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微透析-高效液相色谱法测定米诺环素大鼠血液和脑内的药动学董文彬;程佳祎;陈爱瑛;郑高利【期刊名称】《中国临床药理学与治疗学》【年(卷),期】2012(17)6【摘要】目的:研究米诺环素在大鼠血液和脑内的药动学。
方法:采用微透析结合高效液相色谱技术,测定米诺环素大鼠血浆蛋白结合率;大鼠尾静脉注射米诺环素,测定给药后10h内不同时间点大鼠血液、海马CA1区中游离药物的浓度。
结果:米诺环素大鼠血浆蛋白结合率为82.08%,给药后迅速进入脑组织,在给药后3.83h左右浓度达到峰值,其后缓慢下降,脑组织的游离药物-时间曲线下面积(AUC0-10h)可达血液的62.42%。
结论:微透析结合高效液相色谱技术可以测定米诺环素的大鼠血浆蛋白结合率,并实现大鼠血液和脑组织中游离米诺环素浓度的动态监测。
结果表明米诺环素易于透过血脑屏障,且能长时间维持较高浓度,从而发挥其神经保护作用。
【总页数】5页(P654-658)【关键词】米诺环素;药动学;血浆蛋白结合率;微透析;高效液相色谱【作者】董文彬;程佳祎;陈爱瑛;郑高利【作者单位】浙江省医学科学院药物研究所;浙江中医药大学药学院【正文语种】中文【中图分类】R964;R917【相关文献】1.基于UPLC-TOF/MS和脑内微透析技术的异嗪皮啶在帕金森病模型大鼠脑内药动学研究 [J], 卢芳;范振群;张颖;周世慧;刘树民;唐波;杨婷婷2.微透析-高效液相色谱法测定大鼠脑脊液中4种氨基酸的含量测定 [J], 韩进;万海同;别晓东;李金辉;张宇燕3.高效液相色谱法分析大鼠脑微透析液中的去甲肾上腺素 [J], 贺赛琳;岳云;张英民;郝建华;郭徽;盛志勇4.微透析和高效液相色谱法测定大鼠脑内天麻素及天麻苷元含量 [J], 吕允凤5.微柱高效液相色谱法测定大鼠脑微透析液中的乙酰胆碱和胆碱 [J], 贾兴元;吴安石;岳云;刘敬忠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
脑蛋白水解物溶液氨基酸含量分析方法研究方案1、仪器与试药1.1 仪器1525型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；Waters1525型泵，Waters2487型检测器，Waters5CH 型柱温箱，WatersBREEZE数据处理软件，水浴恒温器（精度±0.1℃），旋涡器，微量移液器，衍生专用管；CP225D型分析天平（德国）；4umNora-Pak TM C18（3.9mm×150mm，5μm）色谱柱（美国）1.2 药品与试剂16种氨基酸（门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸）由中国药品生物制品检定所提供。
脑蛋白水解物注射液，云南盟生药业有限公司生产，规格10ml/支。
批号：2013、2013、2013.乙腈（HPLC级）；EDTA（分析纯）；磷酸（分析纯）；二乙胺（分析纯）；三水合乙酸钠（分析纯）。
2、方法与结果2.1色谱条件流动相A为AccQTag醋酸—磷酸盐缓冲液；由AccQTagEluent A浓缩制备AccQTag洗脱液,用前稀释10倍（或按以下方法配制：称19.04g三水合乙酸钠，加1000ml纯化水，搅拌，溶解，用50%H3PO4将pH调至5.2，加入1ml 1mg/ml的EDTA溶液，加入2.37ml二乙胺，用50%H3PO4滴定至pH4.95，用水溶性过滤器过滤，超声，脱气，备用。
）；流动相B为60% HPLC级乙腈，按梯度表梯度洗脱；流速1.0ml/min；检测波长为254nm；进样量5μl；柱温38℃。
2.2对照品溶液、供试品溶液的制备分别精密称取16种氨基酸标准品，用纯化水配制成浓度如下表所示的混合溶液。
取上述溶液0.1ml，加纯化水0.9ml，旋涡器混匀，作为对照品溶液；取脑蛋白水解物注射液，加水稀释成含总氮为1mg/ml的溶液，取0.1ml，加纯化水0.9ml,旋涡器混匀，作为供试品溶液。
利用微透析技术在大鼠脑内取样的方法本文通过查询文献并结合笔者的实际操作经验，介绍微透析技术原理，以及利用微透析技术进行清醒大鼠rACC脑区定位取样的方法。
标签：微透析；透析液；立体定位；rACC脑区；大鼠前扣带皮层（anterior cingulate cortex，ACC），尤其是其吻侧部（rostral ACC，rACC）是参与情绪情感反应的重要中枢[1-3]。
已有研究证实，rACC也是伤害性刺激传入高位中枢时形成痛厌恶情绪的重要脑区[4-6]，那么在痛情绪发生时rACC脑区神经元释放的神经递质有何变化是我们所关注的。
微透析技术正是一种可以探究这一問题的手段。
该技术是将灌流取样和透析技术结合起来并逐渐完善的一种从生物活体内进行动态微量生化取样的新技术，具有活体连续取样、动态观察、定量分析、采样量小、组织损伤轻等特点[7]。
目前，微透析技术主要应用于大脑、血液、脊髓等部位[8-11]，通过定位后取样再检测，观察目标神经递质的相对变化，可在麻醉或清醒的生物体上使用。
在清醒生物体上进行微透析实验比起麻醉生物体，取得的样本会更接近于正常生理状态[12]。
但由于动物处于可自由活动的状态，存在很多不确定因素，因此实验中所需的条件和对动物的各种操作均要在不断地摸索和尝试中确定。
笔者通过查询文献并结合作者的实验操作经验，介绍利用微透析技术进行清醒大鼠rACC脑区定位取样的方法，现报道如下。
1 定位1.1 微透析探针的选取微透析探针的供应商有瑞典的CMA公司，美国的BAS公司和日本的EICOM公司，另外也有实验室采用自制的微透析探针。
本实验室采用的是EICOM公司的探针，根据定位脑区的深度和所需检测的目标神经递质的分子量大小（一般检测的神经递质为氨基酸类神经递质和单胺类神经递质），选择所需的探针规格。
EICOM公司的脑组织探针主要有三个系列，本实验室选用的探针样式为A-Z系列带有导管、内芯和导管配套的螺帽，探针规格为管长4 mm，膜长2 mm，膜材料：人造纤维素，50 kDa截留分子量，见图1。
高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液中的酪氨酸和色氨酸含量复方氨基酸注射液是一种透明、无色或微黄色的澄明液体，适用于不能口服或经肠道补给营养，以及营养不能满足需要的患者。
复方氨基酸注射液具有促进人体蛋白质代谢正常，纠正负氮平衡，补充蛋白质，加快伤口愈合的作用。
氨基酸（Amino acid）是构成蛋白质的基本单位，赋予蛋白质特定的分子结构形态，使他的分子具有生化活性[1-4]。
蛋白质是生物体内重要的活性分子，包括催化新陈代谢的酵素和酶。
酪氨酸是一种芳香族氨基酸，亦是20种用来合成蛋白质的蛋白氨基酸之一[5-11]。
色氨酸具有促进胃液及胰液产生的作用。
目前主要生产复方氨基酸注射液的厂家有上海长征富民金山制药XX公司、广东利泰制药XX公司、八峰药化宜昌有限责任公司、石家庄四药XX公司、西南药业XX 公司、湖南科伦制药XX公司、安徽丰原药业XX公司、广东科伦药业XX公司、广东利泰制药XX公司、广州百特侨光医疗用品XX公司等。
本文采用高校液相测定了复方氨基酸注射液中酪氨酸和色氨酸的含量。
1 仪器与试药瑞士梅特勒-托利多MS精密天平（梅特勒-托利多中国公司）；SCQ-1020超声波清洗器（上海声彦超声仪器XX公司）；UltiMate3000 高效液相色谱仪（上海仪先仪器XX公司）；E2000制冷色谱柱温箱（上海子期实验设备XX公司）；UV2800紫外可见分光光度计（上海舜宇恒平科学仪器XX公司）；PHS-3C酸度检测仪（深圳市卡迪亚科技XX公司）；MP-TA-10L 超纯水器（成都优越科技XX公司）。
乙腈（济南汇丰达化工XX公司）、三乙胺（吴江市吉祥精细化工XX公司）、冰醋酸（济南汇丰达化工XX公司）、甲醇（吴江市吉祥精细化工XX公司）、醋酸钠（济南汇丰达化工XX公司）、磷酸二氢钠（吴江市吉祥精细化工XX 公司）、四氢呋喃（济南汇丰达化工XX公司）、磷酸（淄博丰仓化工XX公司）。
2 含量测定2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果[11]，确定色谱条件如下。
高效液相色谱-荧光检测法快速测定脊髓和脑内氨基酸王锦;沈霖霖;曹银祥;钱源;朱大年【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2005(020)005【摘要】目的建立快速测定脊髓和脑内氨基酸浓度的方法.方法通过邻苯二甲醛和β-巯基乙醇柱前衍生、反相高效液相色谱结合荧光(激发波长280 nm,发射波长340 nm)检测氨基酸浓度.用0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(pH值6.00～6.25)和甲醇(46%)混合液(加入四氢呋喃2%)作流动相,流速为1 ml/min.结果在0.1～40.0μmol/L范围内,氨基酸浓度与相对峰面积之间的相关系数(r)均值为0.999 2,日内和日间变异系数(CV)分别为2.41%～5.23%、3.51%～6.48%,平均回收率为90.13%～98.47%.结论本法灵敏度高、快速、简便易行,可用于脊髓和脑内氨基酸测定.【总页数】4页(P424-427)【作者】王锦;沈霖霖;曹银祥;钱源;朱大年【作者单位】复旦大学上海医学院生理与病理生理学系,上海,200032;复旦大学上海医学院生理与病理生理学系,上海,200032;复旦大学上海医学院生理与病理生理学系,上海,200032;复旦大学上海医学院生理与病理生理学系,上海,200032;复旦大学上海医学院生理与病理生理学系,上海,200032【正文语种】中文【中图分类】R446.1【相关文献】1.高效液相色谱-荧光检测法快速测定植物油中的α-生育酚 [J], 寇立娟;李兰晓;王明林;胥洪2.高效液相色谱荧光检测法快速测定天然生育酚中痕量苯并[a]芘 [J], 董新艳;杨亦文3.基于涡流色谱技术的在线固相萃取/高效液相色谱-荧光检测法结合在线稀释快速测定牛奶中5种氟喹诺酮抗生素残留 [J], 张艳海;金燕4.高效液相色谱-荧光检测法快速测定血清中的色氨酸 [J], 王清平;唐爱国5.多环芳烃分子印迹柱-高效液相色谱荧光检测法快速测定烤肉中15种多环芳烃[J], 阳文武;谭顺中;郭娅;周浓因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HPLC测定脑组织和脑脊液中4种氨基酸类神经递质含量的方法改良研究王炜;刘朝;江卫国;王式平;何善述【期刊名称】《华中科技大学学报（医学版）》【年(卷),期】1999(028)002【摘要】谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)等神经递质的代谢异常是诱发多种神经系统疾病的因素之一.由于神经递质在脑内的含量很低,改良建立了一种用HPLC 荧光检测Glu、GABA等4种神经递质的方法,以高丝氨酸为内标,流动相为磷酸缓冲液和甲醇,梯度洗脱20min,荧光检测.分离效果及线性关系良好,Glu、GABA的相关系数分别为0.9969、0.9996;精密度CV批内3.4 %,批间5.6 %;其最小检测限分别为3.3 pmol、1.6 pmol.【总页数】2页(P92-93)【作者】王炜;刘朝;江卫国;王式平;何善述【作者单位】同济医科大学基础医学院生物化学教研室,武汉,430030;同济医科大学附属协和医院中心实验室,武汉,430022;同济医科大学基础医学院生物化学教研室,武汉,430030;同济医科大学基础医学院生物化学教研室,武汉,430030;同济医科大学基础医学院生物化学教研室,武汉,430030【正文语种】中文【中图分类】Q592.5;R322.8【相关文献】1.AQC柱前衍生RP-HPLC荧光法测定颅脑损伤患者脑脊液中氨基酸类神经递质[J], 陈为;柯雪红;杨小催2.OPA柱前衍生RP-HPLC-FLD测定小鼠脑组织中6种氨基酸类神经递质 [J], 黄冰琳3.大鼠脑组织中氨基酸类神经递质的rP—HPLC—UV柱前衍生定？… [J], 祁艳斌;张纬4.RP-HPLC法测定大鼠脑组织及脑脊液中四种氨基酸类神经递质的含量 [J], 周卿;代广会;左巨波;尚京川5.荧光高效液相色谱法测定三种失眠模型大鼠脑组织氨基酸类神经递质的含量 [J], 涂星;郜红利;卢映;吴俊洪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
第25卷第2期2006年3月 分析测试学报FENXI CESH I X UEBAO(J ournal of Ins tru m en talAnal ys i s)V ol 25No 290~92高效液相色谱/电化学法测定大鼠血液和脑组织中单胺类物质的含量谭炳炎1,郑 琳1,冯 翔2(1.中山大学 公共卫生学院 中心实验室,广东 广州 510080;2.中山大学 公共卫生学院 营养学系,广东 广州 510080)摘 要:建立了高效液相色谱/电化学检测法测定大鼠脑组织和血液中单胺递质及其代谢产物的方法。
能同时测定去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、3,4-二羟基苯乙酸(DO PAC)、多巴胺(DA)、高香草酸(HAV)、5-羟色胺(5-HT),并能和内标3,4-二羟卞胺(DHBA)分离良好。
本方法快速、简便,回收率为92%~105%,线性范围2 8~680ng/mL,检出限为0 05ng(S/N=3)。
本方法已应用在服用中药的大鼠下丘脑组织及血液的测定中,数据显示,本法能满足测定要求。
关键词:高效液相色谱;电化学检测;单胺类神经递质中图分类号:O657 1 文献标识码:A 文章编号:1004-4957(2006)02-0090-03D eter m i nati on o fM onoa m i ne T rans m itters i n R at Blood and Brai n T issues byH i gh Perf or m ance L i qu i d Chro m atographyTAN B ing-yan1,Z H E NG Lin1,FE NG X iang2(1.Central L aboratory,Schoo l o f Pub lic H ealth,Sun Y at-sen U n i versity,G uangzhou 510089,China;2.D epart m ent o fNutritiona l Sc i ences,School o f Publi c H ea lth,Sun Y a t-sen U n i versity,G uangzhou 510089,Ch i na) Abstrac:t A m ethod was developed to deter m i n e m onoa m ine trans m itters and their m etabo lites in rat blood and brain tissues by h i g h perfor m ance li q u i d chro m atog raphy w ith electroche m i c al detection.No r-ep i n ephri n e(NE),ep i n rphri n e(E),3,4-d i h ydr oxypheny lacetic acid(DOPAC),dopa m ine hydrochlo-ride(DA),ho m ovan illi c ac i d(HVA),and5-hydr oxytrypta m i n e(5-HT)cou l d be deter m i n ed si m ulta-neously and disti n ctly separated fro m i n ter nal standar d(3,4-dihydroxybenzyla m ine,D H BA)by th is m ethod.The recoveries of these co mpounds w ere bet w een92%and105%and the li n ear range w as2 8-680ng/m L.The detecti o n li m itw as0 05ng(S/N=3).This m ethod was app lied to deter m i n i n gt h e m onoa m i n es i n hypothala mus tissues of rats upon taking traditional Ch i n ese m ed ici n e,and satisfac-to r y resu lts w ere achieved.Key words:H i g h perfor m ance li q u i d chr o m atography;E lectroche m i c al detecti o n;M onoa m ines单胺类神经递质包括去甲肾上腺素(NE),肾上腺素(E),多巴胺(DA),5-羟色胺(5-HT)等物质。
