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试验一酵母细胞的破碎及破碎率的测定一、实验目的1.掌握超声波破碎细胞的原理和操作；2.学习细胞破碎率的评价方法。
二、实验原理频率超过15～20kHz的超声波，在较高的输入功率下（100～250W）可破碎细胞。
本实验采用JY95-2D超生波细胞粉碎机，其工作原理是：JY92-2D超声波细胞粉碎机由超声波发生器和换能器两部分组成。
超声波发生器（电源）是将2 20V、50Hz的单相电通过变频器件变为20～25Hz、约600V的交变电能，并以适当的阻抗与功率匹配来推动换能器工作，做纵向机械振动，震动波通过浸入在样品中的钛合金变速杆对破碎的各类细胞产生空化效应，从而达到破碎细胞的目的。
三、实验器材超声波细胞破碎机，电子显微镜，酒精灯，载玻片，血细胞计数板，接种针。
四、试剂和材料（1）酵母细胞悬浮液 0.2g/mL的啤酒酵母溶于50mmol/L乙酸钠-乙酸缓冲溶液（pH为4.7）。
（2）马铃薯培养基①马铃薯（去皮切块）200g；②琼脂20g；③蔗糖20g；④蒸馏水1000mL；⑤pH为6.5。
选优质马铃薯去皮切块，加水煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，融化后补充加水至1000mL，分装，115℃灭菌20min。
五、操作步骤（1）啤酒酵母的培养①菌种纯化。
将酵母菌种转接至斜面培养基上，28～30℃，培养3～4d，培养成熟后，用接种环取一环酵母菌至8mL液体培养基中，28～30℃，培养24h。
②扩大培养。
将培养成熟的8mL液体培养基中的酵母菌全部转接至80mL液体培养基的锥形瓶中，28～30℃，培养15～20h。
（2）破碎前计数取1mL酵母细胞悬浮液经适当稀释后，用血细胞计数板在显微镜下计数。
（3）细胞超声波破碎①将80mL酵母细胞悬浮液放入100mL容器中，液体浸没超声发射针1cm。
②打开开关，将频率设置中档，超声破碎1min，间歇1min，破碎20次。
③取1mL破碎后的细胞悬浮液经适当稀释后，滴一滴在血细胞计数板上，盖上盖玻片，用电子显微镜进行观察，计数。
第1篇一、实验目的1. 了解酵母细胞破壁的基本原理和方法。
2. 掌握酵母细胞破壁的实验操作步骤。
3. 分析不同破壁方法对酵母细胞破壁效果的影响。
二、实验原理酵母细胞壁主要由β-（1，3）-葡萄糖和N-乙酰葡萄糖胺构成，是一种半纤维素。
在破壁过程中，需要破坏这种结构，使酵母细胞内的物质得以释放。
常见的破壁方法有机械法、化学法、酶法等。
三、实验材料1. 酵母菌株：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）2. 培养基：YNB培养基3. 试剂：TE缓冲液、SDS、卤仿、异戊醇、酚、氯仿4. 仪器：高压破壁仪、显微镜、离心机、EP管、均质机等四、实验方法1. 酵母细胞培养将单菌落接种于25mL YNB培养基中，30℃振荡培养过夜。
2. 酵母细胞破壁（1）显微镜观察：取一滴菌液于显微镜下观察，记录细胞形态。
（2）细胞破碎：取10mL培养酵母菌液，5000g离心3min，弃上清液。
加入5mL 1倍TE悬浮液，混匀。
（3）高压破碎：将悬浮液倒入高压破壁仪的样品管中，压力加至20MPa，停留15s，降压，反复来回压3次。
取出细胞液，取一滴于显微镜下观察，记录细胞形态。
（4）原生质体收集：取2个EP管，每管加入1.5mL上述细胞液，12000g离心5min，收集原生质体。
弃上清液，每管加入300μL 10%SDS溶液，混匀冰浴5min。
（5）破原生质体：加入150μL tris饱和酚和150μL卤仿异戊醇混合液（卤仿：异戊醇24：1），混匀，12000g离心10min。
（6）提取质粒：将水相移至另一EP管中，加入等体积的卤仿异戊醇混合液，混匀，12000g离心10min。
3. 破壁效果分析（1）观察细胞形态变化：通过显微镜观察，比较不同破壁方法对酵母细胞破壁效果的影响。
（2）提取质粒浓度测定：通过紫外分光光度计测定提取质粒的浓度，比较不同破壁方法对质粒提取效果的影响。
五、实验结果与分析1. 观察细胞形态变化通过显微镜观察，发现高压破碎法和超声波破碎法破壁效果较好，细胞形态从杆状变为不规则球状，流动性较大。
大肠杆菌细胞破碎的方法
大肠杆菌是常见的一种细菌，破碎大肠杆菌细胞可以用于提取蛋白质、核酸等目的。
以下是常用的几种大肠杆菌细胞破碎的方法。
1.物理破碎法：
(1)超声波破碎法：将大肠杆菌培养物置于超声波水浴中，通过高频
振动破碎细胞壁。
超声波破碎法操作简单，破碎效果好，但需注意温度控制，避免细胞内容物的热失活。
(2)高压破碎法：将大肠杆菌细胞悬浮液注入高压装置，通过高压力
将细胞破碎。
高压破碎法操作较复杂，需要高压装置，但破碎效果较好。
(3)化学破碎法：用氨基磺酸(SDS)等表面活性剂破坏脂膜结构，破碎
细胞。
2. 酶处理法：使用酶来消化大肠杆菌细胞壁，达到破碎细胞的目的。
常用的酶有裂解酶 (lysozyme) 和胰蛋白酶 (trypsin)等。
将大肠杆菌细
胞悬浮液与酶溶液混合，可在室温或低温下静置，待细胞壁完全消化后，
用冷离心机将细胞破碎。
3.冻融破碎法：将大肠杆菌培养物冷冻，然后加入浸泡在恒温水中的
冷微晶纤维素或硅胶颗粒，使细胞黏附在颗粒上。
再用离心机离心沉淀，
将上清液倒掉，然后加入冷离心缓冲液悬浮，再次离心沉淀，破碎细胞。
4.震荡方法：将大肠杆菌细胞悬浮液加入离心管或试管中，使用齿条
式震荡器或超声震荡器进行震荡，使细胞壁破碎。
细胞破碎的方法选择应根据实验的具体需求和条件来决定。
在选择方法时，应综合考虑细胞破碎效果、操作简便性、设备和试剂的可获得性，以及对目标物质的保护等因素。
一、实验目的1. 掌握细胞破碎的基本原理和方法。
2. 学习并运用不同的细胞破碎技术。
3. 观察细胞破碎效果，分析不同破碎方法对细胞内物质释放的影响。
二、实验原理细胞破碎是指利用物理、化学或生物方法破坏细胞膜，使细胞内容物释放出来。
细胞破碎技术在生物医学、生物化工等领域具有广泛的应用。
常用的细胞破碎方法包括机械破碎、化学破碎、超声波破碎等。
三、实验用品1. 细胞悬液（大肠杆菌、酵母细胞等）2. 破碎器械（玻璃匀浆器、超声破碎仪等）3. 破碎剂（洗涤剂、酶等）4. 试剂（细胞裂解液、PMSF、蛋白酶抑制剂等）5. 仪器（显微镜、离心机、分光光度计等）6. 其他（吸管、试管、培养皿等）四、实验内容与方法1. 机械破碎法（1）将细胞悬液置于玻璃匀浆器中，加入适量细胞裂解液。
（2）使用玻璃匀浆器快速上下搅拌，使细胞破碎。
（3）将破碎后的细胞悬液转移至离心管中，离心分离细胞碎片和细胞内物质。
2. 化学破碎法（1）将细胞悬液置于试管中，加入适量洗涤剂和PMSF。
（2）轻轻振荡混合，使细胞膜破裂。
（3）将破碎后的细胞悬液转移至离心管中，离心分离细胞碎片和细胞内物质。
3. 超声破碎法（1）将细胞悬液置于超声破碎仪的样品杯中。
（2）开启超声破碎仪，调整超声功率和作用时间，使细胞破碎。
（3）将破碎后的细胞悬液转移至离心管中，离心分离细胞碎片和细胞内物质。
4. 观察细胞破碎效果（1）取少量破碎后的细胞悬液，在显微镜下观察细胞碎片和细胞内物质。
（2）使用分光光度计测定细胞内物质的浓度，分析不同破碎方法对细胞内物质释放的影响。
五、实验结果与分析1. 观察细胞破碎效果通过显微镜观察，发现机械破碎法、化学破碎法和超声波破碎法均能有效地破碎细胞，细胞碎片和细胞内物质分离良好。
2. 分析不同破碎方法对细胞内物质释放的影响（1）机械破碎法：细胞内物质释放较少，可能由于细胞膜较厚，机械破碎效果较差。
（2）化学破碎法：细胞内物质释放较多，洗涤剂能有效地破坏细胞膜，使细胞内容物释放。
酵母细胞破碎实验报告酵母细胞破碎实验报告引言：酵母是一种常见的单细胞真菌，广泛应用于生物学研究中。
为了进一步了解酵母细胞的结构和功能，本实验旨在通过破碎酵母细胞，提取其细胞内部的物质，并对其进行分析和研究。
材料与方法：1. 酵母细胞培养液：选择适宜的培养基，培养酵母细胞至适宜生长期。
2. 破碎液：含有细胞壁酶和蛋白酶的缓冲液。
3. 离心机：用于离心培养液和破碎后的细胞。
4. 超声波破碎仪：用于破碎酵母细胞。
5. 离心管：用于收集破碎后的细胞。
实验步骤：1. 收集酵母细胞：将培养好的酵母细胞用离心机离心，去除培养液。
2. 重悬酵母细胞：用适量的破碎液将酵母细胞重悬，并在室温下静置一段时间，使细胞壁和细胞膜完全溶解。
3. 超声波破碎：将重悬的酵母细胞放入超声波破碎仪中，设置适当的超声波频率和时间，进行细胞破碎。
4. 离心分离：将破碎后的细胞用离心机进行离心，分离出上清液和沉淀物。
5. 收集上清液：将上清液转移到干净的离心管中，作为破碎后的细胞提取物。
结果与讨论：通过上述实验步骤，我们成功地破碎了酵母细胞，并获得了细胞提取物。
这些提取物可以用于进一步的实验和分析。
在破碎酵母细胞的过程中，破碎液中的细胞壁酶和蛋白酶起到了关键的作用。
细胞壁酶能够降解酵母细胞的细胞壁，使细胞更易于破碎。
而蛋白酶则能够降解细胞膜和细胞内的蛋白质，释放出细胞内的物质。
超声波破碎是一种常用的细胞破碎方法，通过超声波的作用，能够有效地破碎细胞膜和细胞器，释放出细胞内的物质。
在实验中，我们选择了适当的超声波频率和时间，使得细胞能够充分破碎，同时又不会对细胞内的物质造成太大的损伤。
通过离心分离，我们将破碎后的细胞分离为上清液和沉淀物。
上清液中含有被破碎的细胞内物质，如蛋白质、核酸等，而沉淀物则主要是未破碎的细胞残渣和细胞器。
细胞提取物的获得为我们进一步研究酵母细胞的结构和功能提供了重要的基础。
我们可以通过分析提取物中的蛋白质和核酸，了解酵母细胞的基因组和蛋白质组成。
试验一酵母细胞的破碎及破碎率的测定一、实验目的1.掌握超声波破碎细胞的原理和操作；2.学习细胞破碎率的评价方法。
二、实验原理频率超过15～20kHz的超声波，在较高的输入功率下（100～250W）可破碎细胞。
本实验采用JY95-2D超生波细胞粉碎机，其工作原理是：JY92-2D超声波细胞粉碎机由超声波发生器和换能器两部分组成。
超声波发生器（电源）是将2 20V、50Hz的单相电通过变频器件变为20～25Hz、约600V的交变电能，并以适当的阻抗与功率匹配来推动换能器工作，做纵向机械振动，震动波通过浸入在样品中的钛合金变速杆对破碎的各类细胞产生空化效应，从而达到破碎细胞的目的。
三、实验器材超声波细胞破碎机，电子显微镜，酒精灯，载玻片，血细胞计数板，接种针。
四、试剂和材料（1）酵母细胞悬浮液 0.2g/mL的啤酒酵母溶于50mmol/L乙酸钠-乙酸缓冲溶液（pH为4.7）。
（2）马铃薯培养基①马铃薯（去皮切块）200g；②琼脂20g；③蔗糖20g；④蒸馏水1000mL；⑤pH为6.5。
选优质马铃薯去皮切块，加水煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，融化后补充加水至1000mL，分装，115℃灭菌20min。
五、操作步骤（1）啤酒酵母的培养①菌种纯化。
将酵母菌种转接至斜面培养基上，28～30℃，培养3～4d，培养成熟后，用接种环取一环酵母菌至8mL液体培养基中，28～30℃，培养24h。
②扩大培养。
将培养成熟的8mL液体培养基中的酵母菌全部转接至80mL液体培养基的锥形瓶中，28～30℃，培养15～20h。
（2）破碎前计数取1mL酵母细胞悬浮液经适当稀释后，用血细胞计数板在显微镜下计数。
（3）细胞超声波破碎①将80mL酵母细胞悬浮液放入100mL容器中，液体浸没超声发射针1cm。
②打开开关，将频率设置中档，超声破碎1min，间歇1min，破碎20次。
③取1mL破碎后的细胞悬浮液经适当稀释后，滴一滴在血细胞计数板上，盖上盖玻片，用电子显微镜进行观察，计数。
一、酵母和大肠杆菌细胞的破碎及破碎率的测定
一、实验原理
1.超声波破碎细胞的实验原理
频率超过15～20kHz的超声波，在较高输入功率下（100～250W），通过超声波发生器和换能器的作用, 将电能转换为声能，震动波通过浸入在样品中的钛合金变速杆对破碎的各类细胞产生空化效应，从而起到破碎细胞等物质的作用。
2.采用紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验原理
蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此蛋白质溶液在270～280nm具有一个紫外吸收高峰。
在一定范围内，蛋白质溶液在最大吸收波长处的吸光度与其浓度成正比，服从朗伯比尔定律。
由于不同蛋白质中酪氨酸和色氨酸的含量及所处的微环境不同，故蛋白质溶液在280nm的吸光度值不同。
3.血球计算板使用原理
计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格，而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格，而每个大方格又分成16个小方格。
但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
a.16格×25格的血球计数板计算公式:
细胞数/ml=100小格内细胞个数/100×400×10000×稀释倍数
b. 25格×16格的血球计数板计算公式:
细胞数/ml=80小格内细胞个数/80×400×10000×稀释倍数
二、实验流程图
1.啤酒酵母的破碎
啤酒酵母培养（菌种纯化、扩大培养）→破碎前计数（采用紫外分光光度计定性检测蛋白）→细胞超声破碎（80 ml酵母细胞悬浮液置于100 ml容测OD
280
器中，浸没超声发射针1 cm ；频率中档超声4 s，间歇6 s，80-120次；0.5 ml 悬液稀释1000倍，电子显微镜观察、计数；另取1.5 ml酵母破碎液12000 r/min
定性检测蛋白的释放情况；留4 ℃离心10 min取上清，紫外分光光度计测OD
280
取50ul上清加入2×SDS上清缓冲液，煮沸5 min，-20 ℃保存，待下次实验用。
2.大肠杆菌细胞的破碎
啤酒酵母培养（菌种纯化、扩大培养）→破碎前计数定性检测蛋白→细胞超声破碎（80 ml酵母细胞悬浮液置于100 ml容器，浸没超声发射针1 cm；频率中档超声4 s，间歇5 s，80次；取1.5 ml细胞悬浮液12000 r/min 4 ℃离心
定性检测蛋白的释放情况；留取50 ul上2 min取上清，紫外分光光度计测OD
280
清加入 2×SDS上清缓冲液，煮沸5 min，-20 ℃保存，待下次实验用。
三、实验结果
四、实验分析。
