第23章氧化应激损伤生物化学诊断

细胞受到氧化应激后损伤的检测方法杨丽娟;游育红【摘要】正常生理状态下,机体活性氧的产生与消除处于一个动态平衡中.而在某些病理生理状态下,细胞内的自由基产物超出其自身的抗氧化能力时,便会产生氧化应激.活性氧基团引起的氧化损伤在许多慢性疾病中起着重要作用,如糖尿病、动脉粥样硬化等.近年来,一些动物、细胞实验及临床试验对细胞氧化损伤的方法展开了研究.对目前国内外常用的检测细胞氧化损伤的方法予以综述,以期为检测细胞氧化受损提供更好的参考.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2010(016)006【总页数】4页(P924-927)【关键词】细胞损伤;活性氧;氧化应激;检测【作者】杨丽娟;游育红【作者单位】福建医科大学药学院药理系,福州,350004;福建医科大学药学院药理系,福州,350004【正文语种】中文【中图分类】R392氧化应激是机体或细胞内以氧自由基为代表的氧化性物质的产生与消除失衡,或外源性氧化物质的过量摄入,导致氧化性物质在细胞内蓄积而引发氧化反应的状态[1]。

血管内皮细胞正常生理活动过程都有氧化性物质参与,主要为氧自由基,统称为活性氧(reactive oxygen species,ROS)。

ROS是需氧生物在自身的新陈代谢过程中,由于受到内外环境的刺激而在其机体内持续产生的活性产物。

ROS因含有未成对电子,所以极不稳定,容易与其邻近分子反应,并可诱发产生新的自由基。

一般情况下可以参与机体的物质代谢和信号转导,对细胞的正常代谢起着重要作用。

它的产生会受到体内抗氧化防御系统的调节,从而保持在平衡的健康状态。

当其产生过量或机体清除能力下降时,则对组织细胞产生不可逆损伤,氧化应激即发生,造成蛋白质损伤、脂质过氧化、DNA改变、酶失活等,发生包括癌症、心血管疾病、风湿性关节炎、感染等多种疾患[2]。

1.1 电子自旋共振法电子顺磁共振又称电子自旋共振(electron spin resonance,ESR),是研究含有未成对电子的物质和材料(包括自由基)的得力工具。

氧化应激（oxidativestress）与氧化损伤自由基和活性氧是重要的生物活性物质，那么氧化损伤是否存在。

其实在生物体系中，氧化损伤不仅存在，而且自由基和活性氧导致的氧化损伤在许多疾病发生发展中发挥十分重要的作用。

具有重要生理功能的物质同时也可以导致机体损伤，是否存在矛盾？一、生命在于平衡任何事情都有两面性。

例如，氧气十分重要，当空气中氧气浓度低于15%，我们就会发生缺氧。

但是把氧浓度提高到70%以上，长时间呼吸氧气就会对肺造成严重伤害。

假如我们的空气中只有氧气，我们根本无法长时间生存，存活很难超过一月，因为氧气本身就属于自由基，当浓度过高，暴露时间过长，就会使肺发生严重的氧化损伤，这就是肺慢性氧中毒。

如果在高压下呼吸氧气，甚至可导致全身，特别是脑功能迅速伤害，严重时表现为惊厥大发作，这就是急性氧中毒。

又比如血液中葡萄糖是我们赖以生存的物质，如果血液中葡萄糖浓度太低（低过4.0 mM），就会发生低血糖。

低血糖比高血糖危害更大，非常容易威胁患者生命，对于高血糖的危害，糖尿病患者甚至一般读者都知之较多，也非常重视，而对于低血糖的严重性往往重视不够。

再一个例子是关于钙等微量元素，一般我们都非常担心缺钙，但可能不了解，细胞内游离钙离子浓度升高几乎是所有细胞损伤甚至死亡的重要介质。

另如酸硷平衡、激素浓度、氨基酸的神经兴奋性、高血压和低血压和高低体温等等。

这样的例子在生物体系中不胜枚举。

可以说，生物功能的维持就是多种因素的动态平衡，许多重要的物质和生命指标都必须控制在一个有限的正常范围内，过低或过高都无法维持正常的生理过程。

医学生理学领域把这种现象称为稳态。

以上事例说明，我们判断一种物质是否有害，是要根据具体情况，对生物活性物质，我们必须了解同样一种物质，在有的情况下对机体有用，而有的情况下对机体有害，绝对不能简单地把一种物质如自由基看作什么百病之源，万恶之首。

许多商业宣传往往把某种有害因素过分夸大，把自己产品的有利作用随意夸张，这显然是错误的。

抗氧化和氧化应激损伤指标检测的方法与方法学评价。

自由基、活性氧、氧化应激、脂质过度氧化作用的概念与种类； 氧化应激损伤机制、抗氧化损伤的防御系统组成和作用。

氧化应激与疾病和衰老的关系；氧化应激的原因。

氧化应激 (oxidative stress, OS)：机体受到各种内外源因素的干扰 ，使体内的活性氧 (reactive oxygen species, ROS) 自由基和活性氮 (reactive nitrogen species, RNS) 自由基等相关物质产生过多 ，氧化程度超出抗氧化物的清除能力 ，氧化系统和 抗氧化系统失衡 ，从而导致分子、细胞和机体损伤的状态。

自由基 (free radical)： 自由基是单独存在的 ，最外层电子轨道上具有不配对电子的离子、原子、分子基团 ，化学性质十分活泼 ，极易与周围分子发生反应 ，具有多种生物学活性。

活性氧 (reactive oxygen species, ROS)： R OS是一类由氧形成、并在分子组成上含有氧且化学性质比氧自身活泼的物质的总称。

ROS包括超氧阴离子 (O2-)、羟 自由基 (·OH)、烷氧基 (RO ·)、烷过氧基 (ROO ·) 等氧自由基及过氧化氢 (H2O2)、 单线态氧 (single oxygen, 1O2)、氢过氧化物 (ROOH) 和次卤酸 (HOX) 等。

活性氮 (reactive nitrogen species, RNS)： NO及其生物体内继发性产物的统称。

R NS包括一氧化氮 (NO)、二氧化氮 (NO₂) 和过氧化亚硝酸盐 (ONOO-) 等。

1.ROS过多(1) 外源性因素 ：① 加热；② 环境化学污染物； ③ 电离辐射；④ 细菌感染。

(2) 内源性因素 ： ① O2-的产生； ② ·OH的产生； ③ 脂质过氧化作用；④ 一氧化氮 (NO) 的产生； ⑤ 吞噬细胞中活性氧的产生。

细胞自由基和氧化应激机制的生物化学和生物学研究细胞自由基和氧化应激机制是目前生物化学和生物学研究中的热门话题之一。

这两种机制的相互作用对于我们认识生命活动和探索疾病发生的机理具有重要的意义。

本文就这两种机制进行详细的介绍和分析。

一、细胞自由基自由基是指一个原子、分子或离子中存在未配对电子的化学物质。

自由基在生物体内产生多种应激反应，如氧化应激、炎症反应等等。

在生物体内，产生自由基的主要途径有外源性毒素、氧分子和代谢产物等。

细胞内产生的自由基主要有超氧自由基（O2-）、羟自由基（OH.）和氮氧自由基（NO.）等。

超氧自由基是生物体内最常见的自由基。

它的生产与线粒体内呼吸过程和细胞质内的许多氧化还原酶有关。

线粒体是细胞内唯一能够生成大量ATP的部位，但是在进行这个过程中，会产生大量的超氧自由基。

细胞中许多氧化还原酶也能够产生超氧自由基，如NADP氧化酶、XO酶等。

虽然超氧自由基对身体有一定的正面作用，但是过多的超氧自由基会对身体产生不良影响，如氧化DNA、脂质和蛋白质等，从而加速生物体老化和疾病的发生。

羟自由基是最具高反应性的自由基之一。

因为它在两个氢原子和一个氧原子之间存在一个未配对的电子。

羟自由基的产生与多种化学反应和物理因素有关，如热、辐射、炎症等可以产生大量的羟自由基。

羟自由基对生物体的危害主要显示在它的高反应性上，可以氧化DNA、脂质和蛋白质等分子，造成细胞死亡和疾病发生。

氮氧自由基是一类带有氮原子的自由基，其代表物质是一氧化氮（NO.）。

氮氧自由基在生物体内通过一定的生化反应和酶催化发生，如NO合酶、一氧化氮合酶和过氧化氮酶等。

氮氧自由基在生物体内起着多种功能，如调节血压、影响免疫系统、参与神经传导等。

但是，过多的氮氧自由基会造成很多疾病的发生和进一步危害。

二、氧化应激机制氧化应激是生物体在细胞自由基的作用下，与环境产生的各种方式和生物体代谢产生的自由基引起的反应。

氧化应激机制在细胞的物理、化学和生物学特性中起着非常重要的角色。

氧化应激新思路国自然-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述随着科技的发展和人类生活方式的改变，现代社会人们面临着日益增多的环境压力和生活压力，导致身心健康问题的日益突出。

在这个背景下，研究氧化应激及其对人体健康的影响成为了当前医学和生物学领域的热点研究。

氧化应激是指生物体内外的氧自由基和氧反应产物过量积累，导致细胞发生一系列的不可逆反应，从而引发一系列生理和病理过程的综合总称。

氧化应激在正常生理状态下与组织机能的维持有着一定的关系，是生物体内氧代谢抵达平衡的一种机制。

然而，当环境中的氧自由基和氧反应产物超过生物体抗氧化能力时，就会导致氧化应激的产生。

氧化应激对细胞、组织和器官产生了广泛而复杂的影响，对人体的健康产生了重要的影响。

随着对氧化应激研究的深入，科学家们逐渐认识到氧化应激与多种疾病的发生发展密切相关。

氧化应激已经被证实与多种疾病的发生发展密切相关，包括心血管疾病、神经系统疾病、肿瘤和炎症等。

目前，研究氧化应激对疾病的发病机制和临床治疗具有重要的意义，对于预防和治疗这些疾病具有重要的价值。

因此，本文旨在通过对氧化应激进行全面深入的研究，探讨其对人体健康的影响，提出新的研究思路和治疗策略，为促进人类健康和疾病的防治提供新的思路和方法。

通过深入研究，相信可以为人类的健康事业作出贡献，为解决氧化应激相关问题提供有力的科学支持。

在结论部分，我们将总结前文的研究成果，提出新的思路和展望未来的研究方向。

1.2文章结构文章结构部分的内容可以包括以下内容：文章将分为三个主要部分：引言、正文和结论。

引言部分主要介绍氧化应激的背景和研究意义。

首先，概述氧化应激的概念和相关领域的研究进展。

其次，明确文章的目的，即通过新思路探索和解决氧化应激相关的问题。

最后，总结引言部分，为接下来的正文做铺垫。

正文部分将分为三个要点进行讨论。

第一个要点将详细介绍氧化应激的基本原理和机制。

包括氧化应激的定义、生成机制以及对细胞和生物体的影响等内容。

生物化学——生物氧化（一）引言：生物氧化是生物化学领域中的重要概念，指的是生物体内发生的氧化反应过程。

这些反应通常涉及生物体中的氧分子与有机物之间的相互作用，产生能量并支持生命的运行。

本文将详细介绍生物化学中的生物氧化过程。

正文：一、氧化应激作用1. 超氧阴离子的产生与作用2. 过氧化氢的生成及其对细胞的损伤3. 氮氧化物的产生和生物效应4. 氧自由基与细胞的抗氧化机制5. 氧化应激与疾病发生的关系二、细胞色素氧化过程1. 细胞色素P450介导的氧化反应2. 细胞色素c氧化还原作用3. 胆红素的氧化代谢及生物学功能4. 细胞色素氧化过程中的辅助因子与催化机制5. 细胞色素氧化在药物代谢中的作用三、生物体内的有氧呼吸过程1. 有氧呼吸的基本原理和产生的能量2. 糖代谢在有氧呼吸中的作用3. 脂肪酸氧化与有氧呼吸的关系4. 氨基酸代谢在有氧呼吸中的贡献5. 有氧呼吸与孤儿疾病的关联四、蛋白质氧化及抗氧化反应1. 氧化蛋白的产生与损伤2. 氧化还原调节蛋白的功能与机制3. 抗氧化酶的分类和作用4. 蛋白质氧化与老化以及疾病的关系5. 蛋白质氧化与抗氧化剂的应用五、线粒体呼吸链与生物氧化反应1. 线粒体呼吸链的结构与功能2. 线粒体膜中的电子转移过程3. 细胞色素c氧化酶的作用与调控4. 线粒体呼吸链与能量产生的关系5. 生物氧化反应在能量代谢调控中的意义总结：生物氧化是生物体内重要的代谢过程，涉及氧分子与有机物的相互作用。

氧化应激、细胞色素氧化过程、有氧呼吸、蛋白质氧化及抗氧化反应以及线粒体呼吸链都是生物氧化中的关键内容。

深入理解这些过程对于揭示生命活动的分子机制以及疾病的预防和治疗具有重要意义。

生物氧化与氧化应激的生物化学调控机制生物体内的氧化还原反应是维持细胞正常功能的重要过程。

然而，过量的氧化反应也会产生有害的氧化应激。

为了保持细胞内氧化还原平衡，生物体进化出了一系列生物化学调控机制。

1. 抗氧化酶系统细胞内存在着多种抗氧化酶，如超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和过氧化氢酶(CAT)等。

这些酶能够催化氧化反应，将有害的氧自由基转化为无害的物质，降低氧化应激对细胞的损伤。

2. 氧化应激传感器细胞内的氧化应激传感器能够感知细胞内外环境中的氧化应激水平，并传递信号，触发相应的生物化学反应。

其中，核因子E2相关因子2(Nrf2)是一种重要的氧化应激传感器，它能够调控抗氧化酶的合成，增强细胞对氧化应激的抵抗能力。

3. 自噬途径自噬是一种特殊的细胞膜体途径，能够通过溶酶体降解细胞内的有害物质和异常蛋白质。

氧化应激状态下，自噬途径能够清除细胞内受到氧化损伤的蛋白质和细胞器，维持细胞的正常功能。

4. 氧化信号通路氧化应激还可以通过特定的信号通路调控细胞的生物活性。

一种重要的信号通路是Nrf2-ARE通路，它能够调控抗氧化酶的合成。

此外，氧化应激还能够激活一些细胞凋亡信号通路，促使细胞死亡，从而清除受损细胞，维持组织的正常功能。

总结起来，生物氧化与氧化应激的生物化学调控机制涵盖了抗氧化酶系统、氧化应激传感器、自噬途径和氧化信号通路等多个方面。

这些调控机制相互协调、相互作用，保持了细胞内的氧化还原平衡，并保护细胞免受氧化应激的损伤。

了解这些调控机制的原理，对于预防和治疗与氧化应激相关的疾病，具有重要的意义。

氧化应激氧化应激本综述由解螺旋学员穿⼭甲说了什么负责整理（2017年12⽉）氧化应激（oxidative stress, OS）是指体内氧化与抗氧化作⽤失衡，倾向于氧化⽽导致的组织损伤。

1, 2⼀旦发⽣氧化应激，许多细胞⽣物分⼦，如DNA、脂质和蛋⽩质就会容易受到⾃由基引起的氧化损伤，从⽽导致细胞和最终的组织器官功能障碍。

氧化应激与多种疾病有关。

1.⼼⾎管疾病过多的氧化应激反应物的堆积对⾎管系统有害1，它们会损伤内⽪和平滑肌细胞膜，减少NO⽔平，氧化四氢⽣物蝶呤（BH4）作为⼀氧化氮合酶（NOS）的辅助因⼦，促进不对称⼆甲基精氨酸（ADMA）的合成，产⽣NOS抑制物，抑制鸟苷环化酶。

其中的⼀个机制是低密度脂蛋⽩（LDL）中的多不饱和脂肪酸氧化成氧化低密度脂蛋⽩（oxLDL），这也是动脉粥样硬化的⼀个中间产物。

3-5ROS依赖的信号通路引起转录和表观遗传失调，导致慢性低度炎症、⾎⼩板活化和内⽪功能障碍。

4, 6⼼⾎管疾病与⼼肌细胞活性氧族（ROS）的过多有关。

7, 82.神经退⾏性疾病9-11图1. 氧化应激与各种神经退⾏性疾病的关系3.系统性红斑狼疮（SLE）SLE的特点是产⽣有害的⾃⾝抗原，炎症因⼦的过度作⽤，以及破坏性的组织和器官损伤。

所有这些紊乱都会因活性氧的异常消耗和过量⽣成⽽增强或减弱。

12氧化应激在SLE中增加，导致免疫系统失调、细胞死亡信号的异常激活和处理、⾃⾝抗体的产⽣和致死性并发症。

⾃⾝抗原的氧化修饰引起⾃⾝免疫，⾎清蛋⽩的氧化修饰程度与SLE的疾病活动和器官损害密切相关。

134.慢性阻塞性肺疾病（COPD）有证据表明COPD患者存在氧化和羰基应激，特别是在急性加重期。

14COPD患者的肺泡巨噬细胞更活跃，释放更多的活性氧，表现为超氧⾃由基和过氧化氢。

15COPD患者激活的外周⾎中性粒细胞释放的活性氧增加，特别是在病情恶化期间。

14COPD常加重期患者体内内源性抗氧化物⾕胱⽢肽的浓度低于稳定期患者。

常见的氧化损伤生物标记物分析技术分类介绍氧化应激（Oxidative Stress，OS）是指体内氧化与抗氧化作用失衡的一种状态，倾向于氧化，导致中性粒细胞炎性浸润，蛋白酶分泌增加，产生大量氧化中间产物。

氧化应激是由自由基在体内产生的一种负面作用，并被认为是导致衰老和疾病的一个重要因素。

氧化应激可通过测量活性氧（ROS）来直接评估，或通过过度产生的ROS对脂质，蛋白质和核酸造成的相关损害来间接评估。

尽管直接测量ROS是理想的方法，但是与ROS的瞬时特性相比，通常更依赖于间接方法因为生物分子上的损伤标记相对稳定。

以下是用于检测最常见的氧化损伤生物标记物的分析技术的分类。

ROS：氧气作为正常代谢的一部分被电子还原，导致形成各种ROS，包括过氧化氢（H2O2）和超氧化物（O2•-）。

当不受控制的氧化对生物系统造成压力时，会对细胞大分子造成损害。

ROS的测定不能识别ROS 产生的来源（即正常状态与疾病状态），但是如果实验模型处于压力下，则ROS可能增加并且分子成分改变。

过氧化氢分析试剂盒Hydrogen Peroxide Cell-Based Assay Kit，#600050利用ADHP（灵敏稳定的H2O2探针），并包含过氧化氢酶以检查试验的特异性。

RNS：在氧化应激过程中也会产生活性氮（RNS）。

由一氧化氮合酶（NOS）和O2•-合成的高含量一氧化氮（NO•）导致过氧亚硝酸盐的形成。

NO•本身也与硫醇和铁硫酶反应，而过氧亚硝酸盐与酪氨酸残基反应形成硝基酪氨酸。

Nitrate/Nitrite Colorimetric Assay试剂盒Nitrate/Nitrite Colorimetric Assay Kit，#780001将少量添加的NADPH与催化系统结合使用，将用过的NADP+循环回NADPH以避免NADPH干扰Griess试剂的化学性质；对于血浆和尿液等液体的分析非常有效，但不能通过体外NOS分析（添加了过量的NADPH）进行NO2-和NO3-分析。

体内氧化应激损伤的评估方法随着现代人们的生活条件不断提高和寿命延长，慢性疾病的问题日益突出。

其中一个重要的因素就是氧化应激损伤，即氧自由基和活性氧物质对细胞分子的攻击和破坏。

氧化应激损伤的发生和积累会导致各种慢性疾病，包括心血管疾病、癌症、神经退行性疾病等等，因此如何评估氧化应激损伤变得尤为重要。

本文旨在介绍体内氧化应激损伤的评估方法。

首先，氧化应激损伤的评估需要了解氧自由基和活性氧物质的生成和消除。

氧自由基包括超氧阴离子、羟自由基；活性氧物质包括单线态氧分子和氢氧自由基等等。

它们与身体内蛋白质、脂质、核酸等分子相互作用，导致细胞膜、蛋白质、氧化还原途径等组织结构和功能的变化，从而影响人体健康。

其次，体内氧化应激损伤的评估方法包括实验方法和临床方法。

实验方法是在实验室中测量氧化应激指标的变化，常见的指标包括氧化脂质、氧化蛋白质和DNA氧化损伤等。

通过检测这些指标的变化，可以推断体内氧化应激水平的高低。

其中，氧化脂质检测是衡量氧化应激的重要方法之一。

脂质分子在氧化过程中形成的自由基会引起脂质过氧化反应，产生大量的丙二醛（MDA）等证据。

通过检测血液和组织中MDA的水平，可以判断体内脂质氧化的水平。

临床方法是应用生物体内自身的反应来评估氧化应激的水平。

目前最常用的方法是测定血清中的抗氧化酶（SOD、CAT等）和非酶抗氧化指标（葡萄糖醛酸、总抗氧化能力等）的水平。

这些反应物可以反映机体内抗氧化能力的程度，即抵御和清除氧自由基的能力。

除此之外，还有一些先进的分子遗传学方法，如单核苷酸多态性（SNP）和表观遗传学标志物等可在基因水平上探讨氧化应激和氧化应激相关疾病的关系。

虽然这些方法在评估氧化应激有一定的先进性和预测性，但由于技术的限制和方法的复杂性，目前在临床诊断和治疗中尚未得到普遍应用。

总的来说，体内氧化应激损伤的评估方法主要包括实验方法和临床方法，二者可以互相补充，每种方法各有优缺点。

为了更全面和准确地评估氧化应激水平，我们需要根据不同情况，选择合适的方法进行评估。

氧化应激的定量评价方法大致分做三类第一篇：氧化应激的定量评价方法大致分做三类氧化应激的定量评价方法大致分做三类：1）测定由活性氧修饰的化合物；2）测定活性氧消除系统酶和抗氧化物质的量；3）测定含有转录因子的氧化应激指示物。

而根据氧化应激的物质种类，又可主要分为蛋白质氧化损伤标志物检测、脂质过氧化标志物检测、核酸DNA/RNA损伤检测以及活性氧消除系统酶和抗氧化物质检测等。

检测的方法也是多种多样，化学法、免疫染色、ELISA等等就本人经验，核酸DNA/RNA损伤，如8-OHDG ELISA 等方法是比较可靠的，但是通常损伤较重才可能检测出，而传统MDA等脂质过氧化标志物、各种氧化酶化学检测是比较简便的，但却稳定性很差。

大家能否谈谈自己曾采用的相关方法，并从敏感性、简便性等方面谈谈自己的方法ROS氧化损伤碱基后，碱基不稳定，自己掉下去，可以形成AP site(apurinic/apyrimidinic site or abasic site)，或者损伤的碱基被碱基切除（base excision repair）机制切掉形成中间产物。

AP site一般不直接引起细胞凋亡，但是当量太大而又处在S期DNA复制时，细胞在修复AP site 时形成nick直接激活PARP，或者两条互补链上临近的APsite会导致双链断裂，这样激活ATM等，就会进一步传递信号触发细胞凋亡机制了。

一般活性氧才会损伤DNA，过氧化氢不会氧化应激（Oxidative Stress，OS）是指体内氧化与抗氧化作用失衡，倾向于氧化，导致中性粒细胞炎性浸润，蛋白酶分泌增加，产生大量氧化中间产物。

氧化应激是由自由基在体内产生的一种负面作用，并被认为是导致衰老和疾病的一个重要因素细胞氧化损伤后需证实细胞功能障碍可检测哪些指标啊? 1.细胞存活率的测定在细胞氧化损伤过程中,每隔半小时吸取100μL细胞液置于96孔微量滴定板,存活细胞用MTT(噻唑兰,serva)染色法确定.MTT溶于pH7.2PBS(终浓度5g/L),过滤灭菌.每孔加入20μLMTT溶液,37℃孵育4h,每孔再加入100μL酸性异丙醇(100μL异丙醇中含0.04NHCl),混匀,静置5min后,将96孔滴定板置于酶联免疫检测仪上,于波长570nm处测定每孔光吸收值OD,用不加MTT的细胞孔作本底对照,细胞存活率=([OD]t/[OD]u)×100%,此处[OD]t为经3种处理方式处理过的细胞光吸收值,[OD]u为未经任何处理的细胞的光吸收值.2.凋亡细胞DNA电泳分析以800g的速度离心收集处理过的细胞,弃上清后悬浮于40μL96%0.2M磷酸氢二钠于4%0.1M柠檬酸的PC缓冲液中(pH7.8)30min;1kg离心5min后将上清转移至0.5mL Eppendorf管,真空浓缩20min;加入3μL0.25%NP-40溶液和3μL RNaseA(1g/L)溶液,在37℃下孵育30min后,再加入3μL 1g/L蛋白酶K,37℃下继续孵育30min,最后加入12μL电泳指示剂溶液(含0.25%溴酚兰,40%蔗糖).将样品小心加入含溴乙啶的0.8%琼脂糖凝胶点样孔中,在25V电压下电泳10h,于紫外透射仪上观察电泳结果并拍照保存氧化损伤是引起许多组织细胞凋亡的一个重要机制。

氧化应激类检测氧化应激(Oxidative Stress，OS)是机体应答内外环境，通过氧化还原反应对机体极性多层次应激性调解和信号转导，同时造成氧化损伤的重要生命过程。

机体的调节机制会使体内处于相对自稳态，正常代谢使机体处于自稳态的瞬间，会产生氧化产物，通常用所研究系统中或体内氧化增强剂和抗氧化剂之比来衡量其应激水平。

迪信泰检测平台采用生化法，实现对多种氧化应激类物质高效、精准的测定。

目前可检测的氧化应激类物质包括超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、丙二醛和过氧化氢等。

此外，我们还提供氧化应激系列生化试剂盒产品，以满足您的不同需求。

5种氧化应激类物质含量比较迪信泰检测平台可检测氧化应激类项目丙二醛(MDA)含量检测脯氨酸(PRO)含量检测过氧化氢(H2O2)含量检测超氧化物歧化酶(SOD)活性检测过氧化氢酶(CAT)活性检测过氧化物酶(POD)活性检测多酚氧化酶(PPO)活性检测苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性检测黄嘌呤氧化酶（XOD）活性检测葡萄糖氧化酶(GOD)活性检测二胺氧化酶(DAO)活性检测二氢黄酮醇还原酶(DFR)活性检测花青素还原酶(ANR)活性检测总抗氧化能力(T-AOC)检测超氧阴离子含量检测超氧阴离子清除能力检测羟自由基清除能力检测蛋白质羰基含量检测单宁含量检测铜蓝蛋白(Cp)含量检测尿酸(UA)含量检测总巯基含量检测非蛋白质巯基含量检测植物总酚(Tp)含量检测植物类黄酮含量检测植物原花青素(OPC)含量检测植物花色苷含量检测生化法测定氧化应激类物质样本要求：1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL，测定样品不返还，请您保留备份。

周期：2~3周项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：1. 实验步骤（中英文）2. 相关参数（中英文）3. 图片4. 原始数据5. 指定氧化应激类物质含量/酶活性信息。