花粉活力染色液(I2-KI法)

TTC法[2,4]又称氯化三苯基四氮唑染色法(2 3, 5一triphenyl tetrazoliun chloride)。

氯化三苯基四氮唑即红四氮唑,作为非萌发分析花粉生话力的方法,速度快也比较精确地反映花粉的活力红四氮唑是标准的氧化还原色素,水溶液无色,遇到活细胞里的脱氢酶接受氯离子,还原后变红生成不溶于水的三苯甲赝,呈红色。

I-IK染色测定法：此法常用于鉴定不含淀粉的不育花粉,凡染成蓝紫色的为发育好、活力强的花粉,呈黄褐色的为发育不良的花粉。

过氧化物酶测定法具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶,此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色,依据颜色可知花粉的活性强弱。

过氧化物酶测定法
具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶,此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色,依据颜色可知花粉的活性强弱［13］。

醋酸洋红法测定花粉活力[14]
取少量花粉置于载玻片上,然后滴加1滴1%的醋酸洋红溶液。

室温下静置5 min观察。

统计染成红色的花粉粒所占比率。

[13]赵鸿杰，乔龙巴图，殷爱华等．3种山茶属植物花粉活力测定方法的比较（Ｎ）．中南林业科技大学学报．2010，30（3）．
[14] 盖伟玲，盖树鹏，郑国生．牡丹新鲜花粉活力的快速测定(J)．育苗科技Seedling Cultivation．2011(5)。

精心整理实验16?花粉活力的测定在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。

掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。

一、花粉萌发测定法【原理】水放???????1.用。

2.20℃条???????1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。

???2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响。

3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。

二、碘-碘化钾染色测定法多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。

发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。

因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。

【器材与用具】???显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。

???【试剂】-KI300ml。

???I2～3张片??基四氮唑）还原成红色的TTF（三苯基甲??）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC 的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC后的颜色变化判断花粉的生活力。

【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；恒温箱；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。

【试剂】0.5%TTC溶液：称取0.5gTTC放入烧杯中，加入少许95%酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至100ml。

溶液避光保存，若发红时，则不能再用。

采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温箱中，10~15min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。

观察2~3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。

实验四、花粉生活力的测定一、实验目的：通过实验掌握花粉生活力测定的具体技术和方法。

二、实验原理：花粉生活力是指在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力。

花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。

三、实验材料：苹果花粉四、实验用具与试剂：指形管、显微镜、载玻片、盖玻片、凹式载玻片、滴瓶、培养皿、天平、烧杯、玻璃棒、微波炉、滤纸、水浴锅、计数器、镊子；碘化钾（KI）、碘、蓝墨水、蒸馏水、蔗糖、琼脂、硼酸等。

五、实验步骤常用的测定花粉生活力的方法：形态观察法、碘-碘化钾染色法、蓝墨水染色法和培养基发芽法。

1. 形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。

具体方法：将花粉置于载玻片上，在显微镜下观察3个不同视野，要求被检查的花粉粒总数达到100粒以上，计算正常花粉粒占总数的比率。

此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。

2. 染色法(1) 碘-碘化钾染色法①原理：正常的花粉积累淀粉较多，而不正常的花粉则少。

据此，可用化学物质染色，根据呈色反应来间接测定花粉的正常与否和花粉生活力的差别。

通常正常花粉用I-KI染色后呈蓝色，而发育不良畸形花粉则不积累淀粉，当I-KI染色时呈黄褐色。

②I-KI溶液：取2.0 g KI溶于5～10mL蒸馏水中，然后加入1.0 g I2待全部溶解后，再加蒸馏水至200mL，贮于棕色瓶中备用。

③具体方法：取少量花粉撒于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子使花粉散开，再加一滴I-KI溶液，盖上盖玻片置于显微镜下观察。

凡被染色呈蓝色表示具有生活力，呈黄褐色者为发育不良生活力弱的花粉。

为了保证实验的准确性，要求观察不同的3个视野，求其平均值，统计花粉生活力。

实验二花粉生活力的测定―――悬滴培养法一、实验目的：掌握了解花粉生活力测定的意义和方法。

二、实验材料：二月兰花粉三、实验仪器及药品：凹玻片、盖玻片、解剖针、镊子、纱布、标签、铅笔、显微镜、恒温箱、蔗糖、蒸馏水、硼酸、凡士林。

四、实验原理：花粉是植物自然授粉和人工杂交的主要物质基础，花粉生活力的大小是保证杂交成功的关键。

在有性杂交育种中，常因父母本花期的不同，作为父本的花粉必须经过贮藏直到母本植株开花时再用于授粉（花粉在低温0－2℃、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低。

花粉贮藏的原理就是创造代谢强度低的环境，以延长花粉的寿命）；或者双亲不在同一个地方，必须由外地邮寄花粉供应。

经过贮藏或外地邮寄的花粉是否已经丧失生活力，必须经过测定才能确定。

鉴定花粉生活力的方法主要有四种：一是将待测花粉直接授粉，然后统计结实率和结子数。

此法的缺点是需要的时间较长，且实验的结果易受气候条件的影响。

二是将待测花粉授到柱头上，隔一定时间切下柱头，在显微镜下检查花粉的萌发情况。

根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。

三是在培养基上进行花粉的人工萌发，检查待测花粉萌发率的高低。

后两种方法都是根据花粉的萌发率来反映生活力的高低，有一定的参考价值。

但是萌发的不一定都能受精，特别是人工萌发还受许多条件的限制，所以也只有相对的可靠性。

四是用染色方法来鉴定花粉的生活力。

其原理是在活的花粉内有过氧化氢酶的存在，它可以促进过氧化物（如H2O2）放氧分解。

这些刚被放出的活性氧很容易使还原剂氧化，常用无色联苯胺、α－萘酚等还原剂做指示剂，这些还原剂被氧化后表现红色或玫瑰红色。

如果花粉是活的，那么会很快被染成红色或玫瑰红色，如果花粉是死的，则这一反应迟迟不能进行，花粉保持原色。

此法优点是比较快捷，但是比较间接。

本试验采用悬滴培养法鉴定花粉生活力。

五、实验步骤：1.配培养液：用蒸馏水和蔗糖分别配成5％、10%、15％的蔗糖溶液，并在各培养液中加少量硼酸。

实验八花粉活力及花粉管伸长的测定[实验目的]通过花粉活力的测定，可以了解花粉的可育性，并掌握不育花粉的形态、生理特征。

熟悉测定花粉活力的几种方法。

Ⅰ碘-碘化钾（I-KI）染色测定法[实验原理]禾谷类植物花粉成熟时积累淀粉较多，通常可用I-KI染成蓝色。

发育不良的花粉常呈畸形，不积累淀粉，用I-KI染色，不呈蓝色，而呈黄褐色。

[器材与试剂]1.实验仪器显微镜，镊子，恒温箱，载玻片，盖玻片待全2.实验试剂 I-KI溶液（取KI 2g溶于5～10mL蒸馏水中，然后加入1 g I2部溶解后，再加蒸馏水至200mL。

（贮于棕色瓶中备用）凡被染成蓝色的为发育好、活力强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。

Ⅱ过氧化物酶测定法[实验原理]具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。

此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色，依据颜色可知花粉的活性强弱。

[器材与试剂]1．实验仪器显微镜，载玻片，盖玻片，镊子2．实验试剂 0.5%联苯胺[将0.5g联苯胺溶于100mL50%乙醇中（有毒，注意安全）]，0.5%ɑ-萘酚（将0.5g ɑ -萘酚溶于100mL50%乙醇中）， 0.25%碳酸钠（将0.25g碳酸钠溶于100mL蒸馏水中），实验前将上述三种溶液各取10mL混合均匀成试剂Ⅰ，0.3%过氧化氢。

3、实验材料花粉［实验步骤］1．干洁载玻片上放少量花粉，然后加试剂Ⅰ和0.3%过氧化氢各1滴，搅匀后盖上玻片。

30℃下经10min后在低倍显微镜下观察。

如花粉粒为红色，则表示有过氧化物酶存在，花粉有活力，能发芽；如无色或黄色，则表示已失去活力，不能发芽。

2.观察2～3个制片，每片取5个视野，统计100粒，并计算其发芽率。

Ⅲ氯化三苯基四氮唑法（TTC）实验原理见实验7种子活力的快速测定中的TTC法。

[器材与试剂]1.实验仪器显微镜，镊子，载玻片，盖玻片，2.实验试剂 0.5%TTC溶液（参阅实验7-1）[实验步骤]1.取少数花粉于载玻片上，加1～2滴TTC溶液，盖上盖玻片。

用显微镜进行花粉活力的测定用显微镜进行花粉活力的测定用显微镜进行花粉活力的测定实验类型：基础内容：一、实验目的1.学习用碘-碘化钾染色测定法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。

2.学习用过氧化物酶测定法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。

3.学习用氯...内容：1.学习用碘-碘化钾染色测定法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。

2.学习用过氧化物酶测定法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。

3.学习用氯化三苯基四氮唑法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。

（一）碘一碘化钾染色测定法水稻正常花粉呈圆球形，并积累淀粉较多，通常可用I-KI染成蓝色；发育不良的花粉常呈畸形，不积累淀粉，用I-KI染色，不呈蓝色，而呈黄褐色。

具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。

此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色，依据颜色可知花粉有无活性。

（三）氯化三苯基四氮唑法(TTC法)2、3、5-氯化三苯基四氮唑(TTC)的氧化状态是无色的，被氢还原时成红色的TTF。

具有生命力的种子，由于呼吸作用产生的氢能使TTC还原成TTF，因此胚部便染成红色；而无生命的种子没有呼吸代谢活力，TTC不被还原，因而胚部不着色。

所以，可根据种子胚部染不染成红色来判断种子有无生命力，从而测定种子发芽率。

2. 试剂:(1)I-KI溶液(2) 0.5％联苯胺：将0.5g联苯胺溶于100m150％乙醇中。

(3)0.5％a一萘酚：将0.5ga一萘酚溶于100ml 50％乙醇中。

(4)0.25％碳酸钠：将0.25g碳酸钠溶于100ml水中。

(5)0.3％过氧化氢，即试剂Ⅱ。

(6)试剂I：由0.5％联苯胺、0.5％a一萘酚和0.25％碳酸钠溶液各10ml混合配成。

(7)0.5％TTC溶液。

3.器材：、载玻片、盖玻片、镊子、恒温箱。

1.花粉采集、置载玻片上、滴加试剂3.计算1、四氮唑液最好现配现用，如要贮存必须放在棕色瓶中，并放在阴凉黑暗处。

水稻花粉镜检之马矢奏春创作
经由进程花粉活力的测定,可以理解花粉的可育性,并掌握不育花粉的形态和心理特色.在作物杂交育种、作物结实机理和花粉心理的研究中,常涉及花粉活力剖断.掌握花粉活力的快速测定方法,是进行雄性不育株的选育、杂交技能的改良以及揭示表里成分对花粉育性和结实率影响的根本. Ⅰ、碘-碘化钾染色法多半植物正常花粉呈规则外形,如圆球形或椭球形、多面体等,并积累淀粉较多,常日I2-KI可将其染成蓝色.发育不良的花粉常呈畸形,往往不含淀粉或积累淀粉较少,用I2-KI染色,往往呈现黄褐色.是以,可用I2-KI溶液染色法测定花粉活力. 一、仪器、药品与材料（一）实验材料
各类着生花芽的植物枝条,花芽要充分发育并已含苞待放. （二）仪器与用品
显微镜,恒温箱,镊子,载玻片,盖玻片. （三）试剂
I2-KI溶液：取 2 g KI 溶于5~10 mL蒸馏水中,然后参加1 g I2,待全部消融后,再加蒸馏水定容至300 mL.贮于棕色瓶中备用. 二、实验步调
1．花粉收集：取充分红熟将要开花的花蕾,剥除花被片等,掏出花药.
2．镜检：取一花药置于载玻片上,加 1 滴蒸馏水,用镊子
将花药充分捣碎,使花粉粒释放,再加 1~2 滴I2- KI溶液,盖上盖玻片,于低倍显微镜下不雅察.凡被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒,呈黄褐色的为发育不良的花粉粒.不雅察 2~3 张装片,每片取5个视野,统计花粉的染色率,以染色率暗示花粉的育性.
注：此法不克不及准确暗示花粉的活力,也不适用于研究某一处理对花粉活力的影响.因为核期退化的花粉已有淀粉积累,遇 I2-KI呈蓝色反应.别的,含有淀粉而被杀去世的花粒遇I2-KI 也呈蓝色.。

水稻花粉镜检之巴公井开创作
通过花粉活力的测定,可以了解花粉的可育性,并掌握不育花粉的形态和生理特征.在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中,常涉及花粉活力鉴定.掌握花粉活力的快速测定方法,是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础. Ⅰ、碘-碘化钾染色法
大都植物正常花粉呈规则形状,如圆球形或椭球形、多面体等,并积累淀粉较多,通常I2-KI可将其染成蓝色.发育不良的花粉常呈畸形,往往不含淀粉或积累淀粉较少,用I2-KI染色,往往出现黄褐色.因此,可用I2-KI溶液染色法测定花粉活力. 一、仪器、药品与资料（一）实验资料
各种着生花芽的植物枝条,花芽要充沛发育并已含苞待放. （二）仪器与用品
显微镜,恒温箱,镊子,载玻片,盖玻片. （三）试剂
I2-KI溶液：取 2 g KI 溶于5~10 mL蒸馏水中,然后加入1 g I2,待全部溶解后,再加蒸馏水定容至300 mL.贮于棕色瓶中备用. 二、实验步伐
1．花粉收集：取充沛成熟将要开花的花蕾,剥除花被片等,取出花药.
2．镜检：取一花药置于载玻片上,加 1 滴蒸馏水,用镊子
将花药充沛捣碎,使花粉粒释放,再加 1~2 滴I2- KI溶液,盖上盖玻片,于低倍显微镜下观察.凡被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒,呈黄褐色的为发育不良的花粉粒.观察 2~3 张装片,每片取5个视野,统计花粉的染色率,以染色率暗示花粉的育性.
注：此法不能准确暗示花粉的活力,也不适用于研究某一处置对花粉活力的影响.因为核期退化的花粉已有淀粉积累,遇I2-KI呈蓝色反应.另外,含有淀粉而被杀死的花粒遇I2-KI 也呈蓝色.。

花粉活力染色液(I 2-KI 法)简介：花粉活力的大小直接影响授粉、受精过程，与植物的产量密切相关，通过花粉活力的测定，可了解花粉的发育，并掌握不育花粉的形态、生理特征。

花粉中所含淀粉的有无和多少可以作为判断花粉发育程度的指标，大多数正常成熟的花粉呈球形，含有较多淀粉，遇见I 2-KI 溶液可被染成蓝色；发育不良的花粉常呈畸形，通常不含淀粉或含淀粉少，遇见I 2-KI 溶液不会被染色或被染成黄褐色，根据花粉染色情况，可鉴别花粉的活力。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、取成熟将要开放的新鲜花朵，小心去除花瓣和雌蕊。

2、将花药物质置于载玻片，滴加一滴蒸馏水，用镊子或其他工具将花药捣碎，使花粉粒释放出来。

3、滴加1－2滴I 2-KI Stain ，盖上盖玻片，显微镜下观察。

4、观察2-3张片子，每片取5-6个视野，统计花粉的染色率。

染色结果：活力强蓝色 活力弱不被染色或被染成黄褐色 无活力或不育无色计算：观察统计100粒花粉，计算有活力花粉的百分数。

其公式为：花粉活力百分数(%)=有活力花粉数/100×100%注意事项：1、 染完色后，应立即显微镜下观察。

2、 染色时需要将花粉完全浸没于染色液中。

编号 名称 DP0105 DP0105 Storage I 2-KI Stain 10ml 50ml RT 避光使用说明书 1份3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

相关：编号名称DC0032 Masson三色染色液DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)TC1243 甘油三脂(TG)检测试剂盒(GPO-PAP单试剂比色法)。

溲疏花粉的萌发特性及活力测定李娟;路丙社【摘要】以溲疏(Deutzia scabra Thunb)花粉为材料,用染色法(TTC染色法和I2-KI染色法)对花粉活力进行了测定.采用液体培养的方法探讨了不同贮藏温度、不同培养温度、蔗糖浓度、H3BO3浓度以及CaCl2浓度对其花粉萌发的影响和花粉的萌发动态.结果表明:(1)TrC染色法和I2-KI染色法所得结果存在一定的差异,TTC染色法所测得花粉活力为68.24％,I2-KI染色所测得花粉活力接近100％.用TTC染色能够更加准确的测定花粉活力.(2)在20℃,5℃,-15 ℃的贮藏环境下储藏24 h后花粉萌发率分别为49.15％,30.28％,38.50％,因此贮藏溲疏花粉最佳温度为20℃.(3)溲疏花粉萌发的最适宜的糖的质量浓度为100 g/L,最适宜培养温度为25℃.(4)溲疏花粉萌发的最适宜的H3B03和CaCl2质量浓度分别为0.3 g/L和1.5 g/L.(5)溲疏花粉接种后经过2～3h的培养,花粉管长度增长量最高,是花粉萌发的最佳观察时机.【期刊名称】《河北科技师范学院学报》【年(卷),期】2018(032)003【总页数】5页(P10-14)【关键词】溲疏;花粉;花粉活力;花粉萌发率;花粉管生长【作者】李娟;路丙社【作者单位】河北农业大学园林与旅游学院,河北保定,071001;河北农业大学园林与旅游学院,河北保定,071001【正文语种】中文【中图分类】S685.990.1溲疏(Deutzia scabra Thunb)虎耳草科、溲疏属落叶灌木；花粉白色；喜温暖、潮湿的气候环境，耐寒、耐旱，喜光照、稍耐阴；富含腐殖质、pH6～8并且排水良好的土壤是溲疏生长的最适宜土壤条件。

溲疏萌芽力强，极其耐修剪。

溲疏的园林应用广泛，能够丛植于路边、林缘、花篱及岩石园。

对于瓶插观赏来说，溲疏花枝也是不错的选择。

其根、叶、果都可以药用，具有极高的药用价值。