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山鸡Ｈ５Ｎ１高致病性禽流感免疫效价评估试验卫龙兴１，袁红艳２，张春华２，方桂明１，焦 楠２（１．上海市奉贤区动物疫病预防控制中心，上海奉贤２０１４００；２．上海欣灏珍禽育种有限公司，上海奉贤２０１４０３）摘 要：长期以来，山鸡Ｈ５Ｎ１高致病性禽流感的免疫一直引用了家禽的免疫程序，也未能开展系统的免疫抗体消长规律的研究，给山鸡规模化养殖带来了较大的隐患。
为此，于近期组织开展了一次针对种山鸡全周期（一个世代、５６周）Ｈ５Ｎ１高致病性禽流感免疫抗体的跟踪检测和免疫效价评估试验，并分析提出了山鸡专用的Ｈ５Ｎ１高致病性禽流感推荐免疫程序。
关键词：山鸡；Ｈ５Ｎ１高致病性禽流感；免疫；抗体检测；程序中图分类号：Ｓ８５２．４＋３ 文献标识码：Ａ ＤＯＩ：１０．１９５６７／ｊ．ｃｎｋｉ．１００８－０４１４．２０１８．０３．００７收稿日期：２０１８－０２－２７基金项目：上海市科技兴农基金项目，编号：沪农科推字（２０１６）第２－１－７号 引言山鸡，俗称野鸡、学名雉，是一种在我国广泛分布的小型鸟类，其外貌绚丽多彩、肉质细嫩鲜美、野味浓郁醇厚、营养丰富齐全，具有较高的经济和观赏价值；而且山鸡的抗病能力较强，野外生活几乎无疾病发生。
近年来，随着社会发展和物质生活水平的不断提高，人们对名特优新产品的需求也不断增长，而山鸡作为其中的典型代表，成为了人们的首选，市场需求与日俱增，人工养殖的规模和数量逐年上升；据不完全统计，目前国内存栏商品种山鸡约２００万套，年上市商品肉山鸡近亿羽、商品山鸡蛋约５亿枚，成为了特种养殖中规模最大的品种。
山鸡的规模化人工养殖，有效缓解了市场需求和生态保护的压力，但高密度的人工饲养，在加速山鸡抗病能力退化的同时，也显著增加了各类疾病的发生概率，特别是高致病性禽流感等主要疫病，已严重危害了产业的发展。
而目前国内还没有一套专门的山鸡高致病性禽流感的免疫程序，也未见系统开展山鸡高致病性禽流感免疫抗体消涨规律研究的报导，养殖户基本都是参照家禽的推荐免疫程序进行免疫，免疫失败现象时有发生。
2015年第12期（下半月）农民致富之友Nong Min Zhi Fu ZhiYou[中图分类号]S831[文献标识码]A[文章编号]1003-1650(2015)12-0260-01鸡群禽流感免疫抗体的监测效果分析左江环（安徽省贵池区牛头山镇畜牧兽医站，安徽池州247115）科研◎畜牧兽医高致病性禽流感是当今全球范围内比较严重的家禽传染病。
所谓禽流感是由A 型流感病毒引起的一种家禽的感染或疾病综合症，其对鸡有较高的致病性。
对于禽流感疾病的治疗，目前并没有有效的特效药来治疗，只有对鸡禽做好防疫工作。
本文以安徽贵池区鸡禽为例，采取鸡群的血样，利用血凝抑制试验对AIVH5抗体进行检测，对鸡群进行疫苗注射，观察和检测鸡的状态，了解鸡群禽流感免疫抗体的监测效果，以工作人员制定科学的免疫程序来防护鸡群，避免鸡患有禽流感疾病，最终死亡。
1材料与方法1.1材料1.1.1检测对象：安徽贵池区不同品种鸡。
1.1.2试验疫苗：由我国制定生产厂生产的禽流感H5亚型、禽流感H9亚型灭活疫苗。
1.1.3试验抗原：由我国农科研兽医研究所提供的禽流感H5亚型抗原、禽流感H9亚型抗原。
1.1.4样品制备：在安徽贵池区某养殖场随机选用不同品种的鸡，在鸡身上取得血样，提取1%鸡红细胞。
1.2方法1.2.1试验过程：在不同品种鸡的血样进行母源抗体检测。
在此基础上分别利用禽流感H5亚型疫苗和禽流感H9亚型疫苗免疫鸡，在30天和120天后对分别打禽流感H5亚型疫苗和禽流感H9亚型疫苗的鸡进行采血检测，测定鸡的抗体。
另外，再随机选用一些鸡，给鸡打入禽流感H5+H9亚型疫苗，在打完疫苗的30天、120天进行采血检测，测定鸡的抗体。
1.2.2实验操作：按照国家质量监督检验检疫局发布《高致病性禽流感诊断技术》，推荐标准进行血凝试验（HA ）和血凝抑制试验（HI 微量法），进行免疫抗体水平检测。
2结果与分析经过以上试验，得到禽流感H5-H1检测表1与禽流感H9-H1检测表2。
养殖与饲料2021年第07期禽流感免疫抗体检测分析陈霞1陈银基2黄福林11.江苏省南京市高淳区农业农村局动物疫病预防控制中心，南京211313；2.南京财经大学食品科学与工程学院，南京210038摘要为准确评估不同饲养方式下禽流感免疫效果，笔者于2018-2020年连续3年定期对南京市高淳区内的笼养家禽、放养家禽开展抗体检测，以期为禽流感的预防和管理提供科学依据，进一步提高禽流感疫病防控工作的水平。
检测结果表明：近3年本地区禽流感抗体合格率明显上升，笼养方式家禽抗体合格率为90%以上，明显高于放养家禽（70%左右），需要进一步加强对放养家禽的免疫管理工作。
关键词禽流感；抗体检测；笼养；放养；免疫；疫苗收稿日期：2021-01-06陈霞，女，1990年生，硕士，助理兽医师。
禽流行性感冒（简称禽流感）是由禽流感病毒引起的家禽和野禽的一种从呼吸系统疾病到全身性败血症等多种症状的综合病症。
在抗原特性相同的病毒中，有毒力强的毒株，也有毒力弱的毒株。
禽流感临床表现为精神沉郁，羽毛蓬乱，食欲减退或废绝，轻重度不一的呼吸道感染，产蛋下降甚至严重致死性疾病[1]，对家禽养殖业危害很大。
由于本病的临床症状和病理变化的差异大，所以确诊需要依靠病毒的分离鉴定和血清学试验。
该病以预防为主，是国家强制免疫的疾病，对活禽、观赏鸟类、野禽应当进行严格执行免疫程序。
2018年，南京市高淳区采用的是二价苗（H5N1Re-8株和H7N9H7Re-1株），从2019年开始，使用三价苗（H5N1Re-11+12株，H7N9H7Re-2株），以下简称H5+H7三价苗，进行家禽免疫。
随着农业产业结构的不断调整，禽养殖业逐年增加，规模化鸡场增多，仍有部分鸡场及散养户采用放养的方式进行养殖。
笔者对南京市高淳区2018-2020年春秋两季各养殖场进行采样和监测，现将不同饲养方式下禽流感免疫监测效果作出对比，以及时掌握流行病学动态，查漏补缺。
1材料与方法1.1免疫疫苗2018年采样禽流感（H5+H7）二价灭活苗免疫（乾元浩生物股份有限公司）；2019-2020年采样重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活苗免疫（乾元浩生物股份有限公司）。
家禽禽流感免疫抗体监测与分析摘要：为了真正做好家禽禽流感动物疫病防控事宜，全面提升畜牧业的产量、效益，让广大农民增收，来进一步巩固乡村脱贫成果，现随机抽样监测鸡鸭鹅家禽的重大疫病免疫效果。
禽流感免疫抗体效价结果如下所示：养禽场所的家禽免疫抗体合格率整体平均值达到81%，满足了我们国家的合格标准要求。
关键词：免疫抗体；家禽禽流感；监测引言禽流感是禽类感染正黏病毒科系列A型流感病毒属病毒而产生的烈性传染病，属于一类由呼吸体系至全身显著败血症等一系列症状突出的传染病，动物世卫组织将其确定成为法定报告系列动物传染病[1]。
其中的高致病性系列禽流感还存在非常大的患病率、致死率，会造成巨大的危害，在世界上广泛流行。
高密度免疫注射是当前最有效防控这种高致病性禽流感的手段方法，在畜禽生产养殖中以经常性抗体监测为主要的防控技术措施。
大朗镇总面积144km2，一共饲养2.3万羽家禽，实际出栏2.1万羽。
现阶段，该地严格贯彻实施“季防月补”规则制度，并专门对禽流感采取强制性免疫工作，在全面预防、控制禽流感上发挥了很积极的价值作用。
为知晓禽流感真实的免疫抗体水平，准确了解流行病学领域的动态状况、免疫力，现对家禽禽流感进行监测分析的结果作出如下报告。
一、家禽禽流感分析流行病学诊断：一般A型流感病毒可以感染诸多类型的家禽，具体流行情况会由于毒株、动物类别而不同。
通常禽类种别、毒株、养殖年龄、环境条件、并发感染等不一样时，相应的禽流感额会呈现出明显不一样的患病率、致死率。
禽流感能够从多渠道广泛传播，比如，呼吸系统、消化系统、皮肤破损黏膜等[2]。
一般而言，该病患病率非常的高，实际致死率则相对较低，但是如若感染其中的高致病力系列毒株后，则从整体上会呈现出100%的患病率、致死率。
临床症状：常见的典型症状：精神萎靡，仅需较少量的饲料，身形消瘦；就巢性强化，产蛋量变少；整个呼吸系统呈现出轻微～严重的表征，如打喷嚏、常咳、泪流不止；频繁腹泻、头脸肿大、神经错乱。
畜牧兽医杂志第40卷第1期2021年23湖北鄂州市春季养禽高致病禽流感免疫效果监测陆伟伟1,吕新慧1,熊勇兵2,张盼望1(1.鄂州市动物疫病预防控制中心，湖北鄂州436000,.鄂州市东沟畜牧兽医站)摘要:H5及H7型禽流感是目前养禽业主要免疫的两种高致病性流感病毒亚型，对养殖业危害很大。
动物疫苗接种是预防和控制高致病性流感发生的有效措施。
为了解湖北省鄂州市H5及H7型禽流感二联苗的免疫效果，按照国家标准采用血凝抑制试验对全市采集养禽场(户)的729份血液样品分别进行H5、H7型禽流感抗体实验室检测。
检测结果显示，H5、H7型禽流感抗体检测中，免疫合格的分别为706份、716份，两者抗体水平合格率分别达到96.84%、9&21%，均符合国家免疫要求。
关键词：免疫；血凝抑制；抗体［中图分类号&S851.33［文献标识码&A［文章编号&1004-6704(2021)01-0023-02Surveillance on Immune Effect of Highly Pathogenic Avian Influenza in Spring Poultry Farm(Household)in Ezhou City,Hubei ProvinceLU Wei-wei,LV Xin-hui,XIONG Yong-bing,ZHANG Pan-wang(1.Ezhou Animal Disease Prevention and Control Center,Ezhou Hubei436000,China,2.EzhouDonggou Animal Veterinary Station)Abstract:H5and H7Avian Influenza viruses are two kinds of highly pathogenic influenza virus subtypes that are mainly immunizedinpoul@ryindus@rya@presen@,whichdogrea@harm@******************************f ec@ivemeasure@opreven@ and con@rol@he occurrence of Highly Pa@hogenic Avian Influenza.In order@o comprehend@he immune e f ec@of H5and H7Avi-anInfluenzacombinedvaccineinEzhouciy,Hubeiprovince,according@o@henaionals@andard,@hehemaggluinaioninhibi-@ionassaywasused@ode@ec@H5and H7avian influenza an@ibody in729blood samples co l ec@ed from poul@ry farms.The re-sulsshowed@ha@706ofH5and716ofH7avianinfluenzaanibodywerequalified,and@hequalifiedra@esof@he@woanibody levels were96.84%and98.21%respec@ively,which me@@he na ional immuniza ion requiremen@s.Keywords*immuniy,hemaggluinaioninhibi@ion,anibody禽流感是禽流感病毒感染家禽后引起的各种综合征,分为中、低致病性禽流感和高致病性禽流感。
健康养殖·防控452020.01 畜牧业环境摘 要：针对我国对高致病性禽流感的防控现状，开展对高致病性禽流感疫苗抗体水平的分析十分必要。
根据文献资料和现实调查，针对养鸡场高致病性禽流感疫苗免疫后一次性进行的免疫效果评估很多，但对疫苗免疫后不同时间抗体水平跟踪监测的较少。
为此，开展了跟踪检测几个鸡场高致病性禽流感疫苗免疫后不同时间的抗体水平研究。
对洛阳市4个规模化鸡场共进行了33次共990羽（份）的血清抗体检测，总合格率为99.0%。
A场、B场、C场免疫程序有缺陷，存在较长的免疫保护空白期，D场免疫程序较合理，免疫保护空白期最短。
成年鸡用H5亚型H7N9流感重组三价灭活疫苗免疫，免疫保护期可达到4个月以上。
所选两个疫苗厂疫苗的免疫效果无明显差异。
强化免疫抗体水平较上次免疫抗体水平上升快而且维持时间较长。
关键词：高致病性禽流感；疫苗；抗体；监测；分析目前，我国使用的高致病性禽流感疫苗主要是H5亚型重组H7N9流感病毒灭活疫苗。
开展对疫苗免疫抗体的监测十分必要；本研究的目的在于通过跟踪监测几个鸡场高致病性禽流感疫苗免疫后抗体消长情况，为规模化鸡场高致病性禽流感疫苗选择提供数据评估参考；指导规模化鸡场对高致病性禽流感疫苗免疫程序的优化。
1 材料与方法1.1 材料和仪器1.1.1 疫苗疫苗分别选用青岛易邦H5亚型H7N9流感三价（Re-6 Re-7 Re-8）灭活苗（疫苗批号：160740201）和乾元浩H5亚型H7N9流感三价（Re-6 Re-7 Re-8）灭活苗（疫苗批号：2016021）。
1.1.2 试剂H7N9流感病毒H5（Re-6）亚型血凝抑制试验抗原和阴阳性血清，购自哈尔滨维科生物技术开发公司，批号：2015047，冻干的抗原和血清均按瓶签上规格标注的量，用PH值7.2 0.01mol/L PBS配置、阿氏（Alsevers）液的配置以及1%鸡血红细胞悬液的配置，按参考文献[1]操作。
禽流感免疫抗体效价检测
作者：何生
来源：《湖北畜牧兽医》2013年第07期
摘要：为掌握H5N1高致病性禽流感疫苗免疫效价，了解乌鲁木齐市米东区鸡群禽流感免疫抗体水平，对该地区不同鸡场进行了禽流感抗体检测。
结果表明，40只免疫鸡，免疫抗体效价合格数33只，总合格率为82.5%。
说明近几年对高致病性禽流感采取的强制免疫措施达到了比较显著的效果。
关键词：禽流感；免疫；抗体效价；血凝试验；血凝抑制试验
中图分类号：S855 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2013）07-0029-02
禽流感是由禽流感病毒引起的一种禽类（家禽和野禽）的烈性传染病，被世界动物卫生组织（OIE）定为A类传染病。
禽流感病毒感染后，呈现出较严重的全身性、出血性、败血性症状，死亡率较高。
禽流感病毒不仅能引起禽类严重的疾病，而且对人类和哺乳类动物也能造成感染。
在世界各种家禽和野生禽类中，按照血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）表面抗原来区分，已发现了数千种属于许多不同抗原亚型的病毒。
各种品种和不同日龄的禽类均可感染高致病性禽流感。
该研究为掌握H5N1高致病性禽流感疫苗免疫效价，了解本地区鸡群禽流感免疫抗体水平，对该地区鸡场进行了禽流感抗体检测，并对不其检测结果进行了对比分析。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验动物 40只鸡由米东区铁厂沟镇大草滩村养禽场提供。
1.1.2 试剂禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原，禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验阳性血清，1%鸡红细胞悬液。
1.1.3 仪器 96孔V型微量反应板、台式离心机，单道、多道微量可调移液器，吸嘴，微量振荡器，加样槽。
1.2 方法
1.2.1 血凝（HA）试验在微量反应板的1～12孔均加入0.025 mL的PBS，换滴头，吸取0.025 mL病毒悬液加入第1孔混匀，从第1孔吸取0.025 mL病毒液加入第2孔，混匀后吸取0.025 mL加入第3孔，依次倍比稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025 mL弃之，换滴头，每
孔再加入0.025 mL PBS。
每孔均加入0.025 mL体积分数为1%的鸡红细胞悬液，充分混匀后加入。
在微量振荡器上振荡2 min，在25 ℃恒温箱内静置40 min后观察结果。
1.2.2 血凝抑制（HI）试验在微量反应板的1～11孔加入0.025 mL的PBS，，第12孔加入0.05 mL的PBS，吸取0.025 mL被检血清加入第1孔内，充分混匀后吸0.025 mL于第2孔，依次倍比稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025 mL弃去。
1～11孔均加入含4 HAU混匀的病毒抗原液0.025 mL，室温25 ℃静置30 min。
每孔加入0.025 mL体积分数为1%的鸡红细胞悬液混匀，轻轻混匀，在室温25 ℃静置40 min，对照孔红细胞将呈明显的钮扣状沉到孔底。
灭活疫苗的免疫效果以抗体效价≥4log2时，判定为免疫效力良好；
2 结果与分析
2.1 血凝（HA）试验结果
将反应板倾斜，观察红细胞有无呈泪滴状流淌，完全血凝的抗原或病毒最高稀释倍数代表一个血凝单位（HAU）。
本试验中抗原的血凝效价为1：128。
2.2 血凝抑制（HI）试验结果
以完全抑制4个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。
只有当抗原对照孔（第11孔），红细胞对照孔（第12孔）阴性血清对照都成立时，试验结果才有效。
被检测的40份鸡血清样品中，抗体监测结果其抗体效价≥4log2的样品有33份，合格率达82.5%。
鸡群经过几次接种免疫后，抗体保持了较高的水平，与反复免疫产生的免疫应答和免疫记忆有关。
3 小结与讨论
3.1 免疫效果影响因素
免疫抗体水平的高低与疫苗的质量、保存管理、疫苗免疫剂量、免疫操作技术、营养状况、母源抗体水平、遗传因素等都有关。
在免疫时应严格把管好质量，对保存不当、过期和失效的疫苗坚决废弃。
在接种疫苗时确保每只鸡都能接种到一定剂量的疫苗及要严格遵守接种疫苗时所应遵守的原则，接种后还要注意观察鸡群的反应情况。
3.2 试验器材的选择和使用
微量反应板。
单道和多道微量移液器，吸头等都会影响HI试验的准确性。
微量反应板有U型和V型两种，V型板产生的凝集图像清晰，易于判定，因此一般使用V型板，最好是一次性96孔V型微量反应板。
单道、多道可调微量移液器在使用时需注意：一是吸取液体时一定要缓慢平稳地松开拇指，绝不允许突然松开，以防容液吸取过快，冲入移液器内腐蚀柱塞而
造成漏气；二是取样时只需按到第一档，停点排样时需按到第二档停才能彻底排出，以达到吸取的量准确。
吸头的型号和规格需一致，否则会导致加样量不一致。
3.3 缓冲液的配制
试验中使用的稀释液的pH对本试验有影响。
稀释液的pH在5.8以下时，红细胞易自凝；pH在7.8以上时，凝集的红细胞洗脱加快，而pH 7时红细胞沉淀最充分，图形清晰。
此外，缓冲液对其他酸碱物质具有一定的缓冲能力，有维持反应体系pH的作用。
使用pH 7.2的PBS 比使用生理盐水作稀释液效果好。
3.4 血清稀释时的混合程度
稀释血清时混合不均匀，会使结果出现差异。
用微量移液器吹打时，V型孔内和吸头内都易产生气泡，使得稀释不充分，而且稍不小心，孔内的液体就会溅出，影响检测结果的准确性。
所以稀释血清时应避免产生过多的气泡及液体溅出。
