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抗线粒体抗体检测临床意义：免疫检验辅导由于抗M1抗体即抗心磷脂抗体，目前不列入抗线粒抗体中。
抗M2见于90%的PBC患者，常用作该病的重要实验室诊断指标，但AMA与PBC的病期、疾病严重程度、治疗效果均无相关性。
除PBC外，抗M2也见于慢性活动性肝炎（CAH）、HBsAg阴性的肝病。
抗M3AMA 见于吡唑酮（pyrazolone）系列药物诱发的假红斑狼疮（PLE）综合征患者；抗M4AMA也见于PBC；抗M9见于PBC早期；抗M5见于SLE、自身免疫性溶血性贫血；抗M6见于异丙烟肼（iproniazid，一种单胺氧化酶抑制药）诱导的肝炎医|学教育网整理；抗M7出现于一些原因不明的心肌病患者，它的靶抗原有器官特异性，存在于心肌细胞的线粒体中。
由于线粒体抗原成分复杂，对很多抗原的性质尚不了解，而原发性胆汁性肝硬化患者几乎都出现高效价抗M2AMA，因此，目前AMA（或抗M2AMA）测定主要用于PBC的诊断。
多克隆抗体的制备介绍大多数抗原是由大分子蛋白质组成，但只是抗原上有限部位的特殊分子结构能与其相应抗体结合，称此部位为抗原决定簇或表位。
一种天然抗原性物质（如细菌或其分泌的外毒素以及各种组织成分等）往往具有多种不同的抗原决定簇，而每一决定簇都可刺激机体一种抗体形成细胞产生一种特异性抗体医|学教育网整理。
在机体淋巴组织内可存在千百种抗体形成细胞（即B细胞），每种抗体形成细胞只识别其相应的抗原决定簇，当受抗原刺激后可增殖分化为一种细胞群，这种由单一细胞增殖形成的细胞群体可称之为细胞克隆（clone）。
同一克隆的细胞可合成和分泌在理化性质、分子结构、遗传标记以及生物学特性等方面都是完全相同的均一性抗体，亦可称之为单克隆抗体。
在早期传统的抗体制备方法是将一种天然抗原经各种途径免疫动物，由于抗原性物质具有多种抗原决定簇，故可刺激产生多种抗体形成细胞克隆，合成和分泌抗各种决定簇抗体分泌到血清或体液中，故在其血清中实际上是含多种抗体的混合物，称这种用体内免疫法所获得的免疫血清为多克隆抗体，也是第一代抗体。
四种方法检测抗线粒体抗体M ２亚型性能比较岳㊀燕１,王玥文２,白㊀婕１,杨本善１,何小魁１,张明珍３,郑宇淼３,李宜桐３,金㊀文３,刘向祎１(１．首都医科大学附属北京同仁医院检验科,北京１００７３０;２．香港大学李嘉诚医学院,香港９９９０７７;３．首都医科大学,北京１０００６９)D O I :１０．１１７４８/b j m y ．i s s n ．１００６－１７０３．２０２１．０５．０２９收稿日期:２０２１Ｇ２Ｇ２５;修回日期:２０２１Ｇ０３Ｇ１２基金项目:首都医科大学本科生科研创新项目(编号:X S K Y ２０２０１６９)通讯作者:刘向祎.摘要:目的㊀探讨抗线粒体抗体M ２亚型不同检测方法的分析性能㊁相关性及其对原发性胆汁性胆管炎的诊断价值.方法㊀选择２０１０年至２０１９年于北京同仁医院就诊的原发性胆汁性胆管炎(P B C )患者１０６例作为P B C 组,同期其他自身免疫病组患者１２０例,１００例体检健康人作为正常对照组.用免疫印迹㊁间接免疫荧光㊁酶联免疫吸附试验和胶体金４种方法分别测定三组的抗线粒体抗体M ２亚型水平,比较不同方法的分析性能㊁相关性及诊断价值.结果㊀灵敏度从高到低依次是酶联免疫吸附试验(９６．２％,１０２/１０６)㊁免疫印迹(８９．６％,９５/１０６)㊁胶体金(８７．７％,９３/１０６)㊁间接免疫荧光法(７３．６％,７８/１０６).特异性从高到低依次是间接免疫荧光(９８．２％,２１６/２２０)㊁酶联免疫吸附试验(９６．８％,２１３/２２０)㊁免疫印迹(８７．７％,１９３/２２０)㊁胶体金法(８５．５％,１８８/２２０).免疫印迹与胶体金法之间检出率差异无统计学意义(P ＝０．７３６).酶联免疫吸附试验与免疫印迹㊁酶联免疫吸附试验与间接免疫荧光㊁免疫印迹与胶体金法之间一致性较好(K a p p a ＞０．７５).结论㊀酶联免疫吸附试验是目前临床实验室检测抗线粒体抗体M ２亚型的最佳方法.关键词:抗线粒体抗体M ２亚型;㊀胶体金法;㊀免疫印迹法;㊀间接免疫荧光法;㊀酶联免疫吸附试验中图分类号:R ３９２Ｇ３３㊀㊀文献标识码:AAC o m p a r a t i v e S t u d y o f F o u rM e t h o d s f o r t h eD e t e c t i o n o fA n t i ＧM i t o c h o n d r i a lA n t i b o d y M２Y U E Y a n １,WA N G Y u e w e n ２,B A I J i e １,Y A N G B e n s h a n １,H E X i a o k u i１,Z H A N G M i n g z h e n ３,Z H E N G Y u m i a o ３,L IY i t o n g ３,J I N W e n ３,L I U X i a n g yi １(１．D e p a r t m e n t o fC l i n i c a l L a b o r a t o r y ,B e i j i n g T o n g r e nH o s p i t a l ,C a p i t a lM e d i c a lU n i v e r s i t y ,B e i j i n g １００７３０,C h i n a ;２．D e p a r t m e n t o f S u r g e r y ,L iK aS h i n g F a c u l t y o fM e d i c i n e ,T h eU n i v e r s i t y o fH o n g K o n g ,H o n g K o n g ９９９０７７,C h i n a ;３．C a p i t a lM e d i c a lU n i v e r s i t y ,B e i j i n g １０００６９,C h i n a )A b s t r a c t :O b j e c t i v e I n t h i s p a p e r ,w e e v a l u a t e d t h e a n a l y t i c a l pe rf o r m a n c e a sw e l l a s t h e c o r r e l a t i o no f d i f f e r e n t d e t e c t i o nm e t h o d s f o r a n t i Ｇm i t o c h o n d r i a l a n t i b o d y M ２s u b t y p ea n d i t sd i ag n o s t i cv a l u e f o r p r i m a r y b i l i a r y ch o l a n gi t i s ．M e t h o d s １０６p a t i e n t sw i t h p r i m a r y b i l i a r y c h o l a n g i t i s (P B C ),１２０p a t i e n t s w i t ho t h e r a u t o i m m u n ed i s e a s ea n d １００h e a l t h y c o n t r o l sw h ou n d e r w e n t p h ys i c a l e x a m i n a t i o nf r o m ２０１０t o ２０１９a tT o n g r e n H o s p i t a l (B e i j i n g )w e r ec o l l e c t e da sr e s e a r c ho b j e c t s ．A m o n g th e s et h r e e g r o u p s ,t h es e r u m a n t i ＧM ２a n t i b o d y l e v e l s w e r ed e t e r m i n e d b y w e s t e r n b l o t t i n g (WB ),i n d i r e c t i m m u n o Ｇf l u o r e s c e n c e (I I F ),e n z y m e Ｇl i n k e di m m u n o Ｇs o r b e n ta s s a y (E L I S A )a n d c o l l o i d a l g o l d c o l l o i di m m u n o c h r o m a t o g r a p h y a s s a y (C G C I A ),r e s p e c t i v e l y a n d t h e a n a l y t i c a l p e r f o r m a n c e ,c o r r e l a t i o na n dd i a g n o s t i cv a l u ew e r ea n a l y z e d t oc o m pa r e t h e p e r f o r m a n c e so f t h e s e f o u rm e t h o d s ．R e s u l t s A c c o r d i n g t os t a t i s t i c a l a n a l y s i s ,t h es e n s i t i v i t y o fE L I S A w a s t h e l a r g e s ta m o n g t h e s ef o u r m e t h o d s (９６．２％,１０２/１０６),f o l l o w e db y W B (８９．６％,９５/１０６),C G C I A (８７．７％,９３/１０６)a n dI I F (７３．６％,７８/１０６)．I na d d i t i o n ,I I Fh a d t h eh i g h e s t s p ec i f i c i t y (９８．２％,２１６/２２０),f o l l o w e db y EL I S A (９６．８％,２１３/２２０),W B (８７．７％,１９３/２２０)a n d C G C I A (８５．５％,１８８/２２０)．T h e r e w a sn os i gn i f i c a n t ３５８标记免疫分析与临床㊀２０２１年５月第２８卷第５期d i f fe r e n c e i n t h e d e t e c t i o n r a t e b e t w e e n i m m u n o b l o t t i n g a n d c o l l o i d a l g o l dm e t h o d(P＝０．７３６)．T h e r e s u l tm e a s u r e db y E L I S Aa n d W B,E L I S Aa n d I I F,WBa n dC G C I A w e r eh i g h l y c o n s i s t e n t(K a p p a v a l u e＞０．７５)．C o n c l u s i o n T h ec u r r e n t s t u d y s u g g e s t s t h a tE L I S Ai s t h eb e s tm e t h o dt od e t e c t t h e M２s u b t y p eof a n t iＧm i t o c h o n d r i a l a n t i b o d i e s(AMAＧM２)i nc l i n i c a l l a b o r a t o r i e s．K e y w o r d s:A n t iＧM２a n t i b o d y;㊀C G C I A;㊀W B;㊀I I F;㊀E L I S A㊀㊀原发性胆汁性胆管炎(p r i m a r y b i l i a r y c h o l a n g i t i s, P B C)是一种慢性胆汁淤积性肝病,其特征是进行性㊁非化脓性㊁破坏性小胆管炎,最终导致纤维化和潜在的合并肝硬化.该病男女比例为１ʒ９,以中老年女性多见[１].P B C发病与多种基因的多态性相关,研究[２Ｇ４]显示H L AＧⅡ基因与P B C发病具有强相关性,尤其是H L AＧD R B１㊁H L AＧD Q A１㊁H L AＧD Q B１.P B C进展经历４期,临床前期表现为抗线粒体抗体(a n t iＧm i t o c h o n d r i a l a n t i b o d y,AMA)阳性㊁碱性磷酸酶A L P正常;无症状期虽未出现明显症状但A L P逐渐升高;症状期出现瘙痒㊁乏力等症状;终末期出现腹水㊁消化道出血㊁肝性脑病等并发症[５].随访发现近５０％P B C早期患者在５年内会进展至中期或终末期.早期应用熊去氧胆酸治疗可改善高胆红素血症㊁延缓肝硬化.该病发展至终末期,则药物疗效甚微,唯一有效的治疗是肝移植[６].尽早诊断㊁及早给药能明显改善预后.㊀㊀２０１５年原发性胆汁性胆管炎诊断和治疗共识提出免疫学检查中AMA阳性是最具诊断价值的实验室检查.AMA分为９个亚型M１ＧM９,其中以M２最为重要,可在无症状期前被检测到.目前国内临床实验室检测AMAＧM２亚型的方法较多.本研究利用P B C组㊁其他自身免疫病组和正常对照组的临床样本,评价间接免疫荧光(i n d i r e c ti mm u n oＧf l u o r e s c e n c e,I I F)㊁胶体金(c o l l o i d a l g o l d c o l l o i d i mm u n o c h r o m a t o g r a p h y a s s a y,C G C I A)㊁酶联免疫吸附试验(e n z y m eＧl i n k e di mm u n oＧs o r b e n ta s s a y, E L I S A)和免疫印迹(W e s t e r nb l o t t i n g,W B)这４种方法检测AMAＧM２的分析性能㊁相关性及其对原发性胆汁性胆管炎的诊断价值.材料和方法㊀㊀１㊀研究对象㊀㊀２０１０年至２０１９年来北京同仁医院就诊的P B C 患者１０６例,其中男性３１例,女性７５例,年龄１７~７８岁,平均年龄４３．２岁.根据２０１８年美国肝病学会(A A S L D),P B C的诊断标准包括以下３条[７Ｇ８]:①存在６个月以上A L P升高的胆汁淤积的生化证据;②AMA阳性;③肝脏组织学与P B C相容,存在非化脓性破坏性胆管炎以及小叶间胆管损伤表现.以上３条标准中至少２条存在即可诊断P B C. AMA阴性者,需进行肝组织病理学检查确定诊断[９].另外纳入其他自身免疫病组１２０例,包括原发性干燥综合征５０例㊁自身免疫性肝炎２７例㊁系统性红斑狼疮３１例㊁混合性结缔组织病１２例.另选取１００例健康体检者作为正常对照组.㊀㊀２㊀主要试剂与仪器㊀㊀２．１㊀主要试剂㊀C G C I A法使用试剂购自上海科新生物技术股份有限公司抗线粒体抗体M２亚型检测试剂盒.W B法使用德国欧蒙医学实验诊断有限公司抗核抗体谱检测试剂盒.I I F法采用德国欧蒙医学实验诊断有限公司抗线粒体抗体M２亚型检测试剂盒.E L I S A采用德国欧蒙医学实验诊断有限公司抗线粒体抗体M２亚型测定用试剂盒.㊀㊀２．２㊀主要仪器㊀德国Z e i s s公司L a b．A１荧光显微镜;瑞士T E C A N S u n r i s e酶标仪;德国欧蒙印迹法自动操作仪.㊀㊀３㊀方法㊀㊀P B C组㊁其他自身免疫病组和正常对照组均要求空腹采取静脉血５m L,３０００r/m i n离心５m i n,留取血清冻存于－８０ħ冰箱待检.每年取出收集的待测血清,平衡至室温.同时用４种方法测定AMAＧM２亚型,并记录数据.㊀㊀E L I S A方法测定AMAＧM２:将１０μL待测血清用样本缓冲液１m L进行１ʒ１００稀释.分别将１００μL３个不同浓度的标准品(C１~C３浓度分别为２００㊁２０㊁２R U/m L)㊁阳性对照㊁阴性对照或稀释后的样本,注入相应微孔,室温(１８~２５ħ)温育３０m i n.用稀释后的清洗缓冲液清洗３次,每次４５０μL.滴加１００μL酶结合物至每一微孔,室温温育３０m i n.倒掉微孔板内液体,重复上述清洗步骤.每孔滴加１００μL底物溶液,室温避光温育１５m i n.滴加１００μL终止液至每一微孔.４５０n m比色,参考波长６２０~６５０n m,加完终止液后３０m i n之内比色.以C１~C３标准血清的浓度为横坐标㊁吸光度为纵坐４５８L a b e l e d I mm u n o a s s a y s&C l i n M e d,M a y．２０２１,V o l．２８,N o．５标作标准曲线,并根据标准曲线点对点求出患者血清中AMAＧM２的浓度.以２０R U/m L作为C u tＧo f f值,ȡ２０R U/m L为阳性.㊀㊀C G C I A法测定AMAＧM２:直接将血清滴加在金标板上,５m i n后根据T线颜色判读实验结果.T 线出现着色均匀和清晰可见的颜色反应时,结果判为阳性.㊀㊀W B法测定AMAＧM２:将１５μL待测血清标本用标本缓冲液１．５m L进行１ʒ１００稀释.取出实验膜条平衡至室温.将膜条上有编号的一面朝上放入室温育槽中.预处理:每槽中加入１．５m L标本缓冲液,室温条件下在摇床上震荡５m i n.吸去槽内液体.血清温育:温育槽中分别加入１．５m L已稀释血清.于室温在摇床上震荡３０m i n.吸去槽内液体.清洗:在摇床上用１．５m L清洗缓冲液清洗膜条３次,每次５m i n.酶结合物温育:在温育槽中加入１．５m L 已稀释的碱性磷酸酶标记的羊抗人I g G,室温在摇床上温育３０m i n.清洗:重复上述清洗步骤.在温育槽中分别加入１．５m L底物溶液,于室温在摇床上温育１０m i n.将实验膜条放置在结果判定模板中,风干后判断结果.在相应抗原线处出现明显的蓝紫色条带,结果判为阳性.抗原带着色的深浅与相应抗体的滴度相关.㊀㊀I I F法测定AMAＧM２:将１０μL待检血清样本用９９０μLP B S吐温缓冲液进行１ʒ９９稀释.加样板每一反应区分别加人２５μL稀释后的血清样本.将生物载片有生物薄片的一面朝下,盖在加样板的凹槽里.室温温育３０m i n.用P B S吐温缓冲液短暂冲洗载片后,将生物载片浸入装有P B S吐温缓冲液的洗杯中,浸泡５m i n.将２０μL F I T C标记的抗人I g A GM加至洁净加样板的反应区上.室温温育３０m i n,避免阳光直射载片.如上述步骤清洗浸泡.封片,荧光显微镜下进行结果判读.滴度１ʒ１００及以上为阳性.大鼠肾是确认AMA的标准基质.近端肾小管和远端肾小管细胞胞浆显示明显颗粒状荧光,肾小球显示微弱荧光.阳性对照血清必须显示相同的特异性荧光模式.在刷状缘出现的荧光不作为判断依据.如果AMAＧM２亚型抗体阳性,在包被有M２抗原的生物薄片上出现点状荧光.㊀㊀４㊀统计学处理㊀㊀本研究数据采用S P S S２５．０软件进行统计学分析.用例数和百分比描述计数资料;用F i s h e r精密概率进行样本之间率的比较.４种方法检测结果采用配对χ２检验;采用K a p p a检验对不同方法的一致性进行分析.一致性强度的判断:当K a p p a＜０．４,一致性强度较差;０．４ɤK a p p a＜０．７５,两者一致性一般;K a p p aȡ０．７５一致性较好.所有统计学检验均以P＜０．０５为差异有统计学意义.结㊀㊀果㊀㊀１㊀P B C组㊁疾病对照组㊁健康对照组A M AＧM２亚型检测结果㊀㊀４种方法检测P B C组㊁其他自身免疫病组㊁正常对照组血清中的AMAＧM２亚型,结果见表１.P B C 组以E L I S A法阳性检出率最高(９６．２％),其次为W B法(８９．６％),C G C I A法(８７．７％),阳性检出率最低的是I I F法(７３．６％).其他自身免疫病组和正常对照组４种方法AMAＧM２检出率均显著低于P B C组.表１㊀不同分组AMAＧM２亚型阳性检出率[％(n)]组别W B法I I F法E L I S A法C G C I A法P B C组８９．６(９５)７３．６(７８)９６．２(１０２)８７．７(９３)其他自身免疫病组１９．２(２３)２．５(３)４．２(５)２２．５(２７)正常对照组４．０(４)１．０(１)２．０(２)５．０(５)㊀㊀㊀注:括号内数字为检测阳性例数㊀㊀２㊀E L I S A法㊁W B法㊁C G C I A法和I I F法的分析性能比较㊀㊀以P B C临床诊断为标准,分别计算４种方法的灵敏度㊁特异性㊁阳性预测值㊁阴性预测值㊁阳性似然比㊁阴性似然比等指标,对其分析性能进行评价.结果见表２.灵敏度最高的为是E L I S A(９６．２％,１０２/１０６),其次为W B法(８９．６％,９５/１０６)㊁C G C I A法(８７．７％,９３/１０６)㊁I I F法(７３．６％,７８/１０６).特异性从高到低依次是I I F法(９８．２％,２１６/２２０)㊁E L I S A 法(９６．８％,２１３/２２０)㊁W B法(８７．７％,１９３/２２０)㊁C G C I A法(８５．５％,１８８/２２０).５５８标记免疫分析与临床㊀２０２１年５月第２８卷第５期表２㊀４种方法测定AMA ＧM ２亚型分析性能比较方法临床诊断＋－灵敏度(％)特异性(％)阳性预测值阴性预测值阳性似然比阴性似然比W B ＋９５２７８９．６８７．７０．７８０．９５７．３００．１２－１１１９３I I F ＋７８４７３．６９８．２０．９５０．８９４０．４７０．２７－２８２１６E L I S A ＋１０２７９６．２９６．８０．９４０．９８３０．２４０．０４－４２１３C G C I A＋９３３２８７．７８５．５０．７４０．９４６．０３０．１４－１３１８８㊀㊀３㊀４种检测方法的一致性与相关性分析㊀㊀将４种方法测得的数据进行配对χ２检验,结果显示,W B 法与E L I S A 法㊁I I F 法与E L I S A 法㊁C G C I A 法与E L I S A 法㊁I I F 法与C G C I A 法㊁W B 法与I I F 法之间检测结果差异均有统计学意义(P ＜０．０５).C G C I A 法与W B 法之间差异无统计学意义(P ＝０．７３６).同时对测得的结果进行一致性K a p pa 检验,结果显示:C G C I A 法与E L I S A 法㊁I I F 法与C G C I A 法㊁W B 法与I I F 法之间一致性一般(０．４ɤK a p pa ＜０．７５).W B 法与E L I S A 法㊁I I F 与E L I S A 法㊁C G C I A 法与W B 法之间一致较好(K a p pa＞０．７５).表３㊀４种方法检测AMA ＧM ２亚型一致性分析＋㊀－方法W B 法I I F 法C G C I A 法＋－＋－＋－E L I S A 法＋９７１２７９３０９５１４－２５１９２３２１４３０１８７P 值０．０４７＜０．０１０．０２３K a p p a ０．７５２０．７５８０．７０７方法I I F 法C G C I A 法＋－＋－方法C G C I A 法＋－W B 法＋８０４２１０６１６I I F 法＋８１１－２２０２１９１８５－４４２００P 值＜０．０１０．７３６P 值＜０．０１K a p pa ０．６９２０．７７２K a p pa ０．６８８㊀㊀C G C I A 法与W B 法为定性检测方法,I I F 法为半定量检测方法,E L I S A 法为定量检测方法.对I I F 法㊁E L I S A 法检测结果的相关性进行分析,结果显示两种方法检测AMA ＧM ２亚型水平呈正相关,即I I F 滴度越高,E L I S A 法测得的水平越高(图１).图１㊀E L I S A 法与I I F 法的相关性讨㊀㊀论㊀㊀AMA 是针对线粒体内膜脂蛋白成分的自身抗体,其抗原决定簇存在于肝㊁肾组织细胞的线粒体内膜中,其靶抗原成分复杂,可分为M １~M ９共９个亚型,其中AMA ＧM ２为P B C 特异性抗体[１０Ｇ１１].存在于线粒体内膜上的２Ｇ含氧酸脱氢酶复合体(２ＧO A D C )是AMA ＧM ２针对的靶抗原,包括丙酮酸脱氢酶复合体(P D C )㊁αＧ酮戊二酸脱氢酶复合体(O G D C )和支链二酮酸脱氢酶复合体(B C O A D C ).P D C 又分为E １α亚基㊁E １ß亚基和E ２亚基.其中P D C ＧE ２亚基硫辛酰区域的特定氨基酸残基是抗体识别的关键部位[１２Ｇ１３].９０％~９５％的P B C 患者针对P D C ＧE ２发生阳性反应;５０％~８０％的P B C 患者对B C O A D C ＧE ２发生阳性反应;O G D C ＧE 的抗体阳性率则为２０％~６０％.P D C ＧE ２或B C O A D C ＧE ２㊁O G D C ＧE ２㊁P D C ＧE ２三者的融合重组蛋白M ２Ｇ３E 均可作为AMA ＧM ２试剂盒采用的靶抗原[１３Ｇ１５].检测AMA ＧM ２的方法较多,有C G C I A 法㊁E L I S A 法㊁６５８L a b e l e d I mm u n o a s s a y s&C l i n M e d ,M a y．２０２１,V o l ．２８,N o ．５W B法㊁I I F法等,目前尚无对该指标方法学选择的统一意见,故实验室对AMAＧM２检测方法的选择上存在一定的困扰.㊀㊀本研究通过对上述４种方法进行分析性能比较发现,I I F法特异性和阳性预测值最高,其次是E L I S A法㊁W B法和C G C I A法;E L I S A法灵敏度和阴性预测值最高,其次是W B法㊁C G C I A法和I I F 法,这可能是由于检测体系中使用不同的抗原所致.I I F法采用的M２抗原是线粒体内膜上３个酶复合体的组份之一.W B法和C G C I A法检测的M２抗原是提取纯化的P D C.E L I S A微孔板包被的抗原是从牛心分离得到的P D C和重组融合蛋白B P O的混合物.B P O在E．c o l i中表达,由B C O A D CＧE２㊁P D CＧE２和O G D CＧE２的抗原位点共同组成,故称为３E.从对比的情况看,３E抗原作为３种抗原融合表达的重组蛋白,提高了E L I S A法检测的灵敏度.I I F法采用天然抗原,由于结构相对更完整,因此检测的特异性优于其他方法.W B法和C G C I A法检测的M２抗原成分相同,两者检出率无显著性差异且一致性较好.㊀㊀E L I S A法灵敏度为９６．２％,特异性为９６．８％,并可对A M AＧM２进行定量检测,综合评价是检测A M AＧM２首选方法.E L I S A法适合大样本量操作,并可定量检测,但样本量少时,试剂成本偏高,不适合中小医院开展.W B法灵敏度㊁特异性较好,与E L I S A 法一致性也较好,且W B法操作方便㊁适合小样本检测,是中小实验室采用的最优方法.I I F法特异性最高为９８．２％,阳性预测值为０．９５;但其灵敏度为７３．６％,明显低于其他３种方法,容易导致漏诊.此外,I I F法检测需由具备专业能力的检验人员使用荧光显微镜才能准确分析和判读,结果易受主观因素影响.C G C I A法灵敏度８７．７％㊁特异性８５．５％,无突出优势,但该法操作简便快捷,仅一步操作,５m i n出结果.无需任何实验设备,对人员技术㊁标本量要求低,能够满足快速筛查的检测要求,且与W B法相关性及一致性较好,适合基层实验室开展.㊀㊀综上所述,E L I S A法是目前较为准确灵敏的AMAＧM２测定方法.W B法与E L I S A法相关性及一致性较好,是临床实验室样本量较少时替代E L I S A法检测AMAＧM２的最佳方法.根据标本量选择E L I S A法或W B法检测AMAＧM２,对于P B C 具有重要的辅助诊断价值.I I F法特异性最高,但灵敏度低,可结合E L I S A法或W B法提高检测的性能.C G C I A法操作非常简便,对人员㊁设备要求最低,适合基层实验室开展.对AMAＧM２亚型的检测方法进行选择时,应结合临床诊断的实际需求㊁检测方法的分析性能㊁实验室具备的条件进行综合判断.参考文献[１]T E R Z I R O L B E R E T T AＧP I C C O L I B,M I E L IＧV E R G A N I G, V E R G A N I D,e t a l．T h e c h a l l e n g e s o f p r i m a r y b i l i a r y c h o l a n g i t i s:W h a ti sn e w a n d w h a 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自身抗体检测在自身免疫性肝病中的应用及其临床分析目的：探讨自身抗体检测在自身免疫性肝病中的应用，为临床上疾病的诊断提供一定参考意义。
方法：选取试验组32例自身免疫性肝病患者和对照组32例病毒性肝炎患者的自身抗体进行检测，比较其阳性率。
结果：试验组ANA、SMA、AMA-M2、SLA/LP、LKM-1、gp210、Sp100、LC-1抗体阳性率均显著高于对照组，两组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。
SLA/LP、LKM-1、LC-1 3种抗体为自身免疫性肝炎所特有，ANA、AMA-M2、gp210、Sp100抗体为原发性胆汁性肝硬化所特有。
结论：自身抗体谱的检测有助于临床上自身免疫性肝病的诊断，SLA/LP抗体、LKM-1抗体、LC-1抗体有助于自身免疫性肝炎的诊断，AMA-M2抗体、gp210抗体、Sp100抗体有助于原发性胆汁性肝硬化的诊断。
自身免疫性肝病是一种由自身免疫反应导致的肝胆系统损伤的慢性进展性疾病。
可以分为以肝炎为主的自身免疫性肝炎、以胆管损害和胆汁淤积为主型的原发性胆汁性肝硬化和原发性硬化性胆管炎，以及兼具上述两组特征的重叠综合征[1-2]。
研究自身抗体谱检测在自身免疫性肝病中的应用，对于疾病的诊断、分型是十分有利的。
1 资料与方法1.1 一般资料选取本院2014年1-12月确诊的32例自身免疫性肝病患者为试验组，其中男7例，女25例；年龄19～67岁，平均（45.6±18.3）岁；自身免疫性肝炎有17例（53.1%），原发性胆汁性肝硬化有10例（31.3%），原发性硬化性胆管炎有5（15.6%）。
另外，再随机选取同时段本院收治的病毒性肝炎患者32例为对照组，其中男15例，女17例，年龄25～77岁，平均（52.1±22.7）岁。
自身免疫性肝炎诊断符合国际自身免疫性肝炎小组的诊断标准及积分系统，原发性胆汁性肝硬化和原发性硬化性胆管炎诊断符合2003年美国肝病学会指导建议，重叠综合征的诊断参考文献标准[3-6]。
Mod Diagn Treat 现代诊断与治疗2012Dec 23（11）类风湿性关节炎（RA ）是一种发病率高、易致畸形的自身免疫性疾病。
该病可发生于任何年龄，在我国的发病率为0.3%～0.4%［1］。
RA 早期临床表现复杂多变，大多不典型，容易造成误诊或漏诊［2］。
抗环瓜氨酸肽抗体（CCP ）ELISA 法是1998年Schellkens 等建立起来辅助诊断RA 的检测方法，该技术一出现，立即备受关注，目前国内外多家公司研制出抗-CCP 抗体ELISA 诊断试剂盒，但是性能参差不一，因此有必要对这些试剂盒进行一个性能比较分析，为临床应用提供依据。
本研究通过对三种国外进口ELISA 诊断试剂盒进行比较，对三种国外试剂盒的诊断性能指标作一客观的评价。
报道如下。
1资料与方法1．1血清样本为2007年1月～2010年l2月门诊的RA 患者、非RA 患者及健康体检者共316例，分为3组。
（1）RA 组：风湿科门诊早期RA 患者137例，其中男67例，女70例，年龄31～69岁；临床表现和辅助检查均符合1987年ACR 修订的RA 诊断标准，且病程均<24个月；（2）非RA 患者组：101例，其中男45例，女56，年龄26～71岁，包括风湿性关节炎64例，系统性红斑狼疮21例，干燥综合征(SS)6例，强直性脊柱炎(AS)7例，混合结缔组织病(MCTD)3例。
均符合国内及国际相应疾病的诊断标准；（3）健康对照组：正常健康体检者78名，均无自身免疫性疾病及骨关节性疾病病史。
所有受检者抽取静脉血3m l ，分离血清，存放在－20℃低温冰箱待检。
1．2仪器与试剂检测用酶标仪为奥地利An-thos 2010，洗板机为美国伯乐公司全自动洗板机，所选用的三种试剂盒均为国外市场上最常见的品牌，生产厂家分别为美国INOVA ￣DIAGNOSTICA 公司、德国Medizinische Labordiagnostika AG公司，荷兰EURO ￣DIAGNOSTICA 公司。
血清抗线粒体抗体检查自身免疫自身免疫性疾病是指机体免疫系统异常地攻击自身组织和器官，导致各种疾病的发生。
而抗线粒体抗体是一类自身抗体，其检测能够帮助医生判断和诊断自身免疫性疾病。
本文将从血清抗线粒体抗体的检查原理、检查方法以及临床应用等方面进行介绍。
一、检测原理血清抗线粒体抗体检测是通过检测血清中的特定抗体水平来判断机体是否存在自身免疫反应。
正常情况下，机体的免疫系统会抑制自身抗体的产生，防止免疫系统攻击自身组织。
而当机体的免疫系统出现异常时，自身抗体的产生会增加，对线粒体等自身组织发生免疫攻击，导致自身免疫性疾病的发生。
二、检查方法血清抗线粒体抗体检查可以通过酶联免疫吸附测定法（ELISA）或间接免疫荧光法进行。
这些方法通过特定蛋白质抗原与抗体的结合反应，来测定血清中的抗线粒体抗体水平。
1. 酶联免疫吸附测定法（ELISA）ELISA是目前常用的检测方法之一。
该方法通过将抗线粒体抗体与酶标记结合，再加入抗人IgG抗体与底物，产生颜色反应来进行定量测定。
ELISA法具有操作简便、结果准确等优点，被广泛应用于临床医学中。
2. 间接免疫荧光法间接免疫荧光法是另一种常用的检测方法。
该方法通过将患者血清和抗人免疫球蛋白荧光素标记结合，加入切片中的线粒体抗原，通过观察是否出现荧光信号来判断是否存在抗线粒体抗体。
三、临床应用血清抗线粒体抗体检查在临床中具有重要的应用价值。
它主要用于以下几个方面：1. 自身免疫性疾病的诊断抗线粒体抗体的检测可以帮助医生对自身免疫性疾病进行诊断。
例如，抗线粒体抗体的阳性结果可与系统性红斑狼疮、硬皮病等疾病的关联进行判断，有助于提供更准确的诊断依据。
2. 预测疾病进展和指导治疗抗线粒体抗体水平的变化可以作为评估疾病进展和治疗效果的重要指标。
医生可以通过定期检测抗体水平的变化，来了解疾病的活动性以及治疗效果，从而调整治疗方案，提高治疗效果。
3. 预防疾病的发生对于高危人群，如亲属中有自身免疫性疾病患者的人群，可以通过进行血清抗线粒体抗体的检测，了解自身免疫疾病的患病风险。
自身抗体检测对自身免疫性肝病的临床应用价值分析摘要目的探讨自身抗体检测在自身免疫性肝病（ALD）诊断中的价值。
方法对400例不明原因肝功能反复异常的患者应用间接免疫荧光法检测抗核抗体（ANA）、抗线粒体抗体（AMA）、抗平滑肌抗体（SMA）、抗纤维肌动蛋白抗体（F-actin）、抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA），应用欧蒙印迹法检测抗线粒体抗体M2型（AMA-M2）、抗M2-3E（BPO）、抗Ro52、抗Sp100、抗gp210、抗肝肾微粒体抗体（LKM-1）、抗肝细胞溶质抗原1（LC-1）、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原（SLA/LP）、抗早幼粒细胞白血病抗体（PML），观察检测结果。
结果400例患者自身抗体阳性55例，诊断自身免疫性肝炎（AIH）10例，阳性率2.50%；诊断原发性胆汁性肝硬化（PBC）18例，阳性率4.50%。
AIH患者检出的自身抗体有ANA、抗SMA、抗F-actin、抗Ro52、抗LKM-1、抗LC-1、抗SLA/LP，其中ANA、抗SMA抗体阳性率最高，其次为抗F-actin；PBC患者检出的自身抗体有ANA、AMA、AMA-M2、抗M2-3E、抗Sp100、抗Ro52、抗gp210、抗LKM-1，其中以ANA、AMA、抗M2-3E阳性率最高，其次为AMA-M2。
结论对于不明原因肝功能反复异常的患者，主要以检测ANA为主，对于怀疑AIH的患者检测SMA与F-actin，如果为阴性，应进一步联合检测LKM-1、LC-1、SLA/LP、Ro52，对于怀疑PBC的患者检测AMA、AMA-M2、M2-3E，如为阴性，应进一步联合检测Sp100、gp210、LKM-1、Ro52。
多种自身抗体的联合检测有助于ALD的早期诊断。
关键词自身抗体；自身免疫性肝病；自身免疫性肝炎；原发性胆汁性肝硬化自身免疫性肝病（autoimmune liver diseases，ALD）是一组原因未明、免疫介导的慢性肝脏疾病，包括自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis，AIH）、原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis，PBC）和原发性硬化性胆管炎（primary sclerosing cholangitis，PSC）。
自身抗体检测对自身免疫性肝病的诊断价值作者：张伟锋来源：《中国保健营养·上旬刊》2014年第05期【摘要】目的对自身抗体检测对自身免疫性肝病的诊断价值进行探讨。
方法采用间接免疫荧光法来对抗核机体（ANA）、抗平滑肌抗体（SMA）以及抗线粒体抗体（AMA）进行检测，利用免疫印迹法来对与肝脏疾病有关的抗肝肾微粒体抗体I型（抗LKM-1）、抗肝特异性胞浆抗原I型抗体（抗LC-1）以及可溶性肝抗原进行检测，用酶联免疫吸附实验对AMA-M2进行检测。
结果自身免疫性肝病组中PBC和AIH的阳性检出率明显优于非自身免疫性肝病组。
P【关键词】自身抗体；自身免疫性肝病；间接免疫荧光法doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.05.729文章编号：1004-7484（2014）-05-2970-02本文选取我院2010年5月——2013年5月期间就诊的肝功能生化指标反复异常的患者60例，60例患者中，经过初步诊断，AIH患者有20例，PBC患者有29例，PSC患者有11例。
另外再选择60例肝功能异常，但属于非自身免疫性肝病的患者作为对照组。
现报道如下。
1资料与方法1.1临床资料选取我院2010年5月——2013年5月期间就诊的肝功能生化指标反复异常的患者60例，60例患者中，经过初步诊断，AIH患者有20例，PBC患者有29例，PSC患者有11例。
另外再选择60例肝功能异常，但属于非自身免疫性肝病的患者作为对照组。
两组患者年龄在22-46岁之间，平均年龄为（29.1±1.3）岁。
1.2方法采用间接免疫荧光法来对抗核机体（ANA）、抗平滑肌抗体（SMA）以及抗线粒体抗体（AMA）进行检测，选用HEP-2细胞与大鼠肝、肾以及胃三种组织的冰冻切片来作为抗原，待检测的血清按1：100进行稀释，和各种组织进行共同孵育30min，再加入异硫氰酸荧光素（FITC）标记的抗体孵育进行洗片，使用甘油进行封片之后在显微镜下进行观察。
