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骨髓间充质干细胞研究与应用概况于雷;高俊玲【摘要】骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal cells,BMSCs)是当下热点研究对象之一。
1867年德国病理学家Cohnheim教授[1]在研究创口愈合过程中发现骨髓中存在一种非造血系统的多潜能细胞,但研究因为条件原因未能深入。
后来有研究者[2]在20世纪60年代开展一系列开创性研究,发现从骨髓中分离得到长梭状、成纤维细胞样的细胞群,在塑料培养皿中呈集落样贴壁生长;1987年,又发现这种骨髓单核细胞可在一定的条件下分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞。
培养增殖二十代后仍保有其多向分化的潜能。
于是把这种多能细胞称为间充质干细胞(mesenchyma stem cell,MSC)。
【期刊名称】《华北理工大学学报：医学版》【年(卷),期】2018(020)002【总页数】5页(P164-168)【关键词】骨髓间充质干细胞;肺纤维化;缺血性脑卒中【作者】于雷;高俊玲【作者单位】[1]华北理工大学基础医学院,河北唐山063000;[1]华北理工大学基础医学院,河北唐山063000;【正文语种】中文【中图分类】R329.2骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal cells，BMSCs)是当下热点研究对象之一。
1867年德国病理学家Cohnheim教授[1]在研究创口愈合过程中发现骨髓中存在一种非造血系统的多潜能细胞，但研究因为条件原因未能深入。
后来有研究者[2]在20世纪60年代开展一系列开创性研究，发现从骨髓中分离得到长梭状、成纤维细胞样的细胞群，在塑料培养皿中呈集落样贴壁生长；1987年，又发现这种骨髓单核细胞可在一定的条件下分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞。
培养增殖二十代后仍保有其多向分化的潜能。
于是把这种多能细胞称为间充质干细胞(mesenchyma stem cell，MSC)。
原代骨髓间充质干细胞分离及提取方法骨髓间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells, MSCs）是一种具有多向分化潜能的成体干细胞，广泛应用于组织工程、再生医学等领域。
原代骨髓间充质干细胞的分离和提取是进行相关研究的基础。
本文将详细介绍原代骨髓间充质干细胞的分离及提取方法。
一、实验材料1.骨髓样本：取自健康志愿者或实验动物（如大鼠、小鼠等）。
2.PBS缓冲液：磷酸盐缓冲液，用于细胞洗涤和分离。
3.胎牛血清：用于细胞培养。
4.抗生素：如青霉素和链霉素，用于细胞培养液中，防止细菌感染。
5.细胞分离液：如Ficoll分离液、Percoll分离液等。
6.细胞培养瓶、离心管、移液器等实验室常用器材。
二、分离方法1.骨髓样本采集：在无菌条件下，从志愿者或实验动物体内抽取骨髓，置于含有抗凝剂的离心管中。
2.骨髓细胞分离：将骨髓样本用PBS缓冲液稀释，然后缓慢加入细胞分离液，进行密度梯度离心。
离心后，收集界面层的细胞，即含有骨髓间充质干细胞的一层。
3.细胞洗涤：用PBS缓冲液洗涤细胞，去除残留的分离液和红细胞。
4.细胞计数：用细胞计数板对洗涤后的细胞进行计数，调整细胞浓度为合适的值。
5.细胞接种：将细胞接种于含有胎牛血清和抗生素的细胞培养液中，置于37℃、5% CO2的培养箱中培养。
三、提取方法1.原代培养：将分离得到的骨髓间充质干细胞进行原代培养，待细胞生长至80%-90%汇合时，进行传代。
2.传代培养：将原代细胞用胰蛋白酶消化，然后按照1:2或1:3的比例进行传代。
传代后的细胞继续培养至所需细胞量。
3.细胞冻存：将提取得到的骨髓间充质干细胞进行冻存，以备后续实验使用。
4.细胞复苏：将冻存的细胞在37℃水浴中快速融化，然后用细胞培养液重悬，继续培养。
四、注意事项1.在实验过程中，严格遵循无菌操作原则，防止细胞污染。
2.骨髓样本的采集和处理应在抗凝条件下进行，以保持细胞活性。
3.选择合适的细胞分离液和离心条件，以提高骨髓间充质干细胞的分离纯度。
大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定干细胞研究一直是生物医学领域的前沿热点，其中骨髓间充质干细胞（BMSCs）因其具有多向分化潜能和低免疫原性而备受。
在众多研究中，大鼠BMSCs的体外培养和鉴定方法为其在科研和临床领域的应用提供了基础。
本文将就大鼠BMSCs的培养、鉴定方法进行详细介绍，并结合实验数据进行阐述。
BMSCs是一种成体干细胞，具有自我更新和多向分化潜能，可以分化为多种细胞类型，如成骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞等。
因其来源广泛，免疫原性低，大鼠BMSCs已成为再生医学、免疫调节等领域的重要研究对象。
近年来，随着生物技术的不断发展，BMSCs的培养和鉴定方法也得到了不断优化和改进。
BMSCs的培养需要无菌环境，常用的培养基为DMEM、F12等，添加适量的生长因子和抗生素以维持细胞的生长和存活。
细胞的鉴定主要包括形态学观察、表面标志物检测和多向分化潜能的证实。
其中，表面标志物如CDCD90等可用来区分BMSCs和其他细胞，多向分化潜能的证实包括成骨、成脂和成肌等方向的诱导分化。
本实验采用大鼠BMSCs的常规体外培养方法。
具体步骤如下：采集大鼠骨髓：在无菌环境下，用注射器抽取大鼠股骨和胫骨骨髓，加入肝素抗凝。
细胞分离：将采集的骨髓用密度梯度离心法分离出单个核细胞。
细胞培养：将单个核细胞接种于培养瓶中，用含10%血清、1%抗生素和1%谷氨酰胺的培养基培养。
细胞鉴定：经过约7-10天的培养，细胞达到80%-90%融合时，进行细胞鉴定。
通过形态学观察、表面标志物检测和多向分化潜能的证实，对BMSCs进行鉴定。
通过观察细胞的形态和生长情况，发现培养的BMSCs呈典型的长梭形，且细胞间连接紧密（图1）。
经表面标志物检测，BMSCs表达CD29和CD90等间充质干细胞表面标志物（图2）。
在多向分化潜能的证实中，我们发现BMSCs经成骨、成脂和成肌诱导后，可分别形成矿化结节、脂肪滴和肌纤维（图3）。
这些结果说明所培养的细胞为BMSCs。
普通贴壁法分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞（BMMSCs）及其生物特性研究作者：吴春朋张潜方宁刘金伟刘祖林章涛来源：《中国保健营养·中旬刊》2013年第03期【摘要】目的：建立从大鼠骨髓分离、培养间充质干细胞的标化流程，并探讨BMMSCs 生物学特性。
方法：无菌条件下剪取2～3周龄SD大鼠两侧完整股骨，采用D-PBS冲洗骨髓腔，含骨髓细胞的洗脱液经离心后收集细胞沉淀，用含10%FBS的LG-DMEM，于37ºC、5% CO2、饱和湿度环境下进行BMMSCs原代培养，每2 d换液1次，同时洗脱未贴壁的血细胞；当BMMSCs生长汇合度达60%～70%时，按2～5×105/ml细胞密度进行传代培养。
采用流式细胞术对第3代BMMSCs进行CD45、CD29和CD90表型分子检查。
结果：分离纯化的BMMSCs具有典型MSCs特征，高表达CD90和CD29，不表达CD45；结论：表明普通贴壁法成功分离培养了具有间充质干细胞表型特征的大鼠BMMSCs【关键词】间充质干细胞；大鼠【中图分类号】R587.1 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）03-0044-02引言研究表明，骨髓含有造血干细胞（hemopoietic stem cells， HSCs）、内皮祖细胞（endothelial progenitor cells， EPCs）和间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）等多种成体干细胞。
EPCs主要分化为血管内皮细胞，有助于血管疾病组织的血管新生；而HSCs和MSCs均具有多向分化潜力的特点，研究表明，骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells， BMMSCs）可分化为成骨、软骨、心肌、肌腱、上皮、内皮等几乎所有三胚层类型细胞的能力[1-3]，基于这个特性使BMMSCs成为了中药诱导、临床移植及一些分子生物学实验的种子细胞源。
大鼠骨髓基质干细胞的体外培养及成骨诱导分化【摘要】目的:研究大鼠骨髓基质干细胞体外培养的方法及成骨能力。
方法: 通过密度梯度离心法分离成年大鼠骨髓基质干细胞,检测细胞表面标志、定向成骨分化和细胞矿化作用。
结果: 原代培养大鼠骨髓基质干细胞通过3~5代传代,细胞形态趋于一致,诱导条件下出现矿化结节。
结论:大鼠骨髓基质干细胞体外培养可模拟成骨分化过程,可作为骨组织工程研究的细胞学模型。
【关键词】骨髓基质干细胞;诱导分化;成骨细胞【中图分类号】r414.1【文献标识码】b【文章编号】1005-0515(2010)009-0010-01骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells, bmscs)是一类具有分化潜能的成体干细胞,在特定条件下可以分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肝细胞、神经细胞等多种细胞,被认为骨组织工程中的最佳种子细胞。
本实验通过贴壁培养法和密度梯度离心法分离成年大鼠骨髓基质干细胞,定向成骨分化,并检测细胞表面标志、碱性磷酸酶活性和细胞矿化作用。
材料和方法1 材料1.1 实验动物。
成年wistar 大鼠,雌雄不限,体重150~180 g ,由浙江大学华家池动物实验中心提供。
1.2 实验试剂。
胎牛血清,胰蛋白酶(hyclone),(杭州四季清生物技术有限公司),b一甘油磷酸纳(sigma,usa),地塞米松(sigma,usa),维生素c(sigma,usa),小鼠抗大鼠oc单克隆抗体(r-d,usa),兔抗大鼠cd4(ba0532)、cd44(ba0321)、cd54(ba0541)、cd105(ba1725)、fibronectin(ba1772)、collagen ⅰ(ba0325)、egfr1(b0485)亲和纯化抗体(武汉博士德公司)2 方法2.1 bmscs的分离和培养:成年wistar大鼠麻醉后处死,无菌条件下取股骨.用含10%fbs的高糖dmem培养液冲洗骨髓腔.制成骨髓单细胞悬液。
骨髓间充质干细胞形态骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是一类具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞。
它们存在于人体骨髓、脂肪组织、胎盘、脐带血和其他组织中。
MSCs在维持组织稳态、修复损伤和参与免疫调节等方面起着重要作用。
本文将从形态学角度探讨骨髓间充质干细胞的特点和特征。
骨髓间充质干细胞的形态特征主要体现在细胞形状、细胞质和细胞核结构等方面。
就细胞形状而言，MSCs通常呈长条状或星形状。
它们的细胞质富含丰富的内质网和线粒体，同时还含有一些囊泡和小颗粒。
细胞核通常呈椭圆形或卵圆形，核质比细胞质稍大，核内可见明显的核仁。
此外，骨髓间充质干细胞还具有一定的异质性，不同来源的MSCs在形态上可能存在一定差异。
除了形态特征，骨髓间充质干细胞还具有一系列特殊的表面标记。
常用的MSCs标记物包括CD73、CD90、CD105等阳性标记物，同时不表达CD34、CD45等造血细胞特异性标记物。
这些表面标记物的存在使得我们能够准确鉴定和纯化MSCs。
骨髓间充质干细胞的形态特征与其多向分化潜能密切相关。
MSCs具有分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞等多种细胞类型的能力。
在细胞分化过程中，MSCs的形态也会发生相应变化。
例如，当MSCs分化为成骨细胞时，细胞会逐渐变得扁平，细胞质中的线粒体和内质网会增多，同时核内的核仁数量也会增加。
骨髓间充质干细胞的形态也受到环境因素的影响。
一些研究表明，细胞培养基的成分和机械力刺激等因素都能够改变MSCs的形态和功能。
例如，细胞培养基中的生长因子和细胞外基质成分可以影响MSCs的形态和增殖能力。
此外，机械力刺激也能够影响MSCs的形态和分化潜能。
因此，在进行MSCs的培养和应用时，我们需要考虑这些因素对细胞形态的影响。
总结起来，骨髓间充质干细胞具有特殊的形态特征，包括细胞形状、细胞质和细胞核结构等方面的特点。
这些形态特征与MSCs的多向分化潜能密切相关，同时也受到环境因素的影响。
