衣原体和支原体的检测(实验课)

衣原体实验室检测(快速胶体金法)1.原理本品含有一预先在检测区包被有鼠克隆抗沙眼衣原体的薄膜。

含衣原体抗原和鼠克隆抗沙眼衣原体-胶体金结合物的标本混合物由于层析作用沿着薄膜上的检测区移动，并形成一作为抗体-抗原-抗体金颗粒混合物形成的可见线。

2.试剂试剂A:提取液（0.2N氢氧化钠）试剂B:中和液（0.1N盐酸）3.取材男性：用拭子插入尿道2-4cm，旋转拭子3-5秒钟后取出或者取尿沉渣。

女性：操作人员应先用棉签或棉球将宫颈口黏液和脓血擦去,再用取样拭子插入宫颈管内并通过鳞柱状上皮交界处，直到拭子头看不见为止。

旋转拭子15-20秒钟取出，注意不要碰到宫颈外及阴道壁。

宫颈管内1-2cm处柱状上皮细胞或尿道取材。

4. 标本处理取得的标本应立即检验或放回到运输试管里。

勿将标本放入含此检测的介质干扰物或繁殖此检测不需要的有机体的运输设备中。

标本在室温15-27°C下可保存6小时，在2-8°C下可保存72小时.建议标本收集后应尽快进行检测。

5．检验方法5.1提取步骤：提取标本的制备5.1.1 打开空的标本采集管。

5.1.2 吸取试剂A溶液（约300ul）达填充接线。

然后转移至试管中。

5.1.3 将含患者标本的拭子插入含试剂A的试管中，快速旋转拭子十次。

5.1.4 等待2分钟，快速旋转拭子十次。

5.1.5 吸取试剂B溶液（约600ui）达填充接线。

然后加至试管中，快速旋转拭子十次。

5.1.6 在试管中部挤压拭子上的液体并抽出拭子丢弃。

5.2检测步骤5.2.1 取出检测板，放置于干净的干燥平台上。

5.2.2 使用提供的一次性滴管将3滴试管中的提取标本滴入检测板的园加样空中5.2.3 检测开始后，可看到紫色线沿着结果显示窗移动。

5.2.4 15分钟内读取结果。

6.检验结果的解释阴性结果：显示窗内仅出现一条紫色线,说明结果阴性。

表明该标本中存在衣原体抗原阴性。

阳性结果：显示窗内出现两条彩色线（T线和C线）不管哪条先出现，说明衣原体抗原为阳性无效结果：显示窗内未出现紫色线，结果无效。

支原体、衣原体超高倍显微镜检查标准操作程序1 检查目的通过支原体、衣原体镜检主要了解感染情况。

本法用超高倍显微镜检查上皮细胞内或分泌物中包涵体情况，参考镜下白细胞数量，主要用鉴别诊断呼吸道和泌尿生殖道支原体衣原体引起的感染。

2 检测原理分泌物中的细胞、某些病原体等采用显微镜检查法。

分泌物中的支原体、衣原体等，这些物质虽然具有不同的形态，但是由于体积太小，肉眼不能看见，利用超高倍显微镜放大的特性能够将涂片中的包涵体放大，根据包涵体形态加以识别鉴定。

3 性能参数支原体、衣原体镜检目前还没有测定性能指标。

4 标本采集与签收取口腔咽拭子或阴道分泌物标本于灭菌容器内立即送检，按标本签收程序签收。

5 设备和试剂5.1 ACT-2000超高倍显微镜。

5.2 生理盐水、载玻片、盖玻片。

6 容器和添加剂类型收集分泌物标本的容器要求为一次性塑料试管，预先加入0.8-1.5ml生理盐水，采集用棉签和咽拭子要求无菌。

7 操作程序7.1 标本的显微镜检查7.1.1 取洁净玻片将采集好的分泌物直接涂片。

7.1.2 先用低倍镜观察全片有无细胞等成分，再用高倍镜详细检查病理成分的形态及结构。

7.2 检验结果的录入和确认7.2.1 打开电脑，启动LIS程序，输入用户名及口令后，进入检验程序。

7.2.2 选择“信息处理”，进行检验结果的录入及修改。

通过申请序号进行结果的输入选择“住院号”，输入检验结果，并对患者以前检测结果进行历史回顾，观察变化趋势。

7.2.3 检验结果的确认：检验结果的确认应由主管技师(主治医师)或专业负责人进行确认，方法为单击“信息处理”菜单，核对检验结果后，按“审核”键进确认。

8 质量控制8.1 正常分泌物中可见少量上皮细胞和白细胞。

8.2 当见到包涵体和较多白细胞时应进一步进行其它相关检验确定是否有支原体、衣原体感染，本镜检只能作为快速过筛试验，不能作为确证试验。

8.3 由于支原体、衣原体镜检目前还以手工操作为主，受操作者个人因素的影响和技术条件的限制，变异较大，不易标准化，因此这就要求检验人员受过专门培训、技术过硬，且有高度责任心，严格按照操作程序进行，确保实验的准确性和稳定性。

衣原体和支原体的检测方法衣原体和支原体是两种常见的细菌性性传播疾病，感染者可能出现尿道炎、附件炎、阴道炎、盆腔炎等症状。

准确快速地进行衣原体和支原体的检测是诊断和治疗感染的重要一步。

目前，常见的衣原体和支原体的检测方法主要包括实时聚合酶链反应（PCR）、酶联免疫吸附测定法（ELISA）、直接免疫荧光染色法以及培养方法等。

1.实时聚合酶链反应（PCR）：PCR是一种高灵敏度和高特异性的检测方法，适用于衣原体和支原体的快速检测。

其原理是通过扩增目标基因的DNA片段来进行检测。

具体操作过程包括目标基因序列的选择、DNA的提取、反向转录（RT-PCR）、扩增反应、放射性标记等步骤。

PCR的优点是能够检测到低浓度的病原体DNA，但是由于检测结果受样本提取和操作技术的限制，存在一定的假阳性和假阴性结果。

2.酶联免疫吸附测定法（ELISA）：ELISA是一种常用的免疫学检测方法，可以检测血清中的衣原体和支原体抗体。

其原理是将病原体的抗原与酶标记的抗体反应，通过底物酶反应来测定抗体的含量。

ELISA的优点是操作简单、快速，结果可靠，但是不能直接检测病原体，只能检测人体对病原体感染产生的免疫应答。

另外，ELISA对不同菌株之间的交叉反应较高，可能导致一些假阳性的情况。

3.直接免疫荧光染色法：直接免疫荧光染色法是一种直接的病原体检测方法，可用于对衣原体和支原体的微生物学定性检测。

该方法利用荧光素标记的抗体与病原体抗原特异性结合，通过荧光显微镜观察荧光信号来确定是否感染。

优点是操作简单，快速，敏感性较高。

4.培养方法：培养方法是一种传统的检测方法，可用于衣原体和支原体的定性和定量检测。

具体操作步骤是将患者样本划在培养基上，通过细菌培养的方式，使衣原体和支原体在培养基上生长和增殖。

然后通过显微镜观察培养基上的细菌形态特征或生化试剂检测培养基内菌株的鉴定，确定是否感染。

培养方法的优点是能够提供细菌的生化特性和药敏试验所必需的细菌量，但该方法耗时长、操作复杂，且对培养基和环境条件要求较高。

支原体衣原体检查要求
支原体和衣原体是两种常见的微生物，它们可以引起人类的感染。

支原体和衣原体的检查通常用于诊断相关感染性疾病。

以下是一般支原体和衣原体检查的要求：
1. 标本采集：通常需要采集适当的标本进行检查，如痰液、尿液、生殖道分泌物、结膜分泌物等。

标本的采集方法和部位可能因感染部位而异。

2. 标本保存：标本采集后，应尽快将其送往实验室进行检查。

为了保证检查结果的准确性，标本的保存和运输条件可能会有特定的要求，如温度、时间等。

3. 实验室检查：实验室通常会使用培养、核酸检测（如PCR）或免疫检测等方法来检测标本中是否存在支原体或衣原体。

4. 检查时机：对于某些感染，如生殖道感染，可能需要在症状出现后或特定时间段内进行检查，以提高检查的准确性。

5. 医生的诊断：检查结果需要结合患者的临床症状、病史和其他相关检查结果进行综合分析，由医生做出最终的诊断。

衣原体和支原体的检测一、衣原体抗原的检测衣原体抗原检测试剂盒（胶体金法）【检验原理】衣原体按其特性分为三类：沙眼衣原体（Chlamydia Trachomatis）、鹦鹉热衣原体(Chlamydia Psittas)和肺炎衣原体（Chlamydia Pneumoniae）。

沙眼衣原体有15个已知的血清型，其中12个血清型与沙眼和生殖道的感染有关；另外3个则与性病性淋巴肉芽肿（Lymphor Ganuloma Venereun, LGV）的发生有关。

沙眼衣原体抗原检测试剂盒（胶体金法）系用抗衣原体脂多糖单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体分别固定于固相硝酸纤维素膜，并和胶体金标记的另一抗衣原体脂多糖单克隆抗体及其他试剂和原料制成，应用胶体金免疫层析技术，采用双抗体夹心的形式建立的衣原体检测方法，用于女性宫颈和男性尿道中沙眼衣原体抗原的检测。

在实验过程中，将所得到的临床样品放入含有溶液A的样品处理管中，2分钟后，加入等量的溶液B，充分混匀后滴2-3滴在检测试剂盒的加样孔中，然后等待结果出现。

在检测试剂盒的硝酸纤维薄膜的检测线上固定有抗衣原体脂多糖单克隆抗体-Ⅱ；质控线上固定有羊抗鼠IgG的抗体。

处理后的样品首先与结合了抗衣原体单克隆抗体-Ⅰ的胶体金颗粒混合，并靠毛细管作用使混合液向检测线移动。

如果样品中含有沙眼衣原体抗原，则沙眼衣原体抗原会与胶体金复合物及检测线上的单克隆抗体Ⅱ结合形成双抗体夹心复合物，并聚集在检测线上显现出一条可见的红线，此即为阳性结果。

无此红线则表示样品中无沙眼衣原体抗原存在，即为阴性结果。

在试纸条上的质控区（C）包被有羊抗鼠IgG，以指示试剂盒反应系统工作是否正常。

质控区（C）色带的出现表明：①样品加入量充足②样品在纸条上运行正常。

【主要组成成份】沙眼衣原体抗原快速检测试剂卡：内含一条包被有抗衣原体脂多糖单克隆抗体-Ⅰ、抗衣原体脂多糖单克隆抗体-Ⅱ和羊抗鼠IgG试纸条。

单人份铝箔袋包装。

医学微生物学课件：支原体与衣原体xx年xx月xx日CATALOGUE 目录•支原体•衣原体•支原体与衣原体的诊断与防治•结论01支原体支原体是一种能独立生活的最小原核微生物，缺乏细胞壁，无鞭毛，呈球形或杆状。

定义1884年首次发现，是人类和动物的重要病原微生物之一。

发现历史支原体的概述分类有150多种，对人致病的支原体有肺炎支原体、人型支原体和解脲脲原体。

分布主要存在于人和动物的腔道和生殖器黏膜表面，可引起人类非淋菌性尿道炎、子宫内膜炎、输卵管炎等。

支原体的分类与分布代谢以宿主细胞为营养供给，能进行DNA复制和蛋白质合成，在宿主细胞内营寄生生活。

形态直径约100～300nm，无细胞壁，仅有由三层膜组成的细胞膜，无坚硬的细胞壁，故对一般细胞壁抑制剂如青霉素等均不敏感。

抵抗力对干燥、紫外线等抵抗力较弱，对甲醛、酒精等有机溶剂敏感。

支原体的生物学特性主要症状咳嗽、乏力、头痛、高热、寒战、肌肉或关节疼痛。

并发症肺炎、支气管炎、肺脓肿、脑膜炎、心肌炎等。

支原体感染的临床表现02衣原体衣原体是一类具有独特性的微生物，属于细菌界、衣原体目、衣原体科。

定义衣原体由英国细菌学家特纳在1937年首次发现并分离出来，对人类和动物具有广泛的感染性。

发现历史衣原体的概述分类衣原体可分为沙眼衣原体、肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体和生殖器衣原体等。

分布衣原体广泛分布于自然界，可感染人类、动物和昆虫等。

衣原体的分类与分布生长繁殖衣原体可在细胞内生长繁殖，具有独特的生命周期，包括裂殖、溶殖和永生性三个阶段。

细胞结构衣原体具有细胞壁、细胞膜、细胞质和核质等结构，与细菌相似，但核质结构较为简单。

衣原体的生物学特性肺炎衣原体感染可引起上呼吸道感染症状，如咳嗽、喉咙痛和发热等。

上呼吸道感染肺炎生殖泌尿系统感染鹦鹉热衣原体感染可引起肺炎症状，如发热、咳嗽、呼吸困难和胸痛等。

沙眼衣原体和生殖器衣原体感染可引起生殖泌尿系统感染症状，如尿道炎、宫颈炎和附件炎等。

泌尿生殖道感染支原体、衣原体联合检测的临床分析目的探讨沙眼衣原体和支原体的感染现状，分析支原体的敏感性和耐药性。

方法收集2010年1月—2012年1月期间，该站相关科室所收治的疑患有NUG的患者768例，取其泌尿生殖道标本进行分析，采用细菌培养法培养支原体，用药敏试剂盒作药敏试验，用金标法检测沙眼衣原体。

结果检出768例标本中共有418株阳性标本，占总数的54.4%，其中，支原体阳性398例，占51.8%，明显比衣原体的7.3%高，差异有统计学意义（P＜0.05）。

支原体的药敏试验结果显示，Uu对12种抗菌药物敏感性最高的是美满霉素、交沙霉素、强力霉素、克拉霉素，耐药性最高的为克林霉素、甲砜霉素；Uu+Mh最敏感的有交沙霉素、强力霉素和美满霉素，耐药性最强的有阿奇霉素、红霉素、克拉霉素、罗红霉素。

结论泌尿生殖道感染主要是Uu感染，对支原体进行耐药试验，并应根据不同的感染类型以及药敏试验结果合理地选择抗菌药物，可以有效降低发病率。

标签：支原体；衣原体；泌尿生殖道感染非淋菌性尿道炎（nongonococcal urethritis，NGU）是临床上常见的一种尿道炎，主要是由沙眼衣原体（CT）和支原体（Uu）等导致的。

NGU传播率很高，且具有较高的无症状率，严重威胁着人类的健康[1]。

为了解该地区的支原体和衣原体的感染情况，该研究对2010年1月—2012年1月该站相关科室收治的768例疑为NGU患者的分泌物进行了CT检测、Uu培养和耐药分析，现报道如下。

1 资料与方法1.1 一般资料收集本站收治的疑患有NUG的患者768例，其中，男282例，女486例，年龄在20～60岁之间，平均年龄为35岁，病程为15 d～2年，且近15 d内未使用抗生素。

1.2 采集标本采集男性标本前1 h内禁止排尿，并清洗尿道口，将无菌棉拭子插入到尿道内约3 cm处，并旋转2周，停留20 s左右取出；采集女性患者标本前，先将阴道口的分泌物清除干净，将无菌棉拭子插入到宫颈管内约1～2 cm处，轻轻旋转20 s左右取出[1-3]。

衣原体支原体检测项目全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：衣原体和支原体是一类常见的微生物，它们可以引起多种传染性疾病，包括性传播疾病、泌尿生殖系统感染等。

及时检测衣原体和支原体对于保护个人健康至关重要。

现代医学技术已经发展到可以通过特殊的检测项目来检测衣原体和支原体，以帮助人们预防和治疗相应的感染病症。

衣原体和支原体检测项目主要分为两种方式：基因检测和免疫学检测。

基因检测是通过检测病原微生物的DNA或RNA序列来确定感染是否存在，通常可以在尿液、血液或尿道分泌物中进行。

免疫学检测则是通过检测体内产生的抗体水平来确定是否感染，通常可以通过血液样本来进行。

对于衣原体和支原体感染的检测项目，通常可以分为以下几个步骤：1.症状评估：医生会根据患者的具体症状来判断是否需要进行衣原体和支原体检测。

一般来说，性传播疾病的症状包括尿道分泌物增多、尿急、尿频、尿痛等，泌尿生殖系统感染的症状包括阴道分泌物增多、下腹疼痛等。

2.样本采集：根据医生的建议，患者需要提供相应的尿液、血液或尿道分泌物样本供检测。

通常来说，尿液检测是比较常见的一种检测方法，因为采集方便，且对检测结果的干扰较小。

3.检测方法选择：根据医生的建议和实验室条件，选择合适的检测方法进行检测。

基因检测和免疫学检测各有优缺点，医生会根据具体情况来选择最合适的方法。

4.结果解读：检测完成后，医生会解读检测结果，并根据检测结果来制定治疗方案。

如果检测结果呈阳性，表示患者已感染衣原体或支原体，医生会根据具体情况来制定相应的治疗方案，包括抗生素治疗、免疫调节治疗等。

衣原体和支原体感染虽然常见，但并不是不可治愈的，通过及时检测和治疗可以有效控制感染的发展。

对于疑似感染的患者或有相关症状的人群，建议及时进行衣原体和支原体检测。

通过科学的检测项目，可以帮助医生准确判断感染情况，制定有效的治疗方案，提高治疗效果。

衣原体和支原体检测项目对于保护个人健康至关重要。

通过定期检测，可以有效预防性传播疾病和泌尿生殖系统感染的发生，从而提高个人健康水平。

• 临床研究 •5392周内患肢以钟摆样锻炼为主，由前屈、后伸运动开始逐渐进行外展运动。

3~6周患肢即可以进行完全功能锻炼，包括活动度、肌力、耐力、日常活动等训练。

术后6~12周可以增加活动强度及肩关节活动范围。

术后12周以后可以完全恢复正常活动，但仍要避免高强度训练，如攀岩、拔河等。

患者术后满1年取出内固定钢板。

1.4 疗效评定方法　依据Karlsson 标准评定疗效，优：患部无疼痛，损伤部相关肌肉肌力正常，患侧肩关节外观无畸形且活动自由，X 线片显示肩锁关节解剖复位良好或肩锁关节间隙＜5mm ；良：患肩轻微疼痛或无痛，肌力中等程度，功能轻度受限，患肩关节活动范围在90°~180°之间，X 线片显示肩锁关节解剖复位良好或呈半脱位状态但肩锁关节间隙在5~10mm ；差：患肩疼痛明显，肌力不佳≤3级，患侧肩关节活动在任何方向均＜90°，X 线片示肩锁关节呈脱位状态。

2 结 果38例患者均经连续性随访，时间为12~24个月，术后定期复查患侧肩部X 线片，钢板无断裂、松动，未发生再骨折、再脱位情况。

满1年时患者锁骨骨折及肩锁关节复位良好。

依据Karlsson 标准进行疗效评定，其中优32例，良5例，差1例，优良率达97.4%。

切口均为一期愈合。

所有患者切口无感染、无骨折移位、骨不连、钩突变形以及锁骨下神经血管损伤等并发症发生。

3 讨 论肩关节锁骨外侧端周围缺少丰厚的软组织保护，在上肢内收位时受到较强外力的作用下，容易造成锁骨外侧端的骨折，骨折后移位形式与肩锁关节脱位后移位形式相类似，表现为肩峰及远端锁骨断端受前臂重力作用向下移位而近端锁骨受胸锁颈阔肌、乳突肌以及斜方肌的牵拉而向上移位。

以往多采用交叉克氏针固定肩锁关节加韧带修补的方式治疗。

但存在术后肩关节的稳定性差，早期不能进行功能锻炼、克氏针断裂及移位、固定螺钉松动、骨折处骨不连、容易并发肩关节脱位等缺点[1]。

锁骨钩钢板是依照肩锁关节解剖及生理学特点设计的，生物力学特点是对抗肩峰下沉和锁骨远端上翘的剪切应力，并通过肩峰和钢板将这种作用力传导至整个肩胛带和锁骨内侧[2]。

怀化医专微生物学检验教案衣原体、支原体、立克次体第二十六章衣原体及检验第一节概述一、衣原体的概念和特点衣原体（chlamydia）是一类能通过细菌滤器，严格活细胞内寄生，有专门发育周期的原核细胞型微生物。

共同特点：①体积大于病毒，约250～500nm，在光学显微镜下能够查见，革兰染色阴性，圆形或椭圆形。

②含有DNA和RNA。

③具有细胞壁，但无肽聚糖，只含微量的胞壁酸。

④对多种抗生素敏锐。

⑤具有一些酶类但不够完善，这些酶缺乏产生代谢能量的作用，要由宿主细胞提供，故专性细胞内寄生。

能在鸡胚卵黄囊及多种细胞中生长繁育。

⑥有专门发育周期，仅在活细胞内以二分裂方式繁育。

分布：广泛寄生于人类、鸟类及哺乳动物。

致病种类：沙眼衣原体、肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体二、生物学性状（一）形状：在细胞内生长繁育，具有专门的发育周期：1 .原体：球形，椭圆形，小而致密，0.2-0.4um，光镜下将就可见；Giemsa染色呈紫色。

为成熟的衣原体，具有强的感染性，无繁育能力。

2.始体：由原体侵入细胞，在空泡发育而成。

圆形或椭圆形，体大而疏松，0.5-1.0um，光镜可见，Giemsa染色呈红色，为衣原体的繁育体，无感染性，以二分裂增殖，在空泡内发育成许多子代的原体。

成熟的子代原体从破裂的细胞中开释出来，再感染新的易感细胞，开始新的发育周期，每一周期约需48-72小时。

3、包涵体：衣原体在易感细胞内增殖所形成的网状体和子代原体的空泡，经染色后可在光镜下看到。

称为包涵体。

经Giemsa染色后呈紫蓝色。

碘染色呈褐色。

具有鉴别意义。

（二）培养特性：专性活细胞内寄生，多数能在6-8日龄鸡胚卵黄囊中生长繁育，并可在卵黄囊中找到包涵体和原体。

有些可感染小鼠，如鹦鹉热衣原体等。

可在某些原代或传代细胞株中生长，如Hele-299等，并比鸡胚更敏锐。

（三）抗击力：耐冷怕热，60 ℃10min可失去感染性，-70℃可储存数年；对消毒剂敏锐；对利福平、四环素、红霉素、磺胺药敏锐。