放射生物学实习二细胞克隆（集落）形成法评估电离辐射细胞增殖性死亡一、目的要求目的：了解细胞克隆（集落）形成法检测细胞存活能力的方法，熟悉细胞存活分数（SF, survival fraction, in unit of %）与受照剂量（D, dose, in unit of Gy）之间剂量－效应的关系，熟悉与细胞存活剂量效应模型曲线结果处理有关的软件及使用方法，掌握细胞存活模型曲线的绘制及重要参数的计算。
要求：1，计算细胞接种效率(PE, planting efficiency)；2，应用SPSS 软件测算单击多靶模型下细胞存活曲线的n、k估计值，评价模型曲线的拟合优度；3，根据n、k估计值进一步计算D0、Dq和D37等参数，以及某一化学增敏剂或处理因素的增敏比(SER, sensitive enhancing ratio)；4，利用EXCEL软件绘制细胞存活剂量效应的模型曲线。
二、实验原理放射生物学中细胞受电离辐射照射后，受照细胞既可以呈现即刻死亡，也可能延迟一段时间后才表现出死亡，即增殖环节出现的细胞死亡。
这是因为有些受照细胞形态上仍然保持细胞结构的完整，同时细胞还具有制造蛋白质、合成DNA，甚至再经历一次或数次细胞的有丝分裂，但最终还是发生了细胞的变性死亡,这种并不立即表现出死亡的部分就称为细胞增殖性死亡。
细胞增殖性死亡是放射生物学研究中最具特色的一类细胞死亡。
细胞增殖性死亡与细胞凋亡是两个不同的概念，有关细胞增殖性死亡的分子生物学机制目前尚未完全清楚。
一般而言, 细胞增殖性死亡是不能经MTT实验、LDH漏出实验、或台盼蓝拒染法等加以检测。
放射生物学上，人们通常采用细胞克隆（集落）形成试验来检测经电离辐射照射后，细胞在克隆性细胞增殖能力上的变化。
一个存活的细胞克隆（集落）代表的是电离辐射细胞经一段时间（大约10天）培养后，由独立分散的单个健在细胞直接分裂、增殖，尔后形成具一定细胞数量的群体（通常含50个以上细胞）。
细胞生长曲线实验细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是培养细胞生物学特性的基本参数之一。
一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。
在细胞达到饱和密度后，停止生长，进入平顶期，然后退化衰亡。
为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期，斜率较大的指数生长期，呈平台状的平顶期及退化衰亡4个部分。
以存活细胞数(万/mL)对培养时间(h或d)作图，即得生长曲线。
实验方法原理细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，是判定细胞活力的重要指标。
一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。
为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期，斜率较大的指数生长期，呈平台状的平顶期及退化衰亡4个部细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，是判定细胞活力的重要指标。
一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。
为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期，斜率较大的指数生长期，呈平台状的平顶期及退化衰亡4个部分。
细胞生长曲线的测定一般可利用细胞计数法进行。
实验材料细胞试剂、试剂盒D-Hanks液牛血清 RPMI1640 双抗 0.08%胰酶仪器、耗材净化工作台离心机恒温水浴箱冰箱倒置相差显微镜培养箱吸管培养瓶吸头枪头 24培养板胶塞微量加样枪红血球计数板实验步骤1. 取生长状态良好的细胞，采用一般传代方法进行消化，制成细胞悬液。
分。
细胞生长曲线的测定一般可利用细胞计数法进行。
实验材料细胞试剂、试剂盒D-Hanks液牛血清 RPMI1640 双抗 0.08%胰酶仪器、耗材净化工作台离心机恒温水浴箱冰箱倒置相差显微镜培养箱吸管培养瓶吸头枪头 24培养板胶塞微量加样枪红血球计数板实验材料细胞试剂、试剂盒D-Hanks液牛血清 RPMI1640 双抗 0.08%胰酶仪器、耗材净化工作台离心机恒温水浴箱冰箱倒置相差显微镜培养箱吸管培养瓶吸头枪头 24培养板胶塞微量加样枪红血球计数板细胞试剂、试剂盒D-Hanks液牛血清 RPMI1640 双抗 0.08%胰酶仪器、耗材净化工作台离心机恒温水浴箱冰箱倒置相差显微镜培养箱吸管培养瓶吸头枪头 24培养板胶塞微量加样枪红血球计数板实验步骤1. 取生长状态良好的细胞，采用一般传代方法进行消化，制成细胞悬液。
