霉菌形态及菌落特征的观察

枝样支孢霉：在 SDA 上生长速度中等，菌落表面有灰色短绒毛状气生菌丝，中央高起，边缘有一圈浸没菌丝，黑色，背面亦呈黑色，镜下可见分生孢子梗，顶端有分生孢子链，孢子呈向顶性生长。分生孢子梗呈假轴性产孢。分子光滑或有刺，淡棕色至深棕色，具明显的暗色脐状物，孢子互相连接成串，但不呈关节状。枝孢样枝孢霉为腐生真菌，广泛存在于自然界的土壤、某些动物的粪便、蔬菜、腐木、鸟巢、腐烂水果及食物中，因皮肤外伤而接触后则有被感染的机会。

橘青霉：边缘有白色绒毛不整齐，整个菌落表面干燥，成粉粒状，白色绒毛较为稀疏，菌落较宽在 3~15 mm 之间，后菌落转为蓝色，基质变暗略显灰绿色，菌落上有少量气生菌丝突起，边缘不整齐，菌落干燥疏松，成粉粒状

马尔尼菲青霉菌，是一种双相性致病真菌, 其双相性转变呈温度依赖性, 25℃时呈菌丝相生长, 37℃时呈酵母相生长。25℃时沙氏培养基上 2～ 3天产生菌落, 呈淡灰褐色膜样或淡黄色绒状, 直径约 5mm, 并产生红色色素, 扩散入培养基中。 12 ～ 14天后菌落呈玫瑰红蜡样, 形成皱褶,菌落直径约 22mm～ 31mm,镜下可见有分枝、分隔无色透明的菌丝, 可见帚状枝,双轮或单轮生。 37℃时沙氏培养基上呈酵母相生长, 经 6～ 8天菌落直径约 3～

5mm, 呈淡灰褐色或奶酪色模样, 2～ 3周时直径 10mm～ 16mm, 有脑回状皱褶, 无色素生成,镜下为圆形, 椭圆形或长形酵母样菌体,部分呈腊肠样有横隔。

25 ℃培养特征:菌落呈霉菌相,在沙保氏琼脂上该菌2～ 3 d 开始生长,菌落初期呈淡灰色或淡白色蜡样菌落,间有白色或暗红色绒毛状,直径3 ～ 5 mm , 5 ～ 7 d 后菌落白色绒样 ,

菌落周围出现暗红色色素,背面呈葡萄酒色,直径 2 ～ 3 cm,15 d 以后 , 菌落表面可变成淡灰、白色、灰绿色及淡红色,几种颜色同时存在;37 ℃培养特征:菌落呈酵母相,生长较25 ℃缓慢,3～ 4 d 菌落为奶白色酵母样,直径3 ～ 5 mm,5 d 后较成熟菌落有脑回样皱褶或放射状沟纹,直径1 cm,周围无色素。

实验五 霉菌的形态观察、微生物的测微与计数

一．实验目的

1.学习并掌握观察霉菌形态的基本方法，初步了解霉菌的形态特征及鉴别依据。

2.学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。

3.了解血球计数板的构造和使用方法。学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。

4.总结并掌握细菌、放线菌和霉菌的鉴别方法。

二、实验原理

1. 霉菌定义及用途

 霉菌不是真菌分类中的名词，而是丝状真菌的统称。

 霉菌在自然界中广泛分布，与食品的关系密切，是人类在实践活动中最早利用的一种微生物，如早期进行的酱和酱油的制作等。

 霉菌也可以使食品发生腐败变质或产生毒素，影响人体健康甚至危及生命。

2.霉菌特征

 霉菌可产生分支的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。

 菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。

 霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗的多（约3-10um)，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍。因此，用低倍镜即可观察。

3.霉菌的菌落

 松：由于霉菌的菌丝较粗较长，菌丝体疏松，因而形成的菌落也比较疏松，呈绒毛状、棉絮状或蜘蛛网状；

 大：菌落形态较大，一般比细菌和放线菌的菌落大几倍到几十倍，有时会长满整个培养皿；

 干：外观干燥，不透明；

 挑：菌落与培养基间的连接紧密，不易挑取；

 颜色：由于基内菌丝、气生菌丝、孢子颜色不同，不同的霉菌菌落表面呈现不同的颜色，菌落正反面、边缘与中心颜色常不一致。

同一种霉菌在不同的培养基上或不同的培养条件下所形成的菌落特征可能有所不同。但同一种霉菌在相同的培养条件下和培养基上所形成的菌落特征相对稳定。菌落特征是霉菌鉴定的重要依据之一。

4、霉菌的菌丝形态

 构成霉菌营养体的基本单位是菌丝。菌丝的宽度一般为3-10μm，比放线菌菌丝宽很多倍，其菌可伸长并产生分枝。

霉菌的形态观察

一、实验目的

1、掌握观察霉菌形态的基本方法，观察常见几种霉菌的菌丝形态

2、学会霉菌浸片的制作方法

二、实验原理

霉菌菌丝观察不能用水作介质制片，因为菌丝会因渗透作用而膨胀，目前，霉菌制片时最理想的介质是乳酸苯酚油。制片时常用乳酸石炭酸棉蓝作染色液。此染色液制成的霉菌浸片除有一定染色效果外，细胞不变形，还具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长时间。

霉菌和放线菌相似，由于其菌丝较粗，形成的菌落较疏松，呈绒毛状、絮状或蜘蛛网状，一般比细菌菌落大几倍到几十倍。菌落的表面和培养基背面往往呈现不同的颜色。霉菌菌落中，处于菌落中心的菌丝菌龄较大，位于边缘的则年幼。

三、实验器材

曲霉（Aspergillus sp．）、青霉（Penicillium sp．）、根霉（Rhizopus sp．）和毛霉（Mucor sp．）的马铃薯培养基斜面

乳酸石炭酸棉蓝染色液、20％甘油、马铃薯培养基、无菌吸管、显微镜、载玻片、盖玻片、U形棒、、滤纸、接种钩、酒精灯、、大头针、玻璃纸、镊子、刀片

四、方法与步骤

1、制作霉菌浸片观察

于清洁载玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，。取生长好的霉菌平板，用两根大头针小心挑取含少量孢子的菌丝少许，并在乳酚棉蓝液上摊开，小心盖上盖玻片，注意不要产生气泡。用低、高倍镜观察。

对于根霉和毛霉的培养物，可轻轻打开培养皿，将皿盖（有菌的一面朝上）置于显微镜低倍镜下直接观察，或将皿底（有菌的一面朝上）置于显微镜低倍镜下，观察皿边缘的菌丝。

2、载玻片观察法

(1)将略小于培养皿底内径的滤纸放入皿内，再放上U形玻棒，其上放一洁净的载玻片，然后将二个盖玻片分别斜立在载玻片的两端，盖上皿盖，把数套（根据需要而定）如此装置的培养皿叠起，包扎好，灭菌后备用。

图14-1 载玻片培养示意图

1 平皿 2 U型玻璃棒 3 载玻片 4 培养物 5 盖玻片 6 滤纸

实验八 霉菌形态观察

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实验八 霉菌的形态观察

一、实验原理

霉菌的营养体是分枝的菌丝体。霉菌在潮湿条件下生长繁殖长出丝状、绒毛状或蜘蛛网

状的菌丝体。菌丝分为营养菌丝与气生菌丝，营养菌丝匍匐于培养基的表面或生于培养基内

吸收养料，从营养菌丝上长出伸于空中的菌丝为气生菌丝系，可分化出产生孢子的结构。菌

丝的直径一般比细菌和放线菌大得多。菌丝在显微镜下观察呈管状，有的有横隔膜将菌丝分

割为多个细胞，有的菌丝无横隔膜整个菌丝体为1个单细胞。霉菌的菌落形态较大，质地较

疏松，颜色各不相同。霉菌无性繁殖或有性繁殖可形成不同类型的孢子。菌丝、孢子及菌落

等特征，因霉菌的种类而异，因而为种类鉴定非常重要的依据。

由于霉菌的菌丝体较粗，而且孢子容易飞散，若在水中溶易变形，显微测量时与实际值

存在人为偏差，故观察时将其置于棉蓝乳酚油中，既有保持其正常的形态、使细胞不易干燥

及杀菌防腐作用，还因棉蓝染料的存在而对菌丝与孢子具有染色作用，真菌的显微观察时常

用棉蓝乳酚油作为浮载剂。

二、主要仪器及设备

曲霉(Aspergillus sp．)，青霉(Penicillium sp．)，根霉(Rhizopus sp．)；

棉蓝乳酸油染色液，载玻片，盖玻片，解剖针，滤纸，显微镜等。

三、操作步骤

1、取95%酒精浸泡的载玻片1块，火焰烧去酒精；

2、冷却后在载玻片中央滴棉蓝乳酚油1滴；

3、以解剖针从霉菌菌落上挑少许菌丝体置于染液中；

4、以解剖针使菌丝体在染液中充分展开；

5、将1洁净的盖玻片盖于染液上，以滤纸吸去盖玻片边缘过剩的染液；

6、显微镜下20X、40X物镜观察绘图。

四、注意事项

1、菌丝体在浮载剂中必须充分展开；

2、盖盖玻片时必须斜着缓慢放下，否则在盖上异形成气泡。

五、实验报告

1、绘制有隔菌丝与无隔菌丝图

2、绘制青霉菌及曲霉菌的分生孢子梗图。

3、霉菌显微观察制片与细菌有何不同？

实验八 霉菌形态观察

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II 四大类细胞型微生物的菌落特征比较观察