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农业生物技术学报ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２００８，１６（２）：２２１￣２２４＊基金项目：国家自然科学基金－广东省联合基金（Ｎｏ．Ｕ０６３１００５）及广东温氏食品集团博士后科研基金项目资助。
＊＊通讯作者。
Ａｕｔｈｏｒｆｏｒｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ．讲师，主要从事动物分子生物学研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：＜ｃｈｅｎｈｙ５０００＠１２６．ｃｏｍ＞，＜ｃｈｅｎｈｙ５０００＠１６３．ｃｏｍ＞．收稿日期：２００７－０６－０６接受日期：２００７－０６－１６・研究论文・猪ＩＦＮ－γ基因多态及功能分析＊陈慧勇１，２＊＊，吴珍芳１，２，毕英佐１，２，赵书红３，曾海玉２，周秀２（１．华南农业大学动物科技系，广州５１０６４０；２．广东温氏食品集团，新兴县５２７４００；３．华中农业大学动物科技学院，武汉４３００７０）摘要：γ－干扰素（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｇａｍｍａ，ＩＦＮ－γ）在机体免疫应答调节及抵抗病毒感染方面具有重要的作用。
为了探测猪ＩＦＮ－γ基因作为猪抗病育种中一种分子标记的可能性，首先对其进行了不同猪品种间的基因组测序，以揭示核苷酸水平的变化，结果在ＩＦＮ－γ基因中发现了３个单核苷酸多态（ＳＮＰ）。
其中２个ＳＮＰ为中国地方猪种二花脸所特有。
另一ＳＮＰ则在杜洛克、长白、皮特兰、圣特西及大白中具有广泛的多态分布，群体杂合度为０．４８２０。
此多态位点经ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测发现３种基因型：ＩＩ基因型（Ａ碱基插入纯合型）、ＤＤ型（Ａ碱基缺失纯合型）和ＤＩ杂合型。
该标记基因型与表型间的卡方独立性检验尚没有发现ＩＦＮ－γ基因与猪健康状况的现场记录直接相关，但多重比较分析却发现该基因与猪的繁殖性能有关。
关键词：猪；ＩＦＮ－γ；单核苷酸多态（ＳＮＰ）；关联分析中图分类号：Ｓ１８８文献标识码：Ａ文章编号：１００６－１３０４（２００８）０２－０２２１－０４ＳｅａｒｃｈｉｎｇａｎｄＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚｉｎｇＳｉｎｇｌｅＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓｉｎＰｏｒｃｉｎｅＩＦＮ－γＧｅｎｅＣＨＥＮＨｕｉ－ｙｏｎｇ１，２＊＊，ＷＵＺｈｅｎ－ｆａｎｇ１，２，ＢＩＹｉｎｇ－ｚｕｏ１，２，ＺＨＡＯＳｈｕ－ｈｏｎｇ３，ＺＥＮＧＨａｉ－ｙｕ２，ＺＨＯＵＸｉｕ２（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６４０，Ｃｈｉｎａ；２．ＧｕａｎｇｄｏｎｇＷｅｎ’ｓＧｒｏｕｐ，Ｘｉｎｘｉｎｇ５２７４００，Ｃｈｉｎａ；３．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＨｕａｚｈｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ４３００７０，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｇａｍｍａ（ＩＦＮ－γ）ｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｉｎｎａｔｅｈｏｓｔｄｅｆｅｎｓｅａｇａｉｎｓｔｖｉｒａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．ＩｎｏｒｄｅｒｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｖａｌｕｅｏｆｔｈｅＩＦＮ－γｇｅｎｅｔｏｂｅａｇｅｎｅｔｉｃｍａｒｋｅｒｏｒｎｏｔｉｎｐｏｒｃｉｎｅｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ｇｅｎｏｍｉｃｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｗａｓｅｍｐｌｏｙｅｄｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂｒｅｅｄｓ．Ａｎｄｔｈｒｅｅｓｉｎｇｌｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ（ＳＮＰｓ）ｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．ＴｗｏｏｆｔｈｅｍｗｅｒｅｆｏｕｎｄｏｎｌｙｉｎＥｒｈｕａｌｉａｎ，ａｎｄｔｈｅｏｔｈｅｒｏｎｅｗａｓｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｗｉｔｈｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙｂｅｉｎｇ０．４８２０ｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂｒｅｅｄｓ，ｗｈｉｃｈａｒｅＤｕｒｏｃ，Ｌａｎｄｒａｃｅ，ＰｉｅｔｒａｉｎａｎｄＳｙｎｔｈｅｔｈｉｃ．ＴｈｒｅｅｇｅｎｏｔｙｐｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＰＣＲ－ＳＳＣＰｆｏｒｔｈｅＳＮＰ，ｗｈｉｃｈｗｅｒｅＩＩ（ｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅｆｏｒｉｎｓｅｒｔｉｏｎｏｆＡ），ＤＤ（ｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅｆｏｒｄｅｌｅｔｉｏｎｏｆＡ）ａｎｄｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｔｅＤＩ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｗａｓｎｏｔｄｅｔｅｃｔｅｄｂｅｔｗｅｅｎｍａｒｋｅｒｓａｎｄｈｅａｌｔｈｌｅｖｅｌｓｒｅｃｏｒｄｅｄｉｎｈｅｒｄｂｙｃｈｉ－ｓｑｕａｒｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｔｅｓｔ，ｂｕｔｂｅｔｗｅｅｎｍａｋｅｒｓａｎｄｐｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｔｒａｉｔｓｂｙＤｕｎｃａｎ＇ｓｍｕｌｔｉｐｌｅｒａｎｇｅｔｅｓｔ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｉｇ；ＩＦＮ－γ；ｓｉｎｇｌｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ（ＳＮＰ）；ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ近几年猪疾病基因表达方面的研究积累了越来越多的可能候选基因（Ｎｉｅｗｏｌｄｅｔａｌ．，２００５；Ｐｅｔｒｙｅｔａｌ．，２００５；Ｓｕｒａｄｈａｔｅｔａｌ．，２００３；Ｚｈａｏｅｔａｌ．，２００６），其中干扰素－γ基因（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｇａｍｍａ，ＩＦＮ－γ）基因即是一例。
全基因组关联分析影响猪GLU和GSP的染色体位点-畜牧兽医论文-农学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——引言【研究意义】血液中的血糖（glucose，GLU）循环全身，对人体具有重要的生理功能，是反映机体生理状况的一个重要指标。
空腹血糖浓度（fasting serumglucose, FSG）是糖尿病临床诊断的常规指标，也是糖尿病诊断后10 年内因心血管疾病的预警指标。
糖尿病病人的空腹血糖浓度持续偏高，波动较小，是一种营养代谢性疾病。
有研究表明，空腹血糖浓度是可遗传的，遗传力为0.62 0.08（P＜0.01），属于高遗传力性状。
糖基化血清蛋白（glycosylatedserum proteins，GSP）是一个比血糖更稳定、更能反映机体23 周内平均血糖水平的指标。
猪作为模式动物，与人类具有相似的代谢功能、心血管系统、成比例的器官大小等，已经成为研究人类肥胖、糖尿病及并发症等疾病的最佳模式动物。
研究影响猪GLU和GSP 的染色体位点及候选基因定位，不仅对猪代谢生理功能的遗传解析具有重要意义，而且对人类相关疾病的临床研究具有参考价值。
【前人研究进展】近年来，已定位了多个影响GLU 和GSP 的QTL。
Cai 等在对西班牙裔儿童研究中发现，影响空腹血糖浓度的QTL 定位在13 号染色体的8599 cM处；An 等在人19 号染色体的88cM 处定位到了显着影响空腹血糖浓度的QTL，在7 号染色体的163cM处定位到了染色体可显着影响空腹血糖浓度的QTL；Kobayashi 等在由SMSMXA-5 构建的F2小鼠中，在8 号染色体上定位到了影响空腹血糖浓度的QTL。
人和鼠的血糖性状QTL 定位结果具有很高的一致性。
在对猪的研究中，Yoo 等利用长白韩国本地猪种F2群体，在SSC1 和SSC8 上定位到染色体可显着影响GLU 的QTL；Dsauts 等利用梅山猪和大白猪构建的F2群体在SSC1、3、5、8 四条染色体上定位到了影响GLU 浓度的QTL；陈蓉蓉等在白色杜洛克二花脸资源家系SSC14 的68 cM 处定位到了1 个5%基因组显着影响GLU 的QTL。
染⾊体核型分析姓名程开源系年级2010级临床医学⼋年制同组者孙琳、孙晶鑫、窦云德科⽬分⼦细胞⽣物学题⽬染⾊体核型分析学号201000232012【实验⽬的】1.了解⼩⽩⿏睾丸细胞染⾊体的形态及数⽬。
2.初步掌握⼩⽩⿏睾丸细胞染⾊体的玻⽚标本制作⽅法。
3.观察动物细胞染⾊体的数⽬和形态。
【实验原理】染⾊体的制备在原则上可以从所有发⽣有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。
最常⽤的途径是从⾻髓细胞、⾎淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染⾊体。
⼩型动物的染⾊体制⽚最好最有效的材料就是⾻髓组织。
⾻髓细胞中，有丝分裂指数相当⾼，因此可以直接得到中期细胞⽽不必象淋巴细胞或其它组织那样要经过体外培养；对⼤型动物通常采⽤对⾻骼、脊或胸⾻穿刺术吸取红⾻髓，⼩型动物多采⽤剥离术取股⾻以获得⾻髓细胞。
制作染⾊体标本的先决条件1. 细胞具有旺盛的分裂能⼒选择活跃的组织：胸腺，⾻髓，睾丸，⼩肠施加药物使细胞分裂：PHA2. 设法得到⼤量的中期细胞：秋⽔仙素(1) PHA：粗细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变为淋巴母细胞(2) 秋⽔仙素：破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使⼤量细胞停⽌在分裂中期。
(3) 低渗作⽤：⽔进⼊细胞内，细胞内容空间变⼤，染⾊体间的距离拉⼤，易于染⾊体展开(4) 空⽓⼲燥：使细胞和染⾊体展开(5) 固定：⽤甲醇：冰醋酸=3:1作⽤使蛋⽩质变性，对染⾊体内的组蛋⽩讲，变性后硬度增加，保持了染⾊体的“及时形态”，对细胞膜蛋⽩讲，变性使细胞膜硬度增强，形成屏障作⽤，防⽌了细胞内物质外溢和丢失。
对于⼩⿏精巢染⾊体标本的制作，⼀般包括以下⼏个要点: 1. ⽤⼀定剂量的秋⽔仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染⾊体停留在⾚道⾯处; 2. ⽤低渗法使将细胞膨胀, 以⾄于在滴⽚时细胞被胀破, 使细胞的染⾊体铺展到载玻⽚上; 3.空⽓⼲燥法可使使细胞的染⾊体在载⽚上展平, 经Giemsa染⾊后便可观察到染⾊体的显微图象。
遗 传HEREDITAS (Beijing )28(6):652~658,2006研究报告收稿日期:20050621;修回日期:20050801基金项目:湖南省科技厅重点攻关项目(编号:02N KY2003)资助[Su pported by the Key Project Fu nd of Scien ce and Techn ology Departmen t of Hunan P rovin ce (No.02N KY 2003)]作者简介:施启顺(1935 )男,教授,博士生导师,研究方向:动物遗传育种。
E mail:yqyzz@p ublic.cs.h 5个与猪产仔数相关基因的效应分析施启顺1,柳小春1,刘志伟1,李小平1,李永辉1,唐 凡2(1.湖南农业大学动物科技学院,长沙410128;2.湖南省正虹种猪场,岳阳414418)摘 要:为了比较不同基因对猪产仔数效应大小,在相同的大白(158头)、长白(224头)猪群中采用PC R R FLP 法进行了ESR 、FSH 、PRL 、PRLR 、NCOA 15种与产仔数相关基因的基因型频率检测及不同基因型的总产仔数和产活仔数效应分析,结果表明,对相同母猪群产仔数影响效应最大的是PRLR 和NCOA 1基因,AA 型比BB 型母猪总产仔数高2 28~3 33头(P <0.01),产活仔数高1 57~3 30头(P <0.01),其次为ES R 和FS H 基因,BB 型比AA 型母猪总产仔数高0 55~1 18头(P <0 05,长白例外),产活仔数高0 37~1 20头(P <0 05)。
P RL 基因对产仔数效应不显著。
关键词:猪;产仔数;ES R;FSH ;PRL ;P RLR ;NCOA 1中图分类号:Q953 文献标识码:A文章编号:0253-9772(2006)06-0652-07Effect of Five G enetic Loci Related to Pig Litter SizeSH I Qi Shun 1,LIU Xiao C hun 1,LIU Zhi Wei 1,LI Xiao Pin g 1,LI Yong Hui 1,TAN G F an 2(1.College of Animal Science and Technology ,Hunan Agricultural U nivers ity ,Cha ngs ha 410128,China ;2.Zhenghong Breeding Pig Farm ,Y ueyang 414418,China )Abst ract :To compare the effect of different genes on litter s i z e,we used PCR RF LP to test the genotypi c frequencies of five genes related to l itter size,i.e.ES R ,FS H ,PRL ,PRLR and NCO A 1and analyz ed the effect of various gen otypes on total number born (TN B)and num ber born ali ve (N BA)within the sam e populati ons of Large W hite (n =158)and Landrace (n =224)pigs.Results s howed that the P RLR and NCOA 1loci exerted the greatest im pact on lit ter si z e:the average TNB from genotype AA was 2 28~3 33more than that from BB (P <0.01)and the average N BA from AA was 1 57~3 30more than that from BB (P <0 01).The ESR and FS H loci had a m oderate effect on litter size.The average TNB of BB being 0.55~1.18m ore than AA (P <0.05)excluding the Landrace,and the av erage NBA of BB was 0.37~1.20more than AA (P <0 05).The PRL locus had no significant effect on litter s i ze.Key words:pigs ;litter size;ESR ;FSH ;PRL ;P RLR ;NCOA 1猪的产仔数是最重要的繁殖性状,由一系列主基因或数量性状基因座控制,同时又受公猪精液质量、配种时间、配种方式、饲养管理条件等环境因素影响。
猪的CDKN1C和NAP1L4基因的描述、组织表达和印迹分析人类CDKN1C/KCNQ1OT1印记域中的CDKN1C和NAP1L4基因是与贝-韦综合征和癌症有关的两个关键的候补基因。
为了增进对猪中的这两种基因的了解，本文将对它的cDNAs进行分析。
通过IMpRH模板，猪的CDKN1C 和NAP1L4基因被分配给猪的2号染色体，分别与IMpRH06175在15.78 和17.94的检测限下有紧密联系。
采用荣昌猪和长白猪相互杂交的F1代，通过实时定量rt - pcr和polymorphism-based方法对两个基因的组织和等位基因表达进行测定。
尽管猪的CDKN1C和NAP1L4基因在1月龄猪的肺和肾脏中显示出最高的表达水平(P<0.01)，但是两者在胎盘组织中的转录水平显著高于其他新生组织。
印迹分析表明，CDKN1C在新生仔猪的心脏、舌、膀胱、卵巢、脾脏、肝脏、骨骼肌、胃、小肠和胎盘等组织中呈母系表达，在新生仔猪的肺和肾脏中呈双等位基因表达，而NAP1L4被验证在上述12种新生组织中呈双等位基因表达。
总的说来，CDKN1C印迹在哺乳动物中保守存在但在新生猪组织中具有组织特异性，而NAP1L4印迹在哺乳动物中存在争议。
1.前言基因印迹，由于体细胞的表观遗传调控，其中某些基因的单等位基因表达取决于亲本的源性，它对哺乳动物新生胎儿的生长发育，胎盘的功能以及产后的行为至关重要。
很多研究已经表明，基因组印迹的中断与先天性疾病、癌症以及其他种类的疾病例如贝-维综合征和普拉德-威利综合征等有关[1-4]。
目前，在小鼠的基因组中估计有大约2114种转录印迹和600种潜在的印迹基因[5,6]，其中有大约116种印迹基因已经被发现，但是只有几种印迹基因在猪中被发现。
因此，有必要在猪中找寻出更多的印迹基因，从而提供新的数据和观点给猪的功能基因组学和比较基因组学研究。
很多印迹基因在基因组的集合和基因顺序以及在每个印迹域中的印迹显示出老鼠和人类之间的相当大的相似性[7,8]。
