土壤中芽孢杆菌的分离及初步鉴定

产淀粉酶芽孢杆菌的分离与初步鉴定吴月婷摘要：从土壤中分离得到一株产淀粉酶的芽孢杆菌X-1，对其进行形态学鉴定和生理生化特性分析，包括菌落形态、菌体形态、糖利用情况、生长pH范围、耐盐范围、明胶液化和酪素的水解等，初步鉴定为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）或地衣芽孢杆菌（Bacillus lentus）。

关键词：产淀粉酶；芽孢杆菌；分离；初步鉴定淀粉酶(Amylase)是指能分解淀粉糖苷键的一类酶，主要包括α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶和异淀粉酶等，在生物体的糖类代谢中起重要的作用。

其中α-淀粉酶（1,4-α-D-glucan glucanohydrolase）能水解淀粉大分子的α-1,4-糖苷键，生成糊精、麦芽寡糖、麦芽糖、葡萄糖等水解产物[1]。

α-淀粉酶在植物、动物和微生物中都广泛存在，常见的产淀粉酶微生物有芽孢杆菌、放线菌、黑曲霉、米曲霉、红曲霉和根霉等[2-7]。

芽孢杆菌属(Bacillus)是一类能产生芽孢的革兰氏阳性细菌，具有较强的抵抗不良环境的能力，如耐酸碱、耐高温的能力较强。

芽孢杆菌中较多菌种具有高淀粉酶、蛋白酶活性，近年来被广泛地用于动物饲料业，特别是作为水产饲料的添加剂。

例如在银鲫饲料中添加了0.1%的芽孢杆菌后，银鲫肠道和肝胰脏的淀粉酶活性提高了3.7%和129.5%[8]，能够有效帮助动物对饲料的消化吸收，同时作为一种良好的免疫激活剂，能增强动物的免疫力和抗病力[9]。

此外，利用芽孢杆菌产生α-淀粉酶，在食品生产中也有广泛应用。

笔者从土壤中分离得到产淀粉酶的芽孢杆菌，进行种属的初步鉴定，以期为芽孢杆菌在动物饲料业和食品生产中的发开应用提供理论依据。

1 材料与方法1.1 材料土壤材料采集于浙江师范大学取杏园食堂草坪土壤表层5~10厘米下的肥土。

1.2 培养基淀粉培养基：可溶性淀粉1%、蛋白胨l%、葡萄糖0.5%、Nacl 0.5%、牛肉膏0.5%、琼脂粉0.8%。

芽孢杆菌的筛选和鉴定的一般流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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微生物技术综合实验年级：13级生物工程（专升本）班级：学号：姓名：徐红贞指导老师：刘凤霞教授日期：二零一三十月五号目录1实验目的及原理 (1)1.1实验目的 (1)1.2实验原理 (1)2实验材料 (1)2.1实验仪器 (1)2.2实验试剂 (1)2.3培养基 (2)2.3.1 生长培养基 (2)2.3.2鉴定培养基 (2)2.3.3摇瓶培养基 (2)3试验方法 (2)3.1仪器的准备 (2)3.2培养基的配置 (2)3.3初步筛选及鉴定 (2)3.3.1采集土样 (3)3.3.2富集培养 (3)3.3.3稀释分离、纯化 (3)3.3.4初筛 (3)3.4复筛及鉴定 (4)3.4.1革兰染色 (4)3.5酶活力的测定 (4)3.5.1摇瓶培养 (4)3.5.2酶液稀释 (4)3.5.3酶液测定 (4)4结果分析 (5)4.1平板涂布分离 (5)4.2平板划线分离 (5)4.3初筛 (5)4.4复筛 (5)4.5摇瓶培养 (6)4.6酶活力测定 (6)5参考资料 (7)6附录 (8)微生物上游技术综合实验枯草芽孢杆菌的分离、纯化、筛选及鉴定1.实验目的及原理1.1实验目的（1）学习从土壤中分离、纯化枯草芽孢杆菌的原理和方法。

（2）学习掌握枯草芽孢杆菌的鉴定方法。

（3）掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力的测定的原理和方法。

（4）培养学生综合应用微生物实验方法的能力。

（5）培养学生自行设计实验流程、综合分析问题解决问题和判断实验结果的能力。

1.2实验原理选择合适与待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。

将土壤稀释液倒在不同类型的培养基平板上，在适宜的环境中培养几天，细菌或是其他的微生物便能在平板上生长繁殖，形成菌落。

将初次筛选得到的微生物接到淀粉培养基上培养，因为只有能够产生淀粉酶的细菌才能够利用培养基中的淀粉成分来完成自身的生命活动，才能够生存。

櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄［２０］ＷｅｉＹＢ，ＬｕＭＡ，ＹｕＱＹ，ｅｔａｌ．Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｔｈｅｄｙｎａｍｉｃｓｏｆｉｎｔｅｇｒａｔｅｄｒｉｃｅ－ｃｒａｗｆｉｓｈｆａｒｍｉｎｇｉｎＱｉａｎｊｉａｎｇｃｏｕｎｔｙ，ＣｈｉｎａｕｓｉｎｇＬａｎｄｓａｔｔｉｍｅｓｅｒｉｅｓｉｍａｇｅｓ［Ｊ］．ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｙｓｔｅｍｓ，２０２１，１９１：１０３１６７．［２１］曹凑贵，江　洋，汪金平，等．稻虾共作模式的“双刃性”及可持续发展策略［Ｊ］．中国生态农业学报，２０１７，２５（９）：１２４５－１２５３．［２２］ＡｖａｔＳ，ＥｍａｍＹ．Ｐｌａｎｔｇｒｏｗｔｈｒｅｇｕｌａｔｏｒ（ｅｔｈｅｐｈｏｎ）ａｌｔｅｒｓｍａｉｚｅ（ＺｅａｍａｙｓＬ．）ｇｒｏｗｔｈ，ｗａｔｅｒｕｓｅａｎｄｇｒａｉｎｙｉｅｌｄｕｎｄｅｒｗａｔｅｒｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｏｎｏｍｙ，２００８，７（１）：４１－４８．［２３］ＺｈａｎｇＸＢ，ＷａｎｇＹ，ＷａｎｇＸＷ，ｅｔａｌ．Ａｖｅｒｙ－ｌｏｎｇ－ｃｈａｉｎｆａｔｔｙａｃｉｄｓｙｎｔｈｅｓｉｓｇｅｎｅ，ＳＤ３８，ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓｐｌａｎｔｈｅｉｇｈｔｂｙａｃｔｉｖａｔｉｎｇｅｔｈｙｌｅｎｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎｒｉｃｅ［Ｊ］．ＴｈｅＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，２０２２，１１２（４）：１０８４－１０９７．［２４］赵　赫，陈受宜，张劲松．乙烯信号转导与植物非生物胁迫反应调控研究进展［Ｊ］．生物技术通报，２０１６，３２（１０）：１－１０．［２５］ＫａｓｈｉｗａｇｉＴ，ＩｓｈｉｍａｒｕＫ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｌｏｃｕｓｆｏｒｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆｌｏｄｇｉｎｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｒｉｃｅ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００４，１３４：６７６－６８３．［２６］ＺｈａｎｇＪ，ＬｉＧＨ，ＳｏｎｇＹＰ，ｅｔａｌ．Ｌｏｄｇｉｎｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｈｉｇｈ－ｙｉｅｌｄｉｎｇｒｉｃｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＦｉｅｌｄＣｒｏｐｓＲｅｓｅａｒｃｈ，２０１４，１６１：６４－７４．［２７］ＺｈａｏＹＴ，ＬｖＹＪ，ＺｈａｎｇＳＡ，ｅｔａｌ．Ｓｈｏｒｔｅｎｉｎｇｉｎｔｅｒｎｏｄｅｓｎｅａｒｅａｒ：ａｎａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｔｏｒａｉｓｅｍａｉｚｅｙｉｅｌｄ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｌａｎｔＧｒｏｗｔｈＲｅｇｕｌａｔｉｏｎ，２０２２，４１：６２８－６３８．董晓雪，彭国袁，常卓凡，等．西藏土壤芽孢杆菌的分离鉴定及生防促生菌筛选［Ｊ］．江苏农业科学，２０２３，５１（２３）：１１４－１２３．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０２３．２３．０１８西藏土壤芽孢杆菌的分离鉴定及生防促生菌筛选董晓雪１，彭国袁１，常卓凡１，于文娟２，旺　姆１（１．西藏农牧学院植物科学学院，西藏林芝８６００００；２．四川省农业科学院植物保护研究所，四川成都６１００００） 摘要：青稞是西藏人民的主要粮食作物，在种植生长过程中有多种病害对其产生危害，直接影响青稞的产量和质量。

枯草芽孢杆菌的分离与鉴定方法枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种广泛存在于自然环境中的细菌，具有重要的应用价值，被广泛应用于农业生产中的抗病、增产、改善土壤等方面。

因此，对枯草芽孢杆菌的分离与鉴定方法进行研究具有重要意义。

以下将介绍枯草芽孢杆菌的分离与鉴定方法。

一、枯草芽孢杆菌分离方法：1. 样品采集：根据研究需要，选择合适的样品，如土壤、植物组织、水等。

采集样品时要注意避免外源性污染，尽量避免使用过多的抗生素。

2. 样品处理：将采集到的样品进行处理，如土壤样品需要经过悬浮液稀释法进行样品制备，植物组织需要进行消毒处理等。

3. 分离培养基选择：根据枯草芽孢杆菌的生长特性，选择合适的分离培养基。

通常可以选用液体培养基（如TSA、LB培养基）或固体培养基（如TSA、PDA培养基）。

固体培养基还可以添加适当的抑菌剂来抑制其他细菌的生长。

4. 分离培养：将样品制备好后，均匀涂布在选择的培养基上，然后进行培养。

液体培养基需要在适当的温度和速度下进行摇床培养，固体培养基需要静置培养。

培养时间一般为24-48小时。

5. 子培养：在培养基上出现孤立的菌落后，用离心管吸取菌落，再划线接种到新的培养基上，进行连续传代培养。

一般选择形态特征明显、菌落形状规则的菌落进行子培养。

6. 纯化：通过连续传代培养，最终获得纯种的枯草芽孢杆菌。

纯化的细菌可以通过形态观察、生理生化特性检测等方法进行初步鉴定。

二、枯草芽孢杆菌鉴定方法：1. 形态观察：观察菌落形态、色素、菌体形态等。

枯草芽孢杆菌的菌落通常呈乳白色或灰白色，形状为圆形或不规则形。

2. 胞内酶活性检测：通过检测枯草芽孢杆菌的胞内酶活性来鉴定，如淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等。

常用方法为利用不同培养基的酶基质进行相关酶活性检测。

3. 生理生化特性检测：包括对枯草芽孢杆菌的耐温、耐酸碱性、氧化还原反应等生理生化特性的检测。

4. 分子生物学鉴定方法：利用分子生物学方法，如PCR、16S rRNA基因测序等来鉴定枯草芽孢杆菌。

芽孢杆菌的分离与鉴定实验器材：铲子（1）,盆（1）,电子天平（1），洗耳球(1)，接种勾和环（1）,1ml吸管（7）,玻璃涂棒（1）,平皿（12）,250ml带玻璃珠三角瓶（1）,双层纱布（1）,试管（7），标签纸（1）,恒温箱，显微镜（4）。

实验试剂：无菌水，1mol/L NaOH、1mol/L HCL、草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、复红液、5%孔雀绿、沙黄、乙醚、吲哚试剂、40%NaOH、肌酸牛肉蛋白胨培养基：牛肉膏1g，蛋白胨2g，Nacl 1g，水200ml，ph7.2，琼脂3.0-4.0g；生孢培养基：0.1%蛋白胨，0.1%葡萄糖，0.07%酵母粉，0.02%硫酸镁晶体（七水），0.02%硫酸铵，0.1%磷酸氢二钾（3水），1.5%琼脂；一、土壤中芽孢杆菌的筛选A.培养基配置步骤：（1）称量：按比例称取牛肉膏、蛋白胨、氯化钠，共置于烧杯中；（2）溶解：先加入适量无菌水，加热使其溶解，再补足水至总量；（3）调pH：用1mol/L NaOH或1mol/L HCL调PH至7.6；（4）过滤：用滤纸过滤；（5）融化琼脂：加入3.5克琼脂，继续加热至完全溶解，补足因加热蒸发失去的水分；（6）分装与包扎：摆斜面（7）灭菌：121℃，灭菌20minB.实验步骤：（一）采集土样: 每个采样点选取土壤较肥沃、有代表性的地块约0．2 cm2，五点法采集。

取5～10cm深土壤，每一个土样约500 g。

将土样放入无菌的纸袋中，并记录采集的时间、地点、植被类型，4℃保存备用。

（二）土壤悬液制备：称取10g土样，放入盛有99ml无菌水并带有玻璃珠的250ml三角瓶中，振荡摇晃20min，使土样与水充分混合，将细胞分散，两层纱布过滤，然后将锥形瓶置于90℃水浴锅，加热20min，制备成土壤悬液。

（三）土壤悬液稀释：用一支1ml的无菌吸管从锥形瓶吸取过滤的土壤悬液1ml加入盛有9ml 无菌水的大试管中，震荡均匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入另一只盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推制成10-1 、 10-2 、 10-3、 10-4、10-5、 10-6 不同的稀释度。

从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌实验方案报告实验方案报告：从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌一、实验目的：本实验旨在从土壤中分离出产淀粉酶的芽孢杆菌，为进一步研究淀粉酶的性质和应用提供材料基础。

二、实验原理：产淀粉酶的芽孢杆菌主要存在于土壤中，它们具有高效分解淀粉的能力。

本实验通过稀释土壤样品，制备土壤悬浮液，然后采用平板和液体培养基法进行分离纯化。

三、实验步骤：1.土壤样品的采集2.土壤样品制备将土壤样品采样袋中的土壤倒入无菌的研钵中，使用无菌铁锹将土壤表面的杂质去除，然后将土壤样品与等量无菌蒸馏水混合浸泡2小时。

使用无菌玻璃棒搅拌1分钟，然后过滤土壤悬浮液，得到土壤样品的0.1倍稀释液。

3.平板培养基分离将制备好的土壤样品0.1倍稀释液分别取0.1mL均匀涂布在含有淀粉的固体培养基平板上，用无菌的铁锹均匀摊开。

将培养皿倒立放置在培养箱中，以30℃恒温培养。

4.鉴定单菌菌落在培养平板上观察菌落生长情况，挑选形态不同的菌落，并进行分离培养。

将单个菌落挑选到含有淀粉的液体培养基中，用无菌胶头移液管进行吸取和移植。

5.验证淀粉酶活性将挑选分离得到的菌株分别接种在含淀粉的液体培养基中，并进行培养。

通过观察培养基颜色的变化、液体浑浊度的变化以及淀粉浓度的定量检测，判断菌株产淀粉酶的能力。

四、实验结果：根据实验步骤所述，从土壤中成功分离得到了产淀粉酶的芽孢杆菌。

通过观察培养基的颜色变化和液体浑浊度的变化，可以初步判断杆菌产淀粉酶的能力。

五、实验讨论与结论：通过本实验的步骤操作，成功分离出产淀粉酶的芽孢杆菌。

该实验为进一步研究淀粉酶的性质和应用提供了材料基础。

此外，实验中还可以对分离得到的菌株进行基于16SrRNA基因的鉴定，对其进行淀粉酶的基本特性、产酶条件和产酶规律等方面的研究。

这对于我们深入了解淀粉酶功能机制，以及在饲料、食品、生物工程等领域的应用具有重要意义。

六、实验心得：通过本次从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌的实验，我学会了土壤样品的制备和分离培养的方法，掌握了菌株的挑选和鉴定技巧，对淀粉酶产生的条件和酶活性的检测有了初步了解。

土壤中芽孢杆菌的分离及初步鉴定一、引言芽孢杆菌（Bacillus）是一类广泛存在于土壤中的细菌，具有较高的耐受性和适应能力。

研究土壤中芽孢杆菌的分离和鉴定，对于了解土壤微生物群落的多样性和功能具有重要意义。

本文旨在介绍土壤中芽孢杆菌的分离方法及初步鉴定步骤，以供参考。

二、芽孢杆菌的分离方法2.1 采样1.选择适当的采样地点，如农田、林地或草地等。

2.使用无菌铁铲或无菌采样袋等工具采集土壤样品，避免污染。

3.采集多个不同位置的土壤样品，以增加样品的代表性。

2.2 分离培养基的选择1.常用的分离芽孢杆菌的培养基有营养琼脂培养基、马铃薯蔗糖琼脂培养基等。

2.培养基中可以添加适当的抑菌剂，如青霉素或链霉素，以抑制其他细菌的生长。

2.3 分离培养1.取适量土壤样品加入到分离培养基中，均匀涂布于琼脂平板上。

2.使用无菌鉴别环或无菌棉签，在培养基表面划线，以分离不同的菌落。

3.将琼脂平板倒置放入恒温培养箱中，培养温度一般为30°C。

4.观察培养基上的菌落形态，并进行初步鉴定。

三、芽孢杆菌的初步鉴定步骤3.1 形态特征观察1.观察菌落的形状、颜色和质地等特征。

2.观察菌落的边缘形态，如光滑、凹凸不平或褶皱等。

3.观察菌落的直径和高度等参数。

3.2 石蜡切片染色1.从培养基上挑取一颗纯培养的菌落，用无菌的刮片将其转移到玻璃片上。

2.在玻璃片上加入一滴碘酒，静置片刻。

3.用无菌的刮片将菌落与碘酒混合均匀。

4.加入一滴无菌水，冲洗碘酒。

5.加入一滴甲苯，使细胞透明化。

6.加入一滴碱性溴甲酮，染色。

7.加入一滴甲苯，清洗溴甲酮。

8.加入一滴封片剂，加盖封片。

3.3 微观形态观察1.使用光学显微镜观察石蜡切片。

2.观察细胞形态、大小、排列方式等特征。

3.观察细胞内部结构，如芽孢、胞内颗粒等。

3.4 生理生化特性测试1.进行革兰氏染色，观察细胞壁结构。

2.进行氧需求实验，观察芽孢杆菌的氧耐受性。

3.进行酸碱度测试，观察芽孢杆菌的酸碱耐受性。

一、实验目的1. 了解芽孢杆菌的基本特性。

2. 掌握从土壤中筛选芽孢杆菌的方法。

3. 学习微生物的纯化与鉴定技术。

二、实验原理芽孢杆菌属于革兰氏阳性菌，具有较强的抗逆性和生存能力。

在土壤中，芽孢杆菌广泛分布，具有丰富的种类。

本实验通过选择含有淀粉的培养基，利用芽孢杆菌产生淀粉酶的特性，从土壤中筛选出芽孢杆菌，并对筛选出的菌株进行纯化和鉴定。

三、实验材料1. 实验仪器：培养皿、移液枪、玻璃棒、天平、酒精灯、高压灭菌锅、恒温培养箱等。

2. 实验试剂：淀粉、琼脂、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、葡萄糖、碘液等。

3. 实验土壤：采集于校园周边土壤。

四、实验步骤1. 土壤样品的处理：将采集的土壤样品进行充分混匀，称取1g土壤置于无菌烧杯中，加入10ml无菌水，用玻璃棒搅拌后静置30分钟，取上清液备用。

2. 稀释涂布：将土壤样品上清液进行10倍梯度稀释，取适量稀释液分别涂布于含淀粉的培养基平板上。

3. 培养与观察：将涂布好的平板倒置，置于37℃恒温培养箱中培养24小时，观察菌落生长情况。

4. 初步筛选：挑选生长良好的菌落进行纯化培养，采用平板划线法进行纯化。

5. 菌株鉴定：对纯化后的菌株进行形态观察、革兰氏染色、生化试验等鉴定。

6. 淀粉酶活性测定：采用淀粉酶活力测定试剂盒对筛选出的菌株进行淀粉酶活性测定。

五、实验结果与分析1. 土壤样品处理：经过充分混匀和搅拌，土壤样品上清液呈现浑浊状态，表明土壤中存在大量微生物。

2. 稀释涂布：涂布后的平板在培养箱中培养24小时后，观察到菌落生长良好，表明土壤中存在大量芽孢杆菌。

3. 初步筛选：通过平板划线法，成功纯化出多个菌落。

4. 菌株鉴定：经过形态观察、革兰氏染色、生化试验等鉴定，初步确定筛选出的菌株为芽孢杆菌。

5. 淀粉酶活性测定：对筛选出的菌株进行淀粉酶活性测定，结果显示其中一株菌株的淀粉酶活性较高。

六、实验结论1. 成功从土壤中筛选出芽孢杆菌。

2. 通过形态观察、革兰氏染色、生化试验等鉴定，初步确定筛选出的菌株为芽孢杆菌。

从土壤中分离和筛选产淀粉酶活性的芽孢杆菌及部分鉴定试验一、实验目的1、通过本实验的学习，学习掌握从环境中分离产淀粉酶菌株以及菌株初步鉴定的方法；2、巩固微生物分离纯化、细菌生理生化鉴定,对所学习过的微生物学实验方法进行综合技能训练；3、培养综合利用微生物学、生物化学等相关知识，自行设计、实施并判断实验结果的能力。

4、根据所学知识自主设计实验方案，在实验方案通过审核后组织实施，最终要求获得产淀粉酶的菌株。

二、实验原理1、土壤中含有各种微生物，其中产淀粉酶的芽孢杆菌含量在不同土壤中含量也不同，因此实验前进行预埋工作，能使土壤中产淀粉酶的细菌含量增加。

待实验前取样即可。

2、在只用淀粉充当碳源的选择培养基中，只有能产生淀粉酶利用淀粉的菌体能成为优势菌种。

在淀粉选择培养基中，产淀粉酶的菌种可以得到富集及分离。

3、芽孢是菌体生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，芽孢最主要的特点就是抗性强，对高温、紫外线、干燥、电离辐射和很多有毒的化学物质都有很强的抗性。

它帮助菌体度过不良环境，在适宜的条件下可以重新转变成为营养态细胞。

细菌富集一段时间后，生长环境不利，会产生芽孢，再在80-90℃温度下杀死菌体，可使芽孢得到富集。

4、芽孢杆菌属的共同特征是：革兰氏阳性；接触酶阳性；水解淀粉；VP试验阳性；不产生吲哚；苯甲氨酸不脱氨；分解酪素；不分解酪氨酸；不产生二羟丙酮；营养体的最高生长温度大约从25℃到75℃以上；最低生长温度大约5℃到45℃；生长最低pH值，从—8到2左右；耐盐范围从低于2%的NaCl到25%NaCl；营养明胶（22℃）7天内液化1厘米或1厘米以上。

枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌在糖发酵试验用阿拉伯糖，木糖和甘露糖代替葡萄糖可产酸；作为营养生长的最低限培养基是无维生素的，但含有葡萄糖、柠檬酸盐和一个氨态盐作为唯一的碳源和氮源。

5、在含有淀粉的鉴别培养基的平板上，具有产淀粉酶能力的芽孢杆菌，水解淀粉生成小分子糊精和葡萄糖，在淀粉平板上菌落周围出现水解圈，但肉眼不易分辨，滴加碘液，未水解的淀粉呈蓝色，水解圈无色。

综合性实验方案土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选及淀粉酶活力的测定一、摘要本实验通过从土壤中分离出能产淀粉酶的芽孢杆菌并对其进行鉴定、保存，试验中涉及菌株的分离纯化、菌株的形态学鉴定和生理生化鉴定，根据伯杰氏细菌手册鉴定其中的种属。

实验中通过80℃水浴20min预处理，杀死无芽孢菌体，筛选出芽孢杆菌；再用稀释涂布平板法对芽孢杆菌进行初步筛选；又通过分区划线对初筛选菌株进一步分离纯化；然后再用选择性淀粉培养基进行筛选，得到纯培养的产淀粉酶，以及产芽孢的杆菌，最后通过对产淀粉酶芽孢杆菌做相关的生理生化实验，将筛选出来的菌株进行鉴别，鉴别到了地衣芽孢杆菌和环状芽孢杆菌。

关键词：芽孢杆菌淀粉酶酶活测定二、实验目的要求1、了解微生物分离纯化的原理及微生物分离纯化常用的方法和技术；2、掌握从土壤中筛选产淀粉酶菌株的原理及方法；3、掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力测定的原理及方法；4、培养学生自行设计实验方案流程、综合分析解决问题及判断实验结果的能力；5、对所学习过的微生物实验方法井陉综合技能训练；6、从不同环境土壤样品中筛选出能产淀粉酶的芽孢杆菌，并分析比较各种淀粉酶菌株的产淀粉酶活力及总结各芽孢杆菌在土壤中的分布情况；三、实验原理土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。

因此，土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。

从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。

平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。

其基本原理是选择适合与待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。

微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由有一个细胞繁殖而成的集合体。

因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。

获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板法或平板划线等技术完成。

土壤中芽孢杆菌的分离及初步鉴定标题：深入探索土壤中芽孢杆菌的分离与初步鉴定一、引言土壤是生物多样性的宝库，其中芽孢杆菌作为一种广泛存在的微生物，具有重要的生态和应用价值。

芽孢杆菌具有强大的生存能力，能够在恶劣环境中形成芽孢，从而实现种群的繁衍和传播。

对土壤中芽孢杆菌的分离和初步鉴定，有助于我们更好地了解土壤微生物群落的结构和功能，为农业、环保等领域提供科学依据。

二、芽孢杆菌的分离1.土壤样品的采集与处理：为了获取丰富的芽孢杆菌资源，我们需要对不同类型的土壤进行采样。

采样后，将土壤样品进行适当的处理，如研磨、悬浮等，以便后续的分离实验。

2.分离培养：将处理后的土壤样品涂布在富含营养物质的培养基上，如牛肉膏蛋白胨培养基。

通过筛选具有特定性状的菌落，如颜色、形状等，初步筛选出芽孢杆菌。

3.纯化菌落：对初步筛选出的菌落进行纯化，以获得单一的芽孢杆菌菌株。

纯化方法通常采用平板划线法或液体摇瓶法。

三、芽孢杆菌的初步鉴定1.形态观察：通过光学显微镜观察菌落的形态特征，如菌落大小、形状、颜色等，初步判断菌株的种类。

2.革兰氏染色：对菌株进行革兰氏染色，观察细菌的形态和结构，进一步确认菌株的分类地位。

3.生化实验：进行一系列生化实验，如氧化酶试验、硝酸还原试验等，根据实验结果判断菌株的生理特性。

4.分子生物学鉴定：采用分子生物学方法，如16S rRNA基因测序，对菌株进行分子鉴定，确立其在物种水平上的分类地位。

四、结论与展望通过对土壤中芽孢杆菌的分离和初步鉴定，我们可以了解土壤微生物资源的多样性，为农业、环保等领域提供有益的信息。

未来研究可以进一步探讨芽孢杆菌的生物学功能，如固氮、溶磷、产生抗生素等，以期为我国土壤微生物资源的研究和利用奠定基础。

综上所述，深入探索土壤中芽孢杆菌的分离与初步鉴定，有助于我们更好地认识土壤微生物群落的结构和功能，为多个领域提供重要的理论支撑。

地衣芽孢杆菌的分离和鉴定作者：布帕提买木·麦麦提潘姣姣阿迪莱·卡哈曼伍麦尔·麦海提陈荟旭张秋林李莲瑞来源：《农业与技术》2020年第17期摘要：为了從土壤中分离得到地衣芽孢杆菌，开展后续研究，试验采集塔里木盆地的土壤进行细菌培养，采用台盼蓝平板方法，对分离培养得到的单菌落进行生物学特性研究、生理生化试验和16S rDNA鉴定。

根据《伯杰细菌鉴定手册》，初步鉴定为芽孢杆菌，提取DNA 进行PCR扩增并送测序。

结果表明，从塔里木盆地土壤中分离得到的细菌为地衣芽孢杆菌，说明该土壤中存在地衣芽孢杆菌，并为后续进一步研究及应用奠定基础。

关键词：土壤;分离和鉴定;16S rDNA;地衣芽孢杆菌中图分类号：S-3文献标识码：ADOI：10.19754/j.nyyjs.20200915005收稿日期：2020-08-17基金项目：大学生创新项目（项目编号：201810757029）作者简介：布帕提买木·麦麦提（1996-），女，硕士在读。

研究方向：动物性食品卫生与安全;通信作者李莲瑞（1968-），女，博士，教授。

研究方向：动物性食品卫生与安全。

地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）为革兰氏阳性菌，广泛分布于微生物混合培养物中[1]。

呈杆状，芽孢为椭圆形，孢囊稍膨大，为非致病性菌，细菌最适生长温度约为50℃，酶的最适生长温度为37℃。

地衣芽胞杆菌耐热、含酶量多、产酶量高的优良特性被广泛应用于工业生产中，主要用来生产淀粉酶[2]及蛋白酶[3]。

芽孢杆菌具有耐酸、耐盐、耐高温等特点，这使得其可以在条件不利的情况下形成芽孢，自我保护，并在环境适宜的条件下复活。

地衣芽孢杆菌在代谢过程中能产生多种酶和活性物质，具有益生保健[4]，降解农药[5]和净化水体[6]的作用。

为了解塔里木盆地土壤中是否存在地衣芽孢杆菌，本试验从塔里木盆地的1份土壤中筛选出1株镜检有芽孢的单菌落，对该菌株进行分离纯化，经过生理生化实验鉴定、16S rDNA基因测序，最终鉴定为地衣芽孢杆菌，且为后续开展地衣芽孢杆菌的应用研究奠定基础。

枯草芽孢杆菌的分离与鉴定枯草芽孢杆菌是一种常见的芽孢杆菌，广泛分布于土壤、水体等环境中。

该菌具有极强的抗逆性，可以在高温、低温、酸碱等各种恶劣环境下存活和繁殖。

此外，枯草芽孢杆菌还具有很高的代谢活性和生物学特性，被广泛应用于食品、医药、化工等领域。

枯草芽孢杆菌的分离和鉴定是研究其生物学特性和应用价值的重要步骤。

下面介绍一种常规的分离和鉴定方法。

1. 选择适宜的培养基和培养条件枯草芽孢杆菌是一种厌氧菌，通常需要选择富含营养物质和适宜的pH、温度等培养条件的培养基来进行分离和培养。

常用的培养基包括厌氧培养基、肉汤培养基、营养琼脂培养基等。

在选用培养基时，需根据研究对象和实验要求进行选择。

2. 样品处理和接种将样品收集到无菌容器中，并在避光下尽快送到实验室进行处理。

将样品加入适量的生理盐水或其他缓冲液中，进行适当的稀释后，从中取出一定量的液体或固体，接种到培养基上。

3. 培养和观察将接种好的培养基放置在适当的环境中进行培养，观察菌落的生长情况、形态特征等。

枯草芽孢杆菌通常在48小时内开始生长，生长后的菌落大小通常为1-3mm，形态呈不规则的肉眼可见点状或细菌丝状，表面为平滑或粗糙，颜色从白色到灰色等不等。

根据菌落的形态特征和大小、颜色等可初步判断是否为枯草芽孢杆菌。

4. 鉴定针对初步判断为枯草芽孢杆菌的菌株，需进行进一步的鉴定和鉴别。

常用的鉴定方法包括生理生化检测、生化反应检测、DNA序列分析等。

其中，生物化学检测可通过对菌落的形态、营养物质的利用情况、代谢产物等进行分析来进行鉴定。

在实验设计过程中，应该根据样品来源、实验需求来设计相应的检测方式，保证分离和鉴定的可靠性和准确性。

综上所述，枯草芽孢杆菌的分离与鉴定是菌类学研究和应用中的重要步骤。

只有凭借可靠的实验方法和技术流程，才能保证研究成果的准确性和可靠性。

⼴州⼤学微⽣物学期末实验报告《⼟壤中产淀粉酶芽胞杆菌的筛选》⼴州⼤学综合性实验报告实验课题：⼟壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选及淀粉酶活⼒的测定学院⽣命科学学院年级：14级专业班级：⽣物技术142班姓名陈⼦禧学号1414300004实验地点：⼴州⼤学⽣化楼指导教师熊⽂婷⽼师、陈琼华⽼师⼀．实验⽬的及任务（1）了解微⽣物分离纯化的原理及微⽣物分离纯化常⽤⽅法和技术。

（2）掌握从⼟壤中筛选产淀粉酶菌株的原理及⽅法。

【包括物理上的温度筛选和⽣化上的培养基筛选】（3）掌握微⽣物的摇瓶培养⽅法及淀粉酶活⼒测定的原理及⽅法。

【检测淀粉酶活性】（4）从不同环境⼟壤样品中筛选出能产淀粉酶的芽孢杆菌【包括取样、筛选及培养⽅法】（5）对所学习过的微⽣物实验⽅法进⾏综合技能训练【包括糖发酵试验、IMViC试验、淀粉⽔解试验等，且学习新的鉴定⽅法如柠檬酸盐利⽤试验、酪素、酪氨酸的⽔解试验等】（6）培养⾃⾏设计实验流程、综合分析解决问题及判断实验结果的能⼒。

（7）作为⼀个四⼈团队，且作为组长，掌握进度把握和根据个⼈长处和时间进⾏调配分⼯，培养团队合作能⼒，集思⼴益，将4个⼈的思路进⾏整合从⽽应⽤到实验中。

( 8 )实事求是，对失误和实验数据进⾏准确真实记载，对⾃⼰的错误进⾏分析。

⼆．摘要：本次实验的⽬的是为了从⼟壤样品中筛选出2株产淀粉酶芽胞杆菌随后进⾏纯化培养和菌种保藏，并进⾏17项⽣化鉴定实验得到参数后与伯杰⽒细菌鉴定⼿册对⽐后确认菌种的种名。

我们组在个不同环境中（河边和树下）分别采取2个⼟壤样品制取⼟壤悬液并进⾏挑取菌种并培养，最终筛选出2个菌种后经过4次划线纯化后各取⼀个菌种进⾏细菌鉴定试验，并进⾏了17项细菌⽣化鉴定试验后（包括接触酶试验、糖发酵试验、V.P 试验、MR试验、吲哚试验、耐盐试验、柠檬酸盐利⽤试验、明胶试验、硝酸盐还原试验、酪素⽔解试验、酪氨酸⽔解试验、运动性试验、温度试验、PH试验、卵黄反应试验、淀粉⽔解试验、0.001%溶菌酶试验）经过对伯杰⽒细菌鉴定⼿册⽐对后，初步鉴定出树下⼟壤所取菌种为凝结芽孢杆菌及河边⼟壤所取菌种为蜡状芽孢杆菌，其中河边的蜡状芽孢杆菌可以产淀粉酶但树下的芽孢杆菌并不能分解淀粉，这是我们组因为实验顺序编排不当造成的⼤失误，但最后仍得到1株产淀粉酶能⼒较强的蜡状芽孢杆菌。

从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌实验方案土壤中产淀粉酶芽胞杆菌的筛选及其淀粉酶活力的测定设计性实验方案一、概述：淀粉酶是淀粉降解酶。

它们广泛存在于微生物、植物和动物体中。

它们将淀粉及相关的聚合物分解为带有具体淀粉分解酶特征的产品。

淀粉酶广泛存在于动植物和微生物中,是最早用于工业生产并且迄今仍是用途最广、产量最大的酶制剂产品之一。

淀粉酶种类繁多,特点各异,可应用于造纸、印染、酿造、果汁和食品加工、医药、洗涤剂、工业副产品及废料的处理、青贮饲料及微生态制剂]等多种领域。

在酿造发酵工业如酒精生产、啤酒制造、发酵原料液化及糖化工艺过程中均有重要价值,如添加淀粉酶分布非常广泛，是人们经常研【】究的一种酶。

从纺织工业到废水处理，这些酶都有不同规模的应用1。

最常见的淀粉酶产生菌是芽孢杆菌。

其中，最常见的产淀粉酶芽孢杆菌是地衣芽【】【】枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌2，凝结孢子3。

由于芽孢杆菌是一种需氧或兼性厌氧的杆状细菌，能产生抗胁迫的胚乳，其中许多是腐生细菌，主要分布在土壤中【】植物表面和水体4。

因此，本实验从土壤中分离出产淀粉酶的芽孢杆菌。

二、实验目的要求1.了解生物分离纯化的原理和方法。

2.掌握从土壤中筛选产淀粉酶菌株的原理和方法3.掌握微生物摇瓶培养方法及淀粉酶活力测定的原理和方法4.培养学生的综合应用微生物实验方法的能力5.培养学生设计实验过程、综合分析和解决问题、判断实验结果的能力。

三、实验原理在自然界中，土壤是最适合微生物生长的环境。

土壤具有微生物生长、繁殖和生命活动所需的各种条件。

土壤中微生物的数量因土壤类型、季节、土层深度与层次等不同而异。

一般地说，在土壤表面，由于日光照射及干燥等因素的影响，微生物不易生存，离地表10cm～30cm的【】土层中菌数最多，随土层加深，菌的数量减少5。

从混合微生物群中仅获得一种或一株微生物的过程称为微生物分离和纯化。

平板分离法广泛应用于微生物的分离纯化。