下载文档原格式
清醒大鼠鞘内注射模型的制备与验证
王怀泉;郑方;李文志
【期刊名称】《中国疼痛医学杂志》
【年(卷),期】2003(009)004
【摘要】@@ 大鼠是研究镇痛药物脊髓作用的常用动物,目前常用的方法是大鼠鞘内埋管法,其次是动物脊髓横切或电毁损消除高位中枢的影响[1].这两类方法均需手术,操作较复杂,所需时间较长.此外,有作者报道了清醒小鼠鞘内注射模型[2,3].由于疼痛研究中大鼠较小鼠更为常用,我们研究了清醒大鼠鞘内注射(intrathecal injection,ith)模型的可能性,并以福尔马林疼痛模型上测定吗啡镇痛作用的方法进行验证.
【总页数】2页(P235-236)
【作者】王怀泉;郑方;李文志
【作者单位】哈尔滨医科大学附属二院麻醉科,哈尔滨,150086;哈尔滨医科大学附属二院麻醉科,哈尔滨,150086;哈尔滨医科大学附属二院麻醉科,哈尔滨,150086【正文语种】中文
【中图分类】R614
【相关文献】
1.大鼠鞘内注射方法的改进与验证 [J], 陈烨;陈彦青;李德龙
2.清醒无拘束大鼠心肌缺血模型的制备 [J], 王洁;吕吉元;张明升;牛拴成;张轩萍;杨彩红
3.2型糖尿病大鼠模型的制备及其验证 [J], 双卫兵;王志慧;王东文;吴博威
4.右美托咪定鞘内注射对骨折模型大鼠行为能力的影响及作用机制分析 [J], 王敏; 任斐; 高慧
5.右美托咪定及舒芬太尼联合鞘内注射对CCI模型大鼠DRG神经元GABAA激活电流的作用 [J], 舒洛娃;王古岩
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
鞘内注射KG—501对神经病理性疼痛大鼠疼痛的影响目的观察鞘内注射KG-501对腰段背根神经节慢性压迫模型（CCD）大鼠神经病理性痛的影响。
方法SD雄性大鼠30只按随机数字表法分为三组：假手术组（S组，n=10）、CCD+DMSO模型组（T0组，n=10）、KG-501组（T1组，n=10）。
T0、T1组制备CCD模型，S组仅暴露L4-5椎间隙。
术后14dT0组鞘内注射30μL10%溶媒二甲基亚砜（DMSO），T1组鞘内注射溶于10%DMSO的KG-501 25μmol/30μL。
各组在造模前1d，造模后第4d、7d、10d、14d（t1-t5）均检测热缩足反射潜伏期（PWTL）和机械性缩足反射阈值（PWMT）。
T0、T1组给药后2h、4h、10h、12h、24h（t6-t10）时进行上述行为学检测。
结果与S 组比较，T0、T1组在t2-t10时PWTL缩短，PWMT降低（P＜0.05）；与T0组比较，T1组在给药后t7-t9时PWTL（12.9±1.0VS16.8±2.0、13.1±1.3VS20.6±2.1、12.4±1.3VS15.8±1.6）（s）延长，PWMT（9.2±1.7VS12.5±1.2、9.1±1.7VS16.7±3.7、9.2±1.8VS12.7±1.8）（g）升高（P＜0.05）。
结论鞘内注射KG-501可有效缓解神经病理性痛大鼠的疼痛反应。
标签：KG-501；CCD模型；CREB；神经病理性疼痛；大鼠神经病理性疼痛被认为是由外周或中枢感受系统的病变或者受疾病影响而产生的慢性疼痛[1]。
坐骨神经痛作为临床常见的一种慢性神经病理性疼痛，带来了重要的医学和社会经济问题[2]。
数以千例的病例研究表明，硬膜外注射皮质类固醇可以有效地治疗神经病理性疼痛[3]。
虽然多数患者经保守治疗好转，但仍有约10～15%的患者需要外科手术治疗[4]。
鞘内注射右旋美托咪啶对福尔马林致痛⼤⿏的抗伤害影响鞘内注射右旋美托咪啶对福尔马林致痛⼤⿏的抗伤害作⽤摘要中⽂论著摘要⽬的探讨鞘内注射右旋美托咪啶（Dex）能否抑制福尔马林致痛⼤⿏的疼痛效应以及对⼤⿏脊髓背⾓nNOS mRNA表达的影响。
⽅法本实验包括两部分内容：(1)观察鞘内注射右旋美托咪啶对福尔马林疼痛⼤⿏⾏为学的影响。
(2)采⽤Real Time PCR，检测鞘内注射右旋美托咪啶对⼤⿏脊髓背⾓nNOS mRNA表达的影响。
成年雄性SD⼤⿏24只随机分为S组为假⼿术组（⿇醉、消毒，不在脚底注射5％甲醛，⿇醉前10 min鞘内注射⽣理盐⽔20µl ）；O组为⼿术对照组；D1组为Dex 5µg／kg组；D2组为Dex 10µg／kg组。
在1．5％异氟烷⿇醉下，O组、D1组和D2组在所有⼤⿏右后⾜底⽪下注射5％甲醛40µl，D1组和D2组于术前10min鞘内注射右旋美托咪啶，S组和O组鞘内注射0.9% 氯化钠溶液20微升。
观察⼤⿏在I相(O-5min)和II相(15-50min)疼痛⾏为学变化(包括缩腿、舔⾜、咬⾜动作)，并进⾏Dubuisson 评分。
注射福尔马林1⼩时后处死⼤⿏，打开椎板，暴露腰膨⼤部的脊髓，⽤⼿术⼑⽚切下腰膨⼤部脊髓。
将采集到的脊髓组织浸泡于⾮液氮型样品RNA保存液中，⽤Trizol法提取⼤⿏脊髓组织总RNA，并⽤Beckman核酸蛋⽩分析仪测提取的总RNA的浓度，将提取的总RNA逆转录成cDNA,4℃保存备⽤。
采⽤Real Time 荧光定量PCR⽅法检测脊髓背⾓L4-5nNOS mRNA表达情况。
结果各组⼤⿏，在I相中的疼痛评分的差异⽆统计学意义(P>O.05)；在II相中与O组相⽐，S、D1、D2组的⼤⿏疼痛评分均显著减少，差别有统计学意义(P2组的⼤⿏疼痛评分显著⼩于D1组，差别有统计学意义(PO组nNOS mRNA 的相对表达量均显著⾼于其他3组（P值均＜0.05），D1组的nNOS mRNA 的相对表达量均显著⾼于D2组和S组（P值均＜0.05）。
鞘内注射Roscovitine缓解大鼠慢性神经病理性疼痛杨磊;马正良;史长喜;钟妤;顾小萍【期刊名称】《临床麻醉学杂志》【年(卷),期】2009(025)004【摘要】目的在SD大鼠脊髓后根神经节慢性压迫(CCD)模型上观察鞘内注射Roscovitine的镇痛效果.方法用不锈钢棒(长4 mm,直径0.7 mm)持续件压迫脊髓背根神经节(DRG)建立慢性神经病理性疼痛模型.术后第7天鞘内注射溶解于DMSO 10 μl中的Roscovitine 50 μg(R组);同时设CCD术后第7天只给予鞘内注射二甲基亚砜(DMS0)10 μl的CCD组(C组)和非CCD处理、并给予鞘内注射DMSO 10 μl的假手术组(S组).三组均于CCD术前、术后第7天(给药前)及给药后2、24、72 h榆测机械痛缩足阈值(PWMT)和热痛缩足潜伏期(PWTL).CCD术前及给药后72 h用免疫组化技术检测脊髓背角N-甲基-D天冬门氨酸(NMDA)受体2A亚基(NR2A)的表达水平.结果 R组和C组给药前PWMT均较术前显著降低[(3.64±0.40)g vs.(14.38±1.53)g,(3.50±0.77)g vs(13.25±2.21)g],也明显低于S 组的(11.31±1.13)g(P<0.05).R组和C组给药前PWTL均较术前显著缩短[(9.28±1.18)s vs(18.34±1.23)s,(8.91±1.08)s vs.(18.59±1.92)s],也短于S组的(18.45±1.44)s(P<0.05).R组PWMT在给药后24 h较给药前和C组显著增加[(7.32±0.69)g vs.(3.64±0.40)g,(3.86±1.14)g](P<0.05),而给药后2 h PWTL,较给药前和C组显著延长[(15.464±1.51)s vs.(9.28±1.18)s,(9.91±1.07)s(P<0.05).给药后72 h,R组脊髓背角NR2A受体表达水平明显低于C组[(0.21±0.02)vs.(0.26±0.01)](P<0.05).结论鞘内注射Roseovitine能有效改善CCD大鼠痛行为学反应;其作用可能与抑制脊髓背角NR2A受体表达有关.【总页数】3页(P335-337)【作者】杨磊;马正良;史长喜;钟妤;顾小萍【作者单位】210008,南京医科大学鼓楼临床医学院麻醉科;210008,南京医科大学鼓楼临床医学院麻醉科;210008,南京医科大学鼓楼临床医学院麻醉科;210008,南京医科大学鼓楼临床医学院麻醉科;210008,南京医科大学鼓楼临床医学院麻醉科【正文语种】中文【中图分类】R9【相关文献】1.鞘内注射地塞米松缓解坐骨神经分支选择性损伤大鼠神经病理性痛 [J], 刘瑞杰;邵金平;任秀花;臧卫东;韩雪萍2.鞘内注射可乐定和氯胺酮对慢性神经病理性疼痛大鼠的镇痛效应 [J], 贺正华;郭曲练;邹望远;黄长盛3.Cdk5抑制剂Roscovitine对神经病理性疼痛大鼠痛行为学的影响及机制 [J], 钟妤;陈佳林;谢玉波;陈静4.右美托咪定对坐骨神经慢性压迫损伤模型大鼠神经病理性疼痛的缓解作用及机制研究 [J], 王瑗;冯建梅;卫白杨5.鞘内注射可乐定对神经病理性疼痛大鼠背根神经节内交感神经芽生的影响 [J], 王海涛;杨美蓉;颜涛;李士通因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
鞘内注射MCPG对神经病理性疼痛大鼠pCREB表
达的影响的开题报告
背景：
神经病理性疼痛是一种常见的疼痛症状，它是由于神经系统损伤或疾病引起的疼痛。
目前，针对神经病理性疼痛的治疗方法比较有限且不够有效。
鞘内注射MCPG是一种抑制神经元兴奋性的化合物，对于神经病理性疼痛的治疗具有潜在的作用。
然而，MCPG对于神经病理性疼痛的作用机制尚未得到全面的研究。
目的：
本研究的目的是探究鞘内注射MCPG对于神经病理性疼痛大鼠pCREB表达的影响，以期为神经病理性疼痛的临床治疗提供基础研究依据。
方法：
选取40只SD大鼠，分为两组，每组20只。
其中一组为实验组，另一组为对照组。
实验组大鼠使用鞘内注射MCPG，对照组使用无生理活性的盐水注射。
在行为学测试前、注射MCPG/盐水后4、8和12小时采集脊髓组织并检测pCREB表达。
结果：
预计实验组大鼠pCREB表达水平较对照组有所下降，但具体变化情况需要后续实验数据支持。
结论：
本研究可进一步探究鞘内注射MCPG对于神经病理性疼痛的作用机制，并为神经病理性疼痛的临床治疗提供新的思路和方法。
脊髓损伤模型大鼠鞘内注射甲基强的松龙后的蛋白质组学变化
的开题报告
一、研究背景和意义
脊髓损伤是一种常见的神经系统损伤，常常导致残疾或死亡。
在过去的几十年中，许多研究已经针对脊髓损伤进行了深入的探究。
虽然有许多治疗方法，但并没有一种可以完全恢复受损的脊髓。
因此，寻找新的治疗方法是非常必要的。
甲基强的松龙是一种被广泛应用于临床的糖皮质激素。
已有研究表明，甲基强的松龙可以改善轻微或严重脊髓损伤的炎症反应，但其具体作用机制尚未完全阐明。
因此，本研究旨在利用蛋白质组学技术探索甲基强的松龙在大鼠脊髓损伤模型中的作用机制，为脊髓损伤的治疗提供新的思路和方法。
二、研究方法
在本研究中，我们将采用大鼠脊髓损伤模型，利用鞘内注射甲基强的松龙治疗。
将甲基强的松龙治疗组与对照组进行比较。
采用蛋白质组学技术，结合质谱分析等实验方法，分析甲基强的松龙对脊髓损伤模型大鼠的蛋白质组学变化，进而探究甲基强的松龙在脊髓损伤治疗中的作用机制。
三、研究预期结果
本研究预期，通过蛋白质组学技术探究甲基强的松龙治疗脊髓损伤模型大鼠后蛋白质质量的变化，揭示甲基强的松龙在治疗脊髓损伤中的作用机制，为临床治疗提供新的理论基础和实验
依据。
同时，本项研究结果也有望拓展蛋白质组学技术在脊髓损伤治疗中的应用示范。
最终的目标是寻找一种无副作用且疗效显著的脊髓损伤治疗方法，改善受损患者的生活和健康。
鞘内注射甘珀酸对佐剂性关节炎大鼠的抗伤害作用研究苏州大学附属第一医院麻醉科215006侯永恒，杨建平，张慧娟，成浩，邹丽，王丽娜【摘要】目的研究鞘内注射缝隙连接阻滞剂－甘珀酸（CBX）对佐剂性关节炎大鼠的抗伤害作用。
方法对所有大鼠L4-5鞘内置管，5～7后保留无障碍者。
①行为学研究：成年雄性大鼠40只随机平分为五组，在大鼠左后肢踝关节外侧皮下注射完全弗氏佐剂（CFA）50μl建立佐剂性关节炎模型，分别以CBX 0（NS对照）、25、50和100μg的剂量在致炎后0.5h、1d、3d、5d、7d、10d、14d鞘内注射，每次给药后2h测定双侧PWTL。
②形态学研究：15只雄性大鼠随机分为3组，每组5只。
NS对照组大鼠左后肢踝关节外侧皮下注射NS 50μl，其它组注射CFA50μl，3d后NS对照组和CFA模型组鞘内注射NS 20μl；CBX处理组鞘内注射注射CBX100μg（20μl）。
鞘内给药后2h，取脊髓腰膨大行c-fos免疫组织化学染色分析并FLIN计数。
结果1、单侧踝关节外侧皮下注射CFA可以在致炎后2h～7d诱导出双侧的热痛觉过敏，呈现明显的域外痛和镜像痛现象。
鞘内注射CBX可以在炎性痛的不同阶段逆转这种痛阈改变（P<0.05或0.01）。
2、单侧踝关节外侧皮下CFA致炎后的第3天腰段脊髓双侧背角c-fos 蛋白表达显著增加，表现为致炎后FLI神经元数量增加和体积增大。
而这种改变可以被鞘内注射甘珀酸逆转，与CFA组比较差异具有显著统计学意义（P<0.01）。
结论结果证实甘珀酸，作为一种缝隙连接阻滞剂，对大鼠佐剂性关节炎诱导的病理性疼痛（包括域外痛和镜像痛）具有显著的抗伤害作用，提示缝隙连接可能参与炎性疼痛的中枢敏感化过程。
【关键词】佐剂性关节炎; 炎性痛；缝隙连接; 甘珀酸；脊髓背角；c-fos蛋白Antinociceptive Effects of Intrathecal Carbenoxolone on AdjuvantArthritis RatsObjective To investigate the antinociceptive effects of intrathecal carbenoxolone (CBX), a gap junction blocker, on adjuvant arthritis rats. Methods Chronic lumbar intrathecal catheters were implanted and then confirmed in all rats. 1) Animal behavior research：40 rats were randomly divided into 4 groups. Adjuvant arthritis model was produced by inoculation of complete Freud’s adjuvant (CFA) at outer side of left ankle joint. Four doses of CBX (0, 25, 50, 100μg) were respectively administered in 4 groups at 0.5h, 1d, 3d, 5d, 7d, 10d, 14d post-CFA. Bilateral PWTL was measured at 2h after each drug delivery. 2) Morphological study: 15 male rats were randomly divided into 3 groups (n=5). NS control group rats were given hypodermic injection of NS 50μl at outer side of left ankle joint, whereas others were given CFA 50 μl inoculation. 3d later, NS control group and CFA group rats were givenintrathecal injection of NS 20 μl, and CBX group CBX 100μg (20 μl). 2 h after every drug delivery, spinal intumescentia lumbalis were taken to conduct c-fos immunohistochemistry staining analysis and FLIN counting. Results 1) CBX could reverse periphery CFA-induced thermal hyperpalgesia dose-dependently in all phrases of inflammatory pain (P<0.05 or 0.01). 2) Expression of c-fos protein in lumbar spinal bilateral dorsal horn increased significantly at the 3rd day after CFA injection，with an increase in FLI neurons numbers and size. Intrathecal carbenoxolone could reverse such change. Compared with CFA groups, the difference is of statistic significance (P<0.01). Conclusion These findings proved that carbonexolone, as a kind of GJ blocker, has significant antinociceptive effects on adjuvant arthritis-induced pain （including extraterritorial and mirror-image pain）, which suggests gap junction may play an important role in central sensitization of inflammatory pain .Key words Adjuvant induced arthritis rats, Inflammatory pain, Gap junctions, Carbenoxclone，spinal dorsal horn，c-fos protein病理性疼痛是指由组织损伤和炎症、神经系统损害或神经系统功能改变引起的疼痛现象。
大鼠鞘内注射方式的改良与验证【关键词】注射，脊髓；布比卡因；疾病模型，动物
大鼠鞘内给药是在脊髓水平研究药物作用的重要手腕，因直接鞘内注射方式操作简单、干扰因素少，被愈来愈多的学者所利用。
传统的鞘内注射方式为Mestre法，它是以穿刺时显现甩尾动作为穿刺成功的标志[1],但笔者在进行动物实验进程中，发觉该判定标志存在争议，为此，笔者对鞘内注射方式进行改良（即New法），以回抽有脑脊液或注射后显现甩尾动作为穿刺成功标志，并验证其靠得住性。
1 材料与方式
一样资料 SD大鼠60只，雌性，9～11周，体质量（320±）g （290～340）g，由中国科学院上海实验动物中心提供，动物合格证号SCXK(沪)2007005，随机均分为2组，别离按New法和Mestre法进行穿刺，鞘内注射％布比卡因。
盐酸布比卡因（上海复星朝辉药业公司）；异氟烷（意大利雅培公司）；25 μL微量进样器（上海高欣玻璃仪器厂）,针头剪短至 cm，针孔长径磨至<1 mm，蒸馏水洗净后高压灭菌备用。
方式 New法组大鼠在％异氟烷麻醉下[2],取伏坐位，以L5-6棘突间隙为穿刺点，维持穿刺点与大鼠背部最高点的垂直距离>3
cm。
实验者左手探及髋结节，其水平位置即为大鼠的L5-6棘突间隙。
左手拇指和中指置于大鼠L5-6棘突间隙双侧，并向外绷紧皮肤。
以食指定位，右手持微量注射器从间隙垂直缓慢进针，显现甩尾动作时助手按压大鼠一侧颈静脉部位，注射器回抽有脑脊液后注药10 μL，注药时常又显现甩尾动作。
Mestre法组具体操作按文献[1]进行。
观看2组大鼠在注射布比卡因苏醒后双后肢的瘫痪情形：有无瘫痪、针刺反映及夹尾反射。
统计学处置数据应用统计学软件SPSS 进行处置。
2组计数资料比较应用χ2查验，P<为不同有统计学意义。
结果用New法进行鞘内注射，30只大鼠中有4只未显现穿刺成功的标志，即回抽无脑脊液或注药进程未显现甩尾动作。
大鼠苏醒后，Mestre法组大鼠活动自如14只，针刺反映及夹尾反射均显现躲避现象，瘫痪16只，瘫痪率（%）。
而New法组大鼠均显现双后肢瘫痪，两后肢不能负重、拖地和针剌小腿无回缩，瘫痪率100%。
2组不同有统计学意义（χ2=,P<）。
2 讨论
在动物实验中，鞘内给药是研究药物在脊髓水平作用机制的重要给药途径，而愈来愈多的学者利用微量进样器采纳Mestre来进行实验
研究。
Mestre法以大鼠的尾巴显现哆嗦或突然的侧向甩动为鞘内穿刺成功的标志，以为是注射针头触及大鼠的终丝所致，从理论上说明针头正好位于蛛网膜下腔[1]。
本研究发觉，Mestre法组中布比卡因注射终止后有14只大鼠活动自如，提示药物并未注入蛛网膜下腔，说明了这种标志方式并非靠得住。
笔者以为由于大鼠棘突间隙较小，微量进样器的针头碰着周围神经根时一样可显现甩尾或侧身动作，而且即便微量进样器针头进入蛛网膜下腔，也不能证明针孔是不是全数位于腔内，从而未能使药物全数注入蛛网膜下腔。
为此，笔者改良了注射方式，以回抽到脑脊液或注射后显现甩尾动作为穿刺成功的标志，观看注射布比卡因后大鼠的双后肢瘫痪情形。
结果说明，采纳新法的大鼠均显现瘫痪，瘫痪率高于Mestre法组（P<），证明这种方式具有良好的可行性和靠得住性，而且操作进程简单迅速。
本次改良的方式不足的地方在于并非是每只大鼠都能回抽到脑脊液或注射后显现甩尾动作。
笔者穿刺了30只大鼠，有4只未显现穿刺成功的标志，穿刺成功率为86%，与操作人员的技术熟练程度有关。
强调实验中大鼠应采取正确的体位，并压迫颈静脉，以利于脑脊液回抽。
研究还发觉，周龄越大（>9周），穿刺成功率越高。
国内报导，在大鼠清醒情形下完成鞘内穿刺给药的操作，以为如此可幸免麻醉药对研究可能产生的阻碍[3]。
可是笔者发觉，清醒穿刺时大鼠显现明显的挣扎扭动，穿刺极难成功，而且阻碍到对穿刺是不
是成功的判定，与文献报导类似[4]。
采纳在%异氟烷浅麻醉下进行鞘内穿刺给药的方法，停药后大鼠可在1 min内苏醒，对随后实验研究阻碍很小,值得推行与进一步研究。
【参考文献】
[1] Mestre C，Pelissier T，Fialip J，et al. A method to perform direct transcutaneous intrathecal injection in rats[J]． J Pharmacol Toxicol， 1994，32(4)：197200．
[2] Zucker J. Central cholinergic depression reduces MAC for isoflurane in rats[J]. Anesth Analg, 1991,72(6):790795.
[3] 王怀泉，郑方，李文志. 清醒大鼠鞘内注射模型的制备与验证[J]. 中国疼痛医学杂志, 2003,9(4):235236.
[4] 林献忠,李继勇,陈冀衡,等. 大鼠经皮穿刺鞘内给药方式在疼痛基础研究中的应用[J].。
