RNA干扰HDAC7表达在肝细胞癌中的作用
- 格式：pdf
- 大小：506.82 KB
- 文档页数：7
HDAC7RNA i-
。 哺 乳 动 物 HDACs 根 据 酵 母 中 不 同 HDACs 类 ) 和 沉 默信 类。
的结 构 同 源 性 划 分 为 还 原 性 钾 依 赖 蛋 白 3 ( 第 类 )、 组蛋白 去乙 酰 化 酶 1 ( 第 息调 节蛋白 2 ( 第 !类 ) 键 性作 用 的 基因 括胰 腺 癌
H DA C7RNA i-
Com pared w ith the contro l group th e rate of cell
group,
the expressio n o f H DAC 7 w as downregulated,
H DA C7RNA i+
grow th inh ib ition and apoptosis in th e pS UPER pressio n o f p 21 and H I F 1 MM P 10 in the pSUPER
用 。 方 法 : 体 外 构 建 pSU PER HDA C7 反 转 录 病 毒 干 扰 质 粒 , 分 为 pSUPERH DAC7RNA i+ 组 ( 有 效 干 扰 ) 、 pSUPERH DAC7RNA i- 组 ( 无 效 干 扰 ) 和 对 照 组 ( pSUPER 空 载 体 ) , 转 染 人 肝 癌 细 胞 H epG 2 和 人 微 血 管 内 皮 细 胞 ( hum an m icrov ascu la r endothelia l ce ll, HM EC 1) 。 W estern 免 疫 印 迹检 测 HDAC 7, p21, 细 胞 周 期 素 E ( cyc lin E ) 、 基 质 金 属 蛋 白 酶 10 ( m a trix m eta lloprote inases 1 0, MM P 1 0 ) 、 低 氧 诱 导 因 子 1 ( hypox ia inducible fac tor 1 , H I F 1 ) 蛋 白 表 达 , 采 用 3 ( 4, 5 二 甲 基 噻 唑 2 ) 2, 5 二 苯 基 四 氮 唑 溴 盐 [ 3 ( 4, 5 di m ethylth ia zol 2 y l) 2, 5 d ipheny ltetrazo lium b ro m ide, M TT ] 、 流式细胞术、 体内裸鼠皮下种植、 体外血管内 皮细胞二维 成 管 方 法 检 测 HDA C 7 表 达 的 作 用 。 结 果 : 与 pSU PERHDAC7RNA i- 组 和 对 照 组 相 比 , pSU PERH DAC7RNA i+ 组 细 胞 HDA C7 蛋 白 表 达 抑 制 , 细 胞 生 长 抑 制 率 和 凋 亡 率 明 显 增 加 , 差 异 具 有 统 计 学 意 义 ( P < 0. 05 ) ; 且 H IF 1 和 p 21 蛋 白 表 达 上 调 , cyc lin E 蛋 白 和 MM P 1 0 表 达 下 调 , 差 异 具 有 统 计 学 意 义 ( P < 0. 05 ) 。 结 论 : HDA C7 蛋 白 通 过 上 调 p 21 和 H IF 1 蛋 白 表 达 、 下 调 cyc lin E 及 MM P 1 0 蛋 白 表 达 , 介 导 肝 癌 细 胞 凋 亡 和 血管成管。 [ 关键词 ] 肝细胞癌; 组 蛋 白 去 乙 酰 化 酶 7; 组蛋白乙酰化; 血管成管 DO I : 10. 3 969 / j. issn. 1 672 734 7. 2 010. 07. 0 12
718
中南大学学报 ( 医学版 ) J C en t Sou th Un iv (M ed S ci )
2010, 35 ( 7)
http : / / xbyx. xysm. n et
RNA 干扰 HDAC7表达在肝细胞癌中的作用
张 鸽文 , 王 志明
( 中 南 大 学 湘 雅 医 院 普 外 科 , 长 沙 41 000 8 ) [ 摘要 ] 目 的 : 探 讨 组 蛋 白 去 乙 酰 化 酶 7 ( h istone deace ty lase 7, HDAC 7 ) 在 肝 细 胞 癌 发 生 发 展 中 的 作
RNA 干扰 HDA C7表达在肝细胞癌中的作用
张鸽文 , 等
719
sio n of HDAC 7 prote in p la ys an i m portant ro le in the apoptosis and vascular tubu lo genesis of hepato ce llu lar carcinom a by the upregulation of p21 and H IF 1 MM P 10. K ey w ords: bulogenesis hepatoce llular carcin om a; h istone deacety lase 7; histone deacety lation; tu and the downregulat io n o f cyclin E and
[ 1]
1. 2
实验分组 转 染 细 胞 实 验 分 为 3 组 : ( 1 ) pSUPER
HDAC7RNA i+ HDAC7RNA i-
组 。 HDAC 7 表 达 有 效 干 扰 ; ( 2 ) pSUPER
组 。 HDAC 7 表 达 干 扰 无 效 ; ( 3 ) 对 照 组 。 转 染 pSUPER 空 载 体 , 每 组 实 验 重 复 3 次 。 4 周 龄 BALB / c nu / nu 裸 鼠 在 恒 温 ( 2 5 ∀ ~ 2 7 ∀ ) 、 恒 湿 ( 4 5% ~ 5 0% ) 、 新 鲜 空 气高 度 除 尘、 除 菌、 无 特 殊病原 体 环境 下 饲 养。 动 物置 于 专 用 培 养箱 内 , 安放于层 流 式 超净 架 内, 以 上述 3 组 转 染细 胞 于裸鼠皮下种植 , 每组数量为 3只 。 1. 3 方法 细胞培养 H epG 2 细 胞 系 、N I H 3T 3 细 胞 和 PT 6 7 包 装 细 胞 采 用 含 1 0% 特 级 胎 牛 血 清 的 高 糖 DM EM 培 养 基 进 行 培 养 。 人 微 血 管 内 皮 细 胞 系 HM EC 1 采 用 含 1 0% 特 级 胎 牛 血 清 的 低 糖 DM EM 培 养 基 , 置 于 3 7 ∀ 和 5% CO2 条 件 下 培 养 。 1. 3. 2 引物设计 根 据 GenBank 中 HDAC 7 c DNA ( H um an, NM _ 0 0 1 0 9 8 4 1 6 ) 完 整 序 列 , 参 考 siRNA 的 设 计 策 略 , 利 用 Amb ion 公 司 提 供 的 在 线 工 具 设 计 , DNA 片 段 由 上 海 生 物 工 程 公 司 合 成 。 pSUPER
收稿日期 ( Da te of recep tion)
2010- 02- 01 王志明 , E m ai: l zyxh888 @ 163. com
作者简介 ( B iography) 张鸽文 , 博士 , 主治医师 , 主要从事普外科临床与基础的研究。 通信作者 ( Correspond ing author)
[ 4] [ 3] [ 2]
1. 3. 1
。 HDAC7 归 属 第
新 的 研 究 发 现 , HDAC7 是 维 持 血 管 完 整 性 中 起 关 , 在多 种 肿瘤 中 呈 高表 达, 包
[ 5]
、 乳腺癌
等 。 然 而 , HDAC 7 在 肝 细
胞 癌 ( hepatocellu lar carc inoma, HCC ) 发 生 发 展 中 的 作 用 , 目 前 尚 未 见 报 道 。 本 文 通 过 构 建 HDAC 7 干 扰 质 粒 , 从 体 内 和 体 外 两 方 面 研 究 HDAC 7 在 HCC 发生 发展中的作用 。
Abstract :
Ob jective
T o investigate th e ro le o f h istone deacetylase 7 ( HDAC 7 ) in the
occurrence and develop m ent o f hepatoce llular carcinom a. M e thods H epG 2 ce lls and hu m an m icro vascular endothe lial ce lls ( HM EC 1 ) w ere d iv id ed in to 3 groups after transfection pSUPER HDAC 7 retrov ira l in terference p la sm id: a pSUPER
H DAC7RNA i&PER
H DAC7RNA i-
group,
and a
pS UPER group as the control group. T he expression of HDAC 7, p2 1, cyc lin E, m atrix m eta llo pro teinases 10 ( MM P 10 ) , and hypox iainducible factor 1 ( H IF 1 ) w ere detected by W estern blot. The expression of HDAC 7 in cell lines w as deter m ined by 3 ( 4, 5 D i m ethy lth iazo l 2 yl ) 2, 5 di phenyltetrazo lium brom id e ( MTT ) and flow cytom etry, the nude m ice m odle, and vascular endotheli al cells 2 di m ensio na l tubu lo genesis in v itro and in v iv o. R esu lts and th e pS UPER
。 哺 乳 动 物 HDACs 根 据 酵 母 中 不 同 HDACs 类 ) 和 沉 默信 类。
的结 构 同 源 性 划 分 为 还 原 性 钾 依 赖 蛋 白 3 ( 第 类 )、 组蛋白 去乙 酰 化 酶 1 ( 第 息调 节蛋白 2 ( 第 !类 ) 键 性作 用 的 基因 括胰 腺 癌
H DA C7RNA i-
Com pared w ith the contro l group th e rate of cell
group,
the expressio n o f H DAC 7 w as downregulated,
H DA C7RNA i+
grow th inh ib ition and apoptosis in th e pS UPER pressio n o f p 21 and H I F 1 MM P 10 in the pSUPER
用 。 方 法 : 体 外 构 建 pSU PER HDA C7 反 转 录 病 毒 干 扰 质 粒 , 分 为 pSUPERH DAC7RNA i+ 组 ( 有 效 干 扰 ) 、 pSUPERH DAC7RNA i- 组 ( 无 效 干 扰 ) 和 对 照 组 ( pSUPER 空 载 体 ) , 转 染 人 肝 癌 细 胞 H epG 2 和 人 微 血 管 内 皮 细 胞 ( hum an m icrov ascu la r endothelia l ce ll, HM EC 1) 。 W estern 免 疫 印 迹检 测 HDAC 7, p21, 细 胞 周 期 素 E ( cyc lin E ) 、 基 质 金 属 蛋 白 酶 10 ( m a trix m eta lloprote inases 1 0, MM P 1 0 ) 、 低 氧 诱 导 因 子 1 ( hypox ia inducible fac tor 1 , H I F 1 ) 蛋 白 表 达 , 采 用 3 ( 4, 5 二 甲 基 噻 唑 2 ) 2, 5 二 苯 基 四 氮 唑 溴 盐 [ 3 ( 4, 5 di m ethylth ia zol 2 y l) 2, 5 d ipheny ltetrazo lium b ro m ide, M TT ] 、 流式细胞术、 体内裸鼠皮下种植、 体外血管内 皮细胞二维 成 管 方 法 检 测 HDA C 7 表 达 的 作 用 。 结 果 : 与 pSU PERHDAC7RNA i- 组 和 对 照 组 相 比 , pSU PERH DAC7RNA i+ 组 细 胞 HDA C7 蛋 白 表 达 抑 制 , 细 胞 生 长 抑 制 率 和 凋 亡 率 明 显 增 加 , 差 异 具 有 统 计 学 意 义 ( P < 0. 05 ) ; 且 H IF 1 和 p 21 蛋 白 表 达 上 调 , cyc lin E 蛋 白 和 MM P 1 0 表 达 下 调 , 差 异 具 有 统 计 学 意 义 ( P < 0. 05 ) 。 结 论 : HDA C7 蛋 白 通 过 上 调 p 21 和 H IF 1 蛋 白 表 达 、 下 调 cyc lin E 及 MM P 1 0 蛋 白 表 达 , 介 导 肝 癌 细 胞 凋 亡 和 血管成管。 [ 关键词 ] 肝细胞癌; 组 蛋 白 去 乙 酰 化 酶 7; 组蛋白乙酰化; 血管成管 DO I : 10. 3 969 / j. issn. 1 672 734 7. 2 010. 07. 0 12
718
中南大学学报 ( 医学版 ) J C en t Sou th Un iv (M ed S ci )
2010, 35 ( 7)
http : / / xbyx. xysm. n et
RNA 干扰 HDAC7表达在肝细胞癌中的作用
张 鸽文 , 王 志明
( 中 南 大 学 湘 雅 医 院 普 外 科 , 长 沙 41 000 8 ) [ 摘要 ] 目 的 : 探 讨 组 蛋 白 去 乙 酰 化 酶 7 ( h istone deace ty lase 7, HDAC 7 ) 在 肝 细 胞 癌 发 生 发 展 中 的 作
RNA 干扰 HDA C7表达在肝细胞癌中的作用
张鸽文 , 等
719
sio n of HDAC 7 prote in p la ys an i m portant ro le in the apoptosis and vascular tubu lo genesis of hepato ce llu lar carcinom a by the upregulation of p21 and H IF 1 MM P 10. K ey w ords: bulogenesis hepatoce llular carcin om a; h istone deacety lase 7; histone deacety lation; tu and the downregulat io n o f cyclin E and
[ 1]
1. 2
实验分组 转 染 细 胞 实 验 分 为 3 组 : ( 1 ) pSUPER
HDAC7RNA i+ HDAC7RNA i-
组 。 HDAC 7 表 达 有 效 干 扰 ; ( 2 ) pSUPER
组 。 HDAC 7 表 达 干 扰 无 效 ; ( 3 ) 对 照 组 。 转 染 pSUPER 空 载 体 , 每 组 实 验 重 复 3 次 。 4 周 龄 BALB / c nu / nu 裸 鼠 在 恒 温 ( 2 5 ∀ ~ 2 7 ∀ ) 、 恒 湿 ( 4 5% ~ 5 0% ) 、 新 鲜 空 气高 度 除 尘、 除 菌、 无 特 殊病原 体 环境 下 饲 养。 动 物置 于 专 用 培 养箱 内 , 安放于层 流 式 超净 架 内, 以 上述 3 组 转 染细 胞 于裸鼠皮下种植 , 每组数量为 3只 。 1. 3 方法 细胞培养 H epG 2 细 胞 系 、N I H 3T 3 细 胞 和 PT 6 7 包 装 细 胞 采 用 含 1 0% 特 级 胎 牛 血 清 的 高 糖 DM EM 培 养 基 进 行 培 养 。 人 微 血 管 内 皮 细 胞 系 HM EC 1 采 用 含 1 0% 特 级 胎 牛 血 清 的 低 糖 DM EM 培 养 基 , 置 于 3 7 ∀ 和 5% CO2 条 件 下 培 养 。 1. 3. 2 引物设计 根 据 GenBank 中 HDAC 7 c DNA ( H um an, NM _ 0 0 1 0 9 8 4 1 6 ) 完 整 序 列 , 参 考 siRNA 的 设 计 策 略 , 利 用 Amb ion 公 司 提 供 的 在 线 工 具 设 计 , DNA 片 段 由 上 海 生 物 工 程 公 司 合 成 。 pSUPER
收稿日期 ( Da te of recep tion)
2010- 02- 01 王志明 , E m ai: l zyxh888 @ 163. com
作者简介 ( B iography) 张鸽文 , 博士 , 主治医师 , 主要从事普外科临床与基础的研究。 通信作者 ( Correspond ing author)
[ 4] [ 3] [ 2]
1. 3. 1
。 HDAC7 归 属 第
新 的 研 究 发 现 , HDAC7 是 维 持 血 管 完 整 性 中 起 关 , 在多 种 肿瘤 中 呈 高表 达, 包
[ 5]
、 乳腺癌
等 。 然 而 , HDAC 7 在 肝 细
胞 癌 ( hepatocellu lar carc inoma, HCC ) 发 生 发 展 中 的 作 用 , 目 前 尚 未 见 报 道 。 本 文 通 过 构 建 HDAC 7 干 扰 质 粒 , 从 体 内 和 体 外 两 方 面 研 究 HDAC 7 在 HCC 发生 发展中的作用 。
Abstract :
Ob jective
T o investigate th e ro le o f h istone deacetylase 7 ( HDAC 7 ) in the
occurrence and develop m ent o f hepatoce llular carcinom a. M e thods H epG 2 ce lls and hu m an m icro vascular endothe lial ce lls ( HM EC 1 ) w ere d iv id ed in to 3 groups after transfection pSUPER HDAC 7 retrov ira l in terference p la sm id: a pSUPER
H DAC7RNA i&PER
H DAC7RNA i-
group,
and a
pS UPER group as the control group. T he expression of HDAC 7, p2 1, cyc lin E, m atrix m eta llo pro teinases 10 ( MM P 10 ) , and hypox iainducible factor 1 ( H IF 1 ) w ere detected by W estern blot. The expression of HDAC 7 in cell lines w as deter m ined by 3 ( 4, 5 D i m ethy lth iazo l 2 yl ) 2, 5 di phenyltetrazo lium brom id e ( MTT ) and flow cytom etry, the nude m ice m odle, and vascular endotheli al cells 2 di m ensio na l tubu lo genesis in v itro and in v iv o. R esu lts and th e pS UPER
