小G蛋白Cdc42对人结肠癌奥沙利铂耐药细胞多药耐药性的影响

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奥沙利铂对人结肠癌细胞NF-κB、STAT3表达影响

－４０．００４）］明显下降（Ｐ＜０．０１）。结论
奥沙利铂能够抑制ＳＷ６２０细胞增殖，其机制可能与抑制ＳＷ６２０细胞内源
性ＮＦ — ＫＢ、ＳＴＡＴ３表达有关。关键词：奥沙利铂；结肠癌；细胞增殖；核转录因子ＫＢ（ＮＦ — ＫＢ）；信号传导与转录激活因子３（ＳＴＡＴ３）中图分类号：Ｒ３９３文献标志码：Ａ文章编号：１００１ — ５８００（￣１５）０８ — １０５３ — ０３ＤＯＩ：１０．１１８４７／ｚｇｇｇｗｓ２０１５ — ３１ — ０８－２１
ＬＩＮＣｈａｎｇ－ｒｏｎｇ，ＹＡＮＧＪｉａｎ — ｒｏｎｇ，ＬＩＢｉ－ｊｉｎ，ｅｔａｌ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｅｎｅｒａｌＳｕｒｇｅｒｙ，ＪｉａｎｇｂｉｎＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＧｕａｎｇｘｉＺｈｕａｎｇＡｕｔｏｎｏｍｏｕｓＲｅｇｉｏｎ，Ｎａｎｎｉｎｇ，ＧｕａｎｇｘｉＺｈｕａｎｇＡｕｔｏｎｏｍｏｕｓＲｅｇｉｏｎ５３００２１，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｉｔｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒＫＢ（ＮＦ — ＫＢ）ａｎｄｓｉｇ — ｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｅｒａｎｄａｃｔｉｖａｔｏｒｏｆｔｒａｎｓｃｒｉｐｉｔｏｎ（ＳＴＡＴ３）ｉｎｈｕｍａｎｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ（Ｓｗ６２０）．ＭｅｔｈｏｄｓＳｗ６２０ｃｅｌｌｓｉｎ

Cdc42小干扰RNA对结肠癌细胞恶性表型的影响

Cdc42小干扰RNA对结肠癌细胞恶性表型的影响刘素蕊;张思源;刘明;朱亚杰;周继陶;黄娟;唐秋琳;陈向征;郎楠;毕锋【期刊名称】《肿瘤防治研究》【年(卷),期】2009()12【摘要】目的研究细胞周期分裂蛋白Cell divisioncy cle42(Cdc42)小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌细胞恶性表型的影响.方法Western blot检测五种结肠癌细胞系中Cdc42的表达。

设计并合成靶向Cdc42编码区的三对siRNA及阴性对照RNA,应用LipofectamineTM2000分别转染结肠癌细胞系中高表达Cdc42的Lovo和SW620细胞,RT-PCR和Western-blot分别检测48h后Cdc42mRNA 及蛋白的表达。

Cell Counting Kit-8检测细胞的增殖能力,损伤刮擦实验和Transwell小室法分别检测细胞迁移与侵袭能力的变化。

结果RT-PCR和Western blot检测显示,Cdc42-siRNA能显著下调Cdc42mR-NA和蛋白水平,尤其Cdc42-siRNA1;siRNA处理后的肿瘤细胞增殖受到抑制,细胞迁移、侵袭能力也显著降低。

结论Cdc42-siRNA可有效抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

提示Cdc42可能成为抑制结肠癌细胞增殖和转移新的分子靶点。

【总页数】4页(P1016-1019)【关键词】结肠癌;Cdc42;Rho;siRNA【作者】刘素蕊;张思源;刘明;朱亚杰;周继陶;黄娟;唐秋琳;陈向征;郎楠;毕锋【作者单位】四川大学生物治疗国家重点实验室/信号转导及分子靶向治疗研究室;华西医院腹部肿瘤科【正文语种】中文【中图分类】R735.35;R73-35【相关文献】1.靶向survivin的小干扰RNA对HCCLM6细胞恶性表型的影响 [J], 韩丹;叶胜龙;刘彬彬;陈荣新;薛同春;孙瑞霞;赵燕;陈洁2.小干扰RNA沉默结肠癌转移相关基因1对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响[J], 陈喜全;王红雷;尚闯3.微小RNA-196a在结肠癌组织中表达及小干扰RNA沉默对结肠癌细胞侵袭和转移的影响 [J], 张健;李亚兰;韩广森;蒋志强;王道海4.小干扰RNA沉默赖氨酸去甲基化酶2A对结肠癌细胞增殖及侵袭能力的影响 [J], 谢二娟;李海杰;罗学来;方华5.Tspan8在结肠癌细胞中的表达及小干扰RNA干扰后对SW620细胞功能的影响 [J], 任宇鹏;宋纯;孟庆凯因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

结直肠癌患者对含奥沙利铂辅助化疗的耐受性

收稿日期:2008208229;修回日期:2008210209作者单位:100021中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所内科通信作者:王金万,E 2mail :jwwang @作者简介:杨林(19692),女,硕士,副主任医师,主要从事实体肿瘤化疗和生物治疗以及新药临床研究结直肠癌患者对含奥沙利铂辅助化疗的耐受性杨　林,王金万,崔成旭,张弘刚,李玉升,黄　镜,周爱萍,依荷芭丽・迟,石远凯Tolerability of Oxalipltin 2based Adjuvant Chemotherapy in Colorectal C ancer P atientsYAN G Lin ,WAN G Jin 2wan ,CU I Cheng 2xu ,ZHAN G Hong 2gang ,L I Yu 2sheng ,HUAN G Jing ,ZHOU Ai 2ping ,YIH EBAL I Chi ,SHI Yuan 2kaiCancer Hos pital &I nstitute ,Chinese A cadem y of Medical Sciences &Peking Union Medical S chool ,B ei j ing 100021,ChinaCorres ponding A uthor :W A N G J in 2w an ,E 2mail :j w w ang @Abstract :Objective To analyze the tolerability of oxaliplatin 2based adjuvant chemotherapy in colorectal cancer patients.Methods Clinical data of 250patients who had received oxaliplatin 2based adjuvant chem 2otherapy f rom November 2001to January 2008in our hospital were analyzed retrospectively.There were three different chemotherapy regimens.Bi 2weekly oxaliplatin combined with continuous intravenous in 2f used 5fluorouracil (52Fu )and leucovorin (L V )(FOL FOX 4)、tri 2weekly oxaliplatin combined with bolus 52Fu and L V (LO HP/Fu/L V )or orally capecitabine (XELOX ).R esults Relative dose intensity of oxali 2platin were 99.4%、93.3%and 100.5%respectively in these three regimens.The median number of completed treatment cycles were 8、6and 6.The most common cause for withdrawing f rom treatment early was to be unable to tolerate the adverse effects (A Es ).Nausea (88.8%)、vomiting (45.6%)、neu 2ropathy (71.2%)、neutropenia (38%)and thrombocytopenia (55.6%)were the most f requent grade 3or 4A Es.Anaemia was more common in rectal cancer patients than in colon cancer patients.Conclusion Pa 2tients in our hospital who received oxaliplatin 2based adjuvant chemotherapy were less tolerable than in western countries.It is necessary to us to expect the survival data to show if there are any difference be 2tween our patients and westerns.K ey w ords :Colorectal cancer ;Aadjuvant chemotherapy ;Oxaliplatin ;52fluorouracil ;Tolerability摘　要:目的　对结直肠癌根治术后接受含奥沙利铂(LO HP )辅助化疗患者的耐受性进行评价。

奥沙利铂抗肿瘤及其耐药机制的研究进展

奥沙利铂抗肿瘤及其耐药机制的研究进展任俊柯重伟*（复旦大学附属上海市第五人民医院普外科，上海 200240）摘要奥沙利铂是已被证明对结直肠肿瘤切实有效的铂类药物，并已成为该肿瘤的一线化疗方案用药，不仅如此，奥沙利铂也应用于胰腺癌及胃癌的辅助治疗。

然而，此类肿瘤患者常出现治疗失败，主要是由于这类患者存在先天性或获得性耐药。

因此，了解奥沙利铂的耐药机制对于克服这一现象并提高精准治疗水平非常重要。

全文复习目前对于奥沙利铂肿瘤耐药机制的最新研究进展，包括药物摄入、转出、DNA损伤修复、细胞死亡、自噬在调控奥沙利铂耐药中的关键作用。

关键词肿瘤；奥沙利铂；耐药；细胞死亡；自噬图分类号：R979.1 文献标志码：A 文章编号：1006-1533（2021）04-0003-06Research progress in tumor-related resistance mechanisms of oxaliplatinREN Jun, KE Chongwei(Department of General Surgery of the Fifth People’s Hospital affiliated to Fudan University, Shanghai 200240, China) ABSTRACT Oxaliplatin is a platinum drug that has been proven to be effective against colorectal tumors, and has become the first-line chemotherapy regimen in treatment of this tumor. Not only that, oxaliplatin is also used in the adjuvant treatment of pancreatic cancer and gastric cancer. However, treatment failure often occurs in patients with such tumors, which is mainly due to congenital or acquired drug resistance. Therefore, understanding the resistance mechanism of oxaliplatin is very important to overcome this phenomenon and improve the level of precision treatment. This paper reviews the latest research progress in the mechanism of oxaliplatin resistance, including the key role of drug intake, transfer, DNA damage repair, cell death, and autophagy in regulating oxaliplatin resistance.KEY WORDS cancer; oxaliplatin; drug resistance; cell death; autophagy铂类药物的抗肿瘤功效在20世纪60年代首次发现，并于1971年4月开始应用于肿瘤患者的治疗，1978年后顺铂迅速通过了临床试验阶段并成为肿瘤治疗的一线药物。

结肠癌细胞耐药的研究现状

结肠癌细胞耐药的研究现状作者：苏建伟周喜汉来源：《右江医学》2017年第01期【关键词】结肠癌；多药耐药性；转运蛋白；中药逆转剂中图分类号：R735.3+5文献标识码：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2017.01.024肿瘤细胞为了自我保护会改变质膜上、细胞质或细胞核内的功能结构及作用机制，降低其对化疗药物的敏感性，从而产生耐药[1]。

结肠癌细胞化疗耐药是影响结肠癌患者化疗效果的主要原因，也是化疗失败的重要因素，引起化疗药物耐药的主要原因是结肠癌细胞群为了在人体内长期生存而排斥化疗药物。

多药耐药性（MDR）是指癌症细胞对一种药物作用发生耐药反应后，对与其作用和结构类似的其他药物也产生耐药性的现象[2]，它是结肠癌细胞耐药性最常见的一种。

临床上，针对MDR及其逆转剂的研究是大多数肿瘤专家和学者关注的热点，关于MDR的产生机制不同学者的研究结果不同，目前认为可能有以下几种机制：（1）细胞调控基因的异常表达；（2）转运蛋白的异常；（3）耐药相关酶表达的改变。

人们根据结肠癌细胞对化疗药物的多药耐药机制，先后应用多种化学药物作为结肠癌细胞耐药性的逆转剂，如噻吩嗪类化合物、维拉帕米及其衍生物、黄体酮、甲地孕酮等，但是由于这些药物的毒副作用使得它们在临床上并没有得到广泛应用[3]。

中药与化学药物相比有价格低、毒副作用小的优点，在我国医学史上有重要地位。

近年来越来越多的专家学者将中药作为肿瘤药物耐药性的逆转剂，取得了良好的效果。

因此，笔者就结肠癌细胞MDR的机制及其逆转剂的研究现状进行综述。

1结肠癌细胞多药耐药的机制由于不同患者的病情不同，因此使用化疗药物的种类也不同。

不同种类的化疗药物会与靶标相互影响，使结肠癌细胞形成不同的耐药表型。

MDR是多种因素共同作用的结果，其产生机制极其复杂，现在国内外大多数的研究主要有以下几个方面：耐药相关酶的异常变化、细胞调控基因的异常表达、转运蛋白的异常等。

关于铂类化疗药物的耐药机制

关于铂类化疗药物的耐药机制铂类化疗药物包括顺铂、卡铂和奥沙利铂，已成为治疗多种实体瘤的主要化疗药物。

然而，很多患者在接受铂类化疗后会出现耐药，导致治疗效果不佳或治疗失败。

本文将从铂类化疗药物的作用机制、耐药的类型、相关的分子机制等方面来探讨铂类化疗药物的耐药机制。

1. 铂类化疗药物的作用机制铂类化疗药物通过与DNA结合形成DNA交联物来抑制DNA复制和转录，从而对肿瘤细胞的生长和分裂产生抑制作用。

顺铂和卡铂通过与DNA结合形成较为稳定的药物-DNA交联物，而奥沙利铂则借助不稳定的氧化还原反应产生药物-DNA交联物。

这些药物-DNA交联物使DNA链的断裂和交联导致损伤的细胞开始进行凋亡，进而达到治疗癌症的目的。

2. 铂类化疗药物的耐药类型铂类化疗药物的耐药分为病理性耐药和药物性耐药两种类型。

(1) 病理性耐药病理性耐药是指肿瘤细胞通过改变其生长和分化状态、表达多种通路的信号转导和凋亡相关因子以及维持DNA修复和稳定的机制等方式，避开了铂类化疗药物对癌细胞的杀伤作用。

在病理性耐药情况中，细胞在化疗药物的作用下仍然能够进行DNA修复和细胞凋亡抵抗，所以铂类化疗药物失去了对细胞的治疗作用。

(2) 药物性耐药药物性耐药的主要原因是由于化疗药物的浓度不足或在药物代谢过程中发生了改变，使得药物难以达到对癌细胞的杀伤浓度。

引起药物性耐药的主要因素包括肿瘤内转运蛋白，药物修饰酶，对药物结合的药物靶点等。

这些都会影响药物的吸收、代谢和排泄，导致药物在治疗过程中与肿瘤细胞的接触减少、代谢加快或无法形成有效的药物-靶点结合。

3. 铂类化疗药物的耐药分子机制铂类化疗药物的耐药分子机制非常复杂。

下面是一些常见的分子机制：(1) DNA修复机制的变化铂类化疗药物通过与DNA结合形成DNA-DNA交联物从而导致DNA的损伤。

局限的DNA修复是细胞响应铂类化疗药物的主要机制之一。

肿瘤细胞耐药性的形成往往与细胞内的DNA组修复和维护机制以及DNA伤害响应机制有关。

结直肠癌奥沙利铂、5-Fu耐药的临床相关性研究

结直肠癌奥沙利铂、5-Fu耐药的临床相关性研究欧阳满照;陈小伍;朱达坚;剧永乐;伍锦浩;李泳【摘要】Objective To analyze the drug resistance of colorectal patients which received adjuvant chemotherapy based on oxaliplatin and 5-Fu after operation. Methods Clinical data of 150 patients who had received adjuvant chemotherapy based on oxaliplatin and 5-Fu in our hospital were analyzed retrospect tively. There were two different chemotherapy regimens: Biwee-ekly oxaliplatin combined with continuous intravenous infused 5-Fu and leucovorin (LV) (FOLFOX4), triweekly oxaliplatin combined with bolus 5-Fu and LV (LOHP/Fu/LV). Results FOLFOX4 treatment group total effective rate was 43.9%, LOHP/Fu/LV group treatment efficiency was 35.29%, there were significant difference; the two group had a certain toxicity, no significant difference. Conclusion Scientific and reasonable use of compatibility of oxaliplatin and 5-Fu can effectively antagonize adjuvant chemotherapy drug resistance, prolong the life of patients with colorectal cancer.%目的对结直肠癌根治术后接受奥沙利铂(LOHP)、5-Fu辅助化疗患者的耐药性进行评价.方法对在我院接受LOHP方案辅助化疗的150例患者的临床资料进行回顾性分析.包括两种化疗方案:LOHP联合持续灌注5氟尿嘧啶(5-Fu)和亚叶酸钙(CF)的两周方案(A组)、LOHP联合快速输注5-Fu和CF的3周方案.结果 A组治疗总有效率为43.9％,B组治疗总有效率为35.29％,两组比较有差异；两组均有一定的毒副反应,两组比较无差异.结论科学合理配伍使用奥沙利铂和5-Fu能有效拮抗辅助化疗的耐药性,延长结直肠癌患者寿命.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2012(009)021【总页数】3页(P62-63,66)【关键词】奥沙利铂;5-氟尿嘧啶;结直肠癌;耐药性【作者】欧阳满照;陈小伍;朱达坚;剧永乐;伍锦浩;李泳【作者单位】广东省佛山市顺德区第一人民医院胃肠胰腺外科,广东佛山528000;广东省佛山市顺德区第一人民医院胃肠胰腺外科,广东佛山528000;广东省佛山市顺德区第一人民医院胃肠胰腺外科,广东佛山528000;广东省佛山市顺德区第一人民医院胃肠胰腺外科,广东佛山528000;广东省佛山市顺德区第一人民医院胃肠胰腺外科,广东佛山528000;广东省佛山市顺德区第一人民医院胃肠胰腺外科,广东佛山528000【正文语种】中文【中图分类】R735.3随着经济的发展，人们生活水平的提高以及饮食结构的改变，佛山市顺德区结直肠癌的发病率呈上升趋势，现已跃升至各种恶性肿瘤发病率的第四位，严重地危害着人们的健康。

结肠癌中奥沙利铂毒性和耐药性相关基因SNPs的研究进展

结肠癌中奥沙利铂毒性和耐药性相关基因SNPs的研究进展姚雨江;谢妮【期刊名称】《临床与病理杂志》【年(卷),期】2014(000)006【摘要】化疗在结肠癌的治疗中仍起着举足轻重的作用,尤其是在术后辅助治疗和转移癌症治疗中。

目前,化疗多采用联合配伍的方案,奥沙利铂被采用作为转移性结肠癌的联合用药之一,使得结肠癌的副毒作用和药效得到相对改善。

但仍不可避免有副作用和耐药性的产生,且具有个体差异性。

这与许多原因有关,其中病人的遗传差异起了举足轻重的作用。

本综述通过回顾最近关于结肠癌中奥沙利铂为基础的联合用药毒性和耐药性相关基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)及其作用机制的研究,为进一步科学研究和临床个体化用药提供依据。

【总页数】11页(P797-807)【作者】姚雨江;谢妮【作者单位】广东医学院病理生理教研室;深圳大学第一附属医院;深圳市第二人民医院生物标本库【正文语种】中文【中图分类】R735.35【相关文献】1.结肠癌中奥沙利铂毒性和耐药性相关基因SNPs的研究进展 [J], 姚雨江;谢妮2.苦参碱调控结肠癌奥沙利铂耐药性及机制研究 [J], 王伟;郑兵;任锐;朱涛3.E2F1基因过表达对人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT116/L多药耐药性的影响[J], 严林海;金钦文;覃宇周;陈建思;钟华戈;唐卫中4.黄连素对人结肠癌细胞株THC-8307奥沙利铂耐药性的影响 [J], 陈琳;黄定贵;伍朝春;刘景慧;肖和卫;魏亚楠;李林茂5.黄连素逆转人结肠癌细胞奥沙利铂耐药性的作用及机制 [J], 陈琳;李卫;黄国秀;韦晓英;刘贺;庞羽;罗珍玉;蓝盈盈;罗颖华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

藤黄酸逆转人结肠癌细胞株SW480奥沙利铂耐药性的作用及机制研究

白表达。结论藤黄酸部分逆转ＳＷ４８０／Ｌ — ＯＨＰ细胞对奥沙利铂的耐药性，其机制与增加细胞内
奥沙利铂的蓄积，抑制ＭＤＲ１基因的表达及降低Ｐ — ｇＰ的表达有关。
【关键词】结肠癌；藤黄酸；多药耐药；多药耐药基因
ＲｅｖｅｒｓａｌｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＯｘａｌｉｐｌａｔｉｎｉｎｈｕｍａｎｃｏｌｏｎｃａＤｃ．ｅｒｂｙｇａｍｂｏｇｉｃａｃｉｄＹＡＮＧＰｉｎｇ＊，ＣＡＯＪｉｅ，
ｈｅｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＬ — ＯＨＰａｎｄｉｎｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈｈｉｇｈ — ｄｏｓｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｎｐａｒｅｎｔａｌｃｅｌｌｓｆＳＷ４８ｏ１．ＭｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｌｕｍｆＭｒｒＩ１）ｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｒｅｖｅｒｓａｌｉｎｄｅｘ（ＲＩ）ｏｆＳＷ４８Ｏ几一ＯＨＰｃｅｌｌｓ
呈量效关系。奥沙利铂与低毒剂量藤黄酸共同作用ＳＷ４８０／Ｌ — ＯＨＰ细胞，其Ｉｃ。显著降低（尸＜０．０５），耐药逆转倍数为３．７２。与奥沙利铂单药组相比，加入低毒剂量藤黄酸后，细胞凋亡率明显增加，差异有统计学意义（尸＜０．０５）。藤黄酸作用后ＭＤＲ１ｍＲＮＡ转录水平降低，同时下调了Ｐ — ｇＰ蛋

结直肠癌奥沙利铂化疗耐药机制的研究进展

图１结直肠癌细胞对奥沙利铂耐药机制结直肠癌细胞可通过过表达ＤＮＡ修复系统、谷胱甘肽、膜转运蛋白、金属蛋白酶家族和整合素家族等降低对奥沙利铂敏感性ＥＧＦＲ：表皮生长因子受体；ＴＮＦ：肿瘤坏死因子；ＧＳＴ：谷胱甘肽ｓ转移酶；ＧＳＨ：谷胱甘肽；ＡＤＡＭＳ：金属蛋白酶家族；ＰＣＤ：程序性死亡；ＮＥＲ：核苷酸剪切修复；ＭＥＲ：错配修复
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生理科学进展２０１８年第４９卷第２期
结直肠癌奥沙利铂化疗耐药机制的研究进展
张逸羿卢星榕△
（福建医科大学附属协和医院结直肠外科，福州３５０００１）
摘要结直肠癌是临床最常见的肿瘤之一。目前国内外对中晚期结直肠癌的患者仍以手术为主，化疗为辅的综合治疗方案。２０１７年ＮＣＣＮ指南推荐含有奥沙利铂的ＦＯＬＦＯＸ、ＣａｐｅＯＸ方案是一线化疗方案，但近一半患者因化疗耐药而致生存率降低。因此，寻找肿瘤细胞对化疗的耐药靶点进而提高化疗疗效，成为结直肠癌化疗亟待解决的关键性问题。同时在精准医学时代，寻找特异性的分子标志物也将成为研究热点。本文将对有关奥沙利铂化疗耐药机制、逆转及精准医学应用的新进展进行综述。关键词结直肠癌；奥沙利铂；化疗耐药机制；耐药逆转中图分类号Ｒ７３５
数实体瘤的治疗。奥沙利铂发挥细胞毒性几乎都是通过破坏ＤＮＡ实现的，可与ＤＮＡ链形成ＰｔＤＮＡ加合物产生链间交联或链内交联，导致双向功能的ＤＮＡ损伤，同时也可抑制ＤＮＡ和ＲＮＡ合成及触发机体的免疫学反应，导致细胞凋亡［１２］。
（一）奥沙利铂耐药机制研究表明，结直肠癌
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细胞对奥沙利铂的抵抗可能与ＤＮＡ损伤修复系统的过表达以及蛋白质差异表达相关，其中如核苷酸切除修复（ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｅｘｃｉｓｉｏｎｒｅｐａｉｒ，ＮＥＲ）过表达、膜转运体蛋白过表达以及细胞凋亡机制的异常等可能通过其调控的基因及其下游事件发挥相应作用［１２～１４］，如图１所示。

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四川大学学报(医学版)J Sichuan Univ(Med Sci Edi)2011;42(4):466 470 小G蛋白Cdc42对人结肠癌奥沙利铂耐药细胞多药耐药性的影响*李楠静1,刘桢1,张又2,岳彩霞2,魏雯1,李立兰1,2,唐秋琳2,毕锋1,21.四川大学华西医院腹部肿瘤科(成都610041);2.四川大学华西医院信号转导及分子靶向治疗研究室(成都610041)摘要目的研究细胞分裂周期蛋白(cell division cycle42,Cdc42)对人结肠癌奥沙利铂耐药细胞系多药耐药性的影响。

方法 Wester n blo t检测人结肠癌SW480、Colo320细胞与已成功构建的奥沙利铂耐药细胞系SW480/L O H P、Co lo320/L O HP细胞中Cdc42的表达,用Lipo fectam ine T M2000介导重组质粒pDEST26 H is Cd c42转染入Cdc42表达相对较低的亲代细胞系,介导Cdc42siRN A转染入Cdc42表达相对较高的耐药细胞系。

Western blot和RT PCR检测转染是否成功。

利用Cell Counting K it 8(CCK 8)检测各细胞系5氟尿嘧啶、顺铂、奥沙利铂,紫杉醇,依托泊苷,长春新碱,阿霉素等结直肠癌常用化疗药物的药物敏感性,计算出各种药物的半数致死浓度(IC50)。

行Wester n blo t检测不同细胞系P g p、M RP1蛋白表达水平。

结果在耐药细胞系中Cdc42的表达高于亲代细胞系。

成功转染外源Cdc42基因的亲代细胞CCK 8(CCK 8)法检测对多种化疗药物的IC50以及P g p、M RP1蛋白表达水平高于未转染细胞系。

成功转染Cdc42siRN A的耐药细胞CCK 8法检测对多种化疗药物的IC50显著低于耐药细胞系。

结论 Cdc42与人结肠癌细胞耐药性形成有关,Cdc42可增强人结肠癌细胞的多药耐药性的形成。

提示Cdc42可能成为降低结肠癌细胞多药耐药性的分子靶点。

关键词 Cdc42 奥沙利铂多药耐药性结肠癌The Effect of Small GTPase Cdc42on the Multidrug Resistance of Oxaliplatin resistant Colon C ancer Cell Lines L I N an j ing1,L I U Zhen1,ZH A N G You2,Y UE Cai x ia2,WE I W en1,L I L i lan1,2,T A N G Q iu lin2,BI Feng1,2 .1.D ep ar tment of A bdominal Cancer,West China H osp ital,Sichuan Univer sity,Cheng du610041,China;2.Labor ator y of Signal T r ansductio n and M olecular T ar get T her ap y,W est China H os p ital,S ichuan Univers ity, Chengdu610041,ChinaCo rr esponding author,E mail:bifeng@Abstract Objective T o deter mine the effect of cell div ision cycle42(Cdc42)o n t he multidrug resistance o f ox aliplatin resistant human colo n cancer cells.Methods T he protein ex pr essio n levels of Cdc42in ox aliplatin resistant colon cancer cells and parental cells were ex amined w ith Western blot.pDEST26 H is Cdc42w as transfected by lipo fect amine T M2000into SW480and Colo320cells w ith lo w ex pr ession o f Cdc42.Cdc42siRN A w as transfected by lipo fectam ine T M2000into SW480/L O HP and Colo320/L O H P cells with hig h ex pr essio n of Cdc42.T he ex pression of Cdc42in these cell lines wer e ex amined by Western blot and RT P CR48hours after tr ansfectio n.T he sensitiv ity o f co lon cancer cells to antitumo r drugs was evaluated using CCK 8assay.T he concent ratio n o f each dr ug that caused a50%r eductio n in the numbers of cells(I C50)w as calculated.T he expressio n o f P g p,M RP1in SW480/Cdc42and Colo320/Cdc42cells w ere ex amined w ith Wester n blot.Results Cdc42w as ov er ex pr essed in the SW480/L O HP and Colo320/L OH P cell lines.O ver ex pression o f Cdc42significantly enhanced the r esistance of colon cancer cells to mult iple antitumor dr ug s and up r egulated the ex pr ession of P g p and M R P1.Conclusion Cdc42enhances the resistance o f colon cancer cells to several antitumo r dr ug s.It mig ht beco me a potential tar get for rever sing multidr ug resistance of colon cancer.Key words Cdc42 O xaliplatin M ultidrug r esistance Colon cancer在我国,结直肠癌的发病率和死亡率都很高,结直肠癌在化疗方面现在采用的治疗一线方案为奥沙*国家自然科学基金(批准号30901719,30971519)资助通讯作者,E mail:bifeng@medm 利铂+氟尿嘧啶+亚叶酸钙(L OH P+5 FU+LV)的FOLFOX方案,采用了三代铂类药奥沙利铂。

部份患者使用到一定周期时会产生耐药性,病情会出现进展。

Rho家族属于Ras超家族,是重要的细胞内信号分子[1],细胞分裂周期蛋白cell division第4期李楠静等:小G蛋白Cdc42对人结肠癌奥沙利铂耐药细胞多药耐药性的影响cycle42(Cdc42)作为Rho家族(Rho GTPases)中研究较多的一个亚家族,目前研究证实其在肿瘤的多项恶性生物学行为中发挥重要作用[2]。

为探究Cdc42与肿瘤细胞多药耐药性形成的相关性,我们检测了Cdc42蛋白在原始肠癌细胞系与耐药细胞系中的表达,并通过转染目的基因和小干扰RNA (siRNA)后不同细胞系对多种化疗药物的半数抑制浓度(IC50)进行比较,以期为结直肠癌治疗后出现药物耐药的患者提供临床靶向治疗的理论依据。

1 材料和方法1.1 材料1.1.1 主要试剂鼠抗人Cdc42、 actin,H is单克隆抗体购自美国BD公司,真核表达空白质粒pDEST26购于Inv itro gen公司,重组质粒pDEST26 H is Cdc42由本室构建[3]。

RPM I1640培养基、G418,小牛及胎牛血清,Lipofectam ine TM 2000,Tr izol购自Gibco公司(Inv itr ogen,Car lsbad, USA),Cdc42siRNA序列由广州锐博公司合成完成,连接酶与内切酶购自T akara公司。

RT PCR kit购于MBI公司。

CCK 8试剂盒购自日本Dojindo公司。

药物顺铂购于云南个旧生物药业有限公司,5 FU购于天津金耀氨基酸有限公司,吡柔比星、长春新碱购于深圳万乐药业有限公司,依托泊苷购于齐鲁制药有限公司,紫杉醇购于太极集团,奥沙利铂购于美国赛诺菲安万特公司。

1.1.2 细胞系结直肠癌细胞系SW480,Colo320均为我实验室保存,奥沙利铂耐药细胞系SW480/ L OH P、Colo320/L OH P细胞由本室利用小剂量药物浓度递增诱导法进行建立[3]。

1.2 方法1.2.1 细胞培养 SW480、SW480/L OH P细胞用RPM I1640(含10%小牛血清),Co lo320、Colo320/ L OH P细胞用RPM I1640(含10%胎牛血清)37 、5%CO2培养箱培养。

1.2.2 Wester n blot检测结肠癌细胞及耐药细胞Cdc42蛋白的表达收集对数生长期细胞,加入细胞裂解液裂解,提取细胞总蛋白,并用紫外分光光度计测定蛋白浓度。

取等量蛋白上样进行SDS PAGE电泳,并将蛋白转移至PV DF膜,5%的脱脂奶粉封闭2h,一抗(1 1000)4 孵育过夜, TBST洗涤3次,加入荧光标记的二抗(1 10000)室温避光孵育2h,最后用红外荧光扫描成像系统显色,测定条带灰度值,以目的产物灰度值与内参照 actin的灰度值比值作为相对表达值。

1.2.3 质粒的提取、酶切、鉴定取空白质粒pDEST26,重组质粒pDEST26 H is Cdc42的菌种接种至含氨苄青霉素的LB培养基的培养皿筛选阳性克隆,少量提取pDEST26 H is Cdc42质粒,经PCR及E co R 和Bam H 双酶切鉴定,并将pDEST26 H is Cdc42质粒送至Invitrog en公司进行测序鉴定,与GenBank公布的序列进行对比。

药物对结肠癌细胞的应激反应

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人结肠癌SW480细胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立

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吲哚美辛对人结肠癌细胞HCT116及SW480的生长以及对肿瘤血管生成的影响

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中药单体华蟾素抗人结肠癌细胞作用和机制研究

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