支原体肺炎血清学试验被动凝集法作业指导书

肺炎支原体抗体检测（被动凝集法）1.目的：规范实验室肺炎支原体抗体检测操作。

2.范围： xxxx院xxxx科3.测定原理：将肺炎支原体（Mac株）的细胞膜成分致敏人工载体明胶粒子制造而成。

这种致敏粒子和样本中的肺炎支原体抗体进行反应发生凝集，由此可以检测出血清和血浆中的肺炎支原体抗体，并且用来测定抗体的效价。

4.标本：4.1采用正确医用技术收集血清/血浆样本，血浆样本推荐使用肝素钠抗凝血浆，枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。

4.2样本中的沉淀物和悬浮物，红细胞等其它有形成分可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。

4.3严重溶血或脂血的样本不能用于测定。

4.4样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。

使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。

5.试剂：珠海丽珠试剂股份有限公司提供的试剂。

5.1试剂盒在2℃—10℃储存，防止冷冻，避免强光照射，有效期12个月。

5.2 试剂盒开启使用后，冷冻干燥品配好后，2℃—10℃保存可使用7日，使用前必须做对照试验。

5.3试剂组成5.3.1血清稀释液（液体）：用于稀释样品和复溶致敏粒子和未致敏粒子。

5.3.2致敏粒子（冷冻干燥）：肺炎支原体（Mac株）抗原致敏的明胶粒子。

使用时加入规定量的血清稀释液。

复溶后的试剂含有0.9%的致敏粒子。

5.3.3未致敏粒子（冷冻干燥）鞣化的明胶粒子冻干制品。

使用时加入规定量的血清稀释液。

5.3.4阳性对照血清（液体）肺炎支原体（Mac株）抗体阳性的兔血清用血清稀释液1:10稀释后的制品。

6.临床标本测定6.1试剂的准备6.1.1溶解液（液体）：按照测定操作规则使用。

6.1.2血清稀释液（液体）：按照测定操作规则使用。

6.1.3致敏粒子（冷冻干燥）：加入一定量的溶解液进行调制。

请在使用前30分钟于室温（15~30℃）下进行调制。

肺炎支原体抗体明胶凝集试验标准操作程序肺炎支原体抗体明胶凝集试验标准操作细则1、目的对肺炎支原体抗体明胶凝集试剂使用进行必要的细化和补充，以规范本试剂的操作程序，正确使用本试剂,保证检测结果准确。

2、适用范围操作适用于采用肺炎支原体抗体明胶凝集试剂的所有操作。

3、试剂厂家日本富士公司4、工作程序（一）、原理利用纯化的肺炎支原体抗原包被明胶颗粒，此致敏的明胶颗粒将与人血清或血浆中的肺炎支原体抗体结合产生可见的凝集反应。

本试剂有如下优点：（1）操作简便，无需特殊设备。

即可对单个标本进行检测，也可用于大规模普查。

（2）反应时间短：孵育时间仅3小时，随后肉眼观察结果。

（3）高度特异性：本试验中所用的载体为人工制造的明胶颗粒，由富士公司独创。

与其它同类试剂中所用的生物载体相比（如TPHA 中的红细胞），最大限度地降低了非特异凝集反应。

（二）、试剂盒内容“A”稀释液（Sample Diluent）用于溶解致敏颗粒“B”和非致敏颗粒“C”及标本的稀释。

“B”致敏颗粒（Sensitized Particles）：为冻干粉，用前30分钟按规定量加“A”液溶解混匀。

是包被有肺炎支原体抗原的明胶颗粒。

“C”非致敏颗粒（Unsensitized Particles）：为冻干粉，用前30分钟按规定量加“A”液溶解混匀。

“D”阳性对照（Positive Control）：为含肺炎支原体抗体的兔血清制成，最终滴度1:320。

其试验方法与定量试验同，可稀释至第7或第8孔则可。

必要时才做此对照试验。

滴管（25μl /滴）：1个，分别用于致敏颗粒（“B”液）或非致敏颗粒（“C”液）的吸取，请勿混用。

U型微孔板2块需自备的材料：刻度吸管，微量移液器及吸头，托盘式混匀器（注：不可用涡旋式振荡器）（三）、试验方法：用U形反应板1、定性试验孔序 1 2 3 4加血清稀释液“A”（μl）100 25 25 25血清标本（μl）25 →25 → 25 → 25 →弃去25μl标本稀释度 1:5 1:10 1:20 1:40加非致敏颗粒“C”（μl） 25致敏颗粒“B”（μl）25血清终滴度1:40 1:80置微型振荡器振摇1分钟，置有盖湿盒内，室温静置3小时后观察结果。

被动凝集法
被动凝集法是一种用于检测抗体或抗原的间接凝集反应，此方法中，可溶性抗原（或抗体）被吸附在载体微粒的表面，然后与相应的抗体（或抗原）发生作用，在适宜的电解质存在的条件下，出现特异性的凝集现象。

以肺炎支原体MP的检测为例，被动凝集法主要用于检测肺炎支原体感染。

灵敏度很高，而且简便、快捷、价格便宜，它用于临床常规的检测和筛查。

目前的正常值是1:40，如果大于1:40就存在弱阳性，如果大于1:80，就是肺炎支原体抗体检测阳性。

但请注意，如果肺炎支原体检测是阳性的，并不能说明就是肺炎支原体的急性感染。

因为肺炎支原体抗体感染一般是7-10天就可以出现，20天左右就能出现长期的抗体，而7-10天出现的是短期的IgM 抗体。

这种IgM抗体最长可以持续一年，甚至有达到两年的记录。

因此，我们判断这个患者是不是有肺炎支原体急性的感染，要根据他的临床症状来加以分析和判断。

肺炎支原体抗体明胶凝集试验标准操作细则1、目的对肺炎支原体抗体明胶凝集试剂使用进行必要的细化和补充，以规范本试剂的操作程序，正确使用本试剂,保证检测结果准确。

2、适用范围操作适用于采用肺炎支原体抗体明胶凝集试剂的所有操作。

3、试剂厂家日本富士公司4、工作程序（一）、原理利用纯化的肺炎支原体抗原包被明胶颗粒，此致敏的明胶颗粒将与人血清或血浆中的肺炎支原体抗体结合产生可见的凝集反应。

本试剂有如下优点：（1）操作简便，无需特殊设备。

即可对单个标本进行检测，也可用于大规模普查。

（2）反应时间短：孵育时间仅3小时，随后肉眼观察结果。

（3）高度特异性：本试验中所用的载体为人工制造的明胶颗粒，由富士公司独创。

与其它同类试剂中所用的生物载体相比（如TPHA 中的红细胞），最大限度地降低了非特异凝集反应。

（二）、试剂盒内容“A”稀释液（Sample Diluent）用于溶解致敏颗粒“B”和非致敏颗粒“C”及标本的稀释。

“B”致敏颗粒（Sensitized Particles）：为冻干粉，用前30分钟按规定量加“A”液溶解混匀。

是包被有肺炎支原体抗原的明胶颗粒。

“C”非致敏颗粒（Unsensitized Particles）：为冻干粉，用前30分钟按规定量加“A”液溶解混匀。

“D”阳性对照（Positive Control）：为含肺炎支原体抗体的兔血清制成，最终滴度1:320。

其试验方法与定量试验同，可稀释至第7或第8孔则可。

必要时才做此对照试验。

滴管（25µl /滴）：1个，分别用于致敏颗粒（“B”液）或非致敏颗粒（“C”液）的吸取，请勿混用。

U型微孔板2块需自备的材料：刻度吸管，微量移液器及吸头，托盘式混匀器（注：不可用涡旋式振荡器）（三）、试验方法：用U形反应板1、定性试验孔序 1 2 3 4加血清稀释液“A”（μl）100 25 25 25血清标本（µl）25 →25 → 25 → 25 →弃去25μl标本稀释度 1:5 1:10 1:20 1:40加非致敏颗粒“C”（µl） 25致敏颗粒“B”（µl）25血清终滴度1:40 1:80置微型振荡器振摇1分钟，置有盖湿盒内，室温静置3小时后观察结果。

血清抗MP-IgM检测法和被动凝集法对小儿肺炎支原体感染检验的准确性分析发布时间：2023-06-07T11:11:42.163Z 来源：《医师在线》2023年2月3期作者：张倩云[导读]血清抗MP-IgM检测法和被动凝集法对小儿肺炎支原体感染检验的准确性分析张倩云（常州市儿童医院；江苏常州213000）【摘要】目的：对比分析小儿肺炎患儿在支原体感染检验中使用血清抗MP-IgM检测法、被动凝集法的准确性。

方法：选择60例小儿肺炎患儿，存在支原体感染，选择病例的时间是2022年1-12月，随机数字表法分组后，每组患者例数相同，在观察组30例患儿的支原体感染检验中使用被动凝集法，而对照组患儿30例使用血清抗MP-IgM检测法，对比两组患儿的组间数据，主要是阳性率。

结果：在观察组患儿中，男女阳性率的差异性不大，无统计学意义P＞0.05；对比6岁以上患儿，3岁以内、3-6岁患儿的阳性率均明显更低，有统计学意义（P＜0.05）。

对比对照组患儿，观察组患儿的阳性率明显更高，有统计学意义，P＜0.05。

结论：小儿肺炎患儿在支原体感染检验中使用血清抗MP-IgM检测法、被动凝集法的准确性不同，后者明显更高，临床应用价值明显更高，患儿可以及时获得对症治疗，避免对病情治疗造成延误。

【关键词】血清抗MP-IgM检测法；被动凝集法；小儿肺炎；支原体感染检验；准确性临床常见小儿肺炎患儿，为了有效提升患儿的治疗效果，应对如何检验患儿的支原体感染进行探讨。

目前来说，临床在支原体感染检验中使用血清抗MP-IgM检测法、被动凝集法[1]。

本组实验选择60例患儿，对比分析小儿肺炎患儿在支原体感染检验中使用血清抗MP-IgM检测法、被动凝集法的准确性。

1 资料和方法1.1资料从我院选择60例小儿肺炎患儿进行数据研究，选择病例的时间是2022年1-12月，随机数字表法分组后，n=30，在观察组患儿中，男女是16/14，年龄11个月到8岁，均（5.2±1.4）岁，其中3岁以内、3-6岁、6岁以上患儿的例数是14例、12例、4例，在对照组患儿中，男女是15/15，年龄10个月到7岁，均（5.1±1.3）岁，其中3岁以内、3-6岁、6岁以上患儿的例数是13例、11例、6例。