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1,3-二油酸2-棕榈酸甘油三酯（OPO）检测技术综述陈盛;陈景春;何亚斌【摘要】母乳是自然界赋予婴儿最好的食物,当母乳无法满足婴儿生长发育所需要的营养与,婴幼儿奶粉为替代母乳的最佳选择。
本文综述了母乳脂肪代替品1,3-二油酸2-棕榈酸甘油三酯( OPO)的由来、合成技术及现有的检测技术。
2013年6月,国家卫生和计划生育委员会发布了关于《食品安全国家标准食品添加剂1,3-二油酸2-棕榈酸甘油三酯》的征集意见稿以及相关的编制说明,要研发出更为快捷、精准的检测技术,成为了各大奶粉生产厂家及第三方检测机构的研究方向。
%Breast milk is the best food for infants in nature, infant formula is the best choice for breast milk substituted. the research value and related detection technology of the breast milk fat substitutes for 1,3-oleic acid 2-palmitic acid triglyceride ( OPO) were reviewed, meanwhile, the future development of this technology in the future was prosected.【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2016(000)003【总页数】3页(P26-27,58)【关键词】1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯(OPO);母乳;婴幼儿配方奶粉;检测技术【作者】陈盛;陈景春;何亚斌【作者单位】上海必诺检测技术服务有限公司，上海 200436;上海必诺检测技术服务有限公司，上海 200436;上海必诺检测技术服务有限公司，上海 200436【正文语种】中文【中图分类】TQ914.1母乳中含有3.0%～4.5%的脂肪，是母乳中的主要营养物质之一，其不仅提供婴儿活动所需的45%左右的能量，同时提供给婴儿生长发育所必需的脂肪酸，其中包括98%的甘油三酯[1]。
甘油三酯试剂盒（GPO-PAP 法）标准化操作规程1 目的规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。
2 授权操作人经培训且考核通过的实验室检验人员。
3 适用范围试剂适用于体外定量检测人血清或血浆中甘油三酯的浓度。
4 检验方法本试剂盒采用氧化酶法测定甘油三酯的浓度。
5 检验原理样品中的甘油三酯在试剂中脂蛋白脂酶（LPL ）的催化下水解成甘油和游离脂肪酸，在甘油激酶（GK ）和三磷酸腺苷（ATP ）的作用下生成的甘油被磷酸化，形成3-磷酸甘油，并经试剂中磷酸甘油氧化酶（GPO ）的作用与氧产生过氧化氢和磷酸二羟丙酮，过氧化氢在过氧化物酶（POD ）的催化下与苯胺类色原物质和4-氨基安替比林作用产生水和醌亚胺色素，醌亚胺色素的生成量与样品中甘油三酯的含量成正比，通过测定特定波长处反应最终生成的色素量，可以计算出样品中甘油三酯的浓度。
甘油三酯 ＋ H 2O 甘油 ＋ 游离脂肪酸甘油 + ATP 3-磷酸甘油 ＋ ADP3-磷酸甘油 + O 2−−→−GPO磷酸二羟丙酮 + H 2O 2H 2O 2 + 4-氨基安替比林 + 苯胺类色原物质−−−→−POD 醌亚胺色素 + 水 6 标本要求6.1样本为血清或血浆。
样本应在禁食10~14小时后采取，不应溶血。
采血管应避免使用甘油成分润滑的物品。
6.2血清分离后，请于当日测定，如当日不能完成测定，样本在2℃~8℃可稳定3天、-20℃可稳定数周。
6.3请勿在室温保存样本，以免引起测定值偏高。
7 试剂及配套品 7.1试剂来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司甘油三酯试剂盒（氧化酶法） 7.2试剂组成−−→−LPL −−−−−→−++2Mg G K7.3试剂的稳定性与贮存：7.3.1试剂在2˚C~8˚C条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期18个月。
7.3.2开封后在2˚C~8℃可稳定30天。
7.4试剂的变质指示：若试剂混浊，或以水为空白在520 nm处吸光度值大于0.100A时，则不能使用。
血清甘油三酯TG 测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理TG+3H2O −−→−PLP 甘油+3脂肪酸甘油+ATP −→−GK3-磷酸甘油+ADP3-磷酸甘油+2H2O+O2−−→−GPO 2H2O2+磷酸二羟丙酮 2H2O2+4-AAP+4-氯酚−−→−POD 醌亚胺类化合物 在一定波长处比色，吸光率（△A ）与TG 浓度成正比。
3 标本：3.1 病人准备:应禁食12小时抽血.3.2 类型：血清3.3 标本存放 留取标本后请尽快分离血清。
在冰箱保存的条件下（2～8℃）稳定3天，-20℃保存至少可以稳定3个月。
3.4 标本运输 室温条件下运输。
3.5 标本拒收标准细菌污染的不能做测定。
4 实验材料4.1 试剂:宁波美康生物科技股份有限公司TG测定试剂盒（浙械注准20142400135）4.1.1 试剂组成R1：三羟甲基氨基甲烷缓冲液pH7.0 0.15mol/L脂蛋白脂酶（LPL）1000 U/L4-氯酚2.5×10-3mol/L胆酸钠3.5×10-3 mol/LR2：过氧化物酶（POD）1000U/L甘油激酶（GK）500U/L磷酸三腺苷（ATP） 1.0×10-3mol/L甘油磷酸氧化酶（GPO） 3000 U/LMgCl2 2.5×10-3mol/L4-氨基安替比林（4-APP） 2.5×10-3mol/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
4.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95 g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
4.2 校准品：使用郎道公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准。
计量学溯源国际参考品（SRM 1951c）企业工作校准品（-80℃保存）产品校准品常规样本厂家选定测量程序厂家常规测量程序用户常规测量程序结果用户物质校准赋值程序实施不确定度企业选定常规实验室甘油三酯产品校准品赋值资料1 溯源链由于甘油三酯具有国际约定校准品，但无国际约定参考测量程序，不能在计量上溯源至SI的情况，依据GB/T 21415-2008/ISO17511:2003 文件5.5条款要求。
溯源链如下：2 产品校准品赋值程序2.1 产品校准品赋值程序2.1.1 MS-880B上赋值程序2.1.1.1系统检测采用本公司生产的甘油三酯检测试剂盒及美康MS-880B全自动生化分析仪，以工作校准品为标准作校准曲线（2号检测系统），测定内部跟踪质控品（水平1，水平2），重复10次，计算10次测定的均值和变异系数（CV）。
如果测得精密度CV≤5.0%，均值在内部跟踪质控品靶值范围内，则可认为试剂和仪器分析系统符合要求。
2.1.1.2 产品校准品赋值程序采用本公司生产的甘油三酯检测试剂盒及美康MS-880B全自动生化分析仪，以工作校准品为标准作校准曲线（2号检测系统），测定本公司产品校准品10瓶，每瓶测1次，计算十个数据的均值X1、标准差S1和变异系数CV1。
再取其中1瓶，检测10次，计算10个数据的均值X2、标准差S2，按照公式S瓶间=2221SS和CV 瓶间=S 瓶间/ X 1×100%计算CV 瓶间。
如果测得精密度CV 1和CV 瓶间≤5.0%，测得的均值X 1即为产品校准品的初步定值。
测定产品校准品10瓶，每瓶测一次取其中一瓶，重复测10次2.1.1.3 产品校准品可靠性验证采用本公司生产的甘油三酯检测试剂盒及美康MS-880B 全自动生化分析仪，以初步定值的产品校准品为标准作校准曲线（3号检测系统），测定内部跟踪质控品（水平1，水平2），重复10次，计算10次测定的均值和变异系数（CV），同时测定40份样本。
sdgsdgs成都分行东风浩荡合法规和法规和土壤突然图腾甘油三酯（TG）试剂盒说明书（酶法）【产品名称】中文名称：甘油三酯（TG）试剂盒（酶法）英文名称：TR IGL Y CE RI DES RE AGE N T K I T（Enzymatic method）【包装规格】60ml/盒（R-1：45ml×1, R-2：15ml×1），280ml/盒（R-1：70ml×3，R-2：70ml×1），300ml/盒（R-1：45ml×5，R-2：15ml×5），360ml/盒（R-1：90ml×3，R-2：90ml×1），400ml/盒(R-1：60ml×5，R-2：20ml×5)，2000ml/盒（R-1：500ml×3，R-2：500ml×1）。
【预期用途】本试剂用于测定人血清或血浆中甘油三酯（TG）的含量。
【检验原理】在第一反应中采用抗坏血酸氧化酶（AOD）消除抗坏血酸的影响；采用甘油激酶消去游离甘油的影响。
在第二反应中，通过甘油三酯生成的甘油与过氧化物酶（POD）作用生成醌系色素，由此可测得甘油三酯的含量。
第一反应：抗坏血酸氧化酶2抗坏血酸+ O2──────────→2脱氢抗坏血酸+ 2H2O甘油激酶游离甘油+ ATP ──────────→甘油-3-磷酸+ ADP甘油-3-磷酸氧化酶甘油-3-磷酸+ O2 ──────────→磷酸二羟丙酮+ H2O2（用过氧化氢酶消去）第二反应：脂蛋白酯酶甘油三酯+ H2O ──────────→甘油+ 脂肪酸甘油激酶甘油+ ATP ──────────→甘油-3-磷酸+ ADP甘油-3-磷酸氧化酶甘油-3-磷酸+ O2 ──────────→磷酸二羟丙酮+ H2O2P0D2H2O2 + 4-AA+TOOS + H3+O ─────→醌系色素+ 5H2OTOOS: N-Ethyl-N-（2-hydroxy-3-solfopropyl）-3-methylaniline, sodiumsalt, dihydrate 【主要组成成份】━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━试剂成份含量─────────────────────────────────R-1 抗坏血酸氧化酶≥3000U/L甘油激酶≥1000U/L甘油-3-磷酸氧化酶≥8000U/LTOOS 1.17mmol/L过氧化氢酶≥3000U/L─────────────────────────────────R-2 脂蛋白酯酶≥2000U/LPOD ≥20000U/L4-AA 2.5mmol/L━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━脂类校准血清人血清详见标示量，━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━*1. 不同批号试剂盒中的各组份，经检验符合产品性能指标的，可以互换。
1、方法依据：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司甘油三酯（TG ）测定试剂盒（氧化酶法）测定方法 2、适用范围：适用于人血清甘油三酯（TG ）的测定。
3、试剂仪器：3.1 试剂：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司原装试剂盒。
3.2 试剂储存：未开启的试剂盒在2℃～8℃保存有效期为一年。
试剂开瓶后应避光保存，在2℃～8℃可稳定21天。
试剂不可冰冻 3.3 仪器：迈瑞BS-2000M 全自动生化分析仪. 4、操作程序4.1方法原理在脂蛋白酯酶（Lipase ）、甘油激酶（GK ）和甘油-3-磷酸氧化酶（GPO ）等一系列酶的作用下，甘油三酯被催化产生过氧化氢。
过氧化氢在过氧化物酶（POD ）的作用下，与4-氨基安替比林（4-AAP ）和酚类缩合，生成醌系色素，通过测定此反应的吸光度可求得甘油三酯的含量。
甘油三酯 + 3H 2O甘油 + 脂肪酸甘油 + ATP甘油-3-磷酸 + ADP甘油-3-磷酸 + O 2二羟丙酮磷酸 + H 2O 2H 2O 2+ 4-氨基安替比林+ 4-氯酚醌亚胺+ HCl +2H 2O4.2样本要求GKPODLipasesGPO新鲜血清样本，采集后及时测定，应避免溶血和污染。
血清样本于2℃～8℃避光保存，可稳定3天。
在-20℃可稳定4个月。
4.3上机操作4.3.1试剂装载、校准、样品和质控血清分析操作详见“《迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪标准操作、维护、保养规程》”。
4.3.2 校准：4.3.2.1 标准液的准备：校准品使用深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司配套冻干品，按说明书要求稀释后分装，-20℃冷冻保存，用前提前15分钟从冰箱中取出，复溶到室温后上机检测。
4.3.2.2 校准程序：首次使用校准。
当有以下情况时需重新校准：1）换试剂批号或出现质控漂移时；2）当仪器做完保养后；3）仪器进行零件更换时。
每次试验前用准备好的校准品进行校准，校准通过后进行检测。
4.3.2.3 质控：在标本开始之前做质控，质控通过后方能进行标本的检测。
南京建成甘油三酯试剂盒说明书南京建成生物工程研究所的甘油三酯(TG)测试盒说明书，货号为A110-1 GPO-PAP，酶法单试剂型。
以下是试剂组成及配制、测定原理、样本处理和结果计算等方面的详细说明：一、试剂组成及配制1.甘油三酯(TG)测试盒（96T）试剂组成：•酶剂：甘油三酯脂肪酶（GPO）•校准品：甘油三酯标准品•终止液：磷酸二氢钾/磷酸氢二钾缓冲液（PBS）•洗涤液：磷酸缓冲液（PBS）试剂配制：a. 将GPO酶液及甘油三酯标准品放入测试盒中，并加入适量的PBS洗涤液。
b. 在酶标板上准确加入待测样本，并尽量避免产生气泡。
c. 加入终止液，轻轻振荡混匀。
d. 将测试盒放入冰箱中保存。
2.洗涤液试剂组成：•磷酸缓冲液（PBS）试剂配制：a. 将适量的PBS加入到洗涤液中，并加入适量的水使其稀释至所需浓度。
b. 将洗涤液加入到测试盒中，并尽量避免产生气泡。
二、测定原理GPO酶能催化甘油三酯水解为游离脂肪酸和甘油，从而使测试盒读数。
测试盒上的反应窗口会在酶催化反应的过程中逐渐变为无色，当反应窗口变为绿色时，表示酶的催化反应已经完全进行，此时可以读取测试盒的读数。
三、样本处理1.采集空腹血清样本a. 在采集空腹血清前至少8-10小时内，避免摄入高脂食物和饮料。
b. 在采集血清前，将采血针清洗干净并尽可能地减少采血针与皮肤接触的时间。
c. 用采血针刺破手指，将适量的血液滴入测试盒的反应窗口中。
d. 将采集的血清保存于-20 ℃冰箱中，以备后续实验使用。
2.采集空腹静脉血样本a. 在采集空腹静脉血前至少8-10小时内，避免摄入高脂食物和饮料。
b. 在采集血样前，将采血针清洗干净并尽可能地减少采血针与皮肤接触的时间。
c. 用采血针刺破手指，使用真空采血管采集血液，并尽可能地保持血液在3-5秒内滴入测试盒的反应窗口中。
d. 将采集的血清保存于-20 ℃冰箱中，以备后续实验使用。
3.样本处理注意事项a. 采集的样本应尽快进行实验，如果不能马上进行实验，应将样本保存于-20 ℃冰箱中。
