非小细胞肺癌胸腔积液中EGFR、ALK、VEGF检测试剂及步骤

胸水细胞块EGFR基因突变检测在非小细胞肺癌中的临床意义禹乐;朱启淦;杨立民;温路生;魁国菊;潘羡心;孟加榕【摘要】Objective To explore the clinical significance of EGFR mutations in positive pleural effusion cell block of non-small cell lung cancer by RT-PCR.Methods Sixty cases of biopsy tissue specimens and pleural effusion from non-small cell lung cancer patients were collected.Cell blocks of pleural effusion specimens were made.DNA was extracted to detect EGFR mutation in exon 19 (19-Del) and exon 21 (L858R) in biopsy tissue specimens and pleural effusion by RT-PCR.The mutation rate of EGFR was analyzed between pleural effusion and biopsy tissue specimens.Results The mutation rate of EGFR in pleural effusions was 35％ (21/60),including 11 cases of 19-Del mutation,9 cases of L858R mutation,and 1 case of 19-Del and L858R double mutations.The mutation rate of EGFR in biopsy tissue specimens was 36.7％ (22/60),including 12 cases of 19-Del mutation,9 cases of L858R mutation,and 1 case of 19-Del and L858R double mutations.The rates of EGFR mutation was not significantly different between the two types of specimens (P ＞ 0.05).The EGFR mutation types in pleural effusion were the same as that of the tissue specimen.Conclusion Pleural effusion cell block and biopsy tissue specimen show high consistency in EGFR mutation.%目的探讨应用实时荧光定量PCR方法检测非小细胞肺癌阳性胸水细胞块EGFR突变的临床意义. 方法收集具有组织标本作为对照的非小细胞肺癌阳性胸水60例,制作细胞块,提取DNA,应用实时荧光定量PCR法同时对细胞块和组织标本的EGFR第19外显子(19-Del)和21外显子(L858R)突变进行检测,分析细胞块与组织标本的EGFR突变率的差异.结果胸水细胞块中EGFR突变率为35％ (21/60),其中19-Del突变11例,L858R突变9例,19-Del和L858R双突变1例;组织标本中EGFR突变率为36.7％ (22/60),其中19-Del突变12例,L858R突变9例,19-Del和L858R双突变1例.两种标本的EGFR突变率差异无统计学意义(P＞0.05);胸水细胞块EGFR突变类型与其对应的组织标本相一致. 结论胸水细胞块与组织样本在EGFR基因突变上具有较高的一致性.【期刊名称】《山西医科大学学报》【年(卷),期】2017(048)005【总页数】5页(P462-466)【关键词】肺癌;胸水;细胞学;EGFR基因【作者】禹乐;朱启淦;杨立民;温路生;魁国菊;潘羡心;孟加榕【作者单位】解放军第175医院,厦门大学附属东南医院病理科,漳州363000;解放军第175医院,厦门大学附属东南医院病理科,漳州363000;解放军第175医院,厦门大学附属东南医院病理科,漳州363000;解放军第175医院,厦门大学附属东南医院病理科,漳州363000;解放军第175医院,厦门大学附属东南医院病理科,漳州363000;解放军第175医院,厦门大学附属东南医院病理科,漳州363000;解放军第175医院,厦门大学附属东南医院病理科,漳州363000【正文语种】中文【中图分类】R734.2目前,肺癌不仅在欧美等发达国家居恶性肿瘤发病率及死亡率之首[1,2],也已成为我国城市居民死亡率首位的恶性肿瘤,且有逐年上升的趋势[3]。

egfr检验流程EGFR（Epidermal Growth Factor Receptor）是一种位于细胞膜上的蛋白质受体，对细胞增殖、分化和存活起重要作用。

EGFR检验可用于评估疾病的诊断和治疗方案。

本文将详细介绍EGFR检验的流程。

一、样本采集EGFR检验的样本通常采集自患者的血液或组织。

血液样本可以通过静脉采集或指尖采血得到。

组织样本则需要通过手术或穿刺等方式获取。

二、标本处理采集到的血液样本需要进行离心分离，将血浆或血清与细胞分离开来。

组织样本则需要进行组织切片，以便后续的染色和分析。

三、EGFR检测方法目前常用的EGFR检测方法主要有免疫组化法和分子生物学法。

1. 免疫组化法免疫组化法是通过特异性抗体与EGFR结合，再经过染色反应可观察到阳性细胞的染色情况。

这种方法可以直观地查看组织中EGFR 的表达情况，但结果受组织处理和抗体质量的影响。

2. 分子生物学法分子生物学法主要包括PCR、FISH和NGS等技术。

PCR可以检测EGFR基因的突变情况，FISH可以观察EGFR基因的扩增，NGS则可以同时检测EGFR以及其他相关基因的突变情况。

这些方法可以提供更为准确的分子水平的信息，对于EGFR的变异情况有更高的敏感性和特异性。

四、结果解读根据EGFR检测结果，可以对疾病进行进一步的诊断和治疗方案的制定。

EGFR阳性表达可能与某些肿瘤的发生和发展相关，而EGFR 基因突变则可能影响某些抗癌药物的疗效。

五、临床应用EGFR检验在临床上具有重要的应用价值。

例如，在肺癌的诊断和治疗中，EGFR突变的检测可以帮助筛选出适合使用EGFR抑制剂的患者，从而提高治疗的效果。

此外，EGFR检测还可以应用于其他肿瘤的早期筛查和治疗监测。

六、质控措施为了确保EGFR检验的准确性和可靠性，实验室需要制定严格的质控措施。

这包括使用标准品进行校准、进行内部质控和参加外部质控等。

七、研究进展随着科学技术的不断发展，EGFR检验也在不断改进和完善。

非小细胞肺癌分子病理检测临床实践指南（完整版）NSCLC基因变异检测主要包括靶向治疗及免疫治疗相关分子病理检测。

我国NSCLC患者分子变异谱不同于西方人群，主要体现在腺癌，包括常见变异基因表皮生长因子受体（EGFR，45%~55%）、KRAS（8%~10%）、间变性淋巴瘤激酶（ALK，5%~10%），少见变异基因ROS1（2%~3%）、MET（2%~4%）、HER2（2%~4%）、BRAF（1%~2%）、RET（1%~4%），以及罕见变异基因NTRK（<1%）、NRG1/2（<1%）、FGFR2（<1%）等。

除极少数病例存在共突变外，上述基因变异在同一个病例中普遍存在互斥现象。

靶向治疗相关分子病理检测详见表1。

免疫治疗相关分子病理检测（表1）包括PD-L1蛋白表达和TMB。

其他生物标志物，如高度微卫星不稳定（MSI-H）在NSCLC中罕见。

目前免疫治疗主要用于EGFR、ALK和ROS1基因变异阴性的NSCLC患者。

近年来，肺癌分子微小残留病灶（molecular residual disease，MRD）的检测已受到广泛关注，MRD 指的是经过治疗后，传统影像学（包括PEC/CT）或实验室方法不能发现，但通过液体活检发现的癌来源分子异常，代表着肺癌的持续存在和临床进展可能。

检测适用人群1.拟接受靶向治疗的肺浸润性腺癌（或包括含腺癌成分的NSCLC）患者需进行靶分子基因检测。

对于晚期NSCLC患者，靶分子基因检测能够有效筛选靶向药物获益人群。

对于术后肺腺癌患者，一方面，EGFR基因突变阳性患者可从酪氨酸激酶抑制剂（TKI）辅助治疗中获益；另一方面，术后患者存在复发风险，分子分型可直接指导复发后肿瘤治疗方案的选择。

2.经活检组织病理学证实为非腺癌的晚期NSCLC患者可推荐进行靶分子基因检测。

3.所有EGFR、ALK基因变异阴性晚期NSCLC患者，如拟进行PD-1/PD-L1抗体药物免疫治疗，推荐进行PD-L1表达检测。

透景EGFR检测试剂盒说明书【药品名称】通用名称：EGFR基因突变检测试剂盒(荧光PCR法)汉语拼音：EGFRJiYinTuBianJianCeShiJiHe(YingGuangPCRFa)【成份】外显子19检测试剂：探针1(delE746-A750)、探针2(delL747-P753insS)、正向引物1、反向引物1、阳性对照品1(delE746-A750)、阳性对照品2(delL747-P753insS)、阴性对照品1(exon19 wildtype)；外显子21检测试剂：探针3(L858R)、探针4(L861Q)、正向引物2、反向引物2、阳性对照品3(L858R)、阳性对照品4(L861Q)、阴性对照品2(exon21wild type)；通用试剂：去离子水、2X PCR Pre-Mix。

产品储存条件及有效期：检测试剂于-20℃±3℃避光、密封储存,通用试剂于2℃～8℃密封储存，有效期为自生产之日起一年。

附件：注册产品标准、说明书【适应症】该产品用于定性检测经临床确诊为非小细胞癌患者的肺组织新鲜样本或石蜡包埋样本中的EGFR基因外显子19(delE746-A750，delL747-P753insS)和外显子21(L858R，L861Q)的突变。

【规格】10人份/盒、20人份/盒。

人EGFR基因突变检测试剂盒（PCR荧光法）技术参数规格：24人份/盒组分及储存有效期24人份：序号名称包装体积描述样本类型（1）推荐样品类型顺序：新鲜病变组织＞冰冻病理切片＞石蜡包埋病理组织或切片＞其它类型标本。

从新鲜病变组织中取样应确定含有肿瘤病变组织,石蜡包埋病理组织或切片应确定含有肿瘤病变组织,所用石蜡包埋病理组织或切片保存时间不超过3年。

（2）推荐使用商业化的DNA提取试剂盒(推荐使用QIAGEN石蜡组织DNA抽提试剂盒，Cat NO,56404)，所提取的DNA OD260/OD280在1.6～2.0。

胸水、血液EGFR基因突变检测在非小细胞肺癌治疗中的应用价值黄健;王于理;代平;孟娟娟;李晶;马晓平;巩平【摘要】目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者胸水、血液中表皮生长因子受体(EGFR)基因突变检测的临床价值.方法收集40例经组织学检测明确EGFR基因突变状态的肺癌患者胸水及血液标本和21例EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)治疗耐药后患者的胸水和血液标本,制作胸水细胞块,常规提取各样本DNA,应用ADx-ARMS法观察EGFR基因突变情况.结果 NSCLC患者胸水中EGFR基因突变23例(57.5％),与组织中EGFR基因检测一致率为92.5％(Kappa=0.843),灵敏度为88.46％(约登指数=0.885).血液中EGFR基因突变阳性13例(32.5％),与组织中EGFR基因检测一致率为67.5％(Kappa=0.412),灵敏度为50％(约登指数=0.500).胸水与血液中EGFR基因检测阳性率比较P＜0.01.EGFR-TKI治疗耐药的21例胸水标本检出14例T790M突变、突变率66.7％(14/21),血液标本检出11例T790M突变、突变率52.4％ (11/21).结论对于无法获取组织活检的晚期NSCLC 患者,可用胸水、血液标本替代组织检测EGFR基因突变状态,并且胸水比血液更有优势.动态监测胸水、血液标本中EGFR基因突变状态,可指导EGFR-TKIs的临床应用.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2018(058)006【总页数】3页(P61-63)【关键词】非小细胞肺癌;表皮生长因子受体基因;基因突变;胸水;血液【作者】黄健;王于理;代平;孟娟娟;李晶;马晓平;巩平【作者单位】石河子大学医学院第一附属医院,新疆石河子832000;石河子大学医学院第一附属医院,新疆石河子832000;石河子大学医学院第一附属医院,新疆石河子832000;石河子大学医学院第一附属医院,新疆石河子832000;石河子大学医学院第一附属医院,新疆石河子832000;石河子大学医学院第一附属医院,新疆石河子832000;石河子大学医学院第一附属医院,新疆石河子832000【正文语种】中文【中图分类】R730.43非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌的80%～85%，是我国最常见的恶性肿瘤之一[1]，发现时多数患者已是晚期，失去手术机会，且放化疗效果难尽人意。

非小细胞肺癌EGFR基因突变检测方法发表时间：2018-07-08T15:07:06.097Z 来源：《医师在线》2018年4月下第8期作者：马增力[导读] 探索和建立快速准确检测NSCLC患者EGFR基因突变的方法，有助于筛选出适合治疗的人群，具有较好的临床意义。

（江西省妇幼保健院检验科；江西南昌330006）【摘要】非小细胞肺癌NSCLC是常见恶性肿瘤，严重危害人类健康的。

近年来，随着靶向治疗的发展，表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂EGFR-TKI为NSCLC的治疗带来新的曙光，但用药前必须依据表皮生长因子受体EGFR的基因突变检测结果选择治疗对象。

因此EGFR基因突变成为肺癌患者应用TKI有无疗效的关键因素。

探索和建立快速准确检测NSCLC患者EGFR基因突变的方法，有助于筛选出适合治疗的人群，具有较好的临床意义。

【关键词】癌,非小细胞肺;EGFR;突变;检测Detection of EGFR gene mutation in non-small cell lung cancerAbstract：Non-small cell lung cancer (NSCLC) is a common malignant tumor, which seriously endangers human health. In recent years, with the development of targeted therapies, epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors (EGFR-TKI) bring a new dawn for the treatment of NSCLC, but the treatment must be on the basis of the epidermal growth factor receptor (EGFR) gene mutation detection results before the medication. Therefore, EGFR gene mutation has become a key factor in lung cancer patients with TKI’s effect. Objective to explore and establish a rapid and accurate method to detect EGFR gene mutations in NSCLC patients, which is helpful to screen the suitable treatment population, and has good clinical significance.Key words：cancer, non-small cell lung; EGFR; mutation; detection肺癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤，恶性程度高。