电泳线常见质量问题

文档来源为:从网络收集整理.word 版本可编辑.欢迎下载支持.1文档来源为:从网络收集整理.word 版本可编辑.欢迎下载支持.琼脂糖凝胶电泳常见问题分析问题可能原因解决方法DNA Marker 降解 核酸酶污染每次吸取时更换灭菌枪头，勿将电泳缓冲液带入管中；用后密闭4°C 保存保存不当4°C 或-20°C 保存，避免多次反复冻融；不可加热DNA Marker 无法正确分离 琼脂糖质量差使用质量可靠的琼脂糖制胶 电泳缓冲液多次使用后失效 更换缓冲液 条带黯淡核酸浓度过低 增加上样量核酸降解使用不含核酸酶的试剂和耗材制备样品 DNA 条带被示踪染料掩盖提高上样量；避免使用与目的片段迁移率相同的示踪染料条带模糊或弥散电泳缓冲液多次使用后失效 更换缓冲液核酸部分降解使用不含核酸酶的试剂和耗材制备样品 核酸样品纯度差，含有DNA 结合蛋白或高浓度的盐份 酚/仿抽提或乙醇沉淀去除蛋白、盐份等杂质电压过低，电泳时间过长根据凝胶大小和电泳缓冲液类型，使用适当的电压进行电泳染色时间过长或拍照前放置过久，DNA 条带弥散电泳结束后及时观察、拍照 条带缺失DNA 条带分子量过大使用脉冲凝胶电泳分子量接近的DNA 条带没有分开 选择适当的凝胶浓度进行电泳电泳缓冲液使用不当SD 和TBE 缓冲液适于分析较小分子量的DNA 片段，大片段分子不能完全分离；TAE 缓冲液不适于分离很小的DNA 片段电泳时间过长或电压过高，DNA 走出凝胶缩短电泳时间，调整电压电极插反，DNA 走出凝胶正确连接电极方向 条带大小不正确核酸降解或形成聚合物加热处理或重新制备样品λ DNA 酶切Marker 的cos 位点复性 电泳前65°C 加热5分钟，冰上冷却5分钟以后再上样相同分子量的DNA 片段由于结构或判断DNA 分子是否有特殊结构，分子是否有特殊结构，如缺口、超如缺口、超序列的差异而有不同的迁移率 螺旋、二聚体等；富含AT碱基的DNA迁移率比同分子量富含GC碱基的DNA片段慢 梳子变形，点样孔不在同一水平线上 使用完好的梳子制胶带型异常 不同样本的上样条件不同 选用相同的上样缓冲液，上样量尽可能接近上样量过大或过小 选择合适大小的上样孔，样品应完全覆盖点样孔底部核酸样品纯度差，含有DNA结合蛋白或高浓度的盐份酚/仿抽提或乙醇沉淀去除蛋白、盐份等杂质电泳缓冲液未完全浸没凝胶 上样和电泳时，确保缓冲液始终能完全覆盖凝胶电压过高或电泳时间过长致使凝胶过热和DNA变性 根据凝胶大小和电泳缓冲液类型，使用适当的电压进行电泳凝胶中加入EB造成染色不均 加入EB时充分混匀或电泳结束后再染色凝胶中有气泡或污染物 使用纯水和洁净容器制胶；缓慢灌胶，并赶除气泡点样孔质量差 待凝胶完全凝聚后再取出梳子小片段扩散,条带模糊,粗 错误选择了低浓度凝胶错误选择了低浓度凝胶,,观察大片段用低浓度凝胶用低浓度凝胶,,观察小片段要用高浓度比如观察100bp的小片段用2%2%凝胶跑电泳凝胶跑电泳 琼脂糖质量不好琼脂糖质量不好,,质量不好的琼脂糖分离小片段容易扩散分离小片段容易扩散,,即使是使用高浓度凝胶换用质量好的琼脂糖选择了不合适的电泳缓冲液 SD和TBE缓冲液适于分析较小分子量的DNA片段，大片段分子不能完全分离；TAE缓冲液不适于分离很小的DNA片段DNA凝胶电泳简介一、实验原理DNA电泳是基因工程中最基本的技术，DNA制备及浓度测定、目的DNA片段的分离，重组子的酶切鉴定等均需要电泳完成。

电泳常见问题及处理方法1.缩孔这类缺陷在湿的漆膜上看不见，当烘干后漆膜表面出现直径通常为0.5-3.0mm漏底微孔、不漏底的火山口状的凹陷，称为陷穴、凹洼，露底者为缩孔，中间有颗粒但不刮手的称为“鱼眼”。

由于电泳漆湿膜中或表面有尘埃、油渍或与电泳涂料不相容的粒子，成为陷穴中心，因而产生涂膜缺陷。

很多情况下这类缺陷还与被涂物的材质有关，如金属底材上存在微裂纹和微孔等。

原因1:外来油污污染电泳漆膜，油污附着在工件表面，使电泳漆成膜受到影响。

这种原因引起缩孔的几率较大。

解决方法:可检查输送机构、挂具,防止油滴污染漆膜。

从电泳设备制造安装开始就要避免上述物质污染，每一种新零件投入电泳前最好进行相关检验，防止受油、硅油、蜡、脂性碳化物、胶水等污染物对工件，电泳设备及电泳槽液的污染。

原因2:前处理除油不干净，造成润湿性不良，使电泳漆烘干后漆膜有缩孔。

解决方法:加强前处理清洗。

原因3:槽液有油污、异物混入，影响电泳漆膜外观。

解决方法:用吸油纸吸去油污，清除槽液内异物，同时避免异物混入，保持电泳槽液清洁原因4:加漆时有电泳漆没搅拌均匀，使槽液无完全熟化，引起漆膜不良。

解决方法:确保加入的电泳漆搅拌均匀，加强槽液循环，使槽液完全熟化原因5:电泳后水洗中含油分或烘干室内不洁净，循环风含油分，使油分附著在漆膜上面烘干后有缩孔。

解决方法:水洗经常更换,烤箱经常清理.烤箱链轨用油可选用耐高温,不会高温挥发为最佳2.针孔工件上有露底针状小孔，称为针孔，它与缩孔的区别是孔径小，中心无异物，且四周无漆膜堆积凹起。

由漆膜再溶解而引起的针孔，称为再溶解针孔；由电泳过程中产生的气体、湿膜脱泡不良而产生的针孔，称为气体针孔；(1)湿膜针孔:工件未进行烘烤,在空气中凉干,可看到的针孔原因1: 电泳电压过高，电流冲击反应过剧，产生气泡过多，或升压速度过快。

解决方法:适当降低电压,加长软启动时间原因2:溶剂含量偏低。

解决方法:添加溶剂，每次添加不能超过1%原因3:槽液温度过低。

关于镀锌件电泳的特殊异常现象关于镀锌件电泳的一此特殊异常现象如图所示的镀锌件电泳，一般情况下电泳涂膜是没问题的。

电泳涂膜质量往往如下所示：均匀完整。

但我们也曾经遇到一批产品，电泳涂膜质量严异常，外观如下图所示：流痕或露底！怎么回事？！是电泳生产线管理控制出了问题？——检查工艺生产管理，各处理槽参数均是正常的！设备当时的运行状态也完全是正常的！且同时生产的其它所有产品，品质都是很正常的！与其它产品同时生产再试样全程跟踪，结果还是一样的！是产品镀层本身的问题？——我们检查来料素材，未能从外观上看出跟以往的产品镀层有何差异。

再者，我们做电泳加工的都知道，客户往往不会接受我们“素材有问题”这样的说法！无论如何，只能我们想办法，交给客户满意的合格品！且不能延误客户交期！退锌处理？——no!no!no!——绝对不可以！那镀锌就失去意义了！关键还在于会导致产品耐蚀性下降！这是绝对不允许的！这也不行！那也不行！！客户又催着要货怎么办？是不是很困惑？关于镀锌件的电泳涂装，有的电泳线做得很好，但不一定知道为什么做好了？不知道会有什么因素会导致做不好？很有可能也有一天会碰到上述异常的困惑！有的电泳厂则是怎么也做不好，于是想方设法去“偷学”——看看别人是怎么做好的？！可由于各自的工艺、设备、处理材料、工艺参数均并不完全相同，对比来对比去、做来做去仍是一头雾水，始终找不到问题的根源及解决对策！万般无奈之下，于是干脆酸洗退锌当冷轧板电泳，这是相当不可取的做法啦！虽然外观上看起来是很正常，但如真拿去做测试可就有问题了，比如做循环腐蚀测试，前期介绍过，其中有一个要求——交变腐蚀测试进行到5个循环周期时，整个工件是不允许起任何红锈的——包括锐边、孔角位等！我们做电泳的大多知道，纯冷轧钢板的电泳件，边角位的防腐蚀是最薄弱的，就是只做盐雾测试，48小时也是很难保证不起红锈，更甭说5个交变测试了！镀锌材料件就能做到吗？看看下图便知一二，这是纯镀锌件未作电泳就进行144小时盐雾测试后的结果：由此图我们可以看到锌层的保护作用，连边角位都没起任何红锈！这就是为什么有的汽车厂明确规定什么材料必须是镀锌板的初衷！那如保障镀锌件电泳涂膜的品质？常规来讲，无非也就从脱脂、磷化、电泳等这几道工序着手，找对根因，针对性处理！。

琼脂糖凝胶电泳条带不清晰的原因琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分析和分离生物大分子的方法。

然而，有时候在进行琼脂糖凝胶电泳实验时，我们可能会遇到条带不清晰的问题，这给结果的解读和分析带来了困扰。

下面我将介绍一些可能导致琼脂糖凝胶电泳条带不清晰的原因。

1. DNA样品质量不佳琼脂糖凝胶电泳的前提是获得高质量的DNA样品。

如果DNA样品质量不佳，比如存在脏带、降解或者污染，都会导致条带不清晰。

因此，在进行实验之前，我们需要对DNA样品进行质控，确保其质量符合要求。

2. 样品预处理不当在进行琼脂糖凝胶电泳之前，我们通常需要对DNA样品进行一些预处理，比如酶切、PCR扩增或者纯化等。

如果预处理过程中存在问题，比如酶切反应时间过长、PCR扩增过程中出现非特异性扩增等，都会导致条带不清晰。

3. 聚丙烯酰胺凝胶浓度选择不当琼脂糖凝胶电泳中，聚丙烯酰胺凝胶的浓度是影响条带清晰度的重要因素之一。

一般来说，较低浓度的凝胶适用于较大的DNA片段分离，而较高浓度的凝胶适用于较小的DNA片段分离。

如果选择的凝胶浓度不合适，就会导致条带模糊不清。

4. 电泳条件设置不当电泳条件的设置也是影响琼脂糖凝胶电泳结果的重要因素。

比如，电泳电压、电泳时间和电泳缓冲液的配制等都会影响条带的清晰度。

如果电压过高或者电泳时间过长，都会导致条带模糊不清。

此外，如果电泳缓冲液的配制不正确，比如pH值不稳定或者离子浓度不合适，也会影响条带的清晰度。

5. 负载样品量过多或过少在进行琼脂糖凝胶电泳时，负载样品量的选择也是非常关键的。

如果负载样品量过多，会导致条带扩散，模糊不清；如果负载样品量过少，条带可能会变得非常弱或者根本看不到。

因此，在进行负载样品时，需要根据实验的需要选择适当的样品量。

琼脂糖凝胶电泳条带不清晰的原因可能是多方面的，包括DNA样品质量不佳、样品预处理不当、聚丙烯酰胺凝胶浓度选择不当、电泳条件设置不当以及负载样品量过多或过少等。

在进行琼脂糖凝胶电泳实验时，我们需要仔细检查每一个步骤，确保实验条件的准确性和合理性，从而获得清晰可靠的结果。

DNA电泳常见问题分析DNA电泳常见问题凝胶电泳操作注意事项1、琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。

2、凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶化的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。

倒入板中的凝胶应避免出现气泡，以免影响电泳结果。

3、电泳缓冲液：为保持电泳所需的离子强度和pH，应经常更新电泳缓冲液但是上样量过多会造成加样孔超载，从而导致拖尾或弥散，对于较大的DNA此现象更明显。

5、DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。

6、DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分子的形状及大小。

采用不同浓度的凝胶有可能分辩范围广泛的DNA分子，制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度。

小片段DNA的检测应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，以提高分辨率。

7.选择的实验材料要新鲜，处理时间不易过长。

8.在加入细胞裂解缓冲液前，细胞必须均匀分散，以减少DNA团块形成。

9. 提取的DNA不易溶解：不纯，含杂质较多；加溶解液太少使浓度过大。

沉淀物太干燥，也将使溶解变得很困难。

10. 电泳检测时DNA成涂布状：操作不慎；污染核酸酶等。

11.分光光度分析DNA的A280/A260小于1.8；不纯，含有蛋白质等杂质。

在这种情况下，应加入SDS至终浓度为0.5%，并重复步骤2～8。

12.酚/氯仿/异戊醇抽提后，其上清液太黏不易吸取：含高浓度的DNA，可加大抽提前缓冲液的量或减少所取组织的量DNA电泳常见问题分析之一1 请问配制聚丙烯酰胺凝胶电泳胶时，促凝的是TEMED还是过硫酸铵？胶聚时间很长如何解决？过硫酸铵提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所需的自由基，而TEMED通过催化过硫酸铵形成自由基而加速它俩的聚合。

胶聚合时间长可能是TEMED失效了，过硫酸铵固体时间过久也会失效的。

一个让PAGE胶很快聚合的方法：不要先配AP（过硫酸铵）溶液，因为AP很容易变质。

dna电泳maker条带缺失1 DNA电泳 maker 条带缺失DNA电泳是一种常用的分子生物学实验技术，它主要用于分离和检测DNA分子。

在DNA电泳实验中，使用DNA电泳marker来作为分子大小的标准，帮助确定待测DNA分子的大小。

然而，在实验中，有时候会出现DNA电泳marker条带缺失的情况。

本文将探讨DNA电泳marker条带缺失的原因以及可能的解决方法。

1. DNA电泳marker条带缺失的原因DNA电泳marker条带缺失可能由多种因素导致，下面列举了一些常见原因：1.1 质量问题：DNA电泳marker可能存在质量问题，例如经过长时间保存后，DNA电泳marker中的DNA分子可能会降解或损坏，导致条带缺失。

1.2 电泳条件问题：DNA电泳过程中的温度、电压和电泳缓冲液等条件可能会对DNA电泳marker的分离和显示产生影响。

不恰当的电泳条件可能导致marker分子无法正确显示出来。

1.3 操作失误：在实验过程中，操作者可能会犯一些错误，例如在加载样品时，未正确加载DNA电泳marker，或者加载不均匀，从而导致marker条带缺失。

2. 解决DNA电泳marker条带缺失的方法当发现DNA电泳marker出现条带缺失时，可以尝试以下方法来解决这个问题：2.1 更换DNA电泳marker：首先，可以尝试更换新的DNA电泳marker，确保其质量良好。

使用新的marker进行电泳实验，观察是否还存在条带缺失情况。

2.2 检查电泳条件：检查电泳条件是否设置正确。

确保电泳缓冲液的配制正确，电泳槽中的温度和电压设置适宜。

调整这些条件，重新运行电泳实验，观察是否可以解决条带缺失问题。

2.3 加载样品的均匀性：确保在加载样品时，将DNA电泳marker 均匀加载到电泳凝胶中。

避免在操作过程中产生空白或重叠的区域，以免影响marker的显示。

2.4 检查电泳凝胶的质量：检查电泳凝胶的制备是否正确。