槐米中芦丁的提取、分离和鉴定

一、实验目的1. 掌握黄酮类化合物提取的基本原理和方法。

2. 学习并掌握芦丁的提取、分离和鉴定技术。

3. 了解槐米中芦丁的药理作用及临床应用。

二、实验原理芦丁（Rutin）是一种黄酮类化合物，广泛存在于槐米、荞麦叶等植物中。

芦丁具有调节毛细血管壁的渗透性、降低血脂、抗炎、抗氧化等药理作用，在临床上常用于治疗高血压、冠心病、视网膜病变等疾病。

本实验采用碱提酸沉法提取槐米中的芦丁，通过重结晶、纸层析、薄层层析等手段对芦丁进行分离和鉴定。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：槐米、石灰水、盐酸、硫酸、硼砂、Mg粉、AlCl3、FeCl3、Monish 试剂等。

2. 实验仪器：研钵、烧杯、漏斗、抽滤瓶、玻璃棒、电热炉、烘箱、紫外可见分光光度计、薄层层析板、显色剂等。

四、实验步骤1. 槐米预处理：称取一定量槐米，研磨成粉末。

2. 提取：将槐米粉末加入烧杯中，加入适量石灰水，加热至沸腾，搅拌煮沸15分钟，抽滤，滤渣再用20mL石灰水煮沸10分钟，合并滤液。

3. 中和：用15%盐酸中和滤液至pH值为2～3。

4. 静置：将中和后的滤液静置6小时，使芦丁沉淀析出。

5. 过滤：过滤沉淀，滤渣干燥，得到粗芦丁。

6. 精制：将粗芦丁用乙醇溶解，进行重结晶，得到精制芦丁。

7. 鉴定：采用纸层析和薄层层析对精制芦丁进行鉴定，并与标准芦丁进行比对。

五、实验结果与分析1. 纸层析结果：精制芦丁在纸层析板上呈现出与标准芦丁相同的色带，证明所提取的化合物为芦丁。

2. 薄层层析结果：精制芦丁在薄层层析板上呈现出与标准芦丁相同的色带，进一步证实了所提取的化合物为芦丁。

六、实验结论本实验成功从槐米中提取并鉴定了芦丁。

实验结果表明，碱提酸沉法是提取槐米中芦丁的有效方法，纸层析和薄层层析是鉴定芦丁的可靠手段。

七、实验讨论1. 影响芦丁提取的因素：槐米的粉碎程度、石灰水的浓度、提取时间、pH值等都会影响芦丁的提取效率。

2. 芦丁的药理作用：芦丁具有调节毛细血管壁的渗透性、降低血脂、抗炎、抗氧化等药理作用，在临床上具有广泛的应用前景。

实验一槐米中芦丁的提取、分离和鉴定一、概述槐米系豆科植物槐树（Sophora japonica L.）的花蕾（槐米）。

具有清热、凉血、止血的功效，用于治疗便血、痔血，尿血、血淋，崩漏，赤血痢下，风热目赤，痛疽疮毒，还可用于预防中风。

近年来被用作治疗高血压的辅助药物。

药理实验证明，槐花米具有调节毛细血管的渗透作用，抗炎作用，解痉、抗渍疡作用，影响脂质代谢，抗菌等多种生物活性。

槐花米中主要含有黄酮苷，皂苷、甾醇和鞣质等成分，其中芦丁(Rutin)含量最高，达12～20%。

主要化学成分的结构及理化性质：芦丁（rutin）：C27H30O16·3H2O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（无水物）。

难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。

槲皮素（quercetin）：C15H10O7·2H2O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。

能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。

二、实验部分（一）实验目的1、通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物提取分离的原理和操作。

2、掌握酸水解将芦丁生成槲皮素的方法。

3、掌握芦丁与槲皮素的鉴别方法，聚酰胺薄膜的操作方法，电子天平的使用方法。

（二）实验原理1、芦丁的提取原理：芦丁中含有多个酚羟基，具有酸性，故用碱提酸沉法。

2、芦丁的分离原理：芦丁在沸水中溶解，在冷水中析出。

3、芦丁的鉴定原理：芦丁与槲皮素分别为黄酮类化合物的苷与苷元，用Molish反应可以进行鉴别，也可以利用聚酰胺的氢键吸附性质进行定性分析，Rf值也应不同。

（三）实验药材、仪器与试剂1、药材：槐米50g(每组)。

槐米中芦丁的提取、水解和鉴定实验简介槐米系豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾。

能凉血止血，清肝泻火。

药理实验证明芦丁有调节毛细血管渗透作用，临床上可作为毛细血管脆弱引起的出血症，常作为高血压症的辅助治疗药。

其有效成分为芸香苷，又称芦丁(rutin)，含量可高达12～20％。

芦丁为槲皮素-3-O-芸香糖苷，淡黄色粉末或细针状结晶，含3分子结晶水（C 27H 30O 16•3H2O ），mp.177~178℃，无水物mp.188~190℃。

溶解度:冷水中的溶解度为1﹕10000，沸水中1﹕200，冷乙醇1﹕650，沸乙醇1﹕60，沸甲醇中1﹕7，可溶于丙酮、乙酸乙酯、吡啶及碱液中，不溶于三氯甲烷、乙醚、苯及石油醚。

芦丁水解后得槲皮素，槲皮素为黄色针状结晶（稀乙醇），含2分子结晶水（C 15H 10O 7•3H2O ），mp.313~314℃（分解），无水物mp.316℃。

溶解度:热乙醇中1﹕23,冷乙醇中1﹕300,可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、吡啶与冰醋酸等，不溶于水、三氯甲烷、乙醚、苯与石油醚等。

本实验应用碱溶解酸沉淀法，重结晶法，酸水解法，纸色谱法，紫外光谱分析法对槐米中芦丁进行提取、水解和鉴定。

O O HO OH O OHOHO O OH OHOHH 2CO OH OH CH 3OH 3H 2O 芦丁 O HO OH OH OH 槲皮素实验原理1、提取精制的原理：芦丁分子中含有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而溶于碱液中，加酸酸化后又可沉淀析出，因此可用碱溶酸沉法提取芸香苷。

芦丁的精制可根据其在冷、热水（或冷、热乙醇）中溶解度相差悬殊的性质进行。

2、鉴定的原理：利用纸色谱的吸附分配原理，将样品和对照品在同一条件下展开显色，判断芦丁和槲皮素的Rf值，达到鉴定的目的。

利用紫外吸收光谱，测定黄酮化合物在加入各种电解质或络合剂后吸收峰的位移，根据位移的情况，以判断化合物羟基的位置。

槐花米中芦丁的提取与鉴定槐花米是槐花籽的胚芽部分，富含植物化学物质，常被用作食品、保健品和药品。

芦丁是一种重要的植物黄酮类化合物，在槐花米中也存在着。

本文主要探讨了槐花米中芦丁的提取与鉴定方法。

一、提取方法1. 酸碱水解法将槐花米粉末用75%酒精浸泡后，用钝性气体保护，加入0.1mol/L的氢氧化钠溶液，水解2小时。

水解完毕后，加入酸化剂使pH值调至5.5左右，然后提取2次，每次提取30分钟，使用乙醇使提取液达到所需的体积，完成提取过程。

2. 超声波辅助法将槐花米粉末用95%乙醇提取2次，每次提取60分钟。

取得的提取液储存在4℃条件下，超声波辅助溶解过程中，超声波功率设置为250W，处理时间为45分钟。

超声波辅助能够加速溶剂的渗透和分解，提高提取效率。

3. 超临界流体法将槐花米粉末与正己烷混合，注入超临界流体反应器中，流体选择二氧化碳，温度为90℃，压力为30Mpa。

在45分钟内处理样品，得到高品质的芦丁提取物。

二、鉴定方法1. 毛细管电泳法使用毛细管电泳法确定芦丁的含量和纯度。

在试验中，一般采用50 mM 磷酸盐缓冲液( pH=3.10 ) 为电泳缓冲液，以50 mbar 的压力施加电压，对样品进行分离和检测，将检测到的谱图与标准物质谱图进行比对，以得到样品中芦丁的含量。

2. 气相色谱法使用气相色谱法测定芦丁在槐花米中的含量。

首先，将提取物用氮气吹干至干燥，然后加入甲醇，溶解完毕后过滤。

过滤后再用甲醇调整成正常体积。

将样品注入色谱柱，沿着柱从注射口到检测器方向以一定的压力进行分离，通过检测器检测分离出来的物质。

将检测到的峰面积与已知含量的标准物质进行比较，以确定样品中芦丁的含量。

3. 紫外分光光度法使用紫外分光光度法确定芦丁的含量。

在试验中，将提取物稀释到一定浓度后，用紫外分光光度计检测其在不同波长下的吸光度值。

根据芦丁的特征峰，在290 nm处进行检测。

将检测到的吸光度值与标准物质进行比较，以确定样品中芦丁的含量。

实验一槐米中芦丁的提取、分离与鉴别一、实验目的（1）掌握黄酮类化合物的提取原理和方法。

（2）掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。

二、实验原理芦丁(Rutin)亦称芸香苷(Rutisude)，广泛存在于植物界中。

现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。

尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。

槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达23.5%，槐花开放后降至13.0%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。

芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性，临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。

芦丁(Rutin)为淡黄色细小针状结晶，mp.174℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。

溶解度情况如下：水：1:10000(冷)，1:200(热)甲醇：1:100(冷)，1:9(热)乙醇：1:300(冷)，1:30(热)吡啶：1:11.7(冷)，易溶(热)不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。

可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。

芦丁可溶于热水，难溶于冷水，其分子结构中具有较多的酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶解，而在酸性条件下，易析出沉淀，故本实验采用碱溶解酸沉淀的方法自槐米中提取芦丁。

再利用其在冷热水中溶解度的差别采用沸水为结晶溶剂进行精制。

利用芦丁可被稀酸水解，生成苷元和糖，通过颜色反应、薄层层析等方法进行检识和确认芦丁。

三、实验内容（一）芦丁(芸香苷)的提取1. 取1.5g石灰粉（CaO），置于干净的小研钵中，加入10mL水研成乳液备用。

称取槐米20g，于1000m1烧杯中，加0.4%硼砂水溶液200mL，在搅拌下小心加入石灰乳调至pH 8～9，加热至微沸，维持pH值20-30分钟，趁热抽滤，弃去滤渣，冷至60-70℃用浓盐酸调至pH4-5，放置过夜，减压过滤，得粗芦丁（滤饼用水洗3-4次），干燥后得粗品。

槐米中芦丁的提取方法
提取槐米中的芦丁可以采用以下方法：
1. 热水浸提法：将槐米粉末加入适量的热水中，浸泡一段时间后，用滤纸或布过滤，收集滤液。

滤液中含有芦丁等水溶性成分。

2. 乙醇浸提法：将槐米粉末加入适量的乙醇中，加热回流浸泡一段时间后，用滤纸或布过滤，收集滤液。

滤液中含有芦丁等乙醇溶性成分。

3. 超声波辅助浸提法：将槐米粉末与适量的溶剂（如水、乙醇）混合后，利用超声波的作用加速浸提过程。

超声波的振动作用可以促使槐米中的芦丁等成分更好地溶解在溶剂中。

4. 色谱法：使用柱色谱或液相色谱等分离方法，将浸提得到的槐米滤液进行进一步分离和纯化，得到纯度较高的芦丁。

这些方法都是一些常用的提取槐米中芦丁的方法，根据需要可以选择适合的方法进行实验操作。

实验名称：槐米中芦丁的提取与鉴定实验目的：1. 掌握槐米中芦丁的提取方法。

2. 了解芦丁的分离和纯化过程。

3. 学会使用薄层色谱法和显色反应对芦丁进行鉴定。

实验原理：芦丁是一种黄酮类化合物，广泛存在于槐米中。

芦丁具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。

本实验采用碱提法、酸沉法、冷却过饱和法等方法提取槐米中的芦丁，并通过薄层色谱法和显色反应对其进行鉴定。

实验材料与仪器：1. 实验材料：槐米（干燥）、芦丁标准品、无水乙醇、氢氧化钠、盐酸、乙酸乙酯、氯仿、硅胶G、显色剂等。

2. 实验仪器：电热套、磁力搅拌器、抽滤装置、分析天平、薄层色谱仪、紫外灯等。

实验步骤：1. 槐米粗提液的制备：将槐米粉末用无水乙醇进行提取，提取液在磁力搅拌器上搅拌，静置过夜。

将提取液过滤，收集滤液。

2. 芦丁的分离和纯化：将滤液用氢氧化钠溶液调节pH值至碱性，静置使芦丁沉淀。

将沉淀物过滤，用无水乙醇洗涤沉淀，收集沉淀物。

将沉淀物用盐酸溶液溶解，调节pH值至中性。

将溶液通过活性炭脱色，过滤收集滤液。

将滤液通过酸沉法使芦丁沉淀，收集沉淀物。

3. 芦丁的鉴定：将芦丁标准品和提取的芦丁样品分别点样于同一块薄层板上。

将薄层板放入展开剂中展开，取出晾干。

在紫外灯下观察，芦丁样品与标准品在同一位置上有相同颜色的斑点。

实验结果与分析：1. 通过碱提法、酸沉法、冷却过饱和法等方法，成功提取了槐米中的芦丁。

2. 通过薄层色谱法和显色反应，鉴定出提取的芦丁样品与标准品在同一位置上有相同颜色的斑点，证明提取的样品中含有芦丁。

结论：1. 本实验成功提取了槐米中的芦丁，并通过薄层色谱法和显色反应对其进行了鉴定。

2. 槐米是一种富含芦丁的植物资源，具有一定的药用价值。

注意事项：1. 在实验过程中，注意安全操作，防止化学品溅入眼睛或皮肤。

2. 在提取过程中，严格控制pH值，以确保芦丁的稳定性和提取效率。

3. 在鉴定过程中，注意观察斑点颜色和位置，以确保鉴定结果的准确性。