磺胺血浆半衰期测定

由标准管的光密度值（Y），浓度（X）求比值K，K＝X／Y； 再根据X＝K Y，由Y1、Y2、Y3、Y4求X1、X2、X3、X4。以四个 lgX值为纵坐标，取血时间为横坐标作时量曲线，在曲线上 任取消除阶段两点的坐标代入下式计算t1/2:
t1/2= 0.301 (logX1-logX2)/(t1-t2)
磺胺类药物能与某些试剂发生反应生成 有色物质，通过比色可以对其血药浓度进行 定量分析。磺胺在酸性环境下使其苯环上的 氨基离子化生成铵类化合物，与亚硝酸钠发 生重氮化反应生成重氮盐，该化合物在525nm 波长下比色，其光密度与磺胺浓度成正比。
【药品】
10％磺胺噻唑（ST） 0.1％磺胺噻唑（ST）标准液 7.5%三氯醋酸 0.5％亚硝酸钠 0.5％麝香草酚（用20%NaOH配制） 0.3％肝素 20％乌拉坦 蒸馏水
【实验动物】
家兔，体重3kg，雌雄不限
【实验方法】
实验步骤 （1）打开分光光度计，预热；取试管，标号 后分别加入10％三氯醋酸2.7ml。 （2）动物麻醉：20％乌拉坦，5ml/kg 耳缘静 脉缓慢推注。 （3）颈动脉插管，插管前注射肝素：1ml/kg ，耳缘静脉推注。插管后取血0.4ml，对照管 （1号）和标准管（2号）各0.2ml，摇均静置 。
Байду номын сангаас
（4）耳缘静脉缓慢推注10％ST，3ml/kg。 （5）给药后1、3、5、15、30、45、60、90分钟各取 血0.2ml加入含有7.5%三氯醋酸2.7ml的试管中摇匀。 标准管中加入0.1%ST标准液0.1ml，其余各管加蒸馏 水0.1ml，摇匀。 （6）显色： 离心5分钟（1500-3000转/分），准确吸取上清 液1.5ml于另一试管中，分别加入0.5％亚硝酸钠 0.5ml，摇匀，再加入0.5％麝香草酚1ml后为橙色。 （7）测定：在分光光度计525nm波长以1号管为对照 测定其余各管的光密度值。

1.掌握药物血药浓度的测定方法 2. 通过用药后血药浓度的变化，研究药物从 血浆中消除的速率；学会制作药物时量曲线

3.计算药物半衰期
实验原理

磺胺嘧啶钠可与某些试剂产生显色反应，通 过比色可以对其血浓度进行定量分析。

通过观察某一药物血药浓度的变化，研究药 物从血浆中消除的速率，可指导临床设计和
一级
一级
常规坐标图
T
半对数坐标图
T
药动学重要参数 的基本概念、意义和应用
①消除速率常数K ②血浆半衰期 t1/2
③表现分布容积 Vd
④清除率Cl ⑤初始浓度C。(ug· m1-1)＝lg-lA ⑥药-时曲线下面积：S (ug· min· ml-1)=Co/ K
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广州医学院药理教研室宜全
半衰期 ( plasma half-life, t1/2)
分光度计测量

已用空白管调零，不用再制作空白管 和调零 同学们测定各采血点的药物吸光度值 不要触碰比色皿的光面

注意事项

注射磺胺嘧啶钠溶液时，动物会有挣扎，注意固定兔 头，注射要一次成功，否则影响结果。 保护耳缘V：麻药，肝素化，注射磺胺嘧啶钠 每次采血前须放血1ml 放血0.5-1ml于EP管中，加样枪吸取0.1ml于试管中 加样准确，勿相互污染 血样与混合液搅拌后应立即进行测量工作 一般可采血3次后再分别混合、离心
【数据处理】
1.计算各采血点的血药浓度：
SD-Na标准曲线已制作，回归方程如下 Y=9.872X+0.0208 (Y为OD值，X为浓度） SD-Na血浓度:C≈10× OD测定管/10 (mg/ml)
2.作图：药-时曲线。
3.计算药动学参数：参照129-130页或用BL-420 的数据处理。

目的是让学生通过测定工具药磺胺嘧啶钠 血浆半衰期 ， 了解药 物在动物体 内随时间变化的代谢规律 ， 掌握药 代动力学 参数半 衰期 的测定和计算方 法【 ｌ 】 ， 从 而加深对半衰期概 念 和临床 意义
的理解 。在实验教学过程 中， 发现影响学生 半衰期测 定实验成
败 的因素主要有实验动物 、 实验操作技能 、 实验器 材等 ， 本文 即
卫 生职 业教 育
Ｖｏ ｌ ＿ ３ ｌ ２ ０ １ ３ Ｎ ｏ ． ２ ２
影响磺胺嘧啶钠血 浆 半衰 期 测定 实验 成 功 的 因素及 对 策
房 志鑫 ， 刘瑞 丽 。 ， 郑建 芳 ， 武 辉
（ １ ． 新乡医学 院三全学院 ， 河南 新乡 ４ ５ ３ ０ ０ ３ ； ２ ． 新乡医学院 ， 河南 新 乡 ４ ５ ３ ０ ０ ３ ）
ｂ ｉ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｌ ａ ｐ ｐ ｎ ａ ｃ ｈ ｔ ｏ ｌ ｅ ｉ ｏ ｍ ｙ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｓ ｉ ｓ ｐ ｅ ｖ ｔ ｏ ｒ ｅ ａ ｌ ｉ ｓ ｄ ｉ ｓ ｓ ｅ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｅ ［ Ｊ ］ ． Ａ ｍ Ｊ Ｏ ｂ ｓ ｔ ｅ ｔ Ｇ ｙ ｎ ｅ ｃ ｏ ｌ ， １ ９ ８ １ ， １ ３ ９ （ ２ ） ： １ ６ ４ — １ ７ ２ ．
进行研究 ， 以充分 利用 、 开发大 豆资源 ， 以期为人 民健康 服务 。
笔者 旨在 研究探讨 植物性雌激 素对子宫肌瘤模 型大 鼠具 有加
【 ２ ｌ 秦保锋 ， 张婷婷． 子宫肌瘤发病相关因素研究进展 【 Ｊ １ ． 现代诊断与 治
疗。 ２ ０ ０ ５ （ ４ ） ：２ ３ ０ — ２ ３ ３ ．
表 １ 植物性雌澉素对子宫肌瘤模型大鼠血清中 和Ｐ 含量的影响（ ｓ ｌ

动脉取血约 1ml，离心取 上清
混匀
准确移液 100μl
1500转/分 离心5min
7.5%三氯醋 酸2ml
A
B
1.加0.5％亚 硝酸钠0.5ml
准确移 上清液 1.5ml
2.加0.5%麝香草 酚1ml
525nm测光密 度
C 偶氮反应 橙红色
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1912
6. 然后准确吸取100μl加入相应的各B管, 各管以 1500转/分离心5min，分别取离心后的上清液 1.5ml，加0.5%亚硝酸钠溶液0.5 ml，摇匀，再加 0.5%麝香草酚1ml，可见橙红色反应。 以7.5%三氯醋酸2ml、 0.5％亚硝酸钠0.5ml、 0.5%麝香草酚1ml的混合液作空白对照，用722型 分光光度计于525nm波长下进行比色，测定各时间 点的光密度，在标准曲线上查得磺胺钠浓度。
3.取家兔，称重，以25%氨基甲酸乙酯溶液(乌拉坦)1g/kg(4ml/kg) 耳缘静脉注射麻醉，麻醉后将兔背位固定于手术台上，正中切开 颈部皮肤，分离一侧颈总动脉，结扎其远心端，并在近心端夹上 动脉夹，以阻断血流，再将放血导管向心脏方向插入颈总动脉内， 用线打活结固定。
4. 耳缘静脉注入3%磺胺嘧啶钠4ml/kg，记录注完时间（准确到分 钟）。
1912
操作步骤
⑴MODE 2 屏幕显示LR，进入线性回归计算状态； ⑵INV AC消除储存器内的全部数据； ⑶XoDo自变量输入； DATA因变量数据输入； ⑷INV A（截距），INV B（斜率） INV r（相关系数）； ⑸INV X得期望值。
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1912 2.计算机的操作步骤（以Excel2002为例）
1912

t1/2的大小可反映药物消除快慢。 t1/2是给药间隔时间计算的重要参考依
据。按一级动力学消除的药物：一次用 药后经5个t1/2体内药物基本被清除。恒 时恒量连续给药，经5个t1/2血药浓度达 到稳态血药浓度。 病人肝肾功能降低时，t1/2增大。
药物-时间曲线
C
C-t data
log C
Semi-log plot
一级
一级
常规坐标图
T
半对数坐标图
T
药动学重要参数 的基本概念、意义和应用
①消除速率常数K ②血浆半衰期 t1/2
③表现分布容积 Vd
④清除率Cl ⑤初始浓度C。(ug· m1-1)＝lg-lA ⑥药-时曲线下面积：S (ug· min· ml-1)=Co/ K
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广州医学院药理教研室宜全
半衰期 ( plasma half-life, t1/2)



以开始采血时间作为血样本时间，若未能按时采血， 则以实际采血时间参加计算。
药物时-量曲线图（是以时间T为横坐 标，药物浓度C或logC为纵坐标绘制的图形）
C
一次静脉注射 log C C-t data Semi-log plot
t
t
药物消除动力学与时-量曲线
C logC
零级
零级

1.掌握药物血药浓度的测定方法 2. 通过用药后血药浓度的变化，研究药物从 血浆中消除的速率；学会制作药物时量曲线

3.计算药物半衰期
实验原理

磺胺嘧啶钠可与某些试剂产生显色反应，通 过比色可以对其血浓度进行定量分析。

通过观察某一药物血药浓度的变化，研究药 物从血浆中消除的速率，可指导临床设计和

药物血浆半衰期的测定实验报告【实验目的】掌握药物半衰期的测定方法【实验原理】药物消除半衰期是血浆药物浓度下降一半所需要的时间。

其长短可反映体内药物消除速度，根据半衰期可确定给药间隔时间。

按一级动力学消除的药物，其血浆半衰期是一个固定的值，不受药物初始浓度和给药剂量的影响，仅取决于k e值（一级动力学的消除速率常数）的大小。

t1/2=0.693k e磺胺嘧啶（SD）的测定原理：磺胺类药物为氨基苯类化合物，在酸性溶液中可与亚硝酸钠起重氮反应生成重氮盐，此盐在碱性溶液中与麝香草酚溶液起偶联反应形成橙红色偶氮化合物，将该化合物在525nm波长下比色，其光密度与磺胺类药物的浓度成正比（朗伯比尔定律）。

【实验对象】家兔。

体重1.5~2.5kg。

【实验试剂】10%磺胺嘧啶钠，肝素，7.5%三氯醋酸，0.5%麝香草酚，0.5%亚硝酸钠，蒸馏水。

【实验器材】离心机，分光光度计，离心管，试管，注射器，移液管，吸球，烧杯，玻璃棒。

【实验方法】(1)取药前血取家兔1只称重，0.5%肝素生理盐水润湿注射器和抗凝瓶，由耳缘静脉取药前血2ml（空白对照）于抗凝瓶内。

(2)给药由一侧耳缘静脉注射10%磺胺嘧啶钠溶液3ml/kg（药物浓度为200mg/10ml）准确记录给药结束时间。

(3)取药后血分别于给药后5min和35min，取另一侧耳缘静脉血各2ml分别置于抗凝瓶内（每次取血后，洗净注射器并用肝素生理盐水湿润备用）。

准确记录实际采血时间。

(4)测定血液样本SD浓度3次血液样本各准确吸取0.2ml，分别加至编号的含7.5%三氯醋酸2.8ml离心管中，混匀。

3000r/min，离心10min。

准确吸取离心管各管上清液 1.5ml，分别至相应编号的试管中。

各管分别加入0.5%亚硝酸钠溶液0.5ml，充分混匀；再加入0.5%麝香草酚溶液1ml，混匀。

以给药前的空白管作参比，使用分光光度计在525nm波长处测定各管光密度值，按下列公式计算血中SD浓度。

磺胺药动力学实验报告磺胺药动力学实验报告实验目的：1.掌握测定血浆中磺胺药物的浓度的方法；2.测定给予一剂量的磺胺药物后的药物动力学参数；3.分析磺胺药物在体内的药代动力学过程。

实验原理：磺胺药物是一种具有广谱抗菌活性的药物。

在体内主要经尿排出，其代谢有两条途径：一为胺基代谢途径，即N4-乙酰化，以形成N4乙酰磺胺，然后在经过进一步代谢变为无活性代谢产物，从尿液中排出。

另一为硝基代谢途径，即对N1位的磺胺甲基上亚硝基团的代谢，以形成N1-羧基吗啉磺胺，然后也经过进一步代谢变为无活性代谢产物从尿液中排出。

实验步骤：1.制备血浆标准曲线：a)血浆添加一定浓度的磺胺药物标准品制备不同浓度的标准溶液；b)每个标准溶液加入内标，加蒸馏水稀释至一定浓度，制备出20组标准样品；c)将样品分批注射至液相色谱-质谱联用仪进行测定，测得峰面积。

2.测定药物浓度：a)测定血浆标本前，禁食水24小时，并加工为草酸钠盐血浆用于测定；b)取不同时间内的标本各3ml，使用琼脂糖/蛋白酶样将血浆分离；c)离心后将血浆转移至色谱管，并加内标；d)用稀释液稀释5倍，离心后离心上清取2 μL注射至液相色谱-质谱联用仪进行测定，测得峰面积。

实验结果：1.通过测定不同浓度的标准样品，得到药物的浓度和峰面积的线性关系，绘制出标准曲线。

药物浓度与峰面积的线性方程为y=1.5543x+3783.7，R^2=0.9979。

2.测定不同时间点的血浆样本后，绘制出磺胺药物的血浆浓度时间曲线。

药物在体内的消除半衰期为3.87h，分布容积为120L，清除率为32L/h。

实验结论：1.通过测定血浆标准曲线，可以计算出给定时间点血浆中磺胺药物的浓度；2.药物的消除半衰期反映了药物在体内代谢消除的速度；3.药物的分布容积和清除率反映了药物在体内分布和消除的能力。

实验不足：1.实验样本较少，不能代表整个人群的药代动力学参数；2.实验中并未考虑药物与其他药物的相互作用对动力学参数的影响。

• 2，将血样加入含有三氯醋酸的试管中 后，应立即摇匀，否则会出现血凝块。 3，实验前试管和取血用微量离心管一 定要标记好 。
合作愉快
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磺胺嘧啶（SD）的测定原理：磺胺类 药物为氨基苯类化合物，在酸性溶液 中可与亚硝酸钠起重氮反应生成重氮 盐。此盐在碱性溶液中与麝香草酚起 偶联反应形成橙红色偶氮化合物，该 化合物在525nm波长下比色，其光密 度与磺胺药的浓度成正比。
实验器材和药品
离心机，分光光度计，离心管，试管， 注射器，移液管，磺胺嘧啶钠（SDNa），肝素，7.5%三氯醋酸，0.5%麝 香草酚，20%氢氧化钠，0.5%亚硝酸钠
4, 准确吸取各管上清液1.5mL分别加至相应 编号的试管中，标准管吸取空白对照管上 清液1.4mL,加0.1mL标准SD溶液(1mg/mL), 然后各试管依次加入0.5%亚硝酸钠0.5mL, 充分摇匀；再加0.5%麝香草酚1mL并摇匀。
5，用分光光度计测定各管在525nm处 的光密度，按下列公式计算血中SD浓 度。
实验步骤
1，取家兔一只，称重。 2，由耳缘静脉取血2~3mL（空白对照）， 然后立即从耳缘静脉注射20%磺胺嘧啶 钠溶液300g/kg（1.5mL/kg)。于注射后 5min、35min时各取血2~3mL至已编号的预先盛有7.5%三氯醋酸 2.8mL的离心管中，混匀。然后置离心机内， 离心10min,3000r/min.
血中SD的浓度=标准管SD的浓度/标准 观光密度*测定管光密度
半衰期的计算
• 一级动力学消除药物半衰期 计算公式： t1/2=0.693/ Ke
Ke为一级动力学的消除速率常 数
Ke=2.303*斜率k k=（lg C1-lg C2)/T
注意事项

药物血浆半衰期的测定
[实验目的] 以磺胺嘧啶（SD）钠为例，学习测定药物血浆半衰 期（t1/2）的基本方法。 [原理] 磺胺＋亚硝酸钠 酸性 重氮化反应 重氮 碱性 盐 ＋ 麝香草酚 偶联反应 橙红色的偶 氮化合物。根据其颜色深浅，应用光电比色法可推算 出磺胺的含量。
[实验方法] 1.取试管3支，按1、2、3标记，各管加入7.5%三氯 醋酸溶液5.8ml。按下表操作： 2.取家兔一只，称重后暴露耳缘静脉，用手指弹动或 轻轻揉擦兔耳或用60W灯泡照射，使血管充分扩张。然 后用少量0.5%肝素生理盐水湿润的1ml注射器从耳缘静 脉取血0.2ml，保留针头…
试管号（ml)
药品与试剂
1
2
3
1
2
3
三氯醋酸 5.8 正常血 0.2 给药1.5ml/kg 药后10分血 药后40分血 离心后上清液 亚硝酸钠 麝香草酚
5.8
5.8
0.2 0.2 4.5 0.5 1.0 4.5 0.5 1.0 4.5 0.长测定其光密度(OD)。 用1管调零。将测得两管OD值，在标准曲线查得血药 浓度（mg％），代入以下公式计算T1/2
0.301 T1/2＝ ×t (lgD1-lgD2)
注： lgD1＝10分钟血药浓度（mg）
lgD2=40分钟血药浓度（mg） t=30
药物的协同作用 [实验目的] 观察氯丙嗪与戊巴比妥钠的协同作用。 [方法] 取18～22g小白鼠三只，称重、编号，IP 甲鼠：0.03% 氯丙嗪0.1ml/10g和0.35%戊巴 比妥钠0.1ml/10g 乙鼠：0.35%戊巴比妥钠0.1ml/10g 丙鼠：0.03%氯丙嗪0.1ml/10g 观察记录各鼠的入睡时间及睡眠持续时间（即 翻正反射消失和恢复之间的时间）。

2/25/2016
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图表标题 200
磺胺药浓度(ug/ml)
y = 582x - 53 150 100 50 0 -50 0 0.1 0.2 吸光度 0.3 0.4 3%磺胺药标准曲线 线性 (3%磺胺药标 准曲线)
根据吸光度,线性方程 y=582x-53, 计算浓度,求对数值. (Excel – 常用函数 – log10 – 计算对数值. ) 将给药时间t 与已求得的磺胺药血浆浓度对数值做直线回归, 根据一级消除动力学公式: lgCt=lgCo+ (-K/2.303)t 回归方程的斜率(-K/2.303), Excel – 常用函数 – slope斜率 – 计算得(-K/2.303)= -19.6, 计算K, t1/2=0.693/K, Vd=D/Co, Cl=K*Vd; 已知 t , lgCt, 计算Co, 从而计算Vd, Cl
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三、方法与步骤 1.取试管5只，依次用A1、A2、A3……A5标记，各加入7.5%三氯醋酸2ml 备用。 2.取试管5只，依次用B1，B2，B3……B5标记，各加入草酸钾结晶几粒 (抗凝)。 3.取家兔，称重， 取血方法1： 以乌拉坦(4ml/kg)耳缘静脉注射麻醉，麻醉后将兔背位固定于 手术台上，正中切开颈部皮肤，分离一侧颈总动脉，结扎其远心 端，并在近心端夹上动脉夹，以阻断血流，再将放血导管向心脏 方向插入颈总动脉内，用线打活结固定。 取血方法2：耳缘静脉近心端开始向远心端方向抽血0.5～1ml 4. 耳缘静脉注入3%磺胺嘧啶钠4ml/kg，记录注完时间（准确到分 钟）。 5.给药前、给药后5min、10min、20min、30min，松开动脉夹，放血 约1ml，分别置于B1 、 B2、B3、B4、B5管，迅速摇匀抗凝，记录取 血标本的准确时间。 注意在取血前先要放掉动脉插管内的残血。

磺胺血药浓度测定
药物浓度－时间曲线图(C-T curve)，也称时量曲线 是以时间为横坐标，药物浓度(或logC)为纵坐标绘制 的图形
血浆药物浓度 (mg/ml)
静脉注射 一次给药 口服
时 间(min)
实验目的

1.掌握药物血药浓度的测定方法 2. 通过用药后血药浓度的变化，研究药物从 血浆中消除的速率；学会制作药物时量曲线



以开始采血时间作为血样本时间，若未能按时采血， 则以实际采血时间参加计算。
药物时-量曲线图（是以时间T为横坐 标，药物浓度C或logC为纵坐标绘制的图形）
C
一次静脉注射 log C C-t data Semi-log plot
t
t
药物消除动力学与时-量曲线
C logC
零级
零级
1.计算各采血点的血药浓度：
SD-Na标准曲线已制作，回归方程如下 Y=9.872X+0.0208 (Y为OD值，X为浓度） SD-Na血浓度:C≈10× OD测定管/10 (mg/ml)
2.作图：药-时曲线。
3.计算药动学参数：参照129-130页或用BL-420 的数据处理。
软件计算（一级动力学药动学参数）
上清1.5 ml
0.5%亚硝酸钠0.5ml
充分摇匀
0.5%麝香草酚1ml
充分摇匀，比色
全血磺胺嘧啶钠浓度测定——各管加液
给药前 5min 10min 15min 30min 50min 蒸馏水 全血 1.9 0.1 1.9 0.1 1.9 0.1 1.9 0.1 1.9 0.1 1.9 0.1
20%三氯醋酸
耳缘i.v. 20％ SD-Na 2ml/kg。
给药后的第5、10、15、30、50分钟分别从动 脉采0.3ml。（先弃1ml 血）

Ke logCt logC 0 t 2.303
Ke=2.303(logC1-logC2)/t2-t1
2.药物血浆半衰期（half life，T1/2）为：
0.693 T1 / 2 Ke
二、实 验 原 理
3.呈色原理：
NaOH 磺胺药 NaNO2 三氯醋酸 重氮盐 麝香草酚碱 偶氮染料（橙红色）
2.计算Ke 及T1/2
Ke logCt logC 0 t 2.303
Ke=2.303(logC1-logC2)/t2-t1
0.693 T1 / 2 Ke
CNaSD=C标/OD标×（OD给药后-OD给药前）
七、注 意 事 项
1.麻醉时一定把握好速度。 2.每次取血之前要先将残血放掉。 3.各盛血的试管及动脉插管要用肝素浸润，动脉插管前要 先注射肝素(全身肝素化)。 4.将血样加到三氯醋酸试管中应边加边摇匀，否则易出现 血凝块。 5.配制比色管的时候各个试管要做好标记。 6.加亚硝酸钠和麝香草酚的顺序不要混乱。
五、实 验 步 骤
（一）动物基本操作
（二）测定液和标准液的配制
（三）比色管的配制
（四）比色与计算
（一）动物基本操作(血液标本的采集）
1.麻醉：抓取家兔1只，称重，用20％乌拉坦 溶液5mL/kg行耳缘静脉麻醉，然后固定于手 术台上。
(一)动物基本操作(血液标本的采集）
2.游离颈总动脉：手术区 剪毛，沿正中线剪开颈 部皮肤，钝性分离皮下 组织及肌肉，找出一侧 颈总动脉并分离约2～ 3cm左右，在其下穿线 两根线备用。
（一）动物基本操作
3.全身肝素化：耳缘 静脉注射肝素2ml。
4.动脉插管：远心端结扎， 近心端用动脉夹夹闭， 在两线中间的动脉上剪 一“V”形切口，插入肝 素浸润过的动脉插管， 用线结扎并做二次固定 以备取血用。

药物血浆半衰期的测定实验报告【实验目的】掌握药物半衰期的测定方法【实验原理】药物消除半衰期就是血浆药物浓度下降一半所需要的时间。

其长短可反映体内药物消除速度,根据半衰期可确定给药间隔时间。

按一级动力学消除的药物,其血浆半衰期就是一个固定的值,不受药物初始浓度与给药剂量的影响,仅取决于值(一级动力学的消除速率常数)的大小。

=磺胺嘧啶(SＤ)的测定原理:磺胺类药物为氨基苯类化合物,在酸性溶液中可与亚硝酸钠起重氮反应生成重氮盐,此盐在碱性溶液中与麝香草酚溶液起偶联反应形成橙红色偶氮化合物,将该化合物在525nm波长下比色,其光密度与磺胺类药物的浓度成正比(朗伯比尔定律)。

【实验对象】家兔。

体重1.5～2、5ｋg。

【实验试剂】１0%磺胺嘧啶钠,肝素,7、5%三氯醋酸,０、5%麝香草酚,0、5%亚硝酸钠,蒸馏水。

【实验器材】离心机,分光光度计,离心管,试管,注射器,移液管,吸球,烧杯,玻璃棒。

【实验方法】(1)取药前血取家兔１只称重,０.5%肝素生理盐水润湿注射器与抗凝瓶,由耳缘静脉取药前血2ml(空白对照)于抗凝瓶内。

(2)给药由一侧耳缘静脉注射１0%磺胺嘧啶钠溶液3ml/ｋg(药物浓度为20０mg／１0ml)准确记录给药结束时间。

(3)取药后血分别于给药后5min与３５ｍin,取另一侧耳缘静脉血各２ml分别置于抗凝瓶内(每次取血后,洗净注射器并用肝素生理盐水湿润备用)。

准确记录实际采血时间。

(4)测定血液样本SD浓度3次血液样本各准确吸取０、２ｍl,分别加至编号的含7、5%三氯醋酸2、8ml离心管中,混匀。

300０ｒ/mｉn,离心10m ｉn。

准确吸取离心管各管上清液1.5ml,分别至相应编号的试管中。

各管分别加入0、5%亚硝酸钠溶液0、5ml,充分混匀;再加入0、５%麝香草酚溶液1ml,混匀。

以给药前的空白管作参比,使用分光光度计在5２5nm波长处测定各管光密度值,按下列公式计算血中SD浓度。

血中ＳD浓度()＝(5)半衰期的计算=代入上述公式:公式中T为给药后两次取血的间隔时间,、分别为给药后两次取血的血浆药物浓度。

药物血浆浓度的测定及半衰期的计算姓名：学号：班级：一、实验目的1.以磺胺嘧啶钠为例学习测定药物血浆浓度、药物血浆半衰期(t1/2) 及表观分布容积(Vd)等药动学参数的基本方法。

2.理解常用药动学参数的临床意义。

二、实验材料1.实验动物：家兔1只2.器材：试管24支，移液吸管(10ml 1支，1ml 2支，2ml 7支)，移液器1支，吸头若干,试管夹，试管架，离心机，722型分光光度计，手术剪，眼科剪，止血钳，动脉夹，眼科镊,缝线，药棉，纱布，捆扎绳，注射器(10ml 1支，5ml 1支)。

3.药品：5%磺胶略啶钠溶液，7.5%三氯醋酸溶液，0.5%亚硝酸钠溶液，0.5%麝香草酚钠溶液(溶于20%氢氧化钠浓度内)，草酸钾结晶，20%乌拉坦容液，肝索注射液，生理盐水。

三、实验方法和步骤1.取试管6支，依次用A1、A2、A3……A6标记，各加入7.5%三氯醋酸2ml备用。

2.取试管6支，依次用B1、B2、B3……B6标记,各加人草酸钾结晶几粒。

3.取家兔1只，称重，以20% 乌拉坦溶液1g/kg (5 ml/kg) 耳缘静脉注射麻醉，背位固定于手术台上，正中切开颈部皮肤，分离一侧颈总动脉，结扎其远心端，并在近心端夹上动脉夹，以阻断血流，再将放血导管向心脏方向插人颈总动脉内，用线打活结固定。

4.松开动脉夹，放血约1ml，置于B 管，迅速摇匀抗凝，然后耳缘静脉注人5% 磺胺嘧啶钠150 mg/kg (3 ml/kg )，记录注完时间( 准确到分钟)。

5.给药后5、10、20、30、40 min,用同样方法放血约1ml,分别置于B2、B3、B4、B5、B6管，迅速摇匀，记录取血标本的准确时间，然后B1~ B6管以1500转/min 离心5 min，准确吸取上层血浆50μl加人相应的各A 管，各管以1500转1分离心5 min,分别取离心后的上清液1.5 ml,加0.5% 亚硝酸钠溶液0.5 ml,摇勾，再加0.5% 麝香草酚1ml，可见橙红色反应.以给药前血样为空白对照，用722 型分光光度计于525m 波长处进行比色，测定各取血时间点的光密度，用标准曲线方程计算磺胺嘧啶钠浓度。

药物半衰期的测定目的：学习测定药物血浓度半衰期的基本方法原理：半衰期为血药浓度下降一半所需要的时间。

大多数药物按一级动力学规律消除，符合恒比规律即㏒C/C0= —kt/2.303公式中的C0、C的含义分别为t=0 的血药浓度及经过时间 t 后的血药浓度，因为C0很难准确测定，又因药物消除的全过程皆符合公式（1），因此，从t1时刻，血药浓度为C1，经过t 时间后的t2时刻，血药浓度C2，符合公式（1），即得：㏒C2/C1= — kt/2.303 (2)又根据半衰期的定义，从（2）式又可得：㏒1/2= —kt1/2 /2.303 (3)(3)÷(2)式得：—㏒2 t1/2=㏒C2/C1t该公式中为时刻血药浓度，为时刻血药浓度，为从时刻至时刻的时间间隔，所采用的单位即的单位，如等。

因此在相同的条件下，只要测出时刻血浆中磺胺嘧啶的光密度，即可求得之值（一）磺胺嘧啶的测定方法现以磺胺嘧啶为例，学习药浓半衰期的测定方法。

血浆中游离磺胺的测定，是根据显色原理设计的。

游离磺胺在酸性溶液中可与亚硝酸纳（）起重氮反应，产生重氮化合物，后者在碱性溶液中再与显色剂麝香草酚反应，生成橙红色偶氮染料。

反应过程如下：重氮化反应：显色反应：重氮+麝香草酚偶氮偶氮颜料的深浅与磺胺的浓度有关，可用光电比色法测出其光密度。

通过与标准品光密度的比较及运算，可推算出磺胺药的血药浓度。

计算公式如下：器材：兔手术台，手术器械，72-2型分光光度计，离心机及试管，吸管，滴管药品：4%磺胺嘧啶钠，5%三氯醋酸，0.5%，0.5%麝香草酚（用20%新鲜配制），肝素动物：家兔方法：1、取家兔一只，由耳缘静脉注射4%磺胺嘧啶钠2.5，记录给药时间。

2、静脉注射肝素750抗凝，于给药磺胺嘧啶钠后30分钟及1小时，从对侧耳缘静脉各抽血5（分别称为侧1、侧2）分别置于烧杯中，抽血前用肝素湿润针管抗凝。

3、用1注射器抽取上述血液各，立即置于预先盛有5%三氯醋酸（提供酸性条件并可使血液中蛋白质沉淀）5的试管中，充分摇匀，5后经1500离心5，然后取上清液1.5标记待用。

将数据输入Excel中，调用其自带的函数，根据对话框 要求操作即可完成运算。 INTERCEPT（known-y’s，known-x’s）求线性回归拟合 线方程的截距。 CORREL（arrayl，array2）返回两组数值的相关系数。 SLOPE（Known-y’s known- x’s）返回经过给定数据点 的线性回归拟合线方程的斜率。 FORECAST（X，Known-y’s known- x’s）通过一线性回 归拟合线返回一个预测值。
5. 给药后5min、10min、20min、30min ，松开动脉夹，放血约 1ml，分别置于A1 、 A2、A3、A4管，迅速摇匀抗凝，离心取上 清。记录取血标本的准确时间。
注意在取血前先要放掉动脉插管内的残血。
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颈总动脉放血
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A1 5min;A2 10min; A3 20min; A4 30min
1912
操作步骤
⑴MODE 2 屏幕显示LR，进入线性回归计算状态； ⑵INV AC消除储存器内的全部数据； ⑶XoDo自变量输入； DATA因变量数据输入； ⑷INV A（截距），INV B（斜率） INV r（相关系数）； ⑸INV X得期望值。
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1912 2.计算机的操作步骤（以Excel2002为例）
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给药后不同时间点的磺胺钠浓度
管号
1
2
3
4
5
给药时间
光密度值
磺胺钠浓度
磺胺钠对数浓度
9/17计算
根据一级动力学消除公式
C将t 给药C时0间et与kt已求lg得Ct的磺lg胺C血0 浆2浓.3度k03对数t 值lg Ct作
直线回归，即可得回归方程的斜率（- K /2.303）和 截距（lgCo）

磺胺嘧啶钠半衰期测定实验报告
以lgC对t做直线回归,得⽅程式lgC=a+bt,请计算a,b的值？
a=-0.5121 b=-0.0117
相关系数r值？
r=0.9371
消除速率常数Ke=?
Ke=0.0269
药物消除半衰期=?
t?=25.7621
实验讨论 1.磺胺类药物为对氨基苯磺酰胺类化合物，在酸性溶液中，可与亚硝酸钠起重氮反应，产⽣重氮盐。

在碱性溶液中，重氮盐可与酚类化合物（麝⾹
草酚）起偶氮反应，形成橙红⾊的偶氮化合物，实验过程中试管中液体呈
橙红⾊。

2.以药物浓度的对数值为纵坐标，时间为横坐标，制作药-时曲线，求出
lgC对t的回归⽅程，得到a、b的值，a=-0.5121、b=-0.0117，消除速
率常数Ke=-2.303b=0.0269，进⽽求出半衰期t(1/2)=0.693/K=25.7621，
C0=0.3075，AUC=11.4327。

实验结论此次试验通过测定磺胺嘧啶钠(SD-NA)单次快速静脉注射后在家兔体内不同时间的⾎药浓度，由此测得磺胺嘧啶钠的半衰期及各种动⼒学参数，
绘制药-时曲线，根据药-时曲线的变化，从⽽对药物剂量进⾏设计和优化，
保证临床上⽤药的安全性。