血管内皮细胞生长因子和血管生成与胃癌发展的关系
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血管内皮细胞生长因子和血管生成与胃癌发展的关系
关键词：胃肿瘤；内皮生长因子；新生血管化；肿瘤转移
中华病理学杂志980410 【摘要】 目的 探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)和血管生成与胃癌发展的关系。方法 应用免疫组织化学和原位分子杂交技术,检测56例人胃癌组织VEGF蛋白表达和微血管密度(MVD)及部分胃癌VEGF
mRNA表达,分析VEGF和MVD、及其与胃癌组织学分型、浸润深度、生长方式、淋巴结转移、远处转移和预后的关系。结果 VEGF阳性者MVD值显著高于阴性者(P<0.01), VEGF表达和MVD与胃癌浸润深度(P<0.01)、淋巴结转移(P<0.05)和远处转移(P<0.05)密切相关， 而与组织学分型和生长方式无关(P>0.05)；VEGF表达阳性或MVD≥43的胃癌患者5年生存率较低；VEGF mRNA表达与 VEGF蛋白表达具有一致性，但其分布不同。结论 VEGF与胃癌的血管生成密切相关，对胃癌的生长和浸润转移有促进作用，VEGF和MVD可作为反映胃癌生物学行为的指标之一。
The relationship of vascular endothelial growth factor and
angiogenesis to the progression of gastric carcinoma Lu Min, Jiang
Yueqin, Wang Ruinian. Department of Pathology, Shanghai Second
Medical University, Shanghai 200025
【Abstract】 Objective To investigate the relationship of
vascular endothelial growth factor (VEGF) and angiogenesis to the
progression of gastric carcinoma (GC). Methods VEGF protein
expression and microvessel density (MVD) in 56 cases of human GC and
VEGF mRNA expression in some cases were examined by use of
immunohistochemical staining and in situ hybridization technique
respectively. MVD and VEGF expression were analysed together with
their relation to histologic types, depth of invasion, growth pattern,
lymph node metastasis, distant metastasis and relapsing rate of GC.
Results MVD was significantly higher in VEGF-positive GC than in
VEGF-negative GC (P<0.01). MVD and VEGF positively correlated with
depth of invasion (P<0.01), lymph node metastasis (P<0.05) and
distant metastasis (P<0.05), but their relation to the histologic
types and growth pattern of GC was not significant. The 5 year
survival rate was significantly lower in GC patients with positive
expression of VEGF or with MVD≥43. The expression of VEGF mRNA was consistent with that of VEGF protein, but the distribution is
different. Conclusion VEGF is highly related to angiogenesis of GC
and promotes growth, invasion and metastasis of GC. VEGF expression
or MVD is one of the predictors for the biological behavior of GC.
【Key words】 Stomach neoplasms Endothelial growth factors
Neovascularization Neoplasm metastasis
肿瘤生长依赖于血管生成[1]，丰富的血管可持续不断地向肿瘤提供营养和排除代谢产物,为其生长提供物质条件。肿瘤组织诱导的血管生成是一复杂的由多因素调节的过程，自从Folkman于1973年提出肿瘤血管生成因子(TAF)概念以来, 已陆续发现多种血管生成因子,如:a/bFGF,VEGF,TGFα等,其中以VEGF的作用最为突出。这些血管生成因子通过各种机制降解血管基底膜和周围的细胞外基质,促进内皮细胞分裂、游走和增殖,诱导宿主毛细血管新生并长入肿瘤组织。我们应用免疫组化和原位分子杂交技术检测人胃癌组织中VEGF表达和微血管密度(MVD)，分析VEGF与MVD,及其与胃癌各临床病理指标和预后的关系。
材料与方法
1.标本：1989年～1991年本校附属瑞金医院普外科手术切除胃癌标本56例，男37例，女19例，年龄33岁～80岁(平均57.6岁)。按中国常见恶性肿瘤诊治规范第四分册胃癌标准进行病理检查，并归类如下:Ⅰ高分化乳头状腺癌,Ⅱ中分化管状腺癌, Ⅲ低分化腺癌和印戒细胞癌,Ⅳ未分化癌;浸润至粘膜层(M)和粘膜下层(Sm), 固有肌层(Pm)和浆膜下层(SS), 穿透浆膜层(Se)和穿透浆膜层合并侵袭邻近脏器(Sei); 按Ming法分为膨胀型, 浸润型。详细资料见附表。取10例正常胃组织作对照。其中39例有术后5年以上随访资料。
附表 VEGF蛋白表达和MVD与胃癌各临床病理指标间关系 指标
例数
VEGF
MVD
阳性例数(%)
P值
±s(个)
P值
组织学类型
Ⅰ
8
3(37.5)
40.8±13.5
Ⅱ
18
8(44.4)
>0.05
38.5±16.1
>0.05
Ⅲ
21
10(47.6)
43.1±14.4
Ⅳ
9
4(44.4)
47.1±15.1
浸润深度
M、Sm
7
2(28.6)
28.4±8.1
Pm、SS
22
5(22.7)
<0.01
36.9±10.7
<0.01
Se、Sei
27
18(66.7)
49.6±15.1
生长方式
膨胀型
21
11(52.4)
41.2±13.9
浸润型
35
14(40.0)
>0.05
42.5±16.0
>0.05
淋巴结转移
有
27
17(63.0)
51.5±13.4
无
29
8(27.6)
<0.05
33.4±10.6
<0.01
远处转移
有
9
7(77.8)
56.4±7.2
无
47
18(38.2)
<0.05
39.1±14.4
<0.05
2.抗体和探针:鼠抗人Ⅷ因子相关抗原(FⅧRAg)单克隆抗体1∶100(DAKO公司), VEGF多克隆抗体1∶50(Santa Cruz公司), VEGF cDNA质粒由美国California大学Warren博士惠赠,片段长400bp，随机引物法标记,地高辛标记试剂盒购自Boehringer Mannheimn公司。
3.免疫组化染色:常规SP法,每次染色设置阳性及阴性对照。结果判定:
按5%以上细胞浆或细胞膜呈棕黄色染色者为VEGF蛋白表达阳性[2];MVD计数参照Veidner等[3]和Maeda等[4]报道的方法,先在低倍镜(100×)下全面观察切片以确定肿瘤内血管密度最高处。高血管密度区多位于肿瘤边缘。再在高倍镜(200×,0.74 mm2 /视野)下,以与周围肿瘤细胞和结缔组织成份明显区别的任何一个棕色染色的内皮细胞或细胞丛作为一个血管,只要结构不相连,其分枝结构也作为一个血管计数。记录5个视野内的微血管数,取其平均数作为该病例MVD值。
4.原位分子杂交：取20例标本，主要步骤：杂交前预处理；杂交：VEGF cDNA探针浓度为2 ng/μl，55℃杂交16小时;杂交后处理,显色。上述过程均在无RNase条件下进行,阴性对照用不含探针的杂交液进行杂交。以细胞浆内呈紫蓝色颗粒或团块状物为阳性。
5.统计学处理:MVD、VEGF蛋白表达和VEGF mRNA表达与各临床病理指标间关系分别用方差分析、χ2检验和Fisher精确检验,Logrank法作时序检验并按Kaplan-Meier法作生存率曲线。
结果
1.VEGF蛋白表达: 56例胃癌中25例VEGF表达阳性(44.6%，1),其表达具明显的异质性,强阳性染色的癌细胞多位于浸润前缘,某些血管内皮细胞呈弱阳性染色,正常胃粘膜未见VEGF阳性表达。
1 胃粘液细胞癌，癌细胞浆VEGF染色阳性 SP法×400 2 胃未分化癌，微血管内皮细胞FⅧRAg染色 SP法×200 5 胃粘液细胞癌，癌细胞浆VEGF
mRNA染色阳性 原位杂交×400
2.MVD表达：胃癌组织中所有毛细血管、小静脉和小动脉内皮细胞均为FⅧRAg染色阳性(2),其血管生成具异质性,即肿瘤浸润前缘的微血管较肿瘤内部的密集。56例胃癌组织的MVD从14～68个不等，±s为41.9±14.9个。
3.VEGF蛋白表达和MVD与各临床病理指标间关系：侵及浆膜和有淋巴结及远处转移者VEGF表达率和MVD平均值显著大于未侵及浆膜(P<0.01)和无淋巴结转移(P<0.01)及远处转移者(P<0.05),见附表。
4.VEGF蛋白表达与MVD关系:25例VEGF表达阳性者平均MVD
