估不同处理下的种子活性。

2. 材料与方法2.1 材料- 待测种子样本：A品种、B品种、C品种- 无菌培养基- 无菌培养皿- 实验室摄像机和计算机- 光照设备- 定量滴管和移液管2.2 方法1. 种子表面消毒：将待测种子分别放入无菌培养皿中，用70%酒精浸泡5分钟，然后用无菌水冲洗3次，以达到表面消毒的目的。

2. 播种：在每个无菌培养皿上均匀撒上100颗已消毒过的种子，使其分散排列。

3. 添加培养基：在每个培养皿中加入适量的无菌培养基，使其浸没种子。

4. 培养条件：将培养皿放置在恒温恒湿的培养箱中，保持温度在25左右，相对湿度为80%。

5. 光照条件：在培养皿上方设置适当的光照设备，以提供足够的光照，模拟自然环境。

6. 数据记录：每天记录各品种种子的发芽情况，包括发芽数、芽长等指标。

7. 活力指数计算：将发芽率和芽长指标综合计算得到种子活力指数。

3. 结果与讨论经过实验观察和数据统计，我们得到了以下结果：品种处理1 处理2 处理3 平均发芽率平均芽长- -A 90% 80% 95% 88.3% 3.6cmB 75% 90% 85% 83.3% 4.2cmC 85% 70% 80% 78.3% 3.8cm通过计算我们得到了各品种的种子活力指数：- A品种：88.3% * 3.6cm = 317.88- B品种：83.3% * 4.2cm = 349.86- C品种：78.3% * 3.8cm = 297.54根据结果我们可以看出，B品种的种子活力指数最高，最适合作为优良的种子来源。

活力指数越高，说明种子具有更好的发芽能力和生长潜力。

而对于不同处理方式的比较，我们可以看出处理2对种子的发芽率和芽长有较为显著的提高。

这可能是由于处理2提供了适宜的环境条件，如更加合理的温度和光照，促进了种子的发芽和生长。

实验四种子生活力测定一、目的要求通过实验要求了解测定种子生活力的基本原理，并学会其操作程序。

二、材料与器具1．材料刺槐种子。

2．器具及药品种子检验板、烧杯、解剖刀、小镊子、手持放大镜、量筒、培养皿、解剖针、玻璃棒、胶匙、四唑等。

三、方法步骤1．靛兰染色法靛兰为兰色粉末，分子式为C16H8N2O2（SO3）2Na2，它能透过种子的死细胞组织染上蓝色，但不能透过活细胞组织，因此活细胞不染色。

所以染成蓝色的种胚是无生活力的种子；未染色的是有生活力的种子。

根据染色部位和比例大小即可判断种子的生活力。

（1）抽取测定样品所需样品从净度测定选出的纯净种子中提取，用四分法随机取出四组种子，每组100粒，此外还要抽取约100粒种子作为后备，以便代替取胚时弄坏的种子。

（2）浸种浸种时间因树种而异。

松属、雪松属的种子在室温下浸3～5天。

刺槐种子可加入沸水不断搅拌至水凉或用锐利的解剖针或小刀等仔细地从胚根后面弄破种皮，然后用室温水浸种24h，浸种过程中更换1～2次水。

（3）取胚以松属树种为例。

浸种后，分组取胚，沿种子的棱切开种皮和胚乳。

取出种胚，种胚取出后放在盛有清水的玻璃皿里，以免种胚干燥萎缩而丧失生活力。

取胚时随时记下空粒、腐烂粒、感染了病害虫害的种粒以及其它显然没有生活力的种子粒数分组记入记录表。

如取胚时由于人为技术而破坏种胚，可以从后备组中任取一粒取胚补上。

（4）溶液的配制及染色用蒸馏水配成浓度为0.05～0.1的溶液。

随配随用，不宜存放过久。

在20℃～30℃条件下约需浸2～3h。

试剂的用量应该能够完全浸没种胚。

将玻璃器皿中清水到出余下种胚，立即注入靛兰溶液，淹没种胚，如有种胚浮在表面，应将其拨沉，（5）观察记载当到达染色所规定的时间之后倒出靛兰溶液。

用清水冲洗种胚，立即将种胚放在垫有潮湿的白纸的培养皿中观察。

根据染色的部位和程度，把胚分为有生活力的和无生活力的两类，记入表5-1。

取胚时受到机械损伤的部分也会染上颜色，但不要把它作为没有生活力的种胚。

实验四氯化三苯基四氮唑（TTC）法测定种子生活力一、实验目的种子生活力是指种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力。

可以通过发芽试验方法了解种子有无生活力，为正确评定种子质量提供依据。

本实验的目的是让学生掌握化学快速测定种子生活力的原理、方法和鉴定标准。

二、仪器与试剂培养皿4套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；放大镜。

TTC溶液，配制方法：取1g TTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC溶液。

三、原理以氯化三苯基四氮唑(简称四唑)无色溶液作为指示剂。

这种指示剂是一种可被种子活组织吸收后，接受活细胞脱氢酶中的氢而被还原成一种红色的、稳定的、不扩散的和不溶于水的三苯基甲臜。

据此，可根据胚和胚乳组织染色反应来区别有生活力和无生活力的种子。

四、方法步骤材料：4份，分别是吸胀的玉米、小麦种子100粒，吸胀后煮5分钟的玉米、小麦种子）1.将玉米、小麦等作物的种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。

2.随机取吸涨种子100 粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。

然后将处理好的种子置于培养皿中，加入0.1% TTC 溶液，以浸没种子为度。

另取沸水中煮5 min 后的100 粒吸涨种子，再加入0.1%TTC 溶液染色。

于35℃恒温箱中保温0.5~1 h。

也可在20℃左右的室温下放置40～60min.3.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表4-1内。

五、注意事项1.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。

2.判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失机能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。