5. 染色 电泳完毕后断电,用镊子取出薄膜条投入染
液氨基黑中1分钟,染色过程中不时轻轻晃动 染色皿,使染色充分。 6. 漂洗
用漂洗液漂洗,不停摆动薄膜条,至背景 颜色脱去。将薄膜夹在干净滤纸中,吸去多余 溶液。
注意: 控制染色和漂洗的时间,防止背景过深或 某些区带太浅。
五、结果与分析:
一般的染色后的薄膜上 可显现清楚的五条区带。 从正极端起,依次为白蛋 白、α1球蛋白、α2球蛋 白、β球蛋白和γ球蛋白
实验二 醋酸纤维素薄膜电泳分离蛋白质
蛋白质是生命的物质承担者,要揭示生命 的本质,探讨各种生命活动的物质基础,就必 须对蛋白质的结构、性质和功能进行深入的研 究,这首先就需要将蛋白质分离出来,进行纯 化,再进一步进行测定。
蛋白质是是构成人体及动物细胞组织的重要成分,参 与机体内的各种生命活动
人体内蛋白质含量直接关系着人体的健康状况,测定 蛋白质含量在临床上尤为重要。
注意: 分清电泳槽上的正负极 如有很多膜条同时电泳时,膜条间应相距 1~3mm ,使之不互相接触,以免相互干扰。
4. 电泳 将电泳槽和电泳仪连接,注意电泳槽上的
正负极(红正黑负)。调节电流1.5mA/1膜; 通电时间45-60分钟。
点样端
1.滤纸桥 2.电泳槽 3.醋酸纤维素薄膜 4.电泳槽膜支架 5.电极室中央隔板
区带观察:1.排列顺序 2.区带宽窄 3.颜色深浅
临床意义
肝硬化:白蛋白降低,γ-球蛋白极度升高; 肝癌患者:白蛋白与球蛋白间多出一条甲胎蛋白
(AFP)带; 急慢性肾炎、肾病综合症:白蛋白降低,a1、a2
和β球蛋白升高;
注意事项
分清光面和毛面 取样要适量、均匀(点样器下端均匀沾有一层血 清即可) 点样时动作要轻稳,用力要均匀,点样时用力不 能太大,以免损坏膜片或印出凹陷影响电泳区带 分离效果。 只能点一次。 分清电泳槽上的正负极 如有很多膜条同时电泳时,膜条间应相距1~ 3mm ,使之不互相接触,以免相互干扰。