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无创产前检测在高龄孕妇产前筛查唐氏综合征中的应用

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DOI：10．13602/j．cnki．jcls．2015．05．02·临床检验技术研究·无创产前检测在高龄孕妇产前筛查唐氏综合征中的应用*季修庆，蒋涛，林颖，胡平，李璃，刘安，周静，许争峰（南京医科大学附属南京妇幼保健院产前诊断研究室，南京210004）摘要：目的探讨无创产前检测（non-invasive prenatal testing，NIPT）在高龄孕妇产前筛查唐氏综合征（Down syndrome，DS）中的应用价值。

方法采用高通量测序技术检测高龄孕妇血浆中胎儿游离DNA（cell-free Fetal DNA，cffDNA），结合生物信息分析，得出胎儿患染色体病的风险率；DS高危的高龄孕妇再用羊膜腔穿刺术进行胎儿染色体核型分析。

结果2789例高龄孕妇中检测失败2例（0．07%，2/2789）。

余2787例中共检测出25例DS高风险胎儿，阳性率0．9%（25/2787），经羊水染色体核型分析证实24例为DS，1例核型正常。

NIPT用于高龄孕妇检测DS胎儿的敏感性为100%（24/24），特异性为99．96%（2762/2763），假阳性率为0．04%（1/2763）。

NIPT还检测出16例其他染色体非整倍体高风险，均进行羊水穿刺术，其中确诊12例胎儿染色体核型异常。

NIPT应用于2789例高龄孕妇产前检测，其中共有43例进行有创性产前诊断，穿刺率为1．54%。

结论NIPT用于高龄孕妇检测DS胎儿具有高敏感性和特异性、无创取样的优点，但目前NIPT检测仍存在假阳性。

对染色体结构异常无法准确检测。

NIPT检测高风险者仍需有创性产前诊断。

关键词：无创产前检测；高龄孕妇；唐氏综合征；胎儿游离DNA；高通量测序技术中图分类号：Ｒ394文献标志码：AApplication of Noninvasive prenatal testing for Down syndrome in advanced maternal age pregnant womenJI Xiu-qing，JIANG Tao，LIN Ying，HU Ping，LI Li，LIU An，ZHOU Jing，XU Zheng-feng（Department of Prenatal Diagnosis，Nan-jing Maternity and Child Health Care Hospital Affiliated to Nanjing Medical University，Nanjing210004，Jiangsu，China）Abstract：Objective To investigate the feasibility of non-invasive prenatal testing（NIPT）for Down syndrome prenatal diagnosis in advanced maternal age．Methods2789advanced maternal age pregnant women were chosen to analyze their cell-free fetal DNA copy numbers from maternal plasma by high-throughput sequencing．Fetal karyotyping was also carried out on amniocentesis if the women were judged as high risk by high-throughput sequencing．Ｒesults2cases（0．07%，2/2789）final detection of NIPT failed．25ca-ses（0．9%，25/2787）were high Down syndrome risk by NIPT，among which24were confirmed by karyotyping to be Down syn-drome．The sensitivity and specificity of NIPT were100．00%（24/24）and99．96%（2762/2763），respectively．The false positive rate is0．04%（1/2763）．We also detected16cases of other chromosomal aneuploidies in high risk（including trisomy18，trisomy 13，sex chromosome aneuploidies）by NIPT，all of them also were carried out the amniotic fluid puncture，and12cases of fetal chro-mosomal abnormalities were confirmed．NIPT was applied to2789cases of pregnant women in advanced maternal age，and a total of 43cases were carried out invasive prenatal diagnosis，so the puncture rate was1．54%．Conclusion NIPT can be popularized for de-tection of Down syndrome fetal in advanced maternal age，which has the advantages of high sensitivity and specificity，and noninvasive sampling．However，there are still false positive cases in NIPT detection，so the high risk cases still need to prenatal diagnosis，in ad-dition the chromosome structure abnormalities can't be accurately detected by the method at present．Key words：non-invasive prenatal testing；advanced maternal age；Down syndrome；cell-free fetal DNA；high-throughput sequencing无创产前检测（non-invasive prenatal testing，NIPT）通过采集孕妇外周血，提取总游离DNA，采用新一代高通量测序技术，结合生物信息分析，计算出胎儿游离DNA（cell-free fetal DNA，cffDNA）相对含量，得出胎儿染色体异常的风险率。

NIPT由于不需要进行创伤性取样，具有高敏感性和特异性，已越来越受到临床的重视［1］。

本研究将NIPT应用于高龄孕妇的唐氏综合征（Down syndrome，DS）胎儿产前检查，得到高危结果时再进行羊水细胞培养和核型分析，以探讨该技术在高龄孕妇产前诊断DS胎儿中的应用价值。

1对象与方法1．1研究对象选取2011年8月至2013年12月*基金项目：国家自然科学基金（81300495）；江苏省医学领军人才与创新团队（LJ201109）；江苏省临床医学重点项目（BL2012039）；江苏省卫生厅科学项目（H201343）。

作者简介：季修庆，1977年生，女，副主任技师，硕士，主要从事产前优生学相关工作。

通信作者：许争峰，主任医师，E-mail：njxzf@126．com。

于本院优生遗传门诊咨询的单胎妊娠的高龄孕妇共2789例，预产年龄35 50岁，平均37．4岁；孕周13 24周，平均18．75周。

研究对象均经知情同意。

1．2试剂与仪器DNA提取试剂盒（德国Qiagen 公司），T4DNA聚合酶、Klenow DNA聚合酶和T4多聚核苷酸激酶（美国ABI公司），多重样品制备寡核苷酸试剂盒（美国Illumina公司），PCＲ扩增产物纯化试剂盒（美国Beckman Coulter公司）；2100Bio-analyzer生化分析仪（美国Agilent公司），HiSeq2000高通量测序仪（美国Illumina公司）。

1．3血浆游离DNA提取采集孕妇静脉血5mL，EDTA抗凝。

5h内于4ħ、1600r/min离心10min 收集上层血浆，将收集的血浆4ħ、16000r/min离心10min，再吸取上层血浆，分装，－80ħ保存。

用DNA提取试剂盒提取血浆游离DNA，操作过程参照试剂盒说明书。

1．4高通量测序文库制备由深圳华大基因公司临床检验中心制备。

利用T4DNA聚合酶、Klenow DNA聚合酶和T4多聚核苷酸激酶完成对提取的血浆DNA片段的末端修复，3'端加碱基A，接头连接的过程；将完成接头连接反应的DNA片段，按照多重样品制备寡核苷酸试剂盒说明书进行PCＲ扩增，富集已连接接头序列的DNA分子。

按PCＲ扩增产物纯化试剂盒的操作程序对扩增产物纯化后，使用2100Bioanalyzer生化分析仪分析制备完成的文库，并使用real-time定量PCＲ对文库进行精确定量。

1．5高通量测序及数据分析获得的文库经扩增反应后，用HiSeq2000高通量测序平台（由深圳华大基因公司临床检验中心提供），将孕妇血中所有游离DNA进行大规模基因并行测序，获得分布在每条染色体上核酸片段的序列。

由于每一条染色体均有自己独特的标签序列，可通过这些标签序列间接识别其相应的染色体，并且标签序列扩增量的多少与染色体的数目具有平行关系。

根据生物信息学分析，计算出每条染色体对应的标签序列的覆盖深度（Cov）值。

第21号染色体（Chr21）的Cov=样本Chr21上有效测序片段总数/参考序列Chr21上有效测序片段总数，其中，参考序列主要是根据NCBI 参考序列计划提供的染色体校正的序列数据和相关的信息。

检测样本Chr21的关联t值=（检测样本的覆盖深度－正常对照样本的覆盖深度的均值）/正常对照样本覆盖深度的标准差，其中，正常对照样本为临床大量样本。

检测样本的Chr21的关联t值≥3即判定胎儿为DS高风险［2］。

1．6羊水染色体核型检查高风险孕妇经遗传咨询后，在18 24孕周通过羊膜腔穿刺术获取羊水，经过细胞培养和核型分析以明确诊断，结果分析按照人类细胞遗传学国际命名体制（2009）进行。

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无创基因检测在高龄孕妇产前筛查中的应用价值

无创基因检测在高龄孕妇产前筛查中的应用价值

Mod Diagn Treat 2019May 30(9),NIPT,。

NIPT DNA 。

:x 、13￣、18￣、21￣、[1]。

,,,。

、。

、,,,,,。

,,[2,3]。

,,,。

1资料与方法1.120171~20185700。

500200。

36~42,13~24;35~46,18~23。

(P >0.05),。

:,,35~49,13~25+6w。

、、、。

,。

1.2:,5ml。

EDTA ,。

4℃;1500/。

10,[4]。

DNA (:、:、;:2ml、5ml)。

,。

,,G [5]。

,,。

:。

B ,,2ml 20ml 、、、G [6],30,5。

1.3SPSS 16.0。

χ2,P <0.05.2结果*:(Y17036)无创基因检测在高龄孕妇产前筛查中的应用价值*彭红梅,张浔,宋清源,陈惠英,周洁,钟永红(,512026)摘要:目的。

方法20171~20185700,500200。

,;,。

结果5008,10。

(P 0.05)。

结论,,、,。

关键词:;;中图分类号:R714.53文献标识码:B文章编号:1011￣8174(2019)09￣1463￣021463··Mod Diagn Treat 2019May 30(9)2.15008,。

1。

1研究组无创基因检测异常及其羊水染色体核型结果DNA 12364021212121437181833818181956373645,XO 47,XXX 45,XO47,XXX ,,78403847,XXX 47,XXY47,XXX 47,XXY,,2.210,。

2。

2对照组直接行羊水穿刺的异常染色体结果DNA 13721103946,XN,15pst+,2345678941363838364238412145,XO47,XYY47,XN,+8(5)/46,XN(50)46,XN,inv(9)(p12q21)46,XN,inv(9)(p12q21)46,XN,1qh+46,XN,9qh+,;,,,,,2.3,T21,T18100%,100%,82%,,。

唐氏综合征产前筛查研究

唐氏综合征产前筛查研究

唐氏综合征产前筛查研究唐氏综合征（21-三体综合征）是最常见的染色体畸形病变，临床主要以生长发育缓慢、智能低下、眼裂小、眼睛上斜、伸舌头、口鼻流涎多等症状表现为主。

由于唐氏综合征会引发先天性的智力以及行为障碍，不仅会给患儿的日后生活带来严重影响，同时还会给患儿的家庭带来沉重负担，所以当前应该加强唐氏综合征的产前筛查，从而有效降低唐氏综合征胎儿的出生率，全面提升我国的人口素质。

本文首先阐述唐氏综合征的产前筛查必要性，然后分析唐氏综合征产前筛查现代技术手段，仅供有关人士参考。

一、唐氏综合征产前筛查必要性唐氏综合征是遗传类疾病，目前尚无特效性的疾病治疗方法，后期仅能对患儿进行长期、耐心的工作指导与训练，所以仅能通过产前筛查，针对怀有唐氏综合征孕妇建议终止妊娠处理，通过筛查来避免唐氏综合征的出现。

唐氏综合征的发病具有较强的随机性，所以无法有效预防，所以开展产前筛查至关重要，在产钳筛查的阶段，最可靠的方式是采集患者的羊绒毛以及脐带血，分析患者的染色体核型，这种传统的方式是诊断唐氏综合征的金标准，但是其属于侵入性操作，在羊膜腔穿刺的过程中可能会导致流产、感染的情况出现，导致孕产妇出现抵触的情绪，不适合大范围推广这一有创操作，所以当前为了扩大唐氏综合征产前筛查的覆盖率，需要推广应用非侵入性、适合孕妇接受的无创操作。

二、分析唐氏综合征产前筛查现代技术手段最早进行唐氏综合征产钳筛查的过程中，发现相较于正常孕妇而言，孕妇妊娠唐氏综合征的情况下，游离雌三醇、甲胎蛋白等血清标志物存在明显的差异，基于这种差异可以预测胎儿是否伴发唐氏综合征，为了有效提高筛查效率，可以联合多种血清标志物。

在开展唐氏综合征的产前筛查时，主要是对孕妇外周血的血清标志物进行测量，之后结合孕妇、体质量、孕周等多种因素，将孕妇分为高低风险，针对高风险的孕妇在后续应该开展羊毛以及绒毛细胞的检查，做更加精准的产前筛查诊断，由于产前筛查风险是统计相关人群推算而出，整体主观性较强，所以容易出现假阳性的情况。

PLGF在孕早期子痫前期和唐氏综合征筛查中的临床应用

PLGF在孕早期子痫前期和唐氏综合征筛查中的临床应用

PLGF在孕早期子痫前期和唐氏综合征筛查中的临床应用随着医学技术的不断发展，孕产妇的保健工作也得到了很大的进步，特别是对于孕早期子痫前期和唐氏综合征的筛查工作，已经有了更加精确和全面的方法。

PLGF（Placental Growth Factor，胎盘生长因子）作为血管内皮生长因子家族的成员，广泛应用于孕早期子痫前期和唐氏综合征的筛查中。

本文将对PLGF在孕早期子痫前期和唐氏综合征筛查中的临床应用进行分析和探讨。

孕早期子痫前期是一种严重妊娠并发症，其临床表现主要为高血压疾病、蛋白尿和水肿，并且易转变为子痫前期和子痫等。

孕早期子痫前期的发生原因十分复杂，包括母体、胎儿和胎盘三方面因素都在其中起到重要作用。

PLGF是胎盘生长因子家族中的一员，其在胎盘发育和母体循环中都起到了非常重要的作用。

PLGF在孕早期子痫前期中的临床应用主要是通过检测孕妇的血液中PLGF的含量来进行筛查。

研究表明，孕早期子痫前期患者的血液中PLGF含量较正常孕妇明显降低。

孕妇的血中PLGF值的下降，可能在发病前数周或数月即可以检测出来。

PLGF可以作为孕早期子痫前期筛查的一个重要指标。

对孕妇的血液中PLGF值进行检测，可以早期发现患有孕早期子痫前期的高危孕妇，及时采取干预措施，以避免病情的进一步恶化。

由于PLGF在孕早期子痫前期中的临床应用，使得对孕妇进行筛查工作变得更加便捷和准确。

传统的筛查方法包括了测量孕妇的血压、尿蛋白和尿酮体等指标，这些指标虽然也可以用来进行筛查，但其灵敏度和特异度相对较低，容易造成漏诊和误诊。

而PLGF检测则是一种更加精确和具有针对性的方法，可以大大提高孕早期子痫前期筛查的准确性和及时性。

唐氏综合征是一种常见的染色体疾病，常见于胎儿期，其主要特征是胎儿染色体21三体。

唐氏综合征的孕产妇高龄、孕前检查遗传学阳性家族史、孕前高龄、孕前重度疾病家族史、孕期放射线史等是其发病的主要原因。

而现阶段采用的唐氏综合征筛查方法主要有无创产前筛查、唐氏综合征筛查及产前诊断。

高龄孕妇妊娠中期唐氏筛查在产前诊断中的应用价值探讨

高龄孕妇妊娠中期唐氏筛查在产前诊断中的应用价值探讨

高龄孕妇妊娠中期唐氏筛查在产前诊断中的应用价值探讨发表时间：2019-09-05T17:00:21.373Z 来源：《中国结合医学杂志》2019年7期作者：胡惠彬熊叶杨云[导读] 高龄孕妇妊娠中期唐氏筛查在产前诊断中的应用价值显著，值得临床推广。

永州市妇幼保健院湖南永州 425000【摘要】目的：探究高龄孕妇妊娠中期唐氏筛查在产前诊断中的应用价值。

方法：选择2018年1月-2019年1月我院接受晚唐氏筛查的妊娠中期孕妇200例，根据孕妇年龄分为两组，对照组为低龄组，观察组为高龄组，两组均接受唐氏筛查，比较两组唐氏筛查结果以及妊娠结局。

结果：①观察组唐氏筛查阳性率22.0%，羊膜穿刺阳性10.0%，对照组唐氏筛查阳性率10.0%，羊膜穿刺阳性1.0%，组间差异具有统计学意义（P＜0.05）.②观察组不良妊娠44.0%，对照组不良妊娠12.0%，组间差异具有统计学意义（P＜0.05）.③不良妊娠组β绒毛促性腺激素（2.6±0.4）mu/ml，甲胎蛋白（0.8±0.2）ug/L，正常妊娠组β绒毛促性腺激素（1.2±0.1）mu/ml，甲胎蛋白（1.7±0.2）ug/L，组间差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论：高龄孕妇妊娠中期唐氏筛查在产前诊断中的应用价值显著，值得临床推广。

【关键词】高龄孕妇；妊娠中期；唐氏筛查；产前诊断；应用价值The application value of Down's screening in the second trimester of pregnant women in prenatal diagnosisHu Huibin Xiong Ye Yang YunYongzhou Maternal and Child Health Hospital Hunan Yongzhou 425000[Abstract] Objective：To explore the application value of Down's screening in the second trimester of pregnancy in prenatal diagnosis. Methods：A total of 200 pregnant women in the second trimester of pregnancy who were screened for late Tang's in our hospital from January 20 to 2019 were enrolled. The age of the pregnant women was divided into two groups. The control group was the younger age group and the observation group was the older group. Down's screening was performed to compare the two sets of Down's screening results and pregnancy outcomes. Results：① The positive rate of Down's screening in observation group was 22.0%，the positive rate of amniocentesis was 10.0%，the positive rate of Down's screening in the control group was 10.0%，and the positive rate of amniocentesis was 1.0%. The difference between the two groups was statistically significant（P<0.05）. ② The observation group had 44.0% of adverse pregnancy，and the control group had poor pregnancy of 12.0%. The difference between the two groups was statistically significant（P<0.05）. ③ The adverse pregnancy group was β-growth gonadotropin（2.6±0.4）mu/ml，alpha-fetoprotein（0.8±0.2）ug/L，β-flock gonadotropin（1.2±0.1）mu/ml，alpha-fetoprotein（1.7±0.2）ug/L in normal pregnancy group，the difference between the two groups was statistically significant（P<0.05）. Conclusion：The application of Down's screening in the second trimester of pregnancy in prenatal diagnosis is significant and worthy of clinical promotion.Key words：advanced pregnant women；mid-pregnancy；Down's screening；prenatal diagnosis；application value相关研究资料证实，在活产儿中唐氏综合征的发病率为0.13%-0.17%，该病是由于染色体数量异常导致的遗传疾病，目前尚未有效治疗方式，给患儿家庭带来沉重负担[1]。