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ttc法测定根系活力实验报告实验报告：TTC法测定根系活力一、实验目的通过TTC法测定根系的活力，了解植物根系对外界条件的适应能力以及对不同环境因素的响应。
二、实验原理TTC(2,3,5-三苯基四氮唑氯化物)法可用于测定细胞线粒体等颗粒物质的活力。
根在呼吸作用下，产生的CO2可以和TTC反应生成甲烷基红色染色物质，反应方程式如下：TTC + 2e- + 2H+ → 染色物质染色物质色深程度与细胞活力成正比，因此可以用染色物质的颜色来评估样品的活力。
三、实验步骤1. 准备材料：TTC试剂、木瓢、淀粉液、滴定管、97%乙醇、植物根系样品。
2. 切取根系样品，在温水中清洗后，将样品放置于淀粉液中进行苏木素染色。
清洗样品的目的是除去外表的污垢和细胞内的胶质物，以避免影响反应的准确性。
在样品染色前，淀粉液要先煮沸，以破坏淀粉酶。
3. 若样品过大，可以在放入淀粉液前用刀片切成较小片段。
4. 取出染色后的样品，用纸巾吸干淀粉液。
避免在植物根系上留下过多的染料，以免干扰实验结果。
5. 将植物根系样品放入烟花瓶内，并加入0.1%TTC试剂，再加入适量的滴定水保持水位2cm左右。
盖住烟花瓶口，避免空气进入。
6. 放置到37℃恒温实验箱中培养30分钟后，加入5～10mL的1N HCl，使混合液呈现明显的色泽变化。
7. 用滴定管加入97%乙醇混合液，振荡均匀。
8. 在另一试管中取相同量的HCl和TTC，作为对照。
9. 用比色计或分光光度计测定样品和对照试管的吸光度值，计算出样品的活力。
四、实验结果本次实验得出了样品的活力，数据如下表所示（数据为典型数据，仅供参考）：根系样品过氧化氢消耗量（mg）活力（%）样品1 3.2 68样品2 2.5 57样品3 3.8 76五、结论通过TTC法测定根系活力，我们可以对植物根系对外界条件的适应能力以及对不同环境因素的响应有一个更加全面的了解。
本次实验得出的活力数据，说明样品的抗逆能力较强，在不同环境下能够保持一定的生命活力。
氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系活力原理：TTC+2H=TTF+HCLTTC无色,TTF红色且比较稳定,不会被空气中的氧气自动氧化,所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体,所以TTC还原量能表示脱氢酶活性,并作为根系活力的指标.试剂:95%乙醇Na2S(还原剂)0.4%TTC溶液:准确称取TTC 0.4g,溶于少量蒸馏水中,定容至 100 ;0.2M PH8.4 Tris-HCL 缓冲液:母液 A:0.2mol/l三羟甲基甲烷(Tris：分子量121g/mol)(24.2g溶至1000ml) B:0.2mol/l HCL A:5OmL+B:16.5 mL,稀释至200ml.1mol/l硫酸:用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml,边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中,冷却后稀释定容至1000ml定量测定:(1)TTC标准曲线的制作吸取0.25ml0.4%TTC溶液放入10ml容量瓶中,加少许Na2S晶体（药匙后端一点即可）,摇匀后立即产生红色的TTF.再用95%乙醇定容至刻度,摇匀.然后分别取此液0.25ml、0.5ml、1.00ml、2.00ml、4ml置10ml容量瓶中,用95%的乙醇定容至刻度,即得到含TTF25μg、50μg 、100μg、200 μg、400 μg的标准比色系列,以空白做参比,在485nm波长下测定光密度,绘制标准曲线.(2)称取样品0.5g,放入25ml的小烧杯中(空白实验先加硫酸再加根样品,其他操作相同),加入0.4%TTC溶液和PH8.4 Tris-HCL 缓冲液的等量混合液10ml,把根充分浸没在溶液中,37℃下暗处保温6h,此后加入1mol/l硫酸2ml(除对照外),以停止反应.(3)把根取出,用吸水纸把材料表面的水吸干,转移到原来的小烧杯中,先加6ml95%的乙醇,浸提15-20min或者封口后放置过夜,直至红色物质完全提出。
提取液转入到10ml的离心管中,用乙醇反复洗涤2-3次,皆转入离心管中,最后加95%的乙醇定容至刻度,4000转速下离心10min,冷却,用分光光度计在485nm下比色,以空白作参比读出光密度,查标准曲线,求出四氮唑还原量.(4)计算将所得数据带入下式,求出四氮唑还原强度四氮唑还原强度=四氮唑还原量(μg)/根重(g)/时间(h)注意事项:1、把根从TTC和Tris-HCL等量混合液中取出时可以不过滤，而直接把根和溶液倾倒在一层纱窗上，在其上面再盖一层纱窗，在纱窗的上面用吸水纸把根上的水分吸干2、37℃保温一定在暗处.3.根切成1cm左右的小段。
氯化三苯基四氮唑（TTC）法测定根系活力摘要：氯化三苯基四氮唑是标准氧化还原电位为80mV的氧化还原物质,溶于水中成为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲,TTC被广泛地用作酶试验的氢受体,植物根所引起的TTC还原,可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强,而被丙二酸、碘乙酸所抑制.所以TTC还原量能表示脱氢酶活性,并作为根系活力的指标.【原理】氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化还原电位为80mV的氧化还原物质,溶于水中成为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲（TTF）,如下式：生成的TTF比较稳定,不会被空气中的氧自动氧化,所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体,植物根所引起的TTC还原,可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强,而被丙二酸、碘乙酸所抑制.所以TTC还原量能表示脱氢酶活性,并作为根系活力的指标.【仪器与用具】分光光度计；分析天平（感量0.1mg）；恒温箱1台；研钵1套；100ml三角瓶；漏斗；移液管10ml 1支、2ml 1支、0.5ml 1支；20ml刻度试管；10ml容量瓶；小培养皿；试管架,药匙；石英砂适量.【试剂】1、乙酸乙酯；2、连二亚硫酸钠（Na2S2O4,为强还原剂,俗称保险粉）；3、1%TTC溶液：准确称取TTC 1.0g,溶于少量蒸馏水中,定容至100ml；4、0.4%TTC溶液：准确称取TTC 0.4g,溶于少量蒸馏水中,定容至100ml；5、磷酸缓冲液（1/15mol/L,pH7.0）；6、1mol/L硫酸：用量筒量取比重 1.84的浓硫酸55ml,边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中,冷却后稀释至1000ml；7、0.4mol/L琥珀酸钠：称取琥珀酸钠（含6个结晶水）10.81g,溶于蒸馏水中,定容至100ml.【方法】1、定性测定（1）配置反应液把1%TTC溶液,0.4moL/L琥珀酸钠和磷酸缓冲液按1:5:4比例混合.（2）把根仔细洗净,把地上部分从茎基切除,将根放入三角瓶中,倒入反应液,以浸没根为度,置37℃左右暗处放1h,以观察着色情况,新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色,表明该处有脱氢酶存在.2、定量测定（1）TTC标准曲线的制作吸取0.25ml 0.4%TTC溶液放入10ml容量瓶,加少许Na2S2O4粉末,摇匀后立即产生红色的TTF.再用乙酸乙酯定容至刻度,摇匀.然后分别取此液0.25ml、0.5ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml置10ml 容量瓶中,用乙酸乙酯定容至刻度,即得到含TTF25μｇ、50μｇ、100μｇ、150μｇ、200μｇ的标准比色系列,以空白作参比,在485nm波长下测定光密度,绘制标准曲线.（2）称取根样品0.5g,放入小培养皿（空白试验先加硫酸再加入根样品,其他操作相同）,加入0.4%TTC 溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml,把根充分浸没在溶液内,在37℃下暗处保温1h,此后加入1mol/L 硫酸2ml,以停止反应.（3）把根取出,吸干水分后与乙酸乙酯3~4ml和少量石英砂一起磨碎,以提出TTF.把红色提出液移入试管,用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二至三次,皆移入试管,最后加乙酸乙酯使总量为10ml,用分光光度计在485nm下比色,以空白作参比读出光密度,查标准曲线,求出四氮唑还原量.（4）计算将所得数据带入下式,求出四氮唑还强度.。
根系活力的测定(ttc法)实验综述报
告
TTC法是一种用来衡量根系活力的有效实验方法，在许多现有的测量植物生长
与发育状况中已被广泛应用。
它是对植物源区域生长活力和发育状况的直接反映，主要通过检测植物根系中是否存在勃起层来量化测量根系的活力。
TTC法的实验步
骤如下：
（1）前期备料：从植物根系挖取一定数量的根系，将其浸入TTC溶液中，然后放
置在25℃恒温环境中诱导根系活力。
（2）TTC测试：以半芯径0.5厘米为主，采用2％——4％TTC溶液测定植物根系
组织的活力，其原理就是那些有活力的根系细胞被黑色染料染色，而死亡的细胞则没有。
（3）固定检测：根据TTC测试结果，将TTC活力分为正活力、弱活力、失活力等
几种，进而检测植物的生长发育状况。
TTC法的实施，可以获知植物根系的情况，也可以作为植物如何应对显著条件
的变化的有效测量依据，因此被广泛应用于植物的生长、发育状况的评价中。
然而，TTC法也有一定的局限性，比如，整个TTC实验过程耗时较长，容易产生假阴性结果，可能误报出尚未出现生长力衰弱的根系组织。
总之，TTC法是衡量植物根系活力的一种有效实验方法，它可以为决定环境要
素对植物生长发育状况的影响提供重要参考意见，是植物学家和拟研究环境因子与植物生长发育关系的科学家的重要研究工具。
但TTC法也具备一定的局限性，在实验步骤的实施中，需要注意控制各项参数，以准确获取植物根系活力的信息。
TTC溶液的配制：取3g TTC溶于1L蒸馏水或冷开水中，配制成01％的TTC溶液。
药液PH应在65～75，以PH试纸试之(如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水)。
【方法】
1将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水(30℃)浸泡2～6H，使种子充分吸胀。
2随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。
3把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。
4放入30～35℃的恒温箱内保温30Min。
也可在20℃左右的室温下放置40～60Min。
5保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力
植物根系活力的测定（TTC法）
一、原理
氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80 mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲（TTF），如下式：
生成的三苯甲（TTF）比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。
二、实验材料、试剂与仪器设备
（一）实验材料
水培或砂培小麦、玉米等植物根系。
（二）试剂
1. 乙酸乙酯（分析纯）。
2. 次硫酸钠（Na2S2O4，分析纯），粉末。
3. 1％TTC溶液：准确称取TTC 1.0 g，溶于少量水中，定容到100 mL。
用时稀释至需要的浓度。
4. 磷酸缓冲液（1/15 mol/L，pH7.0）。
5. 1 mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55 mL，边搅拌边加入盛有500 mL蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000 mL。
6. 0.4 mol/L琥珀酸：称取琥珀酸4.72 g，溶于水中，定容至100 mL即成。
（三）仪器设备
小烧杯3个，研钵1个，移液管：0.5 mL 1支、10 mL 1支、5 mL 3支，刻度试管6支，分光光度计，分析天平（感量0.1 mg），电子顶载天平（感量0.1 g），温箱，试管架，药勺，石英砂适量，滤纸。
三、实验步骤
1. 定性测定
（1）配制反应液把1％TTC溶液、0.4 mol／L的琥珀酸和磷酸缓冲液按1:5:4比例混合。
（2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基部切除。
将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放1～3 h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。
2. 定量测定
（1）TTC标准曲线的制作取0.4％TTC溶液0.2 mL放入大试管中，加9.8 mL乙酸乙酯，再加少许Na2S2O4粉末摇匀，则立即产生红色的TTF。
此溶液浓度为每毫升含有TTF 80 µg。
分别取此溶液0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL置10 mL刻度试管中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含TTF 20 µg、40 µg、80 µg、120 µg、160 µg的系列标准溶液，以乙酸乙酯作参比，在485 nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
（2）称取根尖样品0.5 g，放入小烧杯中，加入0.4％TTC溶液和磷酸缓冲液（pH7.0）各5 mL，使根充分浸没在溶液内，在37℃下暗保温1～2 h，此后立即加入1 mol/L硫酸2 mL，以停止反应。
（与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，37℃下暗保温后不加硫酸，其溶液浓度、操作步骤同上）。
（3）把根取出，用滤纸吸干水分，放入研钵中，加乙酸乙酯3～4 mL，充分研磨，以提出TTF。
把红色提取液移入刻度试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤2～3次，皆移入刻度试管，最后加乙酸乙酯使总量为10 mL，用分光光度计在波长485 nm下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出TTC还原量。
四、结果计算
根系活力= C/(1000*W*h) [mg TTF/（g•h）]
式中：C——四氮唑还原量，μg。
W——根重，g。
h——时间，h。
