最新宫颈癌Hela细胞株培养

一、实验目的1. 掌握宫颈癌细胞株的体外培养方法。

2. 观察宫颈癌细胞在体外培养条件下的生长特点。

3. 通过细胞学观察，了解宫颈癌细胞的形态学特征。

二、实验材料1. 宫颈癌细胞株：Hela细胞2. RPMI-1640细胞培养基3. 胎牛血清4. 0.25%胰蛋白酶5. 75%酒精6. 细胞培养箱7. 显微镜8. 计时器三、实验方法1. 宫颈癌细胞复苏（1）将冻存的宫颈癌细胞株Hela取出，用75%酒精消毒，然后用无菌镊子将细胞接种于培养皿中。

（2）加入适量的RPMI-1640培养基，放入细胞培养箱中，37℃、5%CO2条件下培养。

2. 细胞传代（1）当细胞贴壁生长至80%左右时，用0.25%胰蛋白酶消化细胞。

（2）将消化后的细胞悬液转移至新的培养皿中，加入适量的胎牛血清和RPMI-1640培养基，放入细胞培养箱中培养。

3. 细胞观察（1）取生长良好的细胞，用无菌镊子挑取细胞，制成细胞悬液。

（2）将细胞悬液滴加于载玻片上，室温晾干。

（3）用95%酒精固定细胞，晾干。

（4）用姬姆萨染液染色，晾干。

（5）在显微镜下观察细胞形态学特征。

四、实验结果1. 宫颈癌细胞在体外培养条件下，生长迅速，呈梭形、不规则形或多边形，细胞核较大，核仁明显。

2. 细胞传代过程中，细胞生长良好，细胞密度逐渐增加。

3. 细胞学观察结果显示，宫颈癌细胞呈梭形、不规则形或多边形，细胞核较大，核仁明显，细胞间连接紧密。

五、实验结论1. 成功建立了宫颈癌细胞株Hela的体外培养体系。

2. 宫颈癌细胞在体外培养条件下，生长迅速，细胞形态学特征明显。

3. 本实验为宫颈癌的研究提供了实验材料和方法。

六、实验讨论1. 在细胞培养过程中，应注意无菌操作，避免污染。

2. 适当调整培养基成分和培养条件，有利于细胞的生长和传代。

3. 细胞学观察结果表明，宫颈癌细胞在体外培养条件下，具有明显的细胞学特征，为宫颈癌的研究提供了实验依据。

4. 本实验为宫颈癌的体外研究提供了实验材料和方法，为进一步研究宫颈癌的发生、发展及治疗提供了基础。

Hela细胞系（HeLa cell line）是生物学与医学研究中使用的源自一位名叫Henrietta Lacks美国妇女的子宫颈癌细胞的细胞系。

这名美国妇女在1951年死于该癌症。

为了让Lacks保持匿名，此细胞株原宣称是依「Helen Lane」命名。

海拉细胞系被视为「不死的」（即，不同于其他一般的人类细胞，此细胞株不会衰老致死，并可以无限分裂下去），至今都被不间断的培养。

此细胞系跟其他癌细胞相比，增殖异常迅速。

海拉细胞系被George Gey分送给众研究单位（并未通知Lacks本人也未得到她的许可），并用作癌症细胞模型（model cancer cells）研究。

海拉细胞系也被用作研究细胞信号传导（cellular signal transduction）。

海拉细胞系是被人类乳突状瘤病毒第18型（Human Papillomavirus 18）转化的，和正常子宫颈细胞有许多不同。

已证实海拉细胞系难以控制。

此细胞系有时会污染同一实验室的其他细胞培养物（cell culture），干扰生物学的研究。

污染程度难以估计，因为研究人员很少检定已确立细胞系的本质和纯度。

据说有相当数目的体外细胞系（in vitro cell lines）其实就是海拉细胞系，因为原先的细胞株已被快速增殖的海拉细胞系污染物取代了。

有学者认为此细胞系是一新的物种，因为此细胞株能自行繁殖和散布。

在1991年此细胞株被命名为Helacyton gartleri。

科学研究史在Hela出现之前，科学家已经实现了某些动物细胞的人工培养，但尚未成功培养人类细胞；人类细胞由于分裂次数有限，难以实现长期留存。

肿瘤细胞HeLa以其顽强的生命力和繁殖力成为科学家获得的第一个人类细胞系。

据估计，全世界用于研究而繁育的Hela细胞的总数目已经远远超过了Lacks女士本人所有的细胞数，甚至有人认为可以将HeLa细胞看做一个新的物种。

截至2009年，全世界已经有超过60000篇科学论文是基于对HeLa细胞的研究，并且这一数字还以每月300篇的速度不断增长着。

生物技术进展 2023 年 第 13 卷 第 2 期 311 ~ 317Current Biotechnology ISSN 2095‑2341研究论文Articles褪黑素联合顺铂对宫颈癌HeLa 细胞增殖、凋亡及侵袭的影响沈云燕 ， 邱琦*苏州大学附属第二医院门诊办公室，江苏 苏州 215004摘要：探究了褪黑素（melatonin ， MLT ）联合顺铂（cisplatin ， DDP ）对宫颈癌HeLa 细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。

体外培养宫颈癌HeLa 细胞，利用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium ， MTT)法测定MLT 、DDP 及其联合使用对宫颈癌HeLa 细胞增殖的影响；将HeLa 细胞分为对照组、褪黑素组、顺铂组和联合组；其中褪黑素组采用2.5 mmol ·L -1的褪黑素处理细胞；顺铂组采用5 μg ·mL -1的顺铂处理细胞；联合组采用2.5 mmol ·L -1的褪黑素+5 μg ·mL -1的顺铂联合处理。

采用克隆形成实验、流式细胞仪、划痕实验和Transwell 小室实验分别检测各组HeLa 细胞的增殖、凋亡、侵袭情况，蛋白质印迹法检测Ki -67、PCNA 、Bcl -2、Bax 、N 钙粘蛋白（N -cadherin ）、E 钙粘蛋白（E -cadherin ）和波形蛋白（Vimentin ）蛋白表达情况。

MTT 结果显示MLT 、DDP 可以显著抑制宫颈癌HeLa 细胞的增殖（P <0.05)，且随着使用浓度的升高抑制率显著升高；相比单独使用MLT 、DDP ，联合使用MLT 和DDP 可以显著升高对HeLa 细胞增殖的抑制率（P <0.05)。

相比对照组，褪黑素组和顺铂组细胞克隆形成率、单位面积侵袭细胞数目、划痕愈合率以及Ki67、PCNA 、Bcl -2、E -cadherin 蛋白相对表达水平均降低（P <0.05），细胞凋亡率和蛋白Bax 、N -cadherin 、Vimentin 相对表达水平升高（P <0.05）。

HeLa细胞株在生物学与医学研究中，HeLa细胞是指源自一名美国妇女的子宫颈癌细胞的细胞。

这名美国妇女名叫Henrietta Lacks，于1951年死于癌症。

本来为了让Lacks保持匿名，此细胞株宣称是依“Helen Lane”命名。

HeLa细胞株被George Gey分送给众研究单位（而未通知Lacks本人也未得到她的许可），因用作癌症研究而广为流传。

至今已被视为“不死的”，也就是说此细胞株（不同于其他人类细胞）不会老死，而且可以不限次数的分裂下去，而且已被培养出一个不间断的系列。

从1951年至今，Hela细胞已经培养了50多年，分裂了18000次以上仍然没有停止的迹象。

此细胞株即使和其他癌细胞相比，增殖依然异常迅速。

一般两天左右即可长到35000000～40000000个。

然而，由于当初采集细胞时并没有征得患者或家属的同意，HeLa细胞株广泛应用引发了一系列的医学伦理问题。

2009年，Rebecca Skloot将这个具有传奇性的故事编撰成书，书名为《永生的海拉》[1]。

此细胞株被用作“model cancer cells”来研究细胞信号传导（cellular signal transduction）。

HeLa细胞株是由正常子宫颈细胞被一种人类乳突状瘤病毒（Human Papillomavirus 18 或HPV18）转型成癌细胞的，而且和正常子宫颈细胞有许多不同。

目前已经证实HeLa细胞株难以控制。

此细胞株有时会污染同一实验室的其他细胞培养环境（cell culture），进而影响生物研究。

由于研究人员很少检查已确立的细胞株的本质和纯粹度，因此污染的程度不明。

据说有相当数目的“人造”细胞株其实是HeLa细胞株，也就是说原来的细胞株被一群受到HeLa细胞株污染的快速增殖细胞淹没了。

有的学者已经认为此细胞株其实是一新的品种，因为此细胞株能自行繁殖和散布。

在1991年此细胞株被命名为Helacyton gartleri。

miR -200a 对宫颈癌细胞系HeLa 增殖、迁移、侵袭调控作用观察及其靶向mRNA 和lncRNA 预测分析蔡添娥，陈丽婷，于英上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心海南医院产前诊断中心，海南三亚572000摘要：目的　观察微小RNA -200a （miR -200a ）对宫颈癌细胞系HeLa 增殖、迁移和侵袭的调控作用，对miR -200a 的靶向mRNA 及靶向长链非编码RNA （lncRNA ）进行预测分析。

方法　取人宫颈癌细胞系HeLa 分为1、2、3及4组，分别转染miRNA 模拟物miR -200a mimics 、miRNA 抑制物miR -200a inhibitor 、对照物mimics NC 及inhibitor NC 。

培养48 h 时采用qRT -PCR 法检测各组细胞miR -200a 表达；采用CCK8法检测各组细胞增殖能力，采用Tran⁃swell 侵袭实验检测细胞侵袭能力，采用Transwell 迁移实验和细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力。

使用miRNA 数据库在线预测miR -200a 靶向mRNA 和靶向lncRNA ，采用基因本体论功能注释和京都基因和基因组百科全书富集分析法分析宫颈组织中miR -200a 的靶向mRNA 和靶向lncRNA 的生物学功能。

结果　与3组比较，1组细胞miR -200a 相对表达量高；与4组比较，2组细胞miR -200a 相对表达量低（P 均<0.05）。

与3组比较，培养72、96 h 时1组细胞增殖能力低，培养48 h 时侵袭细胞数及细胞穿膜数少，细胞迁移率低（P 均<0.05）；与4组比较，培养72、96 h 时2组细胞增殖能力高，培养48 h 时侵袭细胞数及细胞穿膜数多，细胞迁移率高（P 均<0.05）。

miR -200a 靶向mRNA 及lncRNA 分别有83、6个， miR -200a 靶向mRNA 功能主要有与转录调控、自噬体组装、神经元迁移和轴突导向等生物学过程，信号通路主要有Wnt 信号通路、Hippo 信号通路及内质网蛋白加工信号通路等。