小鼠一氧化氮合成酶(NOS)说明书

一氧化氮测定指标
一氧化氮（NO）的测定指标通常包括以下几个方面：
1. NO 浓度：直接测量样品中NO 的浓度，常用单位为ppm（百万分之一）或μM（微摩尔/升）。

2. NO 代谢产物：例如硝酸盐（NO3-）和亚硝酸盐（NO2-），它们可以作为NO 生物活性的指标。

3. NOS（一氧化氮合酶）活性：NOS 是合成NO 的酶，测定其活性可以间接反映NO 的产生情况。

4. NO 依赖性血管舒张：通过观察血管对NO 的反应，评估血管内皮功能和血管舒张能力。

这些指标可以通过不同的实验方法来测定，例如化学分析、酶联免疫吸附法、气相色谱法、荧光法等。

具体的测定方法和指标选择会根据研究目的和实验条件而有所不同。

测定一氧化氮的指标在生物学、医学和环境科学等领域都有重要意义。

例如，在心血管研究中，NO 与血管舒张和血液循环有关；在免疫系统中，NO 参与炎症和免疫反应；在环境监测中，NO 可能与空气污染和健康问题相关。

诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与寄生虫感染转载自中国科技信息网一氧化氮(NO)在体内由L－精氨酸在一氧化氮合成酶(NOS)的催化下生成。

它是一种重要的信使分子, 参与血管、气道平滑肌的调节,神经递质的传递,细胞杀伤, 肿瘤细胞的溶解及内分泌激素的释放过程, 与许多疾病的发生、发展密切相关; 既在机体多个系统多种细胞中具有广泛的生理功能，又可能参与多种疾病的发生过程。

NOS是合成NO的唯一限速酶，寄生虫感染时，动物机体内由其诱发产生各种细胞因子，细胞因子激发一氧化氮合酶基因,其转录产生iNOS (inducible nitricoxide synthase)mRNA,由iNOSmRNA指导一氧化氮合酶生成。

本文就NOS的类型和iNOS的表达及NO的生成和NO对寄生虫的作用以及影响NO抗寄生虫感染的因素做一简要综述。

1 NOS的类型和iNOS的表达及NO的生成许多研究表明,NO 是一种重要的细胞内信使和新的神经递质, 又是效应分子[1]。

它介导并调节多种生理机制, 在呼吸系统、神经系统、炎症和免疫反应中起着重要的作用, 但也导致病理生理状态。

由于NO 可在数种哺乳动物细胞内产生, 在体内又具有广泛的生理作用, 因而这种化学结构如此简单的小分子被美国《Science》杂志评为1992 年年度分子[2]。

NOS 根据所在组织类型，在细胞中的分布，效应方式，组织表达，对Ca 2＋/钙调蛋白的依赖性及对不同激动剂的反应，可分为以下3种类型[3]: I型:神经型NOS （ncNOS )，首先于脑组织中发现，所产生的NO为神经递质，也可能作为神经和血管之间的间介物。

为结构表达。

Ⅱ型:可诱导型NOS (iNOS)，主要存在于单核/巨噬细胞系统、肝脏、平滑肌、神经胶质细胞中，另外在内皮细胞、神经元中也有分布。

为非结构表达。

Ⅲ型:上皮型NOS(ecNOS)，存在于血管内皮细胞，与ncNOS类似，为结构表达，对Ca2＋/钙调蛋白依赖，分布于胞浆中。

夏科雷登氏结晶蛋白(CLC)ELISA试剂盒说明书本试剂仅供研究使用标本：体液夏科雷登氏结晶蛋白(CLC)ELISA试剂盒说明书试验原理：BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。

先将BFGF和生物素标记的抗体同时温育。

人碱性成纤维细胞生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。

再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。

产生颜色。

颜色的深浅和样品中BFGF的浓度呈比例关系。

夏科雷登氏结晶蛋白(CLC)ELISA试剂盒说明书自备材料1．蒸馏水。

2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3．振荡器及磁力搅拌器等。

安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。

一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

夏科雷登氏结晶蛋白(CLC)ELISA试剂盒说明书操作注意事项1．试剂应按标签储存，使用前恢复到室温。

稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3．不用的其它试剂应包装好或盖好。

不同批号的试剂不要混用。

保质前使用。

4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。

使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。

底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

避免用手接触，有毒。

实验完成后应立即读取OD值。

8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9．按照中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

夏科雷登氏结晶蛋白(CLC)ELISA试剂盒说明书样品收集、处理及保存方法1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。

二、一氧化氮（NO）一氧化氮（NO）是一种简单的气体分子，可在哺乳类神经细胞内经一氧化氮合酶（NOS）作用产生。

它兼有第二信使和神经递质的功能，是一种新的细胞间信息传递的重要载体，广泛参与了生理的调节，并在中枢与周围神经系统中发挥神经传导作用。

NO 是一种极不稳定的生物自由基，分子小，结构简单，常温下为气体，微溶于水，具有脂溶性，可快速透过生物膜扩散，生物半衰期只有3－5s，其生成依赖于一氧化氮合成酶（nitric oxide synthase, NOS ）。

前体：L-精氨酸合成：在NOS的作用下，精氨酸首先水解，再氧化生成瓜氨酸和NO。

瓜氨酸再通过精氨酸代琥珀酸重新合成精氨酸。

失活：NO在体内可被氧自由基、血红蛋白、氢醌迅速灭活，极易与氧反应生成NO2 ，在中性体液中转化为NO3-而丧失生物活性。

（一）、NOS有两型3种：一型为依赖于 Ca2+ 和钙调蛋白（CAM）的结构型NOS（cNOS），包括神经元型NOS （nNOS ）和内皮细胞型NOS（eNOS ）；二型是不依赖于Ca2+和CAM的诱导型NOS （iNOS ）。

通过定量PCR测定，证实了大鼠 NOS mRNA广泛分布于中枢和外周组织中，其中以小脑的含量为最高；在外周组织中，以肾脏含量为最高，其次为心脏和肺。

（二）、NOS抑制剂：L-Nω-硝基精氨酸甲酯（L-NAME）NG-甲基-L-精氨酸（L-NMMA）N-硝基-L-精氨酸（L-NNA ）氨基胍（AG）选择性抑制 iNOS硝基吲唑（7-NI）选择性抑制 nNOS非对称性二甲基精氨酸（ADMA）和L-单甲基精氨酸（L-MMA）选择性抑制内源性NOS 作用方式：一是通过扩散进入靶细胞，与细胞内特殊的靶分子相互作用，当NO与鸟甘酸环化酶（GC）作用而激活后者，产生环磷酸鸟苷（cGMP），随着细胞内cGMP水平的升高而激活一系列生理和生化过程。

另一个途径是激活二磷酸腺苷（ADP），促进ADP-核糖基直接与受体分子结合。

作者： 徐畅;安书成
作者机构： 陕西师范大学生命科学学院;陕西师范大学生命科学学院 硕士研究生西安
710062;教授西安 710062
出版物刊名： 当代教师教育
页码： 115-118页
主题词： 一氧化氮 一氧化氮合酶 测定
摘要： 一氧化氮(NO)作为细胞间及细胞内的信息物质,在机体的生理、病理过程中有重要的作用。

一氧化氮合酶(NOS)是NO生成过程中必需的酶,在生物体内有广泛分布,随着NO的研究日益深入,测定生物体NO及NOS的方法显得尤为重要。

本文介绍了常用的研究NOS、测定硝酸盐/亚硝酸盐及直接测定NO的几种方法。

一氧化氮合酶解偶联
一氧化氮合酶（Nitric Oxide Synthase，简称NOS）是一种能够催化产生一氧化氮（NO）和L-瓜氨酸的酶。

在正常的生理条件下，NOS通过氧化L-精氨酸来生成NO，这个过程需要NADPH、FAD、FMN以及四氢生物喋呤（BH4）等辅因子的参与，并且是一个耦合的过程，即电子从NADPH经FAD和FMN传递给血红素中心的氧分子，生成NO和L-瓜氨酸。

然而，在某些情况下，NOS可能会发生解偶联（Uncoupling），即电子传递链中的某个环节出现问题，导致电子不能正常地传递给氧分子，而是泄漏到氧分子以外的其他受体上，如分子氧，生成超氧阴离子（O2•−）等活性氧类物质。

这种现象被称为NOS 解偶联。

NOS解偶联的发生可能与多种因素有关，如BH4的缺乏或氧化、NADPH的缺乏、钙离子的浓度变化、酶的结构改变等。

当NOS发生解偶联时，它不仅不能正常地生成NO，还会产生大量的活性氧类物质，这些物质可能对细胞造成氧化应激损伤，从而引发多种疾病，如心血管疾病、神经退行性疾病、炎症性疾病等。

因此，维持NOS的正常耦合状态对于维持生理功能和预防疾病具有重要意义。

这可以通过提供充足的辅因子、保持适当的钙离子浓度、避免氧化应激等方式来实现。

一氧化氮（NO）信号通路研究一氧化氮合酶（NOS）抑制剂研究背景：一氧化氮（ NO ）是自分泌和旁分泌的信号通路分子，可以扩散进入生物膜。

发挥作用时间很短（几秒钟），主要的生理功能是促进血管动态平衡。

它能够抑制平滑肌收缩生长，阻止血小板凝聚以及防止白细胞 - 内皮细胞粘附。

另外它还参与免疫防御系统，神经传递，血管生成等过程。

NO 的下游靶标包括鸟苷酸环化酶和NF-κB，前者可以提高 cGMP 水平，后者在 iNOS 基因表达作为重要的转录因子。

体内 NO 水平和信号失调常发生于某些疾病状态。

糖尿病病人具有低于全球的 NO 水平，动脉粥样硬化常常会导致 NO 信号通路受损。

因此对 NO 信号通路的研究极具意义。

NO信号通路与NOS合酶：一氧化氮（ NO ）是由一氧化氮合酶（ NOS ）氧化 L- 精氨酸产生的，由于 NO 半衰期非常短（约5s ），为此大多数对 NO 功能的研究都是以 NOS 活性的调控为基础。

开发以 NOS 为靶标的抑制剂不仅能很好的阐明 NO 信号通路作用机制，也是开发 NO 引起的疾病治疗药物的重要思路。

►总NOS（一氧化氮合酶）抑制剂表 1 总NOS（一氧化氮合酶）抑制剂体目前发现参与 NO 正常生理或病理过程的有三种类型的 NOS ，分别是： nNOS (neuronal/Type I/NOS-1/bNOS) ， eNOS (endothelial/Type III/NOS-3) 和iNOS (inducible/Type II/NOS-2) 。

►n NOS（神经一氧化氮合酶）抑制剂n NOS ，与 iNOS 和 eNOS 一起催化 L- 精氨酸和分子氧产生 NO 和 L- 瓜氨酸。

体内钙离子浓度超过 100 nm 可激活酶活性，酶的催化反应需要辅助因子四氢生物喋呤（H4B）、黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）、黄素单核苷酸(FMN)和NADPH的参与。

nNOS 的转录调控机制非常复杂， nNOS 基因通过可变启动子、选择性剪切、盒式插入 / 缺失、 3'-UTR 切割位点的变化和聚腺苷酸化等方式产生多种 mRNA 转录子，进而引起氨基酸序列的变化，从而翻译产生不同结构和功能特征的 nNOS 亚型。