巨噬细胞功能检测讲解学习

巨噬细胞吞噬功能检测指标
巨噬细胞的吞噬功能是其重要的免疫反应机制之一，用于摄取和消化病原微生物、细胞残骸、死亡细胞等。

以下是常用于检测巨噬细胞吞噬功能的指标：
1. 吞噬指数（Phagocytic index）：用于评估巨噬细胞吞噬能力的定量指标。

它代表了单个巨噬细胞吞噬过的颗粒数量。

2. 吞噬率（Phagocytic rate）：表示巨噬细胞吞噬某种颗粒的能力，通常以百分比形式呈现。

它反映了吞噬事件在总细胞群中的发生率。

3. 吞噬效能（Phagocytic efficiency）：衡量巨噬细胞吞噬过程中的效率，即吞噬活跃度与吞噬细胞总量的关系。

4. 黏附因子（Adhesion molecules）：这些分子介导巨噬细胞与被吞噬物颗粒的结合，对吞噬功能起着重要作用。

常用的黏附因子有CD14、CD11b等。

5. 溶酶体活性（Lysosomal activity）：巨噬细胞内的
溶酶体是吞噬过程中的关键器官，其酶活性可以反映巨噬细胞的消化能力。

这些指标可以通过多种实验方法进行测定，如流式细胞术、显微观察、免疫组化等。

评估巨噬细胞吞噬功能的变化可帮助了解免疫系统活性和疾病状态。

人巨噬细胞可从外周血或经斑蝥激发的皮疱液中获取，也可从肺灌洗液或患者腹膜透析液中分离，但操作繁锁，得量不多。

许多实验室在进行基础或配合临床研究巨噬细胞功能及其与疾病的关系、或筛检免疫增强药物和探讨其作用机制时，常选用小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象，常用的检测方法如下。

(一)炭粒廓清试验正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒，据此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)，间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。

(二)吞噬功能的检测巨噬细胞具有较强的吞噬功能，实验室常用比细菌大的细胞性抗原作为被吞噬颗粒，如鸡红细胞。

其检测原理是将受检细胞与适量的颗粒抗原混合后，置37℃保温0.5～1h，其间时加振摇，最后离心取测定细胞制成涂片，染色镜检，分别计数出吞噬百分比和吞噬指数。

各实验室应根据自己的条件建立正常参考值。

(三)巨噬细胞溶酶体酶的测定巨噬细胞富含溶酶体酶，如酸性磷酸酶、非特异性酯酶、溶菌酶等，测定这些酶的活性也是衡量巨噬细胞功能的实用指标之一。

1.酸磷酸酶的测定(1)硝酸铅法：本法优点是用普通试剂，价格便宜，一般实验室均有条件做，封片后可较长时间保存，并可用电子显微镜研究观察细胞的超微结构。

缺点是细胞必需固定，而且固定条件要求严格，如处理不当酶活性易消失，反应步骤也较多。

该法基本原理是在适当的酶性条件下，巨噬细胞内的酸性磷酸酶能使β甘油磷酸钠水解成磷酸盐后，后者与硝酸铅反应产生磷酸铅，而磷酸铅再与硫酸铵反应则形成黑色硫化铅，沉积在胞浆内酸所在处，显示棕黑色颗粒。

酶活性强弱可根据颗粒的数量和粗细不同而分级判断，颗粒数量少则细的为+，颗粒多而粗的为++，颗粒很多且很粗的为+++。

(2)偶氮法：本法操作简便，反应液中的底物α-萘磷酸钠被酸性磷酸酶分解后，形成萘酚和磷酸盐，而萘酚结构中的羟基(-OH)邻近的活泼碳原子，立即与偶氮染料起反应，而产生鲜艳的棕色沉积在酶所在处，缺点是封片后保存时间短。

巨噬细胞是免疫系统中的一类重要细胞，具有吞噬功能。

巨噬细胞通过吞噬和消化病原微生物、细胞碎片和其他异物，起到保护机体免受感染和清除废物的作用。

巨噬细胞吞噬功能测定是评估巨噬细胞活性和功能的一种方法。

巨噬细胞吞噬功能测定的基本原理如下：1.制备巨噬细胞：首先需要从人或动物体内获取巨噬细胞，常用的来源包括骨髓、外周血单个核细胞、脾脏等。

这些组织中含有大量未分化或分化成熟的巨噬细胞前体，经过适当培养条件可以诱导其分化为成熟的巨噬细胞。

2.刺激剂处理：为了评估不同刺激剂对巨噬细胞吞噬能力的影响，常常将刺激剂加入到培养基中与巨噬细胞共同培养。

常用的刺激剂包括细菌成分（如脂多糖）、细菌、病毒等。

刺激剂的添加可以模拟体内感染环境，激活巨噬细胞。

3.吞噬实验：巨噬细胞吞噬功能测定通常采用荧光标记的微粒（如琼脂糖微球、细菌等）来评估巨噬细胞吞噬能力。

首先将荧光标记的微粒加入到培养基中与巨噬细胞共同培养，一定时间后，通过显微镜观察和计数吞噬的荧光标记微粒数量，进而评估巨噬细胞的吞噬能力。

4.统计分析：通过对多个样本进行重复实验，可以得到吞噬率、吞噬指数等数据。

根据不同实验设计和目的，还可以进行其他统计学分析，如t检验、方差分析等。

总结起来，巨噬细胞吞噬功能测定就是通过将刺激剂处理后的巨噬细胞与荧光标记微粒共同培养，然后观察和计数吞噬的荧光标记微粒数量来评估巨噬细胞的吞噬能力。

这种测定方法可以用于评估巨噬细胞在不同条件下的活性和功能，进而研究免疫应答、感染和疾病发展等相关问题。

巨噬细胞吞噬功能测定在实验室中有广泛的应用。

通过该方法可以评估不同刺激剂对巨噬细胞活性的影响，了解它们在感染和炎症过程中的作用。

此外，该方法还可以用于筛选新药物或治疗方法对巨噬细胞吞噬功能的影响，为药物开发提供参考。

然而，在进行巨噬细胞吞噬功能测定时需要注意以下几个方面：1.工作环境：实验室必须具备严格的无菌条件，以避免外源性污染对实验结果的干扰。

实验一巨噬细胞吞噬细胞功能实验原理：巨噬细胞具有活跃的吞噬功能，能清除体内抗原物质及变性的细胞，在特异性及非特异性免疫中均起重要作用。

巨噬细胞受抗原刺激后活化，可使其吞噬功能明显增强。

此次实验我们用体内法来介绍巨噬细胞的吞噬功能。

体内法：在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠腹腔注射鸡红细胞，30min后处死小鼠，取出腹腔液，以冷美兰染色，显微镜下计数吞噬鸡红细胞的百分数，及观察巨噬细胞内被杀死而染为紫色的鸡红细胞的形态、数目，以判断巨噬细胞的杀伤能力，由此间接地测定机体的非特异性免疫水平。

方法：（1）试验前3天，小白鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。

（2）实验时，每只小鼠腹腔注射鸡红细胞1ml，轻柔腹部，使鸡红细胞在腹腔中分布均匀，利于吞噬。

（3）30min后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用滴管取出腹腔液，均匀涂布于载玻片上，然后再滴一小滴0.06%冷美兰溶液，盖上盖玻片（4）高倍镜下进行观察，计数。

实验结果：100个巨噬细胞中已吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞的数目吞噬百分率 = ———————————————————×100%100个巨噬细胞100个已吞噬鸡红细胞的巨噬细胞中鸡红细胞的数目吞噬指数 = ———————————————————×100%100个已经吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞结果分析：正常值吞噬百分率：62.77±1.38吞噬指数：1.058±0.049我们的实验结果偏低，原因可能是腹腔注射时没有完全注射到腹腔内，部分残留在腹腔壁上。

实验二沉淀反应（双向琼脂扩散实验）原理：双向琼脂扩散试验是定性实验。

将可溶性抗原与相应抗体与相应抗体分别加入琼脂板上的孔内，两者均可扩散，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。

如果不是相应的抗原与抗体，就不出现沉淀线。

本试验常用于分析抗原抗体的纯度及相互关系。

方法：（1）将熔化的1%琼脂加在玻片上，3ml/板。

一、实验目的1. 了解巨噬细胞在免疫过程中的作用。

2. 掌握巨噬细胞的分离、培养和鉴定方法。

3. 学习巨噬细胞吞噬功能的检测方法。

二、实验原理巨噬细胞是一种具有强大吞噬功能的免疫细胞，在免疫过程中起着重要作用。

巨噬细胞能够识别、吞噬和消化病原微生物、凋亡细胞等异物，并参与抗原呈递、免疫调节等过程。

本实验通过分离、培养和鉴定小鼠腹腔巨噬细胞，并检测其吞噬功能，以了解巨噬细胞在免疫过程中的作用。

三、实验材料与仪器1. 实验动物：6-8周龄小鼠2. 试剂：胎牛血清、RPMI-1640培养基、无菌生理盐水、鸡红细胞、冷亚甲蓝染液等3. 仪器：超净工作台、CO2培养箱、倒置显微镜、移液器、培养皿、离心机等四、实验方法1. 巨噬细胞的分离与培养（1）小鼠处死后，打开腹腔，取出肠系膜，剪成1cm×1cm的小块。

（2）将小块组织放入装有生理盐水的培养皿中，用剪刀剪碎，制成组织悬液。

（3）将组织悬液移入离心管，以1000r/min的速度离心5min，弃去上清液。

（4）加入适量RPMI-1640培养基，重悬细胞，以1000r/min的速度离心5min，弃去上清液。

（5）加入适量胎牛血清的RPMI-1640培养基，重悬细胞，调整细胞浓度至1×10^6个/mL。

（6）将细胞悬液接种于培养皿中，放入CO2培养箱中培养24h。

2. 巨噬细胞的鉴定（1）取少量细胞悬液，加入适量台盼蓝染液，混匀，室温放置5min。

（2）用血细胞计数板计数，计算细胞死亡率。

（3）收集培养24h的细胞，用倒置显微镜观察细胞形态，判断细胞类型。

3. 巨噬细胞吞噬功能的检测（1）取适量鸡红细胞，用生理盐水洗涤3次，调整红细胞浓度为2×10^9个/mL。

（2）将鸡红细胞加入巨噬细胞培养液中，37℃、5%CO2条件下孵育30min。

（3）取出细胞，用生理盐水洗涤3次，弃去上清液。

（4）加入适量冷亚甲蓝染液，混匀，室温放置5min。

巨噬细胞功能检测讲解学习巨噬细胞功能检测单核－巨噬细胞吞噬功能测定单核－巨噬细胞在机体免疫反应中起着重要作用，因此，检测单核－巨噬细胞功能对于了解机体的免疫功能状态具有重要意义。

小鼠巨噬细胞吞噬功能试验（体外法）1、原理巨噬细胞具有吞噬异物的功能，将巨噬细胞与被吞噬物(鸡红细胞、白色念珠菌、白色葡萄球菌等)共同温育，染色，在油镜下计数吞噬异物的巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数，以此判断巨噬细胞的吞噬功能，从而评价机体的免疫状态。

2、方法(1)．小鼠巨噬细胞制备实验前三天每只小鼠腹腔注射1％可溶性淀粉1 ml。

实验时眼球放血、断椎处死小鼠，碘酒、洒精消毒皮肤，剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用镊子夹起腹膜剪开一小口(注意避开血管)用生理盐水(或1640)灌注腹腔，收集腹腔液于试管中(约4 ml)，1500 r/min，离心10 min，去上清，沉积细胞用生理盐水(或1640)洗二次，离心转速、时间同上。

最后沉积细胞用含10％小牛血清1640配成适当浓度备用(1~2×106／ml)。

(2)被吞噬物的制备1）．鸡红细胞制备从鸡翼下抽取静脉血，加入5倍量Alsever液(2.05 g葡萄糖，0.42 g NaCl，0.8 g枸橼酸钠5H2O、0.55 g枸椽酸，加双蒸水到100 ml，加热溶解后过滤分装，8磅高压灭菌，4℃保存)，置4℃可以保存1个月。

用前取适量鸡红细胞悬液，用PBS洗涤二次后配成1％的浓度备用。

2）．白色念珠菌制备将白色念珠菌接种于沙氏平皿培养基中，培养48小时，收集菌，用适量生理盐水配成悬液，100℃，煮沸30 min 灭活，离心去掉上清，再用1％美兰染色30 min，用生理盐水洗涤二次，用生理盐水配成1×108／ml菌悬液，4℃冰箱保存备用。

3、操作取巨噬细胞0.5 ml加1％鸡红细胞或l×l08／ml白色念珠菌悬液0.5ml，置37℃温育30min。

取2滴混合液置玻片上加盖玻片，在高倍镜下观察计数，或离心1000r／min,10min，取细胞沉淀混悬液制成涂片，甲醇固定，姬姆萨染色、油镜观察计数。

巨噬细胞功能检测单核－巨噬细胞吞噬功能测定单核－巨噬细胞在机体免疫反应中起着重要作用，因此，检测单核－巨噬细胞功能对于了解机体的免疫功能状态具有重要意义。

小鼠巨噬细胞吞噬功能试验（体外法）1、原理巨噬细胞具有吞噬异物的功能，将巨噬细胞与被吞噬物(鸡红细胞、白色念珠菌、白色葡萄球菌等)共同温育，染色，在油镜下计数吞噬异物的巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数，以此判断巨噬细胞的吞噬功能，从而评价机体的免疫状态。

2、方法(1)．小鼠巨噬细胞制备实验前三天每只小鼠腹腔注射1％可溶性淀粉1 ml。

实验时眼球放血、断椎处死小鼠，碘酒、洒精消毒皮肤，剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用镊子夹起腹膜剪开一小口(注意避开血管)用生理盐水(或1640)灌注腹腔，收集腹腔液于试管中(约4 ml)，1500 r/min，离心10 min，去上清，沉积细胞用生理盐水(或1640)洗二次，离心转速、时间同上。

最后沉积细胞用含10％小牛血清1640配成适当浓度备用(1~2×106／ml)。

(2)被吞噬物的制备1）．鸡红细胞制备从鸡翼下抽取静脉血，加入5倍量Alsever液(2.05 g葡萄糖，0.42 g NaCl，0.8 g枸橼酸钠5H2O、0.55 g枸椽酸，加双蒸水到100 ml，加热溶解后过滤分装，8磅高压灭菌，4℃保存)，置4℃可以保存1个月。

用前取适量鸡红细胞悬液，用PBS洗涤二次后配成1％的浓度备用。

2）．白色念珠菌制备将白色念珠菌接种于沙氏平皿培养基中，培养48小时，收集菌，用适量生理盐水配成悬液，100℃，煮沸30 min灭活，离心去掉上清，再用1％美兰染色30 min，用生理盐水洗涤二次，用生理盐水配成1×108／ml菌悬液，4℃冰箱保存备用。

3、操作取巨噬细胞0.5 ml加1％鸡红细胞或l×l08／ml白色念珠菌悬液0.5ml，置37℃温育30min。

取2滴混合液置玻片上加盖玻片，在高倍镜下观察计数，或离心1000r／min,10min，取细胞沉淀混悬液制成涂片，甲醇固定，姬姆萨染色、油镜观察计数。

m1型巨噬细胞指标一、介绍巨噬细胞是一类重要的免疫细胞，具有清除病原体和损伤组织的能力。

根据其功能和表型特征的不同，巨噬细胞可以分为多个亚型，其中m1型巨噬细胞是其中一种重要的亚型。

m1型巨噬细胞具有强烈的炎症反应能力，对于抗菌、抗肿瘤和免疫调节等方面起到重要作用。

本文将深入探讨m1型巨噬细胞的指标，包括其表型特征、功能和相关研究进展。

二、m1型巨噬细胞的表型特征m1型巨噬细胞具有一系列特定的表型特征，这些特征可以通过检测特定的标记物来鉴定巨噬细胞的亚型。

以下是m1型巨噬细胞的表型特征：1.CD11c：m1型巨噬细胞通常表达CD11c，这是一种巨噬细胞的表面标记物，用于区分巨噬细胞和其他免疫细胞。

2.CD86：m1型巨噬细胞表达高水平的CD86，这是一种共刺激分子，参与T细胞的活化和免疫应答的调节。

3.iNOS：m1型巨噬细胞表达高水平的iNOS（一氧化氮合酶），这是一种产生一氧化氮的酶，对于抗菌和抗肿瘤具有重要作用。

4.IL-12：m1型巨噬细胞产生高水平的IL-12（白细胞介素-12），这是一种重要的炎症介质，能够促进Th1细胞的发育和活化。

三、m1型巨噬细胞的功能m1型巨噬细胞具有多种重要的功能，这些功能使其在免疫应答和疾病发展中起到重要作用。

以下是m1型巨噬细胞的功能：1.抗菌作用：m1型巨噬细胞通过产生一氧化氮、ROS（活性氧物种）和抗菌肽等物质，参与对病原体的直接杀伤和清除。

2.抗肿瘤作用：m1型巨噬细胞能够识别和杀伤肿瘤细胞，并通过产生炎症因子和促凋亡分子，抑制肿瘤的生长和扩散。

3.免疫调节作用：m1型巨噬细胞通过产生炎症因子和调节其他免疫细胞的活化状态，参与免疫应答的调节和平衡。

四、m1型巨噬细胞的相关研究进展对m1型巨噬细胞的研究已经取得了很多进展，以下是一些相关的研究进展：1.m1型巨噬细胞与肿瘤免疫治疗：研究发现，m1型巨噬细胞在肿瘤免疫治疗中起到重要作用。

通过调节m1型巨噬细胞的活化状态和功能，可以增强肿瘤免疫治疗的效果。

巨噬细胞吞噬功能测定【实验原理】巨噬细胞对颗粒性异物具有很强的吞噬功能。

当鸡红细胞被注入小鼠腹腔时，会被腹腔中的巨噬细胞吞噬。

取小鼠腹腔液涂片、染色，在显微镜下可见到鸡红细胞被吞噬的现象。

计算吞噬百分率和吞噬指数，可判断吞噬细胞的吞噬功能。

【试剂和器材】1. 动物体重20-25g的健康小鼠。

2. 1%鸡红细胞（CRBC）悬液自鸡液静脉或心脏采血，放Alsever液中保存（鸡血与Alsever 液1：5混合），置4℃可有效保存1个月，临用前用生理盐水将CRBC洗3次，按红细胞压积配成1%CRBC悬液。

3. 6%可溶性淀粉肉汤培养基肉汤培养基100ml加入可溶性淀粉6g，混匀，置100℃水浴煮沸消毒。

4. 其他试剂瑞氏（Wright）染液、生理盐水等。

5. 器材无菌注射器及针头、剪刀、镊子、解剖盘、载玻片、显微镜等。

【步骤和方法】1.试验前3天，于小鼠腹腔注射6%可溶性淀粉肉汤培养基1ml。

2.于试验当天，小鼠腹腔注入1%CRBC悬液0.5ml，并轻轻揉腹。

3.30min后小鼠颈椎脱臼处死，取腹腔液涂片，自然干燥后瑞氏染色，用油镜观察。

【结果判定】镜下可见吞噬细胞核呈蓝色，被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形，其胞浆呈红色而核被染成蓝色。

呈油镜下随机观察100个巨噬细胞，计数吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数和吞噬的鸡红细胞总数。

吞噬百分率= (吞噬CRBC的巨噬细胞数/100)*100%吞噬指数= 吞噬细胞吞噬的CRBC总数/100【注意事项】1.涂片的薄厚要适当，否则影响计数。

2.小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。

3.如小鼠腹腔液过少，可注入适量生理盐水。

4.剪开小鼠腹腔时应避免出血，否则将影响试验结果。

5.被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化，时间过短未被吞噬，必须掌握好吞噬作用时间。

阿氏液配方：葡萄糖 2.05克柠檬酸钠0.8克柠檬酸0.055克氯化钠0.42克加蒸馏水至100毫升，加热溶解后将pH值调到6.1，经过69千帕，15分钟的高压灭菌，放置在4℃的环境内，保存备用。